目的 了解戊型肝炎病毒(HEV)核酸阳性血浆对灵长类动物的感染性和致病性。 方法 对抗-HEV IgM阳性而IgG阴性志愿献血员血浆进行HEV RNA检测,并将存在病毒血症献血员的10ml血浆静脉输入健康恒河猴,观察其对恒河猴的感染性和致病性。 结果 从1份抗-HEV IgM阳性而IgG阴性志愿献血员血浆中分离出HEV基因IV型RNA片段。该份血浆输入恒河猴后,恒河猴出现典型急性肝炎生物化学和病理表现,病毒血症,血清抗-HEV IgM和IgG抗体阳转。 结论 HEV病毒血症献血员血浆输入可以引起灵长类动物的HEV感染以及急性肝炎,提示HEV经输血传播的可能性

叶祥忠

夏宁邵

张军

欧山海

葛胜祥

邱艳

郑英杰

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中华肝脏病杂志 年 月第 卷第 期, , ,·病毒性肝炎戊型肝炎病毒核酸阳性血浆经输血传播感染恒河猴的研究夏宁邵 张军 郑英杰 邱艳 葛胜祥 叶祥忠 欧山海【摘要】 目的 了解戊型肝炎病毒 核酸阳性血浆对灵长类动物的感染性和致病性。方法 对抗 一 工 阳性而 阴性志愿献血员血浆进行  检测,并将存在病毒血症献血员的 血浆静脉输入健康恒河猴,观察其对恒河猴的感染性和致病性。结果 从 份抗 一 工 阳性而 工 阴性志愿献血员血浆中分离出 基因 工 型 片段。该份血浆输人恒河猴后,恒河猴出现典型急性肝炎生物化学和病理表现,病毒血症,血清抗 一 馆 和 工 抗体阳转。结论  病毒血症献血员血浆输人可以引起灵长类动物的  感染 以及急性肝炎,提示  经输血传播的可能性。【关键词】 肝炎病毒,戊型 输血传播 恒河猴 ! 不月一 ,月,月石四 五 一艺, , 一艺, 一之, 一乞践 才。郑,乞  口 肠,脚 ,  ,    !    !    一 !一   !∀#!#∃%&∋ !()∗∃( + !)∃! !,−∃#∃#( . / −( 0 !1!∗ 2 0 #∀ 3 !() ( 4∀5 !% / −!!!, ∃6 . 7 ∋ 8 + 2 (#∃#1 ! 2∗−(4 −&9∃ / −( ! ∀:# 34 !0 ;% 1#3 ∗  #< −∗,i m mu n olog ie al,b io ehem ie ala nd h istoPatholog ie al data.Co n clu sio nAe utehepatitisEc a nbeindu e ed b y P la smatr a n sfusio n of H E Vvir emia,w h ieh ind ie atethePo s si b i l ityoftr a n sfusio ntr a n sm it ted hepatitisE.IKey wo rdslHePatitisEvir u s:Mo nkeys:Tr a n sfusio ntr a n sm is sio n在灵长类动物模型中研究携带病毒的志愿献血员血浆输人导致戊型肝炎病毒 (H E V ) 感染以及急性肝炎发生的可能性。材料与方法1.标本来源:志愿献血员 (编号 206 ) 血浆由北京红十字中心血站提供,丙氨酸氨基转移酶 (A LT )正常,抗甲型肝炎病毒 Ig M、抗乙型肝炎核心抗原 Ig M、抗丙型肝炎病毒 Ig G、抗丁型肝炎病毒 Ig G 阴性。2.抗一H E V 抗体检测:献血员206 血浆以G enel abs作者单位: 3 6 1 0 0 5 厦门,厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室 福建 省:医学分子病毒学研究中心 (夏宁邵、张军、郑英杰、葛胜祥、叶祥忠、欧山海);北京市红十字血 液中心 (邱艳 )夏宁邵 男,3 9 岁,研究员,博士生导师,发表论文 6 0 余篇。公司 (新加坡) 抗 一 H E V Ig M、抗 一 H E V lg G 试剂进行检测,并同时以国产新型抗 一 H E v Ig M、抗 一H E V lg G 试剂 (北京万泰公司)进行检测[1]。抗一H E V中和单克隆抗体为本实验室鉴定制备[2],阻断实验按文献进行川。3.H E V R N A 的反转录聚合酶链反应 (R T 一P C R ) 检测:血清 25 0 风用 T R IZ O L 试剂 (美国 Gi bc 。公司 ) 按操作说明提取 R N A;提取的 R N A 以配好的反转录体系溶成 20 夙,进行反转录,反转录引物 A 3(5‘一G G C T C A C C G G A G T G T I牙C了1,C一3’)。取2 沮反转录产物进行第一轮 P C R 扩增,反应体积 20 风,引物为A S (5‘一 C T T T G A T G A C A C C G T C T T C T C G 一3‘)和 A 3,反应条件为:94 ℃预变性 5 m in;94 ℃ 40 5,6 8 oC 4 05,3 5 个循环; 72oC 延伸 5 m in,取 l 以l第一轮 P C R 产物,在 20 川 反应体积中进行第二轮 P C R,中华肝脏病杂志 2004 年 1月第 12 卷第1期 C h in J H epatol, J a n l a r y 2 0 0 4 , V o l 1 2 , N o引物为 B S (5’一G C C G C A G C A A A G G C A T C C A T G 一3‘) 和B 3 (5’一G T G T T T C T T C C A A A A C C C T C G C 一3‘),条件为94℃预变性5 Tn in; 94℃ 4 0 5,5 6 ℃ 4 0 5,7 2 ℃ 8 0 5,3 5 个循环;72 ℃ 延伸 5 m m。将扩增片段用胶回收试剂盒 (上海华舜公司) 回收纯化,连接人pM T 一18 载体 (大连宝生物公司),由上海博亚公司进行序列测定,测序结果与 H E V 4 种基因型代表株用Clust a1 X 软件进行同源性分析,以 T re eV te w 软件绘制系统树。4.实验动物:实验所用恒河猴由广西壮族自治区疾病控制中心提供,1 一 2 岁,实验前进行常规医学观察,并持续2 周检测血清 A L T 正常,以及抗 一 H E VIg M、Ig G 抗体阴性。巡笼生):)注弃M:分子量标准 ; l : 阴性对照 ; 2 : 样品; 3 : 阳性对照图 2 R T 一P C R 检测献血员206 血浆H EV R N A献_血员 2 0 6T 一 C t l结 果1.献血员血浆中 H E V R N A 的检出及其同源性分析:用国产新型抗 一H E V Ig M、Ig G 检测试剂盒对献血员进行 H E V 流行率调查时发现,献血员206 血浆抗 一 H E V Ig M 抗体滴度大于 1,640,而抗 一H E V Ig G阴性;同时用进口 G e n ela b s 公司抗 一 H E V Ig M、工g G检测试剂盒检测均为阴性;对该血浆标本进行单克隆抗体阻断实验,发现其抗 一 H E V lg M 抗体可被抗 一H E V 中和单克隆抗体显著阻断 (图功;其血清学表现复合H E V 感染早期特征,推测同时具有病毒血症的可能性较大。用R T 一P C R 方法从献血员 206 血浆中扩增出一条特异带 (图2),经克隆测序后 (G e曲ank登录号: A Y 245779) 与 H E v 各基因型代表株进行同源性分析。从献血员206 中分离出的序列与 H EV w 型 T 一C t l 株的同源性为 80 %,与其他型的同源性均小于70 %,证实为 H EV 基因 工V 型 (图 3)。T 一 U S Z T 一 M Z图 3 献血员 20 6 中 H E V R N A 序列与 H E V 4 种基 因型代表株 的同源性分析A L T、血清抗 一H E V 抗体以及粪便排毒情况,结果见图 4。对 R T 一 P C R 扩增出的血清和粪便中的 H E VR N A 片段进行克隆测序,所得序列与献血员 206 血浆中克隆出的相应序列完全一致。病毒 恤清 )I △ △ △ ▲ △病毒 (粪便 )1△△△ △ △▲▲▲▲△△病 理卜LT侧\曰n目门曰n,乙曰、划州卜国军塌越嗽 一‘ 未 阻断、 阳 断一一一一0.0‘踌。 一留 已0 1 2 3 4空心标记为病毒核酸 阴性,性一—一J一到 O5 6 7 名 9 1 0 1 1 1 2感染 周数实心标记 为病毒核酸 阳性或病理 阳图 4 输人献血员 2 0 6 血浆后恒河猴的戊型肝炎相关指标动态变化~.一山~一 , - 一‘ 讨 论卜l||l|L仁Ln曰nU1:8 0 1:1 6 0 1:3 2 0 1:6 4 0血清稀释度图 1 抗 一 H E V 中和单克隆抗体对献血员 2 0 6血浆抗 一 H E V 工g M 抗体的阻断实验2.H E V 病毒血症献血员血浆对恒河猴的感染性和致病性:将 10 m l献血员 206 血浆静脉注人一只抗 一H E V 抗体阴性健康恒河猴体内,连续观察恒河猴血清H EV 的感染主要表现为亚哈床感染,病毒血症可以在感染急性期和亚急性期出现[3一51。H E V 病毒血症通常持续 2 一 3周,但也有长达 112 d 的报道[3洲。有流行病学研究发现在血液透析患者、血友病患者和静脉药瘾者中的 H E V 感染率较一般人群更高。A rankale 等16, 7]报道,在 37 例抗 一 H E V 工g G 阴性受血者中有 2例在中华肝脏病杂志 2004年 l月第 12 卷第 l 期 C hin J Hep atol, J a n u a r y 2 0 0 4 , V o l 1 2 , N o.1输血后出现了抗 一H E V 抗体阳转,在印度的20 例健康献血员中发现了 3例 H EV 病毒血症。这些发现均提示着 H EV 经血液传播的可能性,但该研究中未发现感染性献血员与血清阳转受血者之间存在的直接联系。N ica nd 等[sl 曾提出无症状携带者在 H E V 流行中的作用。研究中,将一份来自于志愿献血员的H E V 病毒血症的血浆输人恒河猴,发现恒河猴出现了较典型的急性肝炎表现以及 H E V 复制,从而直接证实了 H E V 经血液传播并导致急性戊肝的可能性。研究的结果以及上述的其他流行病学证据充分提示了H E V 经血制品传播的可能性。参 考 文 献1 葛胜祥,张军,彭耿,等.基于多聚化重组抗原的戊型肝炎病毒抗体Ig M、工g G E L IS A 方法的建立及初步应用.病毒学报,2 0 0 3,1 9:7 4 一 8 2.2 顾颖,葛胜祥,黄果勇,等.戊型肝炎病毒中和性单克隆抗体的鉴定.病毒学报,2 003,1 9:21 7一 2 23.3 A g g a rw a l R,K ini D,SofatS,etal.Du r atio n ofvir a em ia a nd fae e alvir ale x c r etio nin a e utehePatitisE.La n e et2 0 0 0,3 5 6:1 0 8 ]一1 0 8 2-4 Na ndaS,An s a ri l,Ach ax yaS,etal.Pr otr a etedvir em iadu ringa e utesPo r ad iehePatitisEvir u sinfeetio n.Ga str o e nte r olog y 1 9 9 5,1 0 8:2 2 5一2 3 0.5 N ie a nd E,份andadam M,Teys s o uR,etal.Vir a em ia a ndfae e alshed-d ingof H E V in sy m Ptom一fre e e a r rie r s.La n e e t 2 0 0 1,3 5 7:6 8一6 9.6 Ar a nkal leV,C hobeL.Re t r o s Pe c t iv e a n aI ysis of b lo od tr a n sfusio nr e ei P ie n t s : e v i de n e eforPo s t一t r a n sfusio nheP at i t isE.VoxSa ng 2 0 0 0,7 9:7 2一7 4.7 Ar a nkal leV,C hobeL.HePatitisEvir u s : e a nitbetr a n sm it tedPa r e nte r al l y ? J V iral HePat1 9 9 9,6:1 6 1一1 6 4.(收稿日期: 20 0 3一 1 0 一 1 6 )(本文编辑:谢娜)经验交流连续分子吸附再循环系统人工肝治疗过程中患者的不 良反应及处理王新 周新民 苗继延 杨艳 赵玲 丁杰 吴开春 樊代明【关键词】 肝,人工;分子吸附再循环系统;人工肝支持系统Side一 e l l ’e ets a n d m a n a g e m e n t o f co n tin u o u s M A R Sa r tifi e a l liv e rfor P a tie n ts,科今令刀G X in,ZH O U X in一m ing,2}刃八0 J i一ya n,YAN GYanZ 习A O L in,DING Jie,WU K di一ehu n,FAN Dai一m ing.[Key wo rdslArti f icial l iv e r:Mole c ula r ads o rbe ntr e eir e ulatingsystem:Arti f ie al l iv e rIF ir sta utho r, 5 ad dr e s s] In s t i tu t e o f Dege s t iv eD is e a s e,XijingHo sp ital,Fo u rthMi l ita ryMed ie al Univ e x 侣ity,X i’a n7 1 0 0 3 2,C h in a研究分析单次和多次分子吸附再循环系统 (M A R S) 人工肝治疗过程中患者出现的不良反应,及采用相应处理措施后效果,为各类危重肝病患者安全有效地实施M A R S 人工肝治疗提供指导。1.资料与方法:20 例各种原因所致急慢性肝功能不全患者,判定患者的肝功能状态之后,检测患者的凝血酶原时间,做深静脉 (颈静脉或股静脉) 置管。使用德国 M A R S 人工肝支持系统。透析液组成按比例配制碳酸盐透析液。参数设置:循环血液量为150 m l/ l润日1,循环白蛋白(20 % ) 流量为150 耐/m in;透析液流量为 7 5 m l/ m in (若采取循环方式,则为 15 0 一Z O 0nil /m in,Z h 更换一次透析液),单次连续治疗时间为6 h。2.结果:对急慢性肝功能衰竭患者分别经 1、3 或 7 次M A R S 治疗,到目前,共有 20 人进行了29 次M A R S 治疗。经作者单位: 7 1 0 0 3 2 西安,第四军医大学西京医院消化病研究 所随访 1一 9个月,16 例治愈或好转,4 例死亡,生存率为80 %。13例患者出现寒冷反应; 1 例出现消化道反应; 4 例出现过敏反应; 3例出现动脉血压显著升高; l例十二指肠癌伴肝转移患者出现消化道出血,因肝功能衰竭而坚决要求M A R S 治疗,在治疗进行 Z h 时再次消化道大出血,遂终止治疗,后因大出血不止、休克而死亡; 1例老年患者,有前列腺增生,术中尿储留;1例患者连续3次 (1次 /d ) M A R S 治疗后几血小板和血色素明显下降,伴乏力、纳差,但停止M A R S 治疗数天后即可恢复。3.讨论:在治疗 1一Z h 时13 例患者全身发冷,与血液在体外循环有关,经增加透析液和患者周转温度后改善。治疗中1例患者出现恶心、呕吐反应,与M A R S 治疗清除体内大量低分子物,血液渗透压改变有关,术前半小时肌肉注射胃复安预防有显效。4 例患者出现过敏反应 (寒颤、呼吸困难、气短) 与管道致热原或自体血细胞破坏有关,术前半小时静脉滴注20 1119 氢化考地松可预防。多数患者M A R S 治疗中平均动脉压会有所增高,但个别患者收缩压会显著升高达 19 0 一 2 20 m m H g,有诱发消化道、颅内出血的危险,应早期用生长抑素类药物、降压:药(心痛定等)控制。有消化道出血 (显性或隐性)者应慎行M A R s治疗。M A I交S 治疗时间隔2 一4 d l 次为宜。在M A I灵S 治疗过程中,少数患者出现不良反应,经积极度处理后均可缓解。且提前预防性用药可避免发生上诉不良反应,无其它特殊并发症。( 收稿日期: 2 0 0 3一 0 1 一 1 4 )(本文编辑:谢娜)

戊型肝炎病毒核酸阳性血浆经输血传播感染恒河猴的研究

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/21238/%e6%88%8a%e5%9e%8b%e8%82%9d%e7%82%8e%e7%97%85%e6%af%92%e6%a0%b8%e9%85%b8%e9%98%b3%e6%80%a7%e8%a1%80%e6%b5%86%e7%bb%8f%e8%be%93%e8%a1%80%e4%bc%a0%e6%92%ad%e6%84%9f%e6%9f%93%e6%81%92%e6%b2%b3%e7%8c%b4%e7%9a%84%e7%a0%94%e7%a9%b6.pdf?sequence=1&isAllowed=y

戊型肝炎病毒核酸阳性血浆经输血传播感染恒河猴的研究

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