Estudio zootécnico de la Neosporosis bovina: análisis teórico de orientación para los ganaderos de Santander y Boyacá

Una de las principales causas de baja productividad en los hatos ganaderos del país son los problemas reproductivos; aunque se han caracterizado algunas enfermedades como agentes, estudios han demostrado que más de 14 enfermedades generan afecciones reproductivas, y muchas de las cuales no son conocidas por los ganaderos. La Neosporosis bovina es ocasionada por el protozoario llamado Neospora caninum, causante de grandes pérdidas económicas en la ganadería bovina debido a que produce abortos en vacas, tanto doble propósito como de carne y leche. Su presentación es evidente en los hatos de la región de Santander y Boyacá y hace parte de las enfermedades que causan fallas reproductivas en estas regiones, por tanto, se tiene como propósito ampliar el panorama de la enfermedad producida por el parásito haciendo un detallado reconocimiento histórico de la presentación de la enfermedad y los eventos que suceden en cada entorno, prevalencia de la enfermedad en el mundo, morfología, ciclo de vida específico, las vías de transmisión ya sea transparentaría o por contacto y alteraciones patológicas de importancia epidemiológica y su diagnóstico mediante pruebas de laboratorio. El propósito de realizar este estudio zootécnicos de la enfermedad, ha sido el de conocer la incidencia del parásito Neospora caninum como causa importante en la falla reproductiva y su participación en las perdidas económicas generadas a las explotaciones ganaderas; además, de conocer su epidemiologia, caracterización del parásito en sus diferentes fases, los mecanismos de defensa del animal tanto de la madre como del feto en la parte inmune, los diferentes métodos de diagnóstico, el tipo de muestra que se debe remitir al laboratorio y la especificidad de cada una de ellas, una vez revisada y analizada la información se dieron unas medidas de manejo, control, profilaxis y tratamiento.A major causes of low productivity in livestock herds in the country are reproductive problems; although some diseases have been characterized as agents, studies have shown that more than 14 diseases cause reproductive harm, and many of which are not known by farmers. Bovine Neosporosis is caused by the protozoan called Neospora caninum, which causes great economic losses in cattle because it produces abortions in cows, both dual purpose as meat and milk. His presentation is evident in herds in the region of Santander and Boyaca and is part of the diseases that cause reproductive failure in these regions, therefore, it is intended to broaden the outlook of the disease caused by the parasite making a detailed historical recognition presentation of the disease and the events that happen in each environment, disease prevalence in the world, morphology, specific life cycle, transmission routes either transparentaría or by contact and pathological changes in epidemiological importance and diagnosis by Lab tests. The purpose of conducting this zootechnical disease study, was to determine the incidence of the parasite N. caninum as an important cause reproductive failure and their participation in economic losses generated livestock farms; Besides knowing its epidemiology, characterization of the parasite in its various phases, the defense mechanisms of the animal both mother and fetus in immune part, the different methods of diagnosis, type of sample should be forwarded to the laboratory and the specificity of each of them, once reviewed and analyzed information management measures, control, prophylaxis and treatment were given

Prevalencia de Neospora caninum en bovinos en el cantón Guamote.

Neospora caninum is a protozoan that affects cattle herds at the reproductive level, having canines as definitive hosts. This protozoan is capable of causing everything from abortions to having malformed babies. The objective of this research is to determine the prevalence of Neospora caninum in cattle from the Guamote canton (Matriz, Cebadas and Palmira). For this, 5 ml of blood samples were taken from the jugular vein of 184 female bovines for their subsequent analysis using the indirect ELISA test. Then, through the chi-square statistical test, the significance and existing correlation between the variables (age, race and height) and the presence of Neospora caninum were analyzed. The results showed that of the 184 cows a total of 28 cases are positive to Neospora, which represents a prevalence of 15.22%. 4.89% of the prevalence according to age corresponds to 5-year-old females, being the age with the highest positive cases; According to the breed, it was observed that most of the infected cases correspond to the Jersey breed with 13 positive animals, which represents a 7.07% prevalence of Neospora caninum; Regarding the height at which each animal is found, 8.70% of prevalence are found at a height of 2750 to 3000 meters above sea level. Finally, based on the results obtained, the prevalence of Neospora caninum in cattle in the Guamote canton is demonstrated, however, in none of the variables under study significant differences were found, that is, race, age and height are not related. with the presence of the disease. Additionally, a sanitary plan is proposed to prevent and control Neosporosis and the application of the proposed plan at the cantonal level is recommended, since it includes several actions to be taken to prevent and control Neosporosis in cattle herds.La Neospora caninum es un protozoo que afecta a los hatos ganaderos a nivel reproductivo teniendo como hospedadores definitivos a los caninos. Este protozoo es capaz de causar desde abortos hasta teneros mal formados. La presente investigación tiene como objetivo determinar la prevalencia de Neospora caninum en bovinos del cantón Guamote (Matriz, Cebadas y Palmira). Para ello, 5 ml de muestras de sangre fueron tomadas de la vena yugular de 184 bovinos hembra para su posterior análisis mediante la prueba de ELISA indirecto. Después, a través de la prueba estadística chi-cuadrado se analizaron la significancia y la correlación existente entre las variables (edad, raza y altura) y la presencia de Neospora caninum. Los resultados mostraron que de las 184 vacas un total de 28 casos son positivos a Neospora, lo que representa, una prevalencia del 15.22%. El 4.89% de la prevalencia según la edad corresponde a hembras de 5 años, siendo la edad con mayores casos positivos; de acuerdo con la raza se observó que la mayoría de los casos infectados corresponden a la raza Jersey con 13 animales positivos lo que representa el 7.07% de prevalencia de Neospora caninum; en cuanto a la altura a la que se encuentran cada animal, el 8.70% de prevalencia se encuentran en una altura de 2750 a 3000 msnm. Finalmente, en base a los resultados obtenidos, se demuestra la prevalencia de Neospora caninum en bovinos en el cantón Guamote, sin embargo, en ninguna de las variables en estudio se encontró diferencias significativas, es decir, la raza, edad y altura no tienen relación con la presencia de la enfermedad. Adicionalmente, se plantea un plan sanitario para prevenir y controlar la Neosporosis y se recomienda la aplicación del plan propuesto a nivel cantonal, puesto que incluye varias acciones a tomar para prevenir y controlar la Neosporosis en los hatos ganaderos

Seroprevalencia de Neospora caninum en vacunos Brown Swiss en cinco comunidades del distrito de Ilave - 2017

El presente trabajo de investigación se realizó en vacunos Brown Swiss del distrito de Ilave provincia de El Collao en los meses de noviembre, diciembre del año 2017, con el objetivo de determinar la seroprevalencia de Neospora caninum, considerando los siguientes factores: sexo, (machos y hembras), por edad (menores a 2 años y mayores a 2 años) y estado reproductivo (preñadas y vacías), donde las hembras menores a 2 años se consideraran vacías, y los machos menores a 2 años se consideran reproductores, las hembras mayores a 2 años se subdividieron vacías sin producción, vacías en producción y preñadas sin producción, preñadas en producción, en un sistema de crianza al pastoreo, Se trabajó al azar con 81 vacunos Brown Swiss , donde se obtuvo 05 mL de sangre de la vena yugular de cada animal, la técnica diagnostica fue mediante la prueba de ELISA indirecta, para la detección de anticuerpos contra Neospora caninum, con una sensibilidad del 95%, donde fue analizado en el laboratorio de Salud Animal del CIP Chuquibambilla de la F.M.V.Z, UNA-PUNO. Los datos fueron procesados mediante la prueba estadística de Chi-cuadrado, determinando que en dicho distrito el resultado de la seroprevalencia general de Neospora caninum fue 8.64%, la seroprevalencia de la Neospora caninum en vacunos machos fue 6,25% y hembras 9.23% (P>0.05). En menores de dos años fue 8.33% y mayores de 2 años 8.88% (P>0.05). Las vacas en producción 9.09%, y en seca 9.30% (P>0.05). Vacías 20.00%. y las preñadas 4.44% (P≤0.05). La seroprevalencia de Neospora caninum es independiente pues este protozoo afecta a machos y hembras, sin importar la edad, el estado reproductivo y ni el estado productivo, pero si entre vacías y preñadas.Tesi

Transmisión horizontal y vertical de Neospora caninum en tres sistemas de cría bovina

Tesis de maestría para obtener el grado de Magister Scientiae en Sanidad Animal presentada en la Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Mar del Plata en mayo de 2015El objetivo del presente estudio fue evaluar la seroprevalencia y la tasa de transmisión de Neospora caninum en bovinos en tres sistemas de cría. El trabajo se realizó en el campo experimental Colonia Ortiz Basualdo, EEA INTA Cuenca del Salado (lat. 37° 5´ 7,85¨S; long. 57° 52´36,45¨ O), partido de Ayacucho, provincia de Buenos Aires, Argentina. Se seleccionaron 216 vientres Angus involucrados en 3 sistemas de manejo con 72 hembras elegidas al azar en cada uno categorizados como “intensivo", "semi-intensivo" y "tradicional" (extensivo) según la carga animal y el grado de tecnología implementado. Se obtuvieron muestras de sangre cada 3 meses, aproximadamente, durante un período de 21 meses. Un grupo de 90 vaquillonas, Angus de reposición, integradas en partes iguales por el sistema intensivo (30/90), semi-intensivo (30/90) y tradicional (30/90), fueron evaluadas, de la misma forma, desde los 9 meses hasta los 21 meses de edad. A su vez, se obtuvieron muestras de sangre de un total de 34, 20 y 24 terneros de los mencionados sistemas de cría previo a la ingestión de calostro y a los 7 meses de edad. Las muestras fueron analizadas por la prueba de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) para la detección de anticuerpos anti-N. caninum considerando un título serológico de ≥ 200 para vacas multíparas, vaquillonas y terneros de 7 meses de edad, mientras que para los terneros, que aún no habían ingerido calostro, fue de ≥ 25. Se valoró la avidez de los anticuerpos específicos en animales positivos por IFI mediante el test de ELISA. Durante el período de estudio 5, 4 y 8 vacas multíparas, correspondientes a cada uno de los sistemas de manejo, respectivamente, resultaron ser positivas a la infección por N. caninum en alguno de los tiempos analizados. La seroprevalencia acumulada fue de 6,9%, 5,5% y 9,7% para cada uno de los sistemas, respectivamente. Todas las vaquillonas de reposición fueron negativas a la infección por N. caninum, independientemente del sistema de manejo implementado. La transmisión vertical fue del 100% para el sistema intensivo y tradicional y de 50% para el sistema semi-intensivo. El análisis de la avidez de los anticuerpos demostró que la infección estaba presente previo al inicio del trabajo, a su vez, un porcentaje menor de animales en los tres sistemas, presentó baja avidez de anticuerpos sugiriendo la presencia de una infección primaria. No existieron diferencias significativas (Proced Freq/SAS p>0,05) en las seroprevalencias a N. caninum entre los sistemas analizados. La transmisión de la neosporosis bovina en sistemas de cría bovina no se incrementó con la intensificación del sistema productivo al menos en el período en estudio y bajo las condiciones de manejo y la población sobre la cual se realizó el seguimiento.Fil: Rodriguez, Alejandro Martin. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Cuenca del Salado; Argentin

Relación entre la seroconversión positiva de vacas holstein a neospora caninum y el aborto, muerte fetal temprana, momificación fetal, gestación a termino y mortalidad neonatal

El presente trabajo de investigación “Relación entre la seroconversión positiva de vacas holstein a Neospora caninum y el aborto, gestación a término, muerte fetal temprana, momificación fetal y mortalidad neonatal” tuvo como objetivo determinar si existe relación entre la presencia de neosporosis bovina y las variables en estudio. Para lo cual se propuso un estudio de cohorte transversal usando una sola encuesta serológica de ELISA para determinar el estatus de las vacas. Los datos sobre la presentación de los eventos o variables se tomaron de los registros ganaderos de hatos pertenecientes a la sierra sur del Ecuador provincias de Azuay y Cañar (Hacienda la Esmeralda, Criadero Guangarcucho, Hacienda Papaloma y Hacienda Turupamba) de donde de se estudiaron 100 animales seropositivos y 100 seronegativos durante un período entre el parto y el siguiente evento reproductivo. (parto-parto; parto-aborto; etc).Como pruebas de significación estadística se utilizó el Chi-cuadrado de Pearson, de Maentel y Haenzel y el Odds Ratio como análisis de riesgo. Obteniéndose los siguientes resultados: La relación entre el aborto y la seroconversión a Neospora caninum fue altamente significativa (P= 0,005), las vacas positivas tienen 2,73 veces más riesgo de abortar que las vacas negativas. Se determinó asociación entre la muerte neonatal y la seroconversión positiva (P= 0,046) por tanto los terneros de las vacas positivas tienen 2,53 veces más riesgo de morir antes de alcanzar el destete (2 meses) que los terneros de vacas negativas. Con respecto a las otras variables en estudio no se determinó asociación estadística.The present research “Relationship between the holstein cows positive seroconversion a Neospora caninum and the abortion, gestation at end ,early fetal death, fetal mummification, and neonatal mortality” had as objective to determine if there is relationship between the presence of neosporosis bovine and the variables of the study. In order to arrive to the above indicated objective, it was proposed a study of transversal cohort using a single ELISA serological survey to determine the status of the cows. Data regarded to the presentation of events or variables were taken from records of cattle herds belonging to the Southern Highlands of Ecuador, Azuay and Cañar provinces, from which a total of 100 seropositive and 100 seronegative animals were studied over a period between birth and the next reproductive event (calvin-calvin, calvin-abortion; etc.). Chi-square test of Pearson, Maentel and Haenzel were used as statistical significance tests, and Odds Ratio as risk analysis. The research arrived to the following results: The relationship between abortion and seroconversion to Neospora caninum was highly significant (P= UNIVERSIDAD DE CUENCA Dr. Jaime Eduardo Maldonado. Página 4 0.005), being the positive cows 2.73 times more likely to abort than the negative ones. It was determined association between neonatal death and positive seroconversion (P= 0.046), so the positive cow calves have 2.53 times more risk of dying before weaning than calves from negative cows. Regarding to the other variables in study, no statistical association was determined.Magíster en Reproducción AnimalCuenc

Frecuencia de Toxoplasma gondii en gatos en Lima Metropolitana y concordancia entre las técnicas de inmunofluorescencia indirecta y hemaglutinación indirecta

El objetivo del presente trabajo fue determinar la frecuencia de anticuerpos contra Toxoplasma gondii en gatos de Lima Metropolitana. Además, estimar el grado de concordancia entre las técnicas de diagnóstico de inmunofluorescencia indirecta y hemaglutinación indirecta. Se analizaron las muestras de sueros de 178 gatos, obtenidas de diferentes clínicas veterinarias de Lima Metropolitana. Los resultados mostraron una frecuencia de reactores a Toxoplasma gondii de 17.9% con un intervalo de confianza de 95% entre 12.0 y 23.5% para la técnica IFI y 11.2% con un intervalo de confianza de 95% entre 6.6 y 15.8% para la técnica HAI. La evaluación de reactores según edad y sexo, no mostraron diferencia estadística significativa (p>0,05). Por otro lado, al evaluar el grado de concordancia entre ambas pruebas se halló un valor de Kappa (K) igual a 0.73 indicando que el grado de concordancia entre ambas pruebas fue del tipo sustancial; mientras que con la prueba de Mc Nemar se encontró significancia estadística (p menor 0.05), entendiendo que las pruebas no pueden ser reemplazadas mutuamente.--- The aim of the present work was to estimate the frequency of Toxoplasmosis in cats in the city of Metropolitan Lima. Aside from determining the rate of concordance between the Indirect immunofluorescence (IFI) and Indirect haemaglutination (HAI) Assays, two of the very common diagnostic tests for Toxoplasmosis in our area, a number of 178 cat serum samples, collected in veterinary clinics of this city, were analyzed. The results determined a frequency of reactors to Toxoplasma gondii in 17.90% with a 95% confidence interval (CI) between 12.00% and 23.50% for IFI test and in 11.20% with a 95% confidence interval (CI) between 6.60% and 15.80% for HAI test. The evaluation of reactors, according to age and sex, did not provide statistically significant difference (p> 0, 05). On the other hand, when the rate of concordance among both assays was tested, there was a value of Kappa (K) similar to 0.73 indicating that the concordance is substantial between the two test; while in Mc Nemar’s test, there was statistically significant difference (p less 0.05), indicating that both tests cannot be replaced reciprocally.Tesi

Respuesta inmune local en la patogenia del aborto inducido por herpesvirus equino 1

El alfaherpesvirus equino 1 produce alteraciones reproductivas que ocasionan importantes pérdidas económicas, además de las que suceden a nivel respiratorio y nervioso. En esta tesis se utilizó el modelo murino BALB/c para estudiar algunos cambios en el útero y las placentas de ratonas preñadas y experimentalmente infectadas que pudieran producir la pérdida de continuidad del conceptus. Se describieron las lesiones en los pulmones, el útero y las placentas y se estudiaron los cambios vasculares y en la proliferación y muerte celular por inmunohistoquímica. Se analizaron los niveles en la expresión de algunas citoquinas por qPCR, citometría de flujo y por ELISA. Las ratonas infectadas manifestaron signos clínicos respiratorios y en sus pulmones lesiones histopatológicas típicas, con aislamiento viral y detección de ADN positivos. En las placentas infectadas el aislamiento viral y detección de ADN fueron negativos. Sin embargo, presentaron congestión vascular, ocasionales trombos en pequeños vasos de las capas de espongiotrofoblasto y decidua, aumento en el área del laberinto, y reducción significativa en el endotelio capilar fetal. También se redujo significativamente la proliferación celular, mientras que la apoptosis fue significativamente mayor. La regulación local de la expresión de IL-10, TNF-α, IFN-γ, Foxp3 e IL-4 también difirió en el útero y las placentas del grupo infectado con respecto al control. Hubo un fuerte incremento de la respuesta Th1, mayormente representado por IFN-γ, acompañada por una respuesta Th2 tolerogénica, cuyo fin podría ser restaurar el balance homeostático ante la infección. Los datos obtenidos permiten afirmar que se producen cambios celulares y moleculares a nivel de la respuesta inmune local debido a la infección. La comprensión del impacto inmunológico de la infección sistémica y local por el virus en el modelo murino ayudará a abordar estudios en equinos para mejorar las estrategias profilácticas y terapéuticas.Equid alfaherpesvirus 1 causes respiratory, nervous and reproductive disorders, being the latter those that produce high economic losses in Argentina. In this thesis, the BALB/c mice model was used to study some changes in the uterus and placentas of pregnant and experimentally infected mice that could explain the loss of the conceptus. We described the histopathological lesions present in the lungs, uteri and placentas of the infected mice, in addition to placental vascular alterations, and studied cellular proliferation and death changes by immunohistochemistry. In addition, the expression of some cytokines was analyzed by qPCR, flow cytometry and ELISA. The infected mice showed respiratory clinical signs, and histopathological lesions of EHV-1 infection in their lungs, which were also positive to virus isolation and DNA detection. On the other hand, virus isolation and DNA detection were negative in the infected placentas. However, vascular congestion, occasional thrombi in small vessels of spongiotrophoblast layers and decidua, an increase in the labyrinth area, and a significant reduction in fetal capillary endothelium surface were described in them. Besides, cell proliferation was significantly reduced whereas apoptosis was increased. Local expression of IL-10, TNF-α, IFN-γ, Foxp3 and IL-4 also differed in the uteri and the placentas of infected group in comparison to control mice. There was a strong increase in Th1 response, mostly represented by IFN-γ, but also a tolerogenic Th2 response which may be used to restore the immunological homeostasis in response to infection. Here, we have shown changes in the local immune response induced by the infection. The understanding of the immunological impact of systemic and local EHV-1 infection in the murine model will help to address future studies in the natural host to improve prophylactic and therapeutic strategies.Fil: Bravi, Maria Emilia. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentin

Interacción parásito-hospedador en fasciolosis ovina: mecanismos de respuesta en fases tempranas y tardías

Fasciola hepatica es el agente etiológico de la fasciolosis, enfermedad descrita como la principal causa de pérdidas económicas en el sector agrícola y ganadero en países desarrollados y en vías de desarrollo como consecuencia de las tasas de morbilidad y mortalidad que origina en los animales de abasto. La OMS la describe como una enfermedad parasitaria re-emergente con un especial impacto en humanos alrededor de todo el mundo. Entre los distintos principios activos disponibles para hacer frente a esta enfermedad, el triclabendazol se erigió como el fármaco de elección en el tratamiento de la fasciolosis. Debido al uso de antihelmínticos como único medio eficaz para el control de la infección, se hace necesario el estudio e implementación de vías alternativas que permitan el control de esta enfermedad, como la obtención de líneas genéticas resistentes o el desarrollo de vacunas. La infección por F. hepatica desencadena la actuación de la respuesta inmunitaria como consecuencia del reconocimiento de numerosos antígenos de excreción-secreción (FhESPs) o de la superficie del parásito. Estas moléculas han sido identificadas y purificadas con el fin de realizar ensayos vacunales con los que determinar su capacidad inmunógena y qué antígeno pudiera constituir el candidato idóneo de una vacuna eficaz. La mayoría de los estudios vacunales realizados en rumiantes se han centrado en el empleo de antígenos obtenidos a partir de la fase adulta del parásito, si bien se torna de vital importancia identificar áquellos que juegan un papel relevante durante todas las fases de la infección. Con este motivo, se empleó en un primer estudio un antígeno (rFh14- 3-3z) de la familia de proteínas 14-3-3, con el que poder determinar el perfil inmunológico y el componente parasitológico, haciendo hincapié en el número de fasciolas asentadas en hígado y la dinámica de eliminación de huevos en heces. Se usaron 24 ovejas de raza merina de seis meses de edad divididas aleatoriamente en tres grupos (n=8) con el siguiente modelo: el grupo 1 fue inmunizado con la proteína recombinante Fh14-3-3z y el adyuvante Montanide™ ISA 71 VG, el grupo 2 se inmunizó únicamente con Montanide™ ISA 71 VG (control adyuvante) y el grupo 3 fue el grupo control de infección (infectado y no vacunado). Ocho semanas posteriores a la primera inmunización los animales fueron infectados oralmente con una única dosis de 150 metacercarias. A las 6 semanas de la infección se realizó un muestreo de heces semanalmente a todos los animales para analizar la dinámica de eliminación de huevos mediante McMaster con sulfato de zinc. La presencia de huevos en heces se detectó a las 8 semanas post-infección en el grupo 1 y las 9 semanas en los grupos 2 y 3. De la misma manera, una vez sacrificados se recogieron los adultos de F. hepatica de los hígados para realizar su recuento, así como la medición de los vermes. El grupo 1 presentó una carga de 52’25 ± 16’71 fasciolas, similar al grupo 3 con una carga media de 51’13 ± 12’84 y el grupo 2 evidenció una mayor carga parasitaria con 68’13 ± 23’79 adultos. La respuesta inmunitaria humoral, para los isotipos IgG1 e IgG2, analizada mediante ELISA indirecto mostró un incremento significativo en IgG1 tres semanas después de la inmunización, mientras que IgG2 aumenta su producción significativamente únicamente después de la inmunización en el grupo 2. Debido a los ensayos que han demostrado la falta de protección en animales inmunizados con diferentes antígenos de F. hepatica y a la capacidad inmunomoduladora del parásito se hace necesario conocer la respuesta inmunitaria que se desencadena en las primeras fases de la infección. Por ello, el segundo estudio tuvo como objetivo el análisis poblacional de linfocitos (TCD4, TCD8 y WC1+γδ), macrófagos (CD14), MHCII como célula presentadora de antígenos y células dendríticas (CD83) de cavidad peritoneal de animales infectados y sacrificados en fases iniciales y tardías. En este ensayo se emplearon 37 ovejas de raza merina de seis meses de edad, las cuales fueron divididas aleatoriamente en tres grupos atendiendo al momento del sacrificio: el grupo 1 (n=20) (estadios tempranos) y grupo 2 (n=10) (estadios tardíos) fueron infectados con una dosis de 150 metacercarias. Los animales del grupo 1 fueron sacrificados a los 1, 3, 9 y 18 días post-infección (dpi), así mismo, el grupo 2 fueron sacrificados a las 14 semanas post-infección (spi). El grupo 3 no se infectó y se describió como grupo control negativo. Los parámetros parasitológicos del grupo 2 mostraron una carga parasitaria de 67’78 ± 13’85 adultos con una tasa de implantación con niveles de 45’19% ± 9’24. La presencia de huevos en heces se detectó a las 8 semanas de la infección, alcanzando su máximo a la semana 13. El análisis de las distintas poblaciones leucocitarias se determinó mediante citometría de flujo con distintos anticuerpos monoclonales. Los animales sacrificados en las fases tempranas únicamente mostraron un descenso significativo de los TCD4 a los 1 y 18 dpi. Asimismo, la población de CD14 peritoneal evidenció un descenso a las 9 y 18 dpi, mientras que MHCII y CD83 describen un patrón similar con una significativa disminución a los 3 y 9 dpi. Los animales sacrificados a las 14 semanas aumentaron significativamente su población de WC1+γδ pero sufrieron un descenso significativo en las subpoblaciones de macrófagos y células dendríticas peritoneales. Continuando con una mejor compresión de los mecanismos defensivos del hospedador frente a esta enfermedad, el tercer trabajo realizado tuvo como objetivo analizar la dinámica poblacional en líquido peritoneal y la producción de radicales libres en animales infectados y vacunados. Para este estudio se emplearon 45 ovejas de raza merina de seis meses de edad agrupadas aleatoriamente como se describe: el grupo 1 (n=5) fueron animales no infectados ni vacunados y fue descrito como grupo control negativo, el grupo 2 (n=20) fue experimentalmente infectado con 150 metacercarias y el grupo 3 (n=20) fue inmunizado con rFhCL1 e infectado con 150 metacercarias. El grupo 1 fue sacrificado a las 12 spi mientras que los grupos 2 y 3 fueron sacrificados a los 1, 3, 9 y 18 dpi. La respuesta inmunitaria humoral evidenció diferencias significativas en IgG1 desde las 6ª semana post-vacunación en el grupo 3 y únicamente a los 1 dpi para IgG2. El número total de leucocitos reveló un aumento significativo a los 9 y 18 dpi para el grupo 2 y 3. Más específicamente, el grupo 2 evidenció un aumento significativo de granulocitos a los 9 dpi y de las tres poblaciones peritoneales a los 18 dpi. Por su parte, el grupo 3 aumentó el número de linfocitos a los 3 y 18 dpi, así como la población de macrófagos y granulocitos a los 9 y 18 dpi. La medición de radicales libres por parte de los leucocitos se determinó mediante citometría de flujo usando 2 reactivos diferentes: DAF-2DA para el óxido nítrico y DCFH-DA para el peróxido de hidrógeno. En relación a la producción H2O2, el grupo 2 incrementó su producción por parte de los macrófagos a los 3 y 9 dpi, y a los 18 dpi por parte de los granulocitos. Asimismo, los granulocitos en el grupo 3 mostraron un aumento de este radical libre a los 9 y 18dpi. Finalmente, la producción de NO en el grupo 2 sufrió un incremento significativo por parte de los granulocitos a los 9 y 18 dpi y en los macrófagos a los 18 dpi. Sin embargo, el grupo 3 aumentó la producción de NO a los 3 dpi por parte de los macrófagos y a los 3, 9 y 18 dpi en los granulocitos.Fasciola hepatica is the ethyological agent of fasciolosis, a disease described as the major cause of economic losses to the agricultural industry in developed and developing countries due to the high morbility and mortility rates in livestock. It has been described as a tropical reemerging disease by the WHO. Triclabendazole is the drug of choice against fasciolosis, among different drugs available for the control of the disease. Due to the use of anthelmintic as the only effective mean for the control of the infection, alternative ways for disease control are required, as genetically resistant species or the development of vaccines. Fasciola hepatica infection triggers the immune response as a consequence of the recognition of numerous excretory and secretory products (FhESPs) or tegumental proteins. These molecules have been identified and purified in order to perform vaccine trials aimed at determining their immunogenic capacity so as to develop a vaccine. Most of the vaccine trials carried out in ruminants had been conducted using the adult fluke antigens that are exposed to the immune system. Therefore, it is essential to identify the molecules that play a key role during the course of infection. On this reason, an antigen from the 14-3-3 protein family (14-3-3z) has been used in a first study. With the use of rFh14-3-3z antigen we determined the immunological and parasitological parameters since the first vaccination, with special attention to the number of adult flukes in the liver and the dynamic of faecal egg count. Twenty-four female Merino-breed sheep 6 month old were used for the study. Sheep were randomly allocated into three groups (n=8). Animals from group 1 were immunised with the recombinant antigen rFh14-3-3z in Montanide adjuvant (Montanide™ISA 71 VG -Seppic®). Group 2 was immunised with Montanide adjuvant (adjuvant control group) and animals from group 3 were not immunised and remained as positive infection control. Eight weeks after first immunisation all animals were orally challenged with a single dose of 150 metacercariae of F. hepatica. To assess egg output, faecal samples were individually collected weekly from week six after challenge until the end of the trial, and were analysed by a zinc sulphate-based flotation method using the McMaster chamber. Eggs were first detected at 8 wpi in group 1 and 9 wpi in group 2 and 3. Once sheep were slaughtered the livers were collected and the adult flukes were recovered for measurement and weighing. Fluke burden of group 1 was 52’25 ± 16’71, similar to the group 3 with a mean of 51’13 ± 12’84 adult flukes. The group 2 showed a higher fluke burden of 68’13 ± 23’79 adults. On regard to the humoral immune system, indirect ELISA showed a significant increase of IgG1 at week 3 after immunisation, while IgG2 increased significantly its values only after immunisation in group 2. Due to the failure of many vaccination trials using broad variety of F. hepatica antigens and to the immunomodulatory capacity of the liver flukes, the study of the immune response during the early stages of the infection is vital for a better understanding of the immunological pathways elicited during the host-parasite interaction. Thus, the second study was aimed at analysing the peritoneal lymphocyte (TCD4, TCD8 and WC1+γδ), macrophage (CD14), MHCII as an antigen presenting cell, and dendritic cells (CD83) populations of infected animals and slaughtered at the early and late stages of infection. Thirty-seven female Merino-breed sheep, aged 6 months, were used for the study. Animals were randomly allocated into 3 groups according to the slaughtering time: group 1 (n=20) (early stage) and group 2 (n=10) (late stage) were infected with a single dose of 150 metacercariae. Sheep from group 1 were sacrified at 1, 3, 9 and 18 days post-infection (dpi). In the same way, animals from group 2 were slaughtered at 14 weeks post-infection (spi). The group 3 was not infected and remained as a negative control group. Parasitological parameters from group 2 showed a fluke burden of 67’78 ± 13’85 adults with a implantation rate of 45’19% ± 9’24. Eggs in faecal samples were first detected at week 8 post-infection, reaching the highest figures at 13 wpi. The analysis of the different leukocyte populations was determined by flow cytometry with diverse monoclonal antibodies. Animals sacrified at the early stages of infection only showed a significant decrease of TCD4 at 1 and 18 dpi. Furthermore, CD14 peritoneal population showed a decrease at 9 and 18 dpi, while MHCII and CD83 described a similar pattern with a significant decrease at 3 and 9 dpi. Animals slaughtered at 14 wpi increase significantly WC1+γδ subpopulation but macrophage and dendritic cells peritoneal populations showed a significant decrease. Continuing with a better understanding of host immunological mechanisms against the disease, our third study aimed to analyse the dynamic of peritoneal populations and the production of free radicals in immunised and infected animals. For this study, Forty-five six-monthold male merino sheep were used and randomly allocated as described: group 1 (n=5) was not infected and not vaccinated and remained as negative control group, group 2 (n=20) was experimentally infected with 150 metacercariae and group 3 (n=20) was immunised with rFhCL1 and infected with 150 metacercariae. Group 1 was slaughtered at 12 wpi, while groups 2 and 3 were sacrified at 1, 3, 9 and 18 dpi. Humoral immune response showed significant differences in IgG1 at 6 postimmunisation in group 3 and only at 1 dpi for IgG2. Total number of leukocytes revealed a significant increase at 9 and 18 dpi for group 2 and 3. Granulocytes from group 2 increased significantly at 9 dpi and the three peritoneal populations at 18 dpi. Group 3 increased the number of lymphocytes at 3 and 18 dpi, as well as macrophage and granulocyte populations at 9 and 18 dpi. Free radical measurement was determined with flow cytometry analysis using two different reagent: DAF-2DA for nitric oxide and DCFH-DA for hydrogen peroxide. In relation to H2O2 production, macrophages from group 2 increased the production at 3 and 9 dpi, and granulocytes at 18 dpi. Finally, NO production in group 2 increased significantly in granulocytes at 9 and 18 dpi and in macrophages at 18 dpi. However, group 3 increased NO production at 3 dpi in macrophages and at 3, 9 and 18 dpi in granulocytes

Aspectos inmunopatológicos de la neosporosis bovina

Titulo en ingles: Immunopathologic aspects of bovine neosporosisRESUMEN: Neospora caninum es un protozoario coccidial, filum Apicomplexa, familia Sarcocystidae, de distribución mundial y uno de los principales agentes causales de aborto bovino. N. caninum infecta rumiantes, equinos y cánidos silvestres como hospederos intermediarios  y se ha determinado el perro como hospedero definitivo. Aunque ha sido considerado como un género y especie definido, su biología es escasamente conocida.  La respuesta inmune contra la infección por N. caninum se caracteriza por la secreción de interferón ã (IFN ã), factor de necrosis tumoral á (TNFá) e interleuquina 2 (IL-2) por linfocitos T CD4+. En hembras gestantes la infección con N. caninum puede desencadenar aborto así como el nacimiento de terneros débiles o clínicamente sanos  pero persistentemente infectados. Durante la gestación los parásitos se reactivan, diseminan e invaden los tejidos placentarios y fetales, causando  destrucción de las vellosidades placentarias y aborto.  La infección adquirida  por la madre  en  el primer trimestre de gestación desencadena la liberación de citoquinas (IL-12, IFN-ã y TNFá) de células T ayudadoras tipo 1 (Th1) y una subsecuente producción de radicales libres. Posterior al primer trimestre de gestación, la respuesta inmune Th1 vira a Th2 acompañada de la secreción de IL-4 y IL-5, las cuales son menos eficaces en el control de la infección, disminuyendo el riesgo de aborto pero conllevando a una infección congénita.  La implementación de herramientas moleculares para el desarrollo de estudios epidemiológicos más confiables que determinen la incidencia e impacto real de N. caninum en Colombia y la posterior identificación de los blancos moleculares de la infección para el establecimiento de medidas inmunoprofilácticas se proponen como las estrategias de control más viables.Palabras clave: Neospora caninum, bovinos, inmunopatología, linfocitos T CD4+, interferón  ã, abortoABSTRACT: Neospora caninum is a coccidian protozoan, phylum Apicomplexa, family Sarcocystidae, of worldwide distribution and one of bovine abortion-causing agents. N. caninum infects ruminants, equines and wild canids as intermediary hosts, and the dog was determined as definitive host. Although has been considered  belong- ing to defined genus and species, its biology is scarcely known. Immune response against  N. caninum infection is characterized by the secretion of interferon ã (IFN ã), tumor necrosis factor á (TNFá) and interleukin 2 (IL-2) from T CD4+ lymphocytes. In pregnant females, N. caninum infection can lead to abortion as well as born of weak or clinically healthy but persistently infected calves. During gestation, the parasites reactivate, spread and invade placental  and foetal tissues; causing placental villi destruction and abortion.  Acquired infection by the dam in first trimester  of preg- nancy lead to cytokine release  (IL-12, IFN-ã y TNFá) produced by T helper cell type-1 (Th1) and subsequent production of free radicals. Later of the first trimester of gestation, immune response Th1-type turns on Th2- type accompanied of release  of IL-4, IL-5 which  are less effective to control the infection, diminishing the risk of abortion but lead to congenital infection. The implementation of molecular tools for the development of more reliable epidemiologic surveys that determine the incidence and real impact of N. caninum in Colombia and the later identification of molecular targets of infection for the establishment of immunoprophylactic measures are proposed  as more viable control strategies.Keywords: Neospora caninum, bovines, immunopathology, T CD4+  lymphocytes, interferon ã, abortionTitulo en ingles: Immunopathologic aspects of bovine neosporosisRESUMEN: Neospora caninum es un protozoario coccidial, filum Apicomplexa, familia Sarcocystidae, de distribución mundial y uno de los principales agentes causales de aborto bovino. N. caninum infecta rumiantes, equinos y cánidos silvestres como hospederos intermediarios  y se ha determinado el perro como hospedero definitivo. Aunque ha sido considerado como un género y especie definido, su biología es escasamente conocida.  La respuesta inmune contra la infección por N. caninum se caracteriza por la secreción de interferón ã (IFN ã), factor de necrosis tumoral á (TNFá) e interleuquina 2 (IL-2) por linfocitos T CD4+. En hembras gestantes la infección con N. caninum puede desencadenar aborto así como el nacimiento de terneros débiles o clínicamente sanos  pero persistentemente infectados. Durante la gestación los parásitos se reactivan, diseminan e invaden los tejidos placentarios y fetales, causando  destrucción de las vellosidades placentarias y aborto.  La infección adquirida  por la madre  en  el primer trimestre de gestación desencadena la liberación de citoquinas (IL-12, IFN-ã y TNFá) de células T ayudadoras tipo 1 (Th1) y una subsecuente producción de radicales libres. Posterior al primer trimestre de gestación, la respuesta inmune Th1 vira a Th2 acompañada de la secreción de IL-4 y IL-5, las cuales son menos eficaces en el control de la infección, disminuyendo el riesgo de aborto pero conllevando a una infección congénita.  La implementación de herramientas moleculares para el desarrollo de estudios epidemiológicos más confiables que determinen la incidencia e impacto real de N. caninum en Colombia y la posterior identificación de los blancos moleculares de la infección para el establecimiento de medidas inmunoprofilácticas se proponen como las estrategias de control más viables.Palabras clave: Neospora caninum, bovinos, inmunopatología, linfocitos T CD4+, interferón  ã, abortoABSTRACT: Neospora caninum is a coccidian protozoan, phylum Apicomplexa, family Sarcocystidae, of worldwide distribution and one of bovine abortion-causing agents. N. caninum infects ruminants, equines and wild canids as intermediary hosts, and the dog was determined as definitive host. Although has been considered  belong- ing to defined genus and species, its biology is scarcely known. Immune response against  N. caninum infection is characterized by the secretion of interferon ã (IFN ã), tumor necrosis factor á (TNFá) and interleukin 2 (IL-2) from T CD4+ lymphocytes. In pregnant females, N. caninum infection can lead to abortion as well as born of weak or clinically healthy but persistently infected calves. During gestation, the parasites reactivate, spread and invade placental  and foetal tissues; causing placental villi destruction and abortion.  Acquired infection by the dam in first trimester  of preg- nancy lead to cytokine release  (IL-12, IFN-ã y TNFá) produced by T helper cell type-1 (Th1) and subsequent production of free radicals. Later of the first trimester of gestation, immune response Th1-type turns on Th2- type accompanied of release  of IL-4, IL-5 which  are less effective to control the infection, diminishing the risk of abortion but lead to congenital infection. The implementation of molecular tools for the development of more reliable epidemiologic surveys that determine the incidence and real impact of N. caninum in Colombia and the later identification of molecular targets of infection for the establishment of immunoprophylactic measures are proposed  as more viable control strategies.Keywords: Neospora caninum, bovines, immunopathology, T CD4+  lymphocytes, interferon ã, abortio