Molecular identification and environmental screening for members of the Vibrionaceae family

Bacteria of the Vibrio genus are one of the most abundant and diverse prokaryotes in aquatic environments, comprising well-known opportunistic pathogens that infect human and marine animals, and are responsible for human foodborne diseases and disease outbreaks in aquaculture systems. Currently, the risk of infection by Vibrio is rapidly increasing because of climate change effect on the ocean and thus characterization of novel strains and the development of technologies for their early detection are essential for management and to minimize their impact. In this study, seven marine Vibrio isolates from infected sole (Solea senegalensis) and their bathing waters were characterised using microbiological, biochemical, and molecular techniques. Colony morphology, growth, and activity of putative virulence-secreted enzymes were determined under optimal and stress conditions (modified pH and salinity). All isolates had different colony morphologies and sequencing of 16S rRNA fragment (> 1400 bp) revealed they are likely non-described strains. All isolates grew at 22ºC, but only the isolates of V. parahaemolyticus and V. harveyi, which are potential human pathogens, grew at 37 ºC. All isolates are antibiotic sensitive although Amikacin was ineffective. Proteolytic and hydrolytic assays revealed that V. parahaemolyticus and the two V. harveyi isolates had different enzyme activities at 22 and 37 ºC. Culture under decreased salinity (0.75% NaCl) and modified pH (7.8 and 8.2) caused a significant (p < 0.05) increase in their growth and enzymatic activity and revealed the capacity for environmental adaptability. A multiplex PCR (5-plex) targeting different Vibrio species was developed but was inefficient for use with environmental samples. Our results highlight that a large variety of Vibrio spp. remains to be characterised and indicated that culture conditions modify growth and most likely virulence.A família Vibrionaceae inclui diversos géneros extremamente importantes nos ecossistemas marinhos, entre eles o género Vibrio. Este género é caraterizado por bactérias Gram-negativas móveis (devido à presença de um flagelo polar), anaeróbias facultativas e quimiorganotróficas, que existem na forma livre na coluna de água, nos sedimentos ou em associação com organismos aquáticos através do estabelecimento de relações de comensalismo. As bactérias do género Vibrio têm um papel essencial no equilíbrio do ecossistema marinho e na recirculação do carbono orgânico. Em consequência do seu curto tempo de duplicação (geralmente 10-20 minutos), as espécies de Vibrio crescem a uma vasta gama de temperaturas, pH e salinidade. De entre as mais de 100 espécies de Vibrio já identificadas, apenas uma parte constitui perigo para o ecossistema marinho e para a saúde humana através do consumo de peixe e mariscos crus ou pouco cozinhados, sendo responsáveis por surtos de infeções (vibrioses) com impacto na Saúde Pública. As espécies de Vibrio podem ser agentes patogénicos primários, causando geralmente infeção mesmo em hospedeiros saudáveis, ou patogénicos oportunistas. Neste caso, algumas espécies que fazem parte da microbiota dos organismos saudáveis poderão encontrar as condições de crescimento ideais em caso de diminuição da imunidade do hospedeiro ou disbiose, levando a uma possível infeção. Em aquacultura são responsáveis por diversos surtos e elevadas perdas económicas, afetando particularmente as fases larvares dos organismos marinhos. Existem pelo menos 12 espécies classificadas como agentes patogénicos humanos, nomeadamente V. parahaemolyticus, V. vulnificus, V. mimicus, V. alginolyticus e V. cholerae. Estas espécies poderão infetar o hospedeiro através da via oral ou por contacto com a pele. Infeções por estas espécies de Vibrio são extremamente rápidas e os sintomas variam em função do agente infecioso, a via de entrada e condição imunitária do hospedeiro. A sua capacidade infeciosa advém de fatores de virulência como as estruturas de adesão, mobilidade ou produção de enzimas que causam lesões no hospedeiro e permitem a sua proliferação. Alterações das características físico-químicas do meio aquático como temperatura, salinidade e pH, causadas pelas alterações climáticas, têm um papel importante na dinâmica das interações patogénicohospedeiro- ambiente. Estas alterações têm sido observadas ao longo das últimas décadas e prevê-se que sejam ainda mais proeminentes no futuro, com drásticas modificações no ecossistema marinho. As bactérias e a sua interação com o hospedeiro são modificadas pelas condições ambientais, com particular ênfase nos membros do género Vibrio onde o aquecimento dos oceanos e mudanças de salinidade e pH favorecem o crescimento das estirpes patogénicas. Este trabalho teve como objetivo a identificação e caraterização de sete isolados correspondentes a cinco possíveis espécies de Vibrio, isoladas a partir da água dos sistemas de aquacultura e do fígado de linguado (Solea senegalensis) infetado cultivado em sistemas de recirculação de água. Os isolados de Vibrio caracterizados incluem cinco potenciais estirpes patogénicas (V. parahaemolyticus, duas estirpes de V. harveyi e duas de V. ichthyoenteri) e dois isolados não patogénicos (V. renipiscarius e V. alfacsensis). Após a confirmação da pureza dos isolados e a sua morfologia em Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose (TCBS), os mesmos foram identificados através da amplificação do gene 16S rRNA e comparação das sequências nucleotídicas com a base de dados do National Center for Biotechnology Information (NCBI). O crescimento em TCBS, a sua cinética de crescimento e produção de enzimas proteolíticas e hidrolíticas (esterásica e lipolítica) relacionadas com o seu potencial de virulência foram analisados a 22 (temperatura de referência das zonas costeiras) e 37 ºC (temperatura de referência do corpo humano no início de uma infeção). O efeito das condições de cultura, nomeadamente a diminuição em 25% da salinidade e o pH (8.2- referência do meio marino; 7.8- diminuição de 0.4 do pH marinho prevista) na cinética de crescimento e atividade enzimática dos isolados também foi analisada para prever, em condições laboratoriais, qual o impacto das alterações climáticas nos oceanos no crescimento e potencial virulência dos isolados. Por fim, foi desenvolvida uma ferramenta molecular com base na amplificação do DNA genómico por PCR para detetar simultaneamente as cinco espécies de Vibrio (5-plex) em amostras ambientais. A amplificação do gene 16S rRNA resultou em fragmentos com cerca de 1465 pares de bases cuja sequência de nucleótidos foi comparada com a base de dados do NCBI. Os resultados indicam que os sete isolados pertencem ao género Vibrio. No entanto, a percentagem de identidade obtida para cada isolado indica que poderá tratar-se de novas estirpes ainda não caraterizadas. Todos os isolados crescem a 22 ºC, mas só os isolados de V. parahaemolyticus (Vpa) e V. harveyi (Vha1 e Vha2) crescem a 37ºC. Todos os isolados demonstram sensibilidade a todos os antibióticos testados, exceto para a amicacina, cuja suscetibilidade se restringiu aos isolados V. renipiscarius e V. ichthyoenteri 2. Ensaios enzimáticos realizados em placas de agar suplementadas com os substratos específicos (gelatina, Tween 20 e Tween 80) demostraram que só os isolados V. parahaemolyticus e V. harveyi apresentaram atividade enzimática a 22 e 37 ºC, observando-se um aumento significativo do crescimento dos três isolados a 37ºC, tal como um aumento da atividade proteolítica e esterásica do isolado V. harveyi 1. Alterações das condições de cultura afetaram a cinética de crescimento dos isolados de forma distinta. Com a diminuição da salinidade (0.75% NaCl) observou-se um aumento significativo (p < 0.05) do crescimento dos isolados V. alfacsensis e V. ichthyoenteri. Quando cultivados a pH mais baixo apenas o crescimento dos isolados V. alfacsensis, V. renipiscarius, V. ichthyoenteri 1 e V. harveyi 1 diminuiu de forma significativa (p < 0.05). Os três isolados com atividade enzimática a 22 ºC (V. parahaemolyticus, V. harveyi 1 e V. harveyi 2) também demonstraram que a influência das condições de cultura afeta diferencialmente as espécies e estirpes. A atividade esterásica foi estimulada pela diminuição da salinidade, diminuindo com a sucessiva redução do pH. O isolado V. alfacsensis, que não apresentou qualquer atividade enzimática a 22 e 37 ºC, adquiriu atividade esterásica com o decréscimo de 25% da salinidade. Apenas a atividade proteolítica do isolado V. parahaemolyticus foi afetada pelo pH, atingindo o seu maior índice a pH 8.2. A atividade lipolítica dos dois isolados de V. harveyi foi inibida com a diminuição da salinidade e aumento do pH. Para a sua deteção molecular, os primers desenvolvidos para as cinco espécies de Vibrio alvo são eficientes e específicos quando quantidades equivalentes dos diferentes DNAs genómicos são utilizados. Para testar a eficiência do PCR-multiplex (mPCR) desenvolvido na deteção de Vibrio spp. foram utilizadas amostras de mexilhão recolhidos da Ria Formosa segundo as indicações propostas na ISO 21872-1:2017 através de um duplo enriquecimento em meio de cultura apropriado para favorecer o crescimento das espécies de Vibrio. Uma amostra de cada enriquecimento incubada em TCBS indicou a presença de diversas colónias características das espécies de Vibrio, mas nenhuma correspondia à morfologia típica das espécies alvo deste estudo. Nas amostras por PCR usando individualmente os primers específicos para cada espécie foi detetado com base na análise molecular a presença de DNA de V. parahaemolyticus e V. harveyi, mas quando se aplicou o mPCR apenas se detetou V. harveyi. Isto sugere que poderá ter ocorrido alguma interferência na reação ou no microbioma do hospedeiro que inibiu a amplificação da deteção de V. parahaemolyticus ou então que a abundância de V. parahaemolyticus é muito inferior à de V. harveyi. Em resumo, sete novos isolados de Vibrio spp. (dos quais 4 representam duas estirpes das espécies V. harveyi e V. ichthyoenteri) foram identificados e caracterizados pela primeira vez. Caracterização microbiológica, molecular e bioquímica indica que os isolados de V. parahaemolyticus e V. harveyi podem representar potenciais agentes patogénicos humanos, pois são os únicos com capacidade de crescer a 37ºC. O aumento da temperatura favorece o seu crescimento e a atividade enzimática (proteolítica e hidrolítica) associada à sua virulência é alterada com a temperatura e modificação das condições ambientais. O impacto distinto das alterações nas condições de cultura entre os diferentes isolados indica que estes conseguem adaptar-se a diferentes condições, observando-se uma tendência para o aumento do crescimento e atividade enzimática com a diminuição da salinidade, mas o efeito oposto aquando da diminuição do pH. Mais ainda, as modificações nas condições de cultura podem estimular a atividade enzimática de enzimas associadas à virulência em isolados inicialmente não patogénicos, modificando desta forma a sua interação com o hospedeiro. No futuro, a sequenciação do genoma dos sete isolados será um passo fundamental para entender a sua biologia e outros testes mais detalhados deverão ser aplicados para verificar o efeito das alterações do meio de cultura na dinâmica destes isolados, tal como a realização de ensaios de infeção nos organismos vivos para ter uma perceção da sua dinâmica e relação com os hospedeiros nas condições mais próximas das ambientais

Data Profiling in Cloud Migration: Data Quality Measures while Migrating Data from a Data Warehouse to the Google Cloud Platform

Internship Report presented as the partial requirement for obtaining a Master's degree in Data Science and Advanced AnalyticsIn today times, corporations have gained a vast interest in data. More and more, companies realized that the key to improving their efficiency and effectiveness and understanding their customers’ needs and preferences better was reachable by mining data. However, as the amount of data grow, so must the companies necessities for storage capacity and ensuring data quality for more accurate insights. As such, new data storage methods must be considered, evolving from old ones, still keeping data integrity. Migrating a company’s data from an old method like a Data Warehouse to a new one, Google Cloud Platform is an elaborate task. Even more so when data quality needs to be assured and sensible data, like Personal Identifiable Information, needs to be anonymized in a Cloud computing environment. To ensure these points, profiling data, before or after it migrated, has a significant value by design a profile for the data available in each data source (e.g., Databases, files, and others) based on statistics, metadata information, and pattern rules. Thus, ensuring data quality is within reasonable standards through statistics metrics, and all Personal Identifiable Information is identified and anonymized accordingly. This work will reflect the required process of how profiling Data Warehouse data can improve data quality to better migrate to the Cloud

Business plan: biological Milk production in Azores: BioAçores

According to Mahatma Gandhi, "The Earth provides enough to satisfy every person's need but not every person's greed". Considering that, the Autonomous Region of the Azores, as an insular archipelago with unique characteristics, connecting European mainland to American one, has the duty to protect the environment. Since always, the dairy sector assumed itself as predominant in the environmental, economic and touristic dimension of the region. Milk, cows, green pastures, all of this make part of our culture and daily routine; most of all make part of ourselves. Owing to the fact that we live in a globalized world, the continuous sectors' development is imperative, otherwise, they can be outdated. Nowadays, consumers are not the same as before, they are more informed, value their health and well-being, a lot of them influenced by social media. Besides all of those facts mentioned before, it is important to highlight that there is oversupply of conventional milk comparatively to the industry's demand, resulting in a low price paid to milk producers, less than previous years. Those aspects resulted in the Business Plan development to the biological milk's production in São Miguel Island, which is an underexplored product, so far. The project has the purpose the certified production of a Portuguese premium milk, with higher nutritional and environmental components than conventional milk. Summarizing, the BioAçores project aims to differentiate in the national panorama for its social responsibility allied with sustainable consumption of higher quality products, affecting directly the Azorean economy.De acordo com Mahatma Gandhi, "The Earth provides enough to satisfy every person's need but not every person's greed". Deste modo, a Região Autónoma dos Açores, como arquipélago insular com características peculiares, que conecta o continente europeu ao continente americano tem o dever de preservar o meio ambiente. Desde sempre que o setor dos lacticínios se assumiu como preponderante tanto na vertente ambiental, económica e mesmo turística da região. O leite, as vacas, os pastos verdejantes fazem parte da nossa cultura e quotidiano, acima de tudo, fazem parte de nós. Face a vivermos num mundo cada vez mais globalizado, o desenvolvimento contínuo dos setores é imperativo, correndo o risco de serem ultrapassados pela concorrência. Hoje em dia, os consumidores já não são os mesmos que os de outrora, são mais informados, prezam pela sua saúde e bem-estar, muitos deles influenciados pelas redes sociais. Para além dos factos supramencionados, denota-se que excesso de oferta de leite convencional face à procura das indústrias, resulta num valor pago aos produtores abaixo do que era praticado em anos anteriores. Estes aspetos resultaram no desenvolvimento do Plano de Negócios para a produção de leite biológico na ilha de São Miguel, produto ainda pouco explorado na região. O projeto tem como objetivo a produção certificada de um leite premium português, com componentes nutricionais e ambientais mais vantajosas que o leite convencional. Em suma, o projeto BioAçores pretende assim diferenciar-se no panorama nacional pela sua responsabilidade social aliada ao consumo sustentável de produtos com qualidade superior no mercado, impactando diretamente a economia açoriana

Porphyrins analysis in biological fluids: development and application of different methodologies

Tese de mestrado em Biologia Humana e Ambiente, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2017A exposição a metais pesados, tais como o chumbo, arsénio e manganês, constitui uma potencial ameaça para a saúde humana. A persistência destes metais no meio ambiente, juntamente com o seu uso intensivo pelas sociedades modernas, tem ao longo dos anos vindo a aumentar significativamente. Esta exposição pode ocorrer através do ar, alimentos ou água contaminada, e varia com o tipo de metal e com o nível de exposição a que estamos sujeitos. A toxicidade dos metais pesados reside essencialmente na formação de espécies reactivas de oxigénio, que desempenham um papel determinante para o desenvolvimento de efeitos adversos, tais como efeitos neurotóxicos e cancerígenos. O desenvolvimento de biomarcadores, que possibilitem a detecção de exposições continuadas, e/ou elevadas a metais pesados, e que possam assinalar atempadamente o aparecimento de efeitos adversos na fase inicial, enquanto o efeito tóxico for ainda reversível, é essencial para a saúde humana. Alguns metais interferem em pontos-chave da via metabólica da síntese do heme, alterando a excreção de porfirinas e de ácido delta-aminolevulínico (ALA) na urina; e promovem a oxidação das porfirinas reduzidas (porfirinogénios), que irão acumular-se em tecidos alvo, causando efeitos tóxicos no organismo. Concentrações urinárias de ALA superiores a 15 mg/L urina, podem provocar danos cerebrais em trabalhadores expostos, alucinações e convulsões. Neste sentido, o perfil de porfirinas e a concentração de ALA na urina são considerados biomarcadores de exposição e efeito para metais pesados. As porfirinas são compostos macrocíclicos, que desempenham um papel preponderante no metabolismo dos organismos vivos, participando em processos como a fotossíntese e transporte de oxigénio. No organismo, uroporfirina (uro), heptaporfirina (hepta), hexaporfirina (hexa), pentaporfirina (penta) e coproporfirina (copro) são produzidas em excesso, e por isso excretadas normalmente pela urina e fezes, em determinadas concentrações. No entanto, a excreção de porfirinas urinárias pode ser anormalmente elevada devido a vários factores: doenças como as porfirias, ingestão de determinados fármacos, e exposição ambiental a químicos, em particular metais pesados. Considerando as características estruturais e químicas das porfirinas é possível desenvolver métodos que permitam a sua extracção dos fluidos biológicos, e a sua posterior identificação e quantificação, possibilitando obter o perfil de porfirinas de cada indivíduo. A detecção de porfirinas através de métodos espectrofotométricos é eficaz e frequentemente utilizada, uma vez que estas apresentam um espectro característico com bandas na região do visível (400 a 750 nm), correspondentes à banda de Soret e bandas Q. Posteriormente, através de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), foram desenvolvidos métodos altamente sensíveis que permitem a separação e identificação das várias porfirinas e a determinação da sua concentração em amostras biológicas. Novos e mais eficientes métodos que permitam uma melhor extracção e quantificação das porfirinas em diferentes fluidos biológicos, são necessários. O desenvolvimento de condições e meios de conservação eficazes, sem exporem as porfirinas a ambientes que interfiram com a sua fluorescência e absorvência, são igualmente necessários. Estes métodos serão uteis para melhorar o diagnóstico diferencial das porfirias, e aumentar a sensibilidade e especificidade das porfirinas como biomarcadores. Este trabalho teve como objectivos determinar as melhores condições de preservação de porfirinas em amostras de urina e avaliar vários métodos de extracção e quantificação de porfirinas, tendo em vista a obtenção de resultados mais rigorosos. Também, através da análise do perfil de porfirinas e do nível de ALA na urina de cada indivíduo, propomos biomarcadores de exposição e efeito, em subpopulações expostas em diferentes contextos de exposição a metais Amostras de urina de voluntários saudáveis, foram recolhidas e guardadas nas mesmas condições de temperatura (4º, -20º e -80 ºC), armazenamento (em alíquotas ou pool) e sem ou com conservantes (Na2CO3 ou HCl) ao longo de 90 dias. O perfil urinário de porfirinas determinado por HPLC, de cada amostra armazenada na respectiva condição, foi obtido no dia de recolha (dia 0), ao fim de uma semana (dia 7), ao fim de um mês (dia 30) e três meses depois (dia 90). Ao comparar as concentrações de porfirinas nas mesmas amostras em diferentes condições de conservação, é possível identificar quando houve perdas/ganhos de concentração de uro, hepta, hexa, penta e copro, em relação ao dia 0. As condições que não revelem diferenças significativas (p>0.05) são consideradas condições óptimas de conservação. Copro conseguiu manter-se estável a -20ºC e hepta a -80 ºC durante 90 dias, sem a adição de conservantes às amostras de urina. Na presença de Na2CO3, a copro permaneceu estável a -20 ºC e -80ºC e a hexa a -80 ºC, ao longo de 90 dias. Quando se utilizou HCl, a fracção uro manteve-se estável a -80ºC durante 90 dias. As amostras conservadas com Na2CO3 e HCl apresentaram concentrações mais estáveis ao longo do tempo do que amostras sem conservante. As amostras armazenadas em alíquotas apresentaram menos diferenças significativas de concentração em comparação com as denominadas de pools de urina. O método de Soulsby (1974) permite quantificar a concentração total de copro em urina, enquanto que o método de Elder (2001) permite quantificar a concentração de porfirinas totais, ambos através de espectrofotometria UV-Vis. A principal diferença entre os métodos, é que o método Soulsby utiliza éter e vários passos de extracção, enquanto o método Elder apenas acidifica a urina com HCl, não havendo qualquer extração. De forma a estudar cada método, utilizámos padrões de copro I e copro III e uro I para obter os respectivos espectros em UV-Vis, quando aplicados em matriz de água e urina. Também analisámos uma mistura equimolar constituída pelos 3 padrões. Analisámos 55 amostras de urina de indivíduos saudáveis, pelos métodos de Soulsby, Elder e HPLC como forma de comparar os diferentes métodos e inferir sobre a qualidade de resultados. O método de Soulsby falhou na extracção e quantificação de uro I, mas foi bem-sucedido para a copro I e III. O método de Elder permitiu quantificar os padrões de copro e uro, individualmente e sob a forma de mistura de padrões. Os métodos de Soulsby e HPLC apresentaram uma relação linear, ainda que fraca (R2=0,268), para a determinação de copro total na urina. Quando comparados, os métodos de Elder e HPLC para a análise de porfirinas totais, estes também apresentaram uma fraca relação linear entre si (R2= 0,086). Na última parte do trabalho, foram voluntariamente cedidas amostras de urina de 63 indivíduos de uma amostra de população portuguesa, divididos em vários grupos de acordo com o nível e forma de exposição a metais pesados: pessoas que vivem numa cidade de uma ilha portuguesa (Grupo I), pessoas que vivem numa grande área urbana (Grupo L), mineiros (Grupo M), pessoas que vivem numa área rural (Grupo A), técnicos hospitalares de Raios-X (Grupo R), pessoas que vivem numa área urbana não-industrializada (Grupo S), pessoas que vivem numa área urbana industrializada (Grupo V) e fumadores (Grupo F). Determinámos o perfil urinário de porfirinas por HPLC e os níveis de ALA na urina por um método colorimétrico. Estes valores foram combinados usando análise discriminante para criar um modelo capaz de identificar se um individuo tem um contexto de exposição igual a uma área/grupo específico. Estes biomarcadores foram posteriormente integrados em procedimentos preditivos recorrendo a ferramentas estatísticas. Aplicaram-se 3 procedimentos preditivos: o primeiro combinando todos os grupos com excepção do grupo I; o segundo, combinando apenas os grupos expostos ambientalmente (Grupo L, A, S e V), e o terceiro considerando apenas os grupos expostos activamente (Grupo M, R e S). Pela combinação dos biomarcadores determinados, o primeiro procedimento, apenas conseguiu classificar correctamente 76,8% dos individuos. No segundo procedimento, já foi possível classificar correctamente 96,8% dos indivíduos expostos ambientalmente nos diferentes contextos, em áreas urbanas industrializadas e não-industrializadas, numa área rural e numa grande área urbana, de Portugal. No terceiro procedimento, a discriminação de indivíduos expostos activamente a metais pesados de forma ocupacional (mineiros ou técnicos de Raios-X) ou estilo de vida (fumadores), foi alcançada com uma classificação de 100%. Do nosso estudo podemos concluir que para garantir a conservação de todas as porfirinas, especialmente as copro e uro, é necessário adicionar um conservante. Enquanto o Na2CO3, aumenta o pH do meio e conserva os analitos sob a forma de porfirinogénios, o HCl, acidifica a urina e promove a conversão de porfirinogénios a porfirinas. Sugerimos ainda que as amostras sejam armazenadas em alíquotas para garantir uma maior estabilidade das porfirinas urinárias. Este trabalho veio confirmar que a uro não é solúvel em éter, e por isso os métodos espectrofotométricos que o utilizem na extração não o conseguem quantificar. No entanto, estes métodos já são eficazes para análises de copro. As porfirinas totais conseguem ser detectadas em urina acidificada com HCl por espectrofotometria UV-Vis, e estimadas quantitativamente. O método de preferência deve ser HPLC, uma vez que permite a separação de cada porfirina e a sua quantificação individual, mas os métodos espectrofotométricos podem ser utilizados para uma análise rápida e preliminar. A combinação dos perfis de porfirinas com os níveis de ALA na urina pode ser utilizada como biomarcador de exposição e efeito de metais pesados, na amostra de população estudada, uma vez que os resultados dos procedimentos preditivos foram satisfatórios. A aplicação destes biomarcadores pode ser uma ferramenta útil para prever o tipo de exposição e a magnitude dos efeitos tóxicos provocados pelos metais em populações expostas, sendo por isso necessário continuar a investir no estudo das porfirinas e nas suas aplicações em Toxicologia Preditiva.Throughout our lives we are simultaneously exposed to single or multiple sources of metal mixtures in environmental or occupational contexts. Lead (Pb), Arsenic (As) and Manganese (Mn) are classified as human carcinogens and may also cause neurotoxic effects. These metals induce porphyrins and delta-aminolevulinic acid (ALA) accumulation, that results from the interference at specific points of the heme synthetic pathway. For this, porphyrins and ALA can be used as biomarkers of exposure and effect, contributing to prevent the risk of neurotoxicity in human populations. The aim of this work was to determine the best preservation conditions of urinary porphyrins and the most accurate method of extraction and quantification of specific and total porphyrins. We also intended to provide biomarkers for heavy metals, through the characterization of urinary porphyrins profiles and urinary levels of ALA, in a Portuguese sub-population sample. We experienced various storage conditions (aliquots or pools subjected to freeze-thaw cycles), different temperatures (4ºC, -20 ºC and -80 ºC), and two different preservatives, over time. The addition of a preservative, like HCl or Na2CO3, to urine aliquots preserved at -80ºC succeeded to stabilize uroporphyrin (uro) and coproporphyrin (copro) for at least 90 days. Through the analysis of copro (I and III) and uro (I) standards we conclude that spectrophotometric methods, that use ether to extract the porphyrins from urine, are not effective for uro determination, while copro, uro and total porphyrin can be detected in acidified urine by spectrophotometry, without extraction. However, HPLC should be the method of choice, once the various porphyrins are able to be separated and individually quantified through this method. We combined the urinary porphyrin profiles and ALA levels of 63 subjects, using discriminant analysis, to create a model aiming to identify whether an individual is in an exposure context according with a specific area/group. It was possible to correctly classify 96,8% of individuals environmentally exposed to metals in an urban, rural and industrial context, and 100% of the individuals actively exposed to metals (workers or smokers). The investigation of porphyrins and their precursors seems to provide tools for the development of Occupational Toxicology, highlighting predictive biomarkers of effect, and consequently the improvement of public health

Vinculação, relações interpessoais e esquemas precoces desadaptativos

3.º Congresso da Ordem dos Psicólogos Portugueses, Alfândega do Porto, 28 Setembro a 1 Outubro 2016 (Poster).Este trabalho incide sobre o estudo de padrões de vinculação em indivíduos numa relação de intimidade. Nos casos de vinculação insegura, procurou-se compreender a presença de problemas interpessoais e esquemas desadaptativos precoces. Considerando a atenção que a investigação tem vindo a dedicar aos padrões de vinculação e ao desenvolvimento de diferentes modelos de funcionamento interpessoal, entende-se que explorar a relação entre estas variáveis representará um contributo para compreender melhor as dinâmicas disfuncionais e, também, orientar a intervenção psicoterapêutica. O estudo contou com 100 casais heterossexuais, com idades entre os 20 e os 70 anos. Os padrões de vinculação foram analisados com recurso à Escala de Vinculação do Adulto, os esquemas desadaptativos precoces através do Questionário de Esquemas de Young e os problemas interpessoais a partir do Inventário de Problemas Interpessoais. Os resultados indicaram maior proporção de indivíduos com padrão de vinculação seguro (82%) do que inseguro (18%), repartindo-se este pelos padrões desligado (9%), preocupado (6%) e amedrontado (3%). Indicaram, ainda, que o padrão amedrontado colhe a manifestação mais forte de problemas interpessoais, com incidência na falta de assertividade e na inibição social. O padrão amedrontado também se distingue dos restantes no respeitante aos esquemas desadaptativos precoces, designadamente nos esquemas abandono e padrão rígido. Em síntese, o padrão amedrontado parece adotar mais estilos interpessoais suscetíveis de ameaçar a qualidade do relacionamento íntimo. Em termos de intervenção psicoterapêutica, a identificação destes estilos, suportados em crenças inflexíveis provenientes de défices específicos ao nível das relações precocemente estabelecidas, faculta orientação substantiva sobre a necessidade de reestruturação cognitiva, emocional e comportamental.N/

Industrial development in east Timor: an exploratory study of attitudes and perceptions towards the future

Industrialization is essential for the economic development of a country (Porter, 2004). There are few examples of countries that have made the transition without industrialization, much at the expense of the existence of valuable natural resources (such as oil and diamonds), but with the resulting social inequalities. Industrialization is the normal process for the development of the economies, associated with the phenomenon of globalization of the industry and markets, allows the rapid growth of the same. Take the case of China, which in just over twenty years, went from a really rural to an industrial power in global terms (UNIDO, 2009). Why promote industrialization in poor countries? Because if the developed countries to support industrialization in developing countries benefit from cheaper manufactured goods and the process allows to reduce the gap and inequalities between developed and developing countries (UNIDO, 2009). East Timor was an overseas province of Portugal until 1974 and for 450 years. After this period, the territory was invaded and occupied by Indonesia, a situation that lasted until the referendum held on August 30, 1999. The process leading up to this historic event was long and difficult but with the support of the United Nations, selfdetermination has finally arrived in East Timor in 2002. The proposal of the government of East Timor to the economic development is a strategic long term model and intends to reflect the will and aspirations of the people. Being a young country, post-conflict and with low incomes, it is pointed out the need to implement a unique and specific strategy to the country in order to bring prosperity. One way to achieve these aspirations may pass through private sector investment through the creation and implementation of industry in the country. This allows for increased employment, improved living conditions of the Timorese people and consequently the economic development of Timor-Leste, reinforcing the message widely disseminated in "Goodbye Conflict, Welcome Development". For the period 2011-2030, the first decade will focus on creating the basic conditions for development in all areas: infrastructure, education and training, health, agricultural productivity and food selfsufficiency, sustainable urbanization and development of important sectors industry and services. Private investment in Small and Medium Enterprises (SMEs) and Research and Experimental Development (R&D) in key sectors are one of the four pillars of the economic framework by 2020, presented by the government of East Timor (PED 2010). The present study aims to understand the attitudes and perceptions of the East Timorese in relation to industrial development of the country. Taking as a starting point, a survey of the population of East Timor, named as Projeto Timor, we present and discuss the results obtained on various issues such as attitudes in relation to existing industrial development potential of the country, perceived advantages and disadvantages of industrialization and industrial sectors that are perceived as more relevant to East Timor

Prática de ensino supervisionada em educação pré-escolar e 1º ciclo do ensino básico: o ambiente cooperativo na aprendizagem

O presente Relatório de Estágio “Prática de Ensino Supervisionada em Educação Pré-escolar e 1.º Ciclo do Ensino Básico permite partilhar experiências de aprendizagem em ambos os contextos. O ambiente cooperativo na aprendizagem foi o tema que atravessou a prática. Através da observação/intervenção, refletiu-se acerca do ambiente cooperativo em ambas as valências. Ambas as intervenções foram em instituições da rede pública, sendo a de Pré-escolar no Jardim-de-Infância do Bacelo e a de 1.º Ciclo na Escola Básica Integrada com Jardim-de-Infância da Malagueira, em Évora. Traduz um trabalho realizado para aprender a ser educador/professor cuja dimensão da vivência da prática escolar complementa e articula com o que se fez no percurso académico até esse momento. Ao longo do relatório faz-se uma reflexão sobre as possibilidades e desafios do ambiente cooperativo, com base na observação/intervenção, nos registos diários e em referências teóricas, tais como, os pressupostos das Comunidades de Aprendizagem e a Aprendizagem Cooperativa; ABSTRACT: This Internship's Report "Supervised Teaching Practice in Preschool and 1st Cycle School Education" allows sharing learning experiences on both fields. The cooperative learning environment is the theme throughout the practice work. With observation/intervention, was made a reflection about cooperative environment on both fields. Both interventions were made in public institutions: Daycare Center of Bacelo and Primary School Integrated with Daycare Center of Malagueira, in Evora. It reports a work to learn to be a educator/teacher whose experience dimension of academic practice complete and articulate with the academic experience done to that moment. Along the report is described a reflection about possibilities and challenges of cooperative environment, based on observation/intervention, daily records and theoretical references, such the basic concepts of Learning Communities and Cooperative Learning

Perceção de riscos naturais e ambientais numa comunidade insular : o caso de Santa Maria (Açores)

Dissertação de Mestrado, Vulcanologia e Riscos Geológicos, 22 de lulho de 2020.No arquipélago dos Açores, fruto da sua localização geográfica e do enquadramento geodinâmico complexo, ocorrem importantes manifestações geológicas, tais como, sismos, vulcanismo e movimentos de vertente. Localizando-se nas proximidades da junção tripla entre as placas litosféricas Norte-Americana, Euroasiática e Africana, a ilha de Santa Maria, a mais antiga do arquipélago, pelo seu contexto geológico e por ser uma pequena comunidade insular, possui particularidades únicas que a tornam um verdadeiro laboratório para as ciências naturais e sociais. Este trabalho dedica-se ao estudo da perceção de risco dos residentes da Ilha de Santa Maria, nos Açores. Para tal, foi efetuada uma pesquisa de acontecimentos históricos naturais e ambientais ocorridos na ilha, e respetiva caracterização, e elaborado um questionário para avaliar a perceção que os residentes possuem relativamente aos riscos naturais e ambientais a que se encontram expostos. Em particular, é estudada a perceção relativamente a sismos, erupções vulcânicas, movimentos de vertente, tsunamis, furacões e tempestades, cheias e inundações, poluição, fogos, alterações climáticas e seca. Os itens do questionário permitiram investigar quais os principais perigos a que os residentes da ilha se consideram mais vulneráveis, a sua preocupação, a probabilidade de ocorrência que atribuem a cada perigo, o grau de informação que consideram estar disponível, bem como as entidades em que confiam mais e menos. Foram obtidos dados de 354 inquéritos, efetuados de dezembro de 2018 a fevereiro de 2019. Os resultados permitiram constatar que os inquiridos consideram que as secas, os furacões e tempestades e as alterações climáticas são os perigos naturais ou ambientais que mais ameaçam a ilha. Além disso, 51,7% dos inquiridos considera que a informação a que pode aceder relativamente aos perigos é razoável, e 67,8% afirma que se mantem informado sobre os riscos que podem afetar a ilha, sendo a principal fonte a internet (48%) e a televisão (47,2%). A Proteção Civil Municipal foi assinalada como a entidade mais confiável e as redes sociais como a fonte menos confiável. Este estudo da perceção de risco dos habitantes da ilha de Santa Maria contribui com novos dados para uma melhor estratégia de gestão do risco nesta ilha dos Açores.ABSTRACT: In the Azores archipelago, due to its geographical location and complex geodynamic framework, important geological manifestations occur, such as earthquakes, volcanism and landslides. Located near the triple junction between the North American, Eurasian and African lithospheric plates, Santa Maria, the oldest island in the archipelago, due to its geological context and small island community, has particular characteristics that make it a unique true laboratory for the natural and social sciences. This work aims the study of risk perception of residents of Santa Maria Island, Azores. To this end, a survey of the island's natural and environmental historical events and their characterization was carried out and a questionnaire was prepared to assess residents' perceptions of the natural and environmental risks to which they are exposed. In particular, perceptions of earthquakes, volcanic eruptions, landslides, tsunamis, hurricanes and storms, floods and flooding, pollution, fires, climate change and drought are studied. The questionnaire items allowed us to investigate which of the main hazards to which island residents consider themselves most vulnerable, their concern, the likelihood of occurrence that they attribute to each hazard, the degree of information they consider to be available, and the entities in which they trust more and less. Data from 354 surveys, carried out from December 2018 to February 2019, were obtained. The results show that respondents consider droughts, hurricanes and storms and climate change to be the most threatening natural or environmental hazards on the island. In addition, 51.7% of respondents consider the information they can access regarding hazards to be reasonable, and 67.8% say they keep informed about the risks that may affect the island, the main source being the internet (48.0%) and television (47.2%). Municipal Civil Protection was designated as the most trusted entity and social networks as the least reliable source. This study of the risk perception of Santa Maria Islanders contributes with new data to a better risk management strategy in this island of the Azores

Plano de negócios do projeto Furnas Golf & Spa Resort

Mestrado (Trabalho de Projeto), Gestão de Empresas (MBA), 31 de janeiro de 2022, Universidade dos Açores.A partir da análise do setor do turismo nos Açores verifica-se a necessidade de criação de uma unidade hoteleira de cinco estrelas, temática em golfe e o projeto Furnas Golf & Spa Resort apresenta-se como resposta a esta mesma necessidade. O presente trabalho de projeto tem como principal intuito a elaboração de um plano de negócios para o projeto Furnas Golf & Spa Resort, a localizar-se na freguesia das Furnas, em parceria com o Furnas Golf Course. Este alojamento irá contribuir para a sustentabilidade do turismo na região com a diversificação da oferta e consequente aumento das vantagens competitivas do setor, diminuição da sazonalidade e promoção do golfe e dos Açores como destino turístico. O projeto também se reveste de razões de carater social e ambiental, com a utilização de equipamentos com eficiência energética, guia de boas práticas ambientais e criação de trinta novos postos de trabalho. O investimento previsto ascende a 16.912.100 euros, dos quais 6.633.541 euros serão financiados por capitais próprios, 10.147.260 euros por financiamento externo e 131.299 euros por suprimentos de sócios. Determinou-se os cash flows líquidos previsionais do projeto com a previsão dos proveitos e dos custos, com base num conjunto de pressupostos e de dados estatísticos de estabelecimentos hoteleiros similares e constituiu-se assim o balanço e a demonstração de resultados previsionais do projeto. O estudo de viabilidade económica e financeira conclui que o projeto é globalmente viável, uma vez que na perspetiva do projeto pós-financiamento verifica-se VAL ≥ 0 de 3.317.716 euros, TIR ≥ CMPC de 18,44% e Payback de seis anos, período consideravelmente razoável para a dimensão deste projeto. A partir da análise da sensibilidade é possível concluir que mesmo considerando um cenário negativo com descidas nas taxas de ocupação e aumento do investimento, o projeto continua a ser viável.ABSTRACT: By analysing the tourism sector in the Azores, it has been concluded that there is a need to create a five-star resort, thematic in golf, and the Furnas Golf & Spa Resort project presents itself as an answer to this need. The main purpose of this project is to prepare a business plan for the Furnas Golf & Spa Resort project, to be located in Furnas parish, in partnership with Furnas Golf Course. This accommodation will contribute to the sustainability of the tourism in the region, by diversifying the offer and consequently increasing the sector’s competitive advantages, reducing the seasonality, and promoting golf and the Azores as a destination. The project also has social and environmental advantages, with the use of energyefficient equipment, a guide to good environmental practices, and the creation of thirty new jobs. The planned investment amounts is up to 16.912.100 euros, of which 6.633.541 euros will be financed by equity, 10.147.260 euros by external financing, and 131.299 euros by shareholder loans. The project's cash flows were determined with the forecast of income and costs, based on a set of assumptions and statistical data from similar accommodations, and the balance sheet and income statement of the project’s foreseen results. The economic and financial feasibility study concluded that the project is globally viable, since from the perspective of the post-financing project NPV ≥ 0 of 3.317.716 euros, IRR ≥ WACC of 18,44%, and Payback of six years, a considerably reasonable period for the project’s dimension. Based on the project’s sensitivity analysis, it is possible to conclude that even considering a negative scenario, with decreases in occupancy rates and increase of the investment, the project continues to be viable

Análise do processo de coaching

Dissertação de Mestrado apresentada ao ISPA - Instituto UniversitárioO presente estudo é de natureza qualitativa e descritiva. Tem como objectivo perceber se o processo de coaching praticado pelos coaches da nossa amostra vai de encontro ao que se encontra na literatura ou, se, o que a literatura nos diz não é mais que a retórica; e se a percepção de coaches e coachees é a mesma nos respectivos casos. Para tal, foram construídos guiões de entrevistas que foram preenchidos por quatro coaches e quatro coachees. Os participantes têm idades compreendidas entre os 33 e os 55 anos, são Portugueses e as áreas de actuação, dos coachees, são diversificadas. Após recepção dos guiões de entrevista, procedeu-se à categorização da informação. As categorias que emergiram foram muito variadas e, regra geral, vão ao encontro do que está presente na literatura. Através deste estudo verifica-se que a percepção de coaches e coachees de um mesmo caso são idênticas, partilhando a mesma percepção do processo. O processo de coaching utilizado pelos coaches da nossa amostra parece ir ao encontro do que a literatura nos mostra. Os resultados demonstram que os coachees conseguiriam melhorar aspectos que inicialmente tinham identificado. Para estudos futuros, sugere-se o aumento da amostra e a realização de entrevistas, por forma, a haver uma recolha da informação mais enriquecida e detalhada. Seria interessante que se tentasse perceber como os coaches preparam as sessões e que técnicas utilizam na condução de entrevistas. Será que são técnicas existentes na literatura ou cada coach tem uma maneira própria de conduzir a entrevista.ABSTRACT: The present study has a qualitative and descriptive nature. Its aim is to understand if the process of coaching practiced by our sample of coaches, meets what is written in literature or, if literature is only rhetoric. Another goal is to know if the perception of coaches and coachees are the same in the respective cases. To accomplish this goals, interviews guides have been constructed, and were delivered to four coaches and four coachees. The participants have ages understood between 33 and 55 years old and they are all Portuguese, with different working areas. After the reception of the interview guides, the information given by the participants was categorized. The categories that have emerged were very diversified and, in general, they met with what is written in the literature. Through this study it is verified that the perception of coaches and coachees are identical for the same cases, meaning they share the same perception process. The process of coaching used by the coaches in our sample seems to meet with what literature shows us. The results demonstrate that coachees were able to improve the aspects they had early identified as changing points. For future studies the suggestion is to increase the sample and to make interviews, in order to get more enriched and detailed information. It would be interesting to understand the way coaches prepare their sessions and which techniques they use when they are conducting the interviews. Can we find these techniques in literature or each coach has his own way of conducting interviews