Efeito do veneno bruto e de duas fosfolipases a2 (balttx-i – lys49 e balttx-ii – asp49) isoladas do veneno da serpente bothrops alternatus sobre a funcionalidade de macrófagos peritoneais murinos elicitados

Dissertação apresentada ao programa de Pós-graduação em Biologia Experimental da Universidade Federal de Rondônia, para obtenção do título de Mestre.Os venenos de serpentes da família Viperidae consistem em uma complexa mistura de proteínas, peptídeos, lipídios, polissacarídeos e substâncias inorgânicas. Várias miotoxinas, com características estruturais de fosfolipases A2 (FLA2s), foram isoladas dos venenos serpentes da família Viperidae. Os venenos contêm FLA2s, que apresentam homologia estrutural com as de mamíferos. Essas enzimas, por hidrolizarem fosfolipídio de membrana, liberam ácido araquidônico, precursor de eicosanóides, segundos mensageiros de processos fisiológicos e fisiopatológicos. Por catalizarem essas reações, as fosfolipases possuem importantes funções em vários processos biológicos, através da formação de segundos mensageiros que exercem ações biológicas importantes e transdução de sinais celulares. Desse modo este estudo teve por objetivo avaliar o efeito de duas FLA2s, isoladas do veneno de Bothrops alternatus, a miotoxina BaltTX-I, uma Lys-49 catalíticamente inativa e a BaltTX-II, uma Asp-49 enzimaticamente ativa, bem como o veneno bruto sobre a funcionalidade de macrófagos peritoneais in vitro. Os resultados obtidos demonstraram que o tanto o veneno quanto as toxinas não interferem na capacidade de adesão e no com o descolamento dos macrófagos. Além disso, o veneno e a toxina BaltTX-I, mas não a BaltTX-II, nas concentrações de 6, 3 e 1,5 µg/mL induziram o aumento da taxa de fagocitose via receptor de complemento após uma hora de incubação. Adicionalmente foi avaliada a participação da proteína kinase C (PKC) na fagocitose via receptor de complemento. A inibição da PKC, pelo pré-tratamento dos macrófagos com estaurosporina, aboliu a fagocitose induzida pelo veneno e pela BaltTX-I. Ainda, o veneno bruto, assim como as duas toxinas induzem a produção de superóxido, sugerindo que a atividade de fosfolipase não é essencial para o desencadeamento desse efeito. Esses estudos contribuem para a melhor compreensão da fisiopatologia do envenenamento e para o mecanismo de ação do veneno botrópico e das fosfolipases, presentes nesses venenos, para a ativação dos macrófagos

Prostaglandina E2 induz ovulação em camundongos pré-púberes

The objective of this study was to determine the ability of prostaglandin E2 (PGE2) to induce ovulation and expression of PGE2 receptor (EP2 and EP4) and COX genes (COX-1 and COX-2) in the ovary and pituitary of prepubertal mice. The positive control consisted of the application of 5 μg of gonadotropin-releasing hormone (GnRH, n = 29); the negative control applied 0.5 mL of phosphate buffered saline (PBS, n=31); the treatment tested the application of 250 μg of PGE2 (n = 29), making a total of 89 prepubertal mice (BALB/c). Mice were euthanized 14 to 15 h after treatments to detect ovulation and tissue collection. A Chi-square test was used to compare the proportion of animals ovulating. Gene expressions and number of ovulation were analyzed by one-way ANOVA and Tukey’s test was used to compare means among groups. A greater proportion of mice (P < 0.001) ovulated after receiving GnRH (89.7%, 26/29) compared to PGE2 group (58.6%, 17/29). However, the proportion was higher compared to those treated with PBS (0%, 0/31). Ep2 gene expression in the pituitary was > two-fold higher (P < 0.05) in the PGE2 group compared to the PBS and GnRH groups. Further, PGE2 stimulated Cox1 (2.7 fold, P < 0.05) while GnRH stimulated Cox2 expression (6.5 fold, P < 0.05) in the pituitary when compared to the PBS group. In conclusion, our results support the hypothesis that PGE2 can induce ovulation in prepubertal mice with a concomitant increase in Ep2 and Cox1 gene expression in the pituitary gland.O objetivo deste estudo foi determinar a capacidade da prostaglandina E2 (PGE2) em induzir a ovulação e expressão do receptor PGE2 (EP2 e EP4) e genes COX (COX-1 e COX-2) no ovário e na hipófise de camundongos pré-púberes. O controle positivo consistiu na aplicação de 5 μg de hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH, n = 29); o controle negativo aplicação 0,5 mL de tampão fosfato-salino (PBS, n=31); o tratamento testado aplicação de 250 μg de PGE2 (n = 29), perfazendo um total de 89 camundongos (BALB/c) pré-púberes. Os camundongos foram sacrificados 14 a 15 h após os tratamentos para detectar ovulações e coleta de tecido. O teste do qui-quadrado foi usado para comparar a proporção de animais ovulando. As expressões gênicas e o número de ovulação foram analisados por ANOVA e o teste de tukey foi usado para comparar as médias entre os grupos. Uma maior proporção de camundongos (P <0,001) ovulou após receber GnRH (89,7%, 26/29) em comparação com o grupo PGE2 (58,6%, 17/29). No entanto, a proporção foi maior em comparação com aqueles tratados com PBS (0%, 0/31). A expressão do gene Ep2 na hipófise foi duas vezes maior (P <0,05) no grupo PGE2 em comparação com os grupos PBS e GnRH. Além disso, a PGE2 estimulou a Cox1 (2,7 vezes, P <0,05) enquanto o GnRH estimulou a expressão de Cox2 (6,5 vezes, P <0,05) na pituitária em comparação com o grupo PBS. Em conclusão, nossos resultados suportam a hipótese de que PGE2 é capaz de induzir ovulação em camundongos pré-púberes com aumento concomitante na expressão dos genes Ep2 e Cox1 na glândula pituitária

Light-emitting diode (LED) photobiomodulation exerts anti-inflammatory action in murine thioglycolate-elicited macrophages stimulated by Bothrops jararacussu venom and by isolated PLA2s

Although the treatment currently recommended for snakebite accidents is serum therapy using antivenom, a need for adjunctive therapy associated with serum therapy for treating the local effects caused by snakebites is an effort of the WHO to reduce local signals and symptoms. Photobiomodulation with laser or LED therapy is one of the primary examples of adjuvant therapy to serum therapy to lessen these local effects caused by snakebite envenoming. For this purpose, the project aims to study the action of photobiomodulation with LED therapy in isolated thioglycolate-elicited macrophages stimulated with Bothrops jararacussu venom (BjV) and isolated bothropstoxins BthTX-I and BthTX-II focusing on cell dead mechanism such as necrosis and apoptosis, mitochondrial membrane potential, and cytokines [Interleukin (IL)-1β, IL-10, IL-6], and [tumor necrosis factor (TNF)-α] and lipid mediator [prostaglandin (PG)E2] liberation. Briefly, thioglycollate-elicited macrophages were harvested from Swiss male mice incubated with BjV or BthTXs irradiated or not with LED, and the following parameters were analyzed: necrosis and apoptosis, mitochondrial membrane potential, cytokines, and lipid mediator liberation. Herein, results showed that LED therapy was able to decrease necrosis cell death, caspase-3 activity, and TNF-α liberation. In addition, LED therapy induces mitochondrial membrane potential and modulates gene expression of lipid mediators. In conclusion, the data of this study support the use of phototherapy as an adjuvant therapeutical approach in combination with serum therapy to mitigate the local effects resulting from snakebite envenoming

Effect of BjcuL, a lectin isolated from Bothrops jararacussu, on human peripheral blood mononuclear cells

Submitted by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2019-05-17T15:05:57Z No. of bitstreams: 1 Effect of BjcuL, a lectin isolated from Bothrops jararacussu, on human peripheral blood mononuclear cells.pdf: 1969117 bytes, checksum: 83d69880c202052f691a3820748335b6 (MD5)Approved for entry into archive by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2019-05-17T20:51:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Effect of BjcuL, a lectin isolated from Bothrops jararacussu, on human peripheral blood mononuclear cells.pdf: 1969117 bytes, checksum: 83d69880c202052f691a3820748335b6 (MD5)Made available in DSpace on 2019-05-17T20:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Effect of BjcuL, a lectin isolated from Bothrops jararacussu, on human peripheral blood mononuclear cells.pdf: 1969117 bytes, checksum: 83d69880c202052f691a3820748335b6 (MD5) Previous issue date: 2017Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil. / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Engenharia de Anticorpos. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Engenharia de Anticorpos. Porto Velho, RO, Brasil. / Centro de Pesquisa em Medicina Tropical. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil. / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil.BjcuL is a C-type lectin with specificity for the binding of β-D-galactose units isolated from Bothrops jararacussu venom. It triggers cellular infiltration in post capillary venules, increases edema and vascular permeability inmurine models, contributes to in vitro neutrophil activation and modulates macrophage functional activation towards an M1 state. The purpose of this study was to investigate the effect of BjcuL on human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) activation with a focus on PBMCs proliferation and inflammatory mediators release. Results showed that BjcuL is not toxic to PBMCs, that BjcuL inhibits PBMCs proliferation and that it stimulates PBMCs to produce superoxide anion and hydrogen peroxide, primarily via lymphocyte stimulation, but does not stimulate the production of nitric oxide and PGE2. These results demonstrate that BjcuL has an immunomodulatory effect on PBMCs. Further studies are needed to confirm the immunomodulatory effect of BjcuL, to elucidate the molecular mechanisms of action responsible for its effects and to determine its potential application as an immunopharmacological and biotechnological tool

Activation of J77A.1 macrophages by three phospholipases A2 isolated from bothrops atrox snake venom

Submitted by Claudete Queiroz ([email protected]) on 2016-05-03T17:00:14Z No. of bitstreams: 1 Activation of J77A.1 Macrophages by Three Phospholipases A2 Isolated from Bothrops atrox Snake Venom.pdf: 2090853 bytes, checksum: 0669d064c65a39c61c661542c067ee9b (MD5)Approved for entry into archive by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2016-05-10T14:32:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Activation of J77A.1 Macrophages by Three Phospholipases A2 Isolated from Bothrops atrox Snake Venom.pdf: 2090853 bytes, checksum: 0669d064c65a39c61c661542c067ee9b (MD5)Made available in DSpace on 2016-05-10T14:32:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Activation of J77A.1 Macrophages by Three Phospholipases A2 Isolated from Bothrops atrox Snake Venom.pdf: 2090853 bytes, checksum: 0669d064c65a39c61c661542c067ee9b (MD5) Previous issue date: 2014Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.In the present study, we investigated the in vitro effects of two basic myotoxic phospholipases A2 (PLA2), BaTX-I, a catalytically inactive Lys-49 variant, and BaTX-II, a catalytically active Asp-49, and of one acidic myotoxic PLA2, BaPLA2, a catalytically active Asp-49, isolated from Bothrops atrox snake venom, on the activation of J774A.1 macrophages. At noncytotoxic concentrations, the toxins did not affect the adhesion of the macrophages, nor their ability to detach. The data obtained showed that only BaTXI stimulated complement receptor-mediated phagocytosis. However, BaTX-I, BaTX-II, and BaPLA2 induced the release of the superoxide anion by J774A.1 macrophages. Additionally, only BaTX-I raised the lysosomal volume of macrophages after 15 min of incubation. After 30 min, all the phospholipases increased this parameter, which was not observed within 60 min. Moreover, BaTX-I, BaTX-II, and BaPLA2 increased the number of lipid bodies on macrophages submitted to phagocytosis and not submitted to phagocytosis. However, BaTX-II and BaPLA2 induced the release of TNF- by J774A.1 macrophages. Taken together, the data show that, despite differences in enzymatic activity, the three toxins induced inflammatory events and whether the enzyme is acidic or basic does not seem to contribute to these effects

The effect of 3β, 6β, 16β-trihydroxylup- 20(29)-ene lupane compound isolated from Combretum leprosum Mart. on peripheral blood mononuclear cells

Submitted by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2016-01-15T15:11:42Z No. of bitstreams: 1 The effect of 3β, 6β, 16β.pdf: 1570998 bytes, checksum: 49dcbf933a2c6dc5e2b9fccb9f221ab5 (MD5)Approved for entry into archive by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2016-01-15T15:57:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 The effect of 3β, 6β, 16β.pdf: 1570998 bytes, checksum: 49dcbf933a2c6dc5e2b9fccb9f221ab5 (MD5)Made available in DSpace on 2016-01-15T15:57:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 The effect of 3β, 6β, 16β.pdf: 1570998 bytes, checksum: 49dcbf933a2c6dc5e2b9fccb9f221ab5 (MD5) Previous issue date: 2015Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Centro de Pesquisa em Medicina Tropical, Porto Velho, RO, Brazil.Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Laboratório Central de Saúde Pública de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Universidade Federal de Rondônia. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Universidade Federal de Rondônia. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Universidade Federal de Rondônia. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brazil.Universidade Estadual de Santa Cruz. Departamento de Ciências Biológicas. Ilhéus, BA, Brazil.Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Química. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Universidade Federal de Rondônia. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brazil.Background: The Combretum leprosum Mart. plant, popularly known as mofumbo, is used in folk medicine for inflammation, pain and treatment of wounds. From this species, it is possible to isolate three triterpenes: (3β, 6β, 16β-trihydroxylup-20(29)-ene) called lupane, arjunolic acid and molic acid. In this study, through preclinical tests, the effect of lupane was evaluated on the cytotoxicity and on the ability to activate cellular function by the production of TNF-α, an inflammatory cytokine, and IL-10, an immuno regulatory cytokine was assessed. The effect of lupane on the enzymes topoisomerase I and II was also evaluated. Methods: For this reason, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were obtained and cytotoxicity was assessed by the MTT method at three different times (1, 15 and 24 h), and different concentrations of lupane (0.3, 0.7, 1.5, 6, 3 and 12 μg/mL). The cell function was assessed by the production of TNF-α and IL-10 by PBMCs quantified by specific enzyme immunoassay (ELISA). The activity of topoisomerases was assayed by in vitro biological assays and in silico molecular docking. Results: The results obtained showed that lupane at concentrations below 1.5 μg/mL was not toxic to the cells. Moreover, lupane was not able to activate cellular functions and did not alter the production of IL-10 and TNF-α. Furthermore, the data showed that lupane has neither interfered in the action of topoisomerase I nor in the action of topoisomerase II. Conclusion: Based on preclinical results obtained in this study, we highlight that the compound studied (lupane) has moderate cytotoxicity, does not induce the production of TNF-α and IL-10, and does not act on human topoisomerases. Based on the results of this study and taking into consideration the reports about the anti-inflammatory and leishmanicidal activity of 3β, 6β, 16β-trihydroxylup-20(29)-ene, we suggest that this compound may serve as a biotechnological tool for the treatment of leishmaniasis in the future

Purification and biochemical characterization of three myotoxins from bothrops mattogrossensis snake venom with toxicity against leishmania and tumor cells

Submitted by Claudete Queiroz ([email protected]) on 2016-05-03T17:49:34Z No. of bitstreams: 1 Purification and Biochemical Characterization of Three Myotoxins from Bothrops mattogrossensis Snake Venom with Toxicity against Leishmania and Tumor Cells.pdf: 2330661 bytes, checksum: d78a494a905fcd4ee4e7b030ef32d219 (MD5)Approved for entry into archive by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2016-05-17T13:55:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Purification and Biochemical Characterization of Three Myotoxins from Bothrops mattogrossensis Snake Venom with Toxicity against Leishmania and Tumor Cells.pdf: 2330661 bytes, checksum: d78a494a905fcd4ee4e7b030ef32d219 (MD5)Made available in DSpace on 2016-05-17T13:55:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Purification and Biochemical Characterization of Three Myotoxins from Bothrops mattogrossensis Snake Venom with Toxicity against Leishmania and Tumor Cells.pdf: 2330661 bytes, checksum: d78a494a905fcd4ee4e7b030ef32d219 (MD5) Previous issue date: 2014Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Universidade Federal Fluminense. Instituto de Biologia. Departamento de Biologia Celular e Molecular. Niterói, RJ, Brazil.Universidade Federal Fluminense. Instituto de Biologia. Departamento de Biologia Celular e Molecular. Niterói, RJ, Brazil.Universidade de São Paulo. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Ribeirão Preto, SP, Brazil.Universidade Federal de São João del Rei. Ouro Branco, MG, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Bothrops mattogrossensis snake is widely distributed throughout eastern South America and is responsible for snakebites in this region. This paper reports the purification and biochemical characterization of three new phospholipases A2 (PLA2s), one of which is presumably an enzymatically active Asp49 and two are very likely enzymatically inactive Lys49 PLA2 homologues. The purification was obtained after two chromatographic steps on ion exchange and reverse phase column. The 2D SDS-PAGE analysis revealed that the proteins have pI values around 10, are each made of a single chain, and have molecular masses near 13 kDa, which was confirmed by MALDI-TOF mass spectrometry. The N-terminal similarity analysis of the sequences showed that the proteins are highly homologous with other Lys49 and Asp49 PLA2s from Bothrops species. The PLA2s isolated were named BmatTX-I (Lys49 PLA2-like), BmatTX-II (Lys49 PLA2-like), and BmatTX-III (Asp49 PLA2). The PLA2s induced cytokine release frommouse neutrophils and showed cytotoxicity towards JURKAT (leukemia T) and SK-BR-3 (breast adenocarcinoma) cell lines and promastigote forms of Leishmania amazonensis. The structural and functional elucidation of snake venoms components may contribute to a better understanding of the mechanism of action of these proteins during envenomation and their potential pharmacological and therapeutic applications