Acurácia e reprodutibilidade de testes imunoenzimáticos com antígenos de Leishmania major e Leishmania infantum para o diagnóstico de leishmaniose visceral canina no Brasil

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2014.Introdução: A leishmaniose visceral é uma enfermidade parasitária, provocada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) infantum (sin. Leishmania (Leishmania) chagasi). A limitada acurácia dos testes empregados para o diagnóstico dos cães pode contribuir com o baixo impacto de uma das medidas de controle preconizadas pelo Ministério da Saúde brasileiro, a eutanásia de cães sororreagentes para leishmaniose. Os objetivos deste trabalho buscam estimar a acurácia e a confiabilidade de dois testes imunoenzimáticos que utilizam antígenos de L.(L.) major ou de L.(L.) infantum em laboratórios de diferentes níveis de complexidade e estimar a acurácia dos testes de ELISA e IFI aplicados em combinação sequencial ou de forma paralela, analisando os valores preditivos positivos e negativos destas abordagens em prevalências variáveis de infecção canina. Método e principais resultados: Foi utilizado um painel de 1.425 amostras de soros caninos, coletados em estudo multicêntrico. As amostras foram analisadas por meio de técnicas de visualização direta de parasitos, por estudo histopatológico corado com hematoxilina-eosina, pela técnica de imunohistoquímica e pelo isolamento do parasito em cultura. Estas técnicas constituíram o padrão de referência, sendo um caso positivo para a infecção por L. infantum o animal que apresentasse positividade em pelo menos um dos testes. Os resultados da acurácia do teste de ELISA com antígenos de L. major e L. infantum realizados em condições ideais no Laboratório de Referencia Nacional foi de 91,84% (IC95% 86,3 - 97,3) e 89,80% (IC95% 83,8 - 95,7) para sensibilidade e de 83,57% (IC95% 81,7 - 85,7) e 82,69% (IC95% 80,6 - 84,7) para especificidade, respectivamente. A AUC (área abaixo da curva ROC) foi de 0,920 para antígeno de L. major e de 0,898 para L. infantum. Os coeficientes de correlação intraclasse médios dos testes com antígenos de L. major, variaram entre 0,890 (0,876-0,902 IC95%) e 0,948 (0,942-0,953 IC95%) e com os antígenos de L. infantum entre 0,818 (0,792-0,841IC95%) e 0,879 (0,865-0,8910 IC95%). A sensibilidade e a especificidade do teste de imunofluorescência indireta (IFI) foi 90,8% (IC95% 84,2 - 97,5) e 53,4% (IC95% 51,6 - 55,1), respectivamente. Utilizados de forma combinada o teste de ELISA com antígeno de L. major e o teste de IFI mostraram que em paralelo o desempenho da sensibilidade global subiu para 99,2%, porém a especificidade diminuiu para 44,8%. Na utilização dos testes em série (ELISA seguido de IFI) observou-se uma diminuição na sensibilidade (83,3%) e melhora na especificidade (92,5%). Conclusões: A acurácia dos dois testes avaliados é semelhante, com um desempenho discretamente melhor do antígeno de L. major. A reprodutibilidade dos testes foi quase que perfeita (>0,81) com desempenho pouco melhor para o antígeno de L. major. Conclui-se, portanto, que não se justifica a mudança do antígeno no teste de ELISA atualmente constituído por L. major para diagnóstico de leishmaniose visceral canina no Brasil. Finalmente, a combinação dos testes de ELISA com antígeno de L. major seguido do teste de IFI melhorou a especificidade da abordagem diagnóstica, sem perda substancial da sensibilidade. A combinação em série destes testes pode satisfazer os anseios, tanto da saúde pública como dos proprietários de cães residentes em áreas endêmicas, por uma abordagem diagnóstica mais acurada da leishmaniose visceral canina. ______________________________________________________________________________ ABSTRACTBackground Visceral leishmaniasis is a parasitic disease caused by the protozoan Leishmania (Leishmania) infantum (syn. Leishmania (Leishmania) chagasi). The limited accuracy of diagnostic tests for canine leishmaniasis may contribute to the lack of impact of the control measures recommended by the Brazilian Ministry of Health, i.e., euthanasia of seroreactive dogs. The objective of this study was to estimate the accuracy and reliability of two ELISA tests employing L. (L.) major or L.(L.) infantum antigen used by laboratories of different levels of complexity and estimate the accuracy of the ELISA tests and IFI applied in sequential or parallel combination , analyzing the positive and negative predictive values of these variables approaches prevalence of canine infection. Methods and principal findings A series of 1,425 serum samples collected from dogs in a multicenter study was used. The samples were analyzed by direct visualization of the parasite in hematoxylin/eosin-stained sections, immune histochemistry, and isolation of the parasite in culture. These techniques represented the reference standard and an animal that was positive in at least one of the tests was defined as infected with L. infantum. The results of the accuracy of the ELISA test with antigens of L. major and L. infantum played in ideal conditions at the National Reference Laboratory was 91.84% (CI 95% CI 86.3 - 97.3 ) and 89.80% ( CI95% 83.8 - 95.7 ) for sensitivity and 83.57% (CI95% 81.7 - 85.7 ) and 82.59 ( CI95% 80.6 - 84.7 ) specificity%, respectively. The AUC (area under the ROC curve) was 0.920 for the L. major and L. infantum 0.898 to. The mean intraclass correlation coefficients of the tests ranged from 0.890 (CI95% 0.876-0.902) to 0.948 (CI95% 0.942-0.953) when L. major was used as antigen, and from 0.818 (CI95% 0.792-0.841) to 0.879 (CI95% 0.865-0.8910) when L. infantum was used. The sensitivity and specificity of indirect immunofluorescence assay (IFA ) was 90.8 % ( 95% CI 84.2 to 97.5 ) and 53.4 % ( 95% CI 51.6 to 55.1 ) , respectively. Used in combination with the ELISA antigen of L. major and the IFA test showed that parallel the performance of the overall sensitivity increased to 99.2 % , but the specificity decreased to 44.8 % . The use of serial testing ( ELISA followed by IFI ) observed a 15 decrease in sensitivity ( 83.3 % ) and improved specificity ( 92.5 % ). Conclusions The accuracy of the two assays was similar with a slightly better performance of the L. major. Reliability of the test was almost perfect (> 0.81) with slightly better performance for the L. major. These results do not support a change in the antigen composition of ELISA tests (L. major) currently used for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil. Finally, the combination of ELISA tests with L. major antigen followed by the IFA test improved the specificity of the diagnostic approach without substantial loss of sensitivity. Serial combination of these tests can satisfy the desires of both the public health and dog owners living in endemic areas for a more accurate diagnostic approach of canine visceral leishmaniasis

Blog sobre legislação ambiental brasileira na Embrapa: a informação ao alcance de todos.

A legislação ambiental brasileira visa fiscalizar e punir aquele que causa dano ao meio ambiente, bem como garantir qualidade de vida e sustentabilidade ambiental para todos. Através de meios eletrônicos é possível obter informações da legislação brasileira. A disponibilidade em meios eletrônicos, especialmente internet, facilita o acesso da população às leis, levando a todos a conscientização das legislações existentes no Brasil. O objetivo desta pesquisa é reunir, classificar e disponibilizar a legislação ambiental, de forma fácil e clara, ao alcance e acesso a toda população. O acesso pode ser feito através de um link que será disponibilizado no site da Embrapa Gado de Corte. Ao acessar a página, o visitante visualiza a legislação ambiental que foi dividida por assuntos. Disponibiliza-se também a sinopse da lei, o número da legislação e o texto da legislação na íntegra através de hiperlink. Este é interligado e direcionado a um site do governo federal, que atualiza regularmente todas as legislações. No site da Embrapa será disponibilizado o acesso de diversas normas jurídicas e administrativas, de âmbito ambiental para pesquisas e download. Hoje temos, relacionado com a legislação ambiental, registros de 37 Leis, 18 Decretos, dois Decreto-Lei, 10 Portarias Normativas do IBAMA, 33 Resoluções do Conama, uma Portaria IPHAN, uma Instrução Normativa MMA, duas Portarias do Ibama, uma Portaria do Ministério da Saúde, uma Resolução RDC e a Constituição da República Federativa do Brasil de 1988. As normas jurídicas ambientais têm como objetivo disciplinar atividades humanas, para torná-las compatível com a proteção do meio ambiente. A pesquisa procura conscientizar a existência das leis ambientais, facilitando e disponibilizando seu acesso pela internet na página da Embrapa. A educação e informações direcionadas e especializadas, como a proposta desta pesquisa, pode auxiliar na transformação do ambiente em que vivemos, além de contribuir na pesquisa educacional dos interessados

Mechanisms of subcutaneous adipose tissue formation in experimental lymphedema model

no abstrac

Construção de um banco de informações sobre compostagem de animais na Embrapa.

A pecuária produz grandes quantidades de resíduos, como dejetos e animais mortos, que podem provocar problemas sanitários e poluição. Esses resíduos devem ser reciclados. A ANVISA possui a Resolução RDC nº 306, de 07/12/2004, que define compostagem como um ?processo de decomposição biológica de fração orgânica biodegradável de resíduos sólidos, efetuado por uma população diversificada de organismos em condições controladas de aerobiose e demais parâmetros?. O Projeto Corporativo da Embrapa ?Implantação das Diretrizes Institucionais de Gestão Ambiental nas Unidades da Embrapa?, quer utilizar a compostagem como solução final para cadáveres de animais nas propriedades rurais. O objetivo aqui é levantar informações para construção de banco de dados sobre compostagem de animais. As publicações são denominadas metadados, preferencialmente do Brasil. Utilizaram-se buscadores de metadados na internet, assim como teses, papers e livros sobre o assunto, com apoio da Biblioteca da Embrapa Gado de Corte. Esta possui parceria com bibliotecas eletrônicas online que disponibilizam revistas e artigos científicos. Os dois buscadores eletrônicos utilizados foram: Google e Yahoo. Os dados atualmente estão armazenados em planilhas Excel e em programa de referências bibliográficas: Fichamento. Utilizando o termo em português ?compostagem? no Google encontraram-se aproximadamente 266.000 resultados. E o termo em inglês ?composting? no mesmo site encontrou aproximadamente 4.300.000 resultados. Os links encontrados demonstram importância dada ao tema. Até o momento catalogaram-se os seguintes números de referencias: bovinos (482), suínos (445), caprinos (185), aves (789), frango (560) e peixes (697). Baseando-se nas publicações a Europa, EUA e Canadá são os locais mais desenvolvidos no assunto. No Brasil, existem poucos trabalhos realizados diretamente com animais mortos. A aquisição de conhecimento é fundamental para o Brasil construir a própria legislação nacional sobre compostagem. Pretende-se disponibilizar essas informações ainda neste ano de 2009. Os trabalhos práticos iniciar-se-ão em novembro de 2009

Mechanisms of subcutaneous adipose tissue formation in experimental lymphedema model

no abstrac

Dispersão secundária em fezes de quatis Nasua nasua (Linnaeus, 1766) (Mammalia: Procyonidae) em um fragmento de Cerrado, Mato Grosso do Sul, Brasil

We tested secondary dispersion of seeds in coati’s feces for the factors rain, invertebrate and vertebrate animals using the species Cordia sellowiana Cham., 1829 and Randia armata (Sw.) DC., 1830. In the area considered, the invertebrate are the main destructors of mounds of feces with seeds. The action of the rain varied in importance. For C. sellowiana the rain was the less important factor in the secondary dispersion. For R. armata the rain factor is comparable to the control and the invertebrate. The percentage of secondary dispersion for vertebrate was in second place for C. sellowiana, and in last for R. armata. Key words: frugivorous, mammals, seeds, ants.Testamos a dispersão secundária de sementes em fezes de quatis pelos fatores chuvas, invertebrados e vertebrados, utilizando as espécies Cordia sellowiana Cham.,1829 e Randia armata (Sw.) DC., 1830. Na área de estudos, os invertebrados são os maiores desagregadores de montículos de fezes com sementes para ambas as espécies testadas. A ação das chuvas variou em importância. Para C. sellowiana, a chuva foi o fator de menor taxa de dispersão secundária, e, para R. armata, o fator chuva se equipara ao controle e a invertebrados. A taxa de dispersão secundária por vertebrados ficou em segundo lugar para C. sellowiana e em último para R. armata. Palavras-chave: frugívoros, mamíferos, sementes, formigas

Histological analysis of the pulp tissue of rats with testosterone deficiency submitted to orthodontic tooth movement induced / Análise histológica do tecido pulpar de ratos com deficiência de testosterona submetidos à movimentação dentária ortodôntica induzida

Considering the increased demand for orthodontic treatments in adult and elderly patients, with possible hormonal changes caused by age, this study carried out a histological analysis of pulp alterations in the molars of testosterone-deficient rats submitted to induced tooth movement (ITM), aiming at a better understanding of the pulp’s biological aspects. Thirty-two Wistar rats were used in four experimental groups, with 8 animals in each: G1 –control group animals, without experimental manipulation; G2 – animals submitted to bilateral orchidectomy; G3 – animals submitted to ITM technique; G4 – castrated animals submitted to ITM. We used a nickel-titanium (NiTi) spring to induce tooth movement, exerting a force of 50cN magnitude on the first upper molar. Seven days after the installation of the ITM device, the animals were euthanized, the jaws were dissected and stored in 10% formaldehyde for 24 hours and processed with routine histological techniques. We evaluated the efficiency of the force and verified tooth movement by measuring the distance between the first and second molars, at the cementoenamel junction level. The groups were histologically evaluated in terms of cellularity pattern, presence of dystrophic and hemodynamic alterations in the dental pulp. The ITM device succeeded in inducing tooth movement in the animals of groups G3 and G4, which differed from each other, with a higher movement rate in the group submitted to castration associated with ITM (G4). In the comparative analysis of groups, the animals’ pulp in groups G1 and G2 (not submitted to ITM) presented histological characteristics typical of the pulp tissue. We found no dystrophic changes such as necrosis, fibrosis, nodules, or calcifications in the pulp of experimental animals that could be attributed to ITM. The animals with orthodontic movement, castrated or not, presented dilated and congested vessels, in addition to hyalinized vessels in the root and coronary pulp. However, we observed no histological changes that could be attributed to testosterone deficiency. Thus, in this experimental model, testosterone deficiency did not cause morphological and degenerative changes in the pulp during tooth movement. The vascular alterations observed in the animals resulted from the orthodontic process

A importância do trabalho do professor-tutor no processo de ensino e aprendizagem: estudo de caso que analisa a experiência da EAD do Centro Universitário de Araraquara - São Paulo - Brasil

O texto dados de uma pesquisa realizada através de um questionário, com alunos matriculados em diferentes cursos oferecidos pela instituição. O questionário foi aplicado no ano de 2012, e foi respondido por 701 alunos, o que representa 57,6% de todos os alunos. Os dados obtidos nesse estudo revelam que o fórum de interação é a ferramenta que mais contribuiu para o aprendizado do aluno, juntamente com o texto de apoio; a maioria dos alunos considera a atuação do professor tutor como ótima e boa; e para a maioria deles os tutores conseguem sanar suas dúvidas integralmente. Verifica-se, portanto, a satisfação dos alunos com os tutores virtuais. Os resultados apresentados revelam a importância das ferramentas interativas em educação a distância, por exemplo, dos fóruns de discussão que permitem a interação entre o tutor e alunos e entre alunos. Reafirma-se, assim, a presença de professores tutores como necessária na mediação dos processos de ensino e a importância da interatividade na educação a distância, mesmo no modo assíncrono. Os resultados desta pesquisa podem contribuir para a melhoria contínua dos cursos a distância oferecidos pela Uniara, contribuindo também para se pensar estratégias para a formação de tutores virtuais, a fim de obter um desempenho mais eficiente do ponto de vista da qualidade do ensino oferecido.The aim of this paper is to discuss the importance of the virtual tutor in Distance Education. This text emphasizes the role of tutor as facilitator in the pedagogical processes that occur in virtual platforms for teaching and learning (Moodle) courses of the Centro Universitário de Araraquara (Uniara). To this end, this article presents data from a survey conducted through a questionnaire, with students enrolled in different courses offered by that institution. The questionnaire was applied in the first half of 2012, was answered by 692 students, which represents 57.6% of all students. The data obtained in this study reveal that the forum of interaction is the tool that most contributes to student learning, along with the supporting text. The students consider the role of tutor as excellent or good. For these students, tutors can answer your questions fully. There is, therefore, the satisfaction of students with virtual tutors. Furthermore, these results reveal the importance of interactive tools in distance education, for example, discussion forums, which allow interaction between the tutor and students and among students. This text reaffirms thus the presence of teachers tutors needed in mediating the processes of teaching and the importance the interactivity in distance education, even in asynchronous mode. The results of this research can contribute to the continuous improvement of distance learning courses offered by Uniara, contributing also to think about strategies for the formation of virtual tutors, in order to obtain a more efficient performance from the standpoint of quality of education offered.Universidade Aberta; Pavilhão do Conhecimento; LEA