Urban spaces, fragmented consciousness, and indecipherable meaning in Mrs Dalloway

This essay discusses the importance of urban spaces in Virginia Woolf's Mrs Dalloway, linking them to central themes in the novel (including the fragmented consciousness of the characters, and withheld - or only partially understood - meaning)

Potential role of fibroblast-like synoviocytes in joint damage induced by Brucella abortus infection through production and induction of matrix metalloproteinases

Arthritis is one of the most common complications of human brucellosis, but its pathogenic mechanisms have not been elucidated. Fibroblast-like synoviocytes (FLS) are known to be central mediators of joint damage in inflammatory arthritides through the production of matrix metalloproteinases (MMPs) that degrade collagen and of cytokines and chemokines that mediate the recruitment and activation of leukocytes. In this study we show that Brucella abortus infects and replicates in human FLS (SW982 cell line) in vitro and that infection results in the production of MMP-2 and proinflammatory mediators (interleukin-6 [IL-6], IL-8, monocyte chemotactic protein 1 [MCP-1], and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor [GM-CSF]). Culture supernatants from Brucella-infected FLS induced the migration of monocytes and neutrophils in vitro and also induced these cells to secrete MMP-9 in a GM-CSF- and IL-6-dependent fashion, respectively. Reciprocally, culture supernatants from Brucella-infected monocytes and neutrophils induced FLS to produce MMP-2 in a tumor necrosis factor alpha (TNF-α)-dependent fashion. The secretion of proinflammatory mediators and MMP-2 by FLS did not depend on bacterial viability, since it was also induced by heat-killed B. abortus (HKBA) and by a model Brucella lipoprotein (L-Omp19). These responses were mediated by the recognition of B. abortus antigens through Toll-like receptor 2. The intra-articular injection of HKBA or L-Omp19 into the knee joint of mice resulted in the local induction of the proinflammatory mediators MMP-2 and MMP-9 and in the generation of a mixed inflammatory infiltrate. These results suggest that FLS, and phagocytes recruited by them to the infection focus, may be involved in joint damage during brucellar arthritis through the production of MMPs and proinflammatory mediators.Fil: Scian, Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "Profesor R. A. Margni"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Barrionuevo, Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "Profesor R. A. Margni"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Giambartolomei, Guillermo Hernan. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "Profesor R. A. Margni"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: de Simone, Emilio Adrian. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Catedra de Fisiologia Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "Profesor R. A. Margni"; ArgentinaFil: Vanzulli, Silvia I.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Fossati, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "Profesor R. A. Margni"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Baldi, Pablo Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "Profesor R. A. Margni"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Delpino, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral "Profesor R. A. Margni"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentin

An Oral Vaccine Based on U-Omp19 Induces Protection against B. abortus Mucosal Challenge by Inducing an Adaptive IL-17 Immune Response in Mice

As Brucella infections occur mainly through mucosal surfaces, the development of mucosal administered vaccines could be radical for the control of brucellosis. In this work we evaluated the potential of Brucella abortus 19 kDa outer membrane protein (U-Omp19) as an edible subunit vaccine against brucellosis. We investigated the protective immune response elicited against oral B. abortus infection after vaccination of mice with leaves from transgenic plants expressing U-Omp19; or with plant-made or E. coli-made purified U-Omp19. All tested U-Omp19 formulations induced protection against Brucella when orally administered without the need of adjuvants. U-Omp19 also induced protection against a systemic challenge when parenterally administered. This built-in adjuvant ability of U-Omp19 was independent of TLR4 and could be explained at least in part by its capability to activate dendritic cells in vivo. While unadjuvanted U-Omp19 intraperitoneally administered induced a specific Th1 response, following U-Omp19 oral delivery a mixed specific Th1-Th17 response was induced. Depletion of CD4+ T cells in mice orally vaccinated with U-Omp19 resulted in a loss of the elicited protection, indicating that this cell type mediates immune protection. The role of IL-17 against Brucella infection has never been explored. In this study, we determined that if IL-17A was neutralized in vivo during the challenge period, the mucosal U-Omp19 vaccine did not confer mucosal protection. On the contrary, IL-17A neutralization during the infection did not influence at all the subsistence and growth of this bacterium in PBS-immunized mice. All together, our results indicate that an oral unadjuvanted vaccine based on U-Omp19 induces protection against a mucosal challenge with Brucella abortus by inducing an adaptive IL-17 immune response. They also indicate different and important new aspects i) IL-17 does not contribute to reduce the bacterial burden in non vaccinated mice and ii) IL-17 plays a central role in vaccine mediated anti-Brucella mucosal immunity

Deep-Sequencing Analysis of the Mouse Transcriptome Response to Infection with Brucella melitensis Strains of Differing Virulence

Brucella melitensis is an important zoonotic pathogen that causes brucellosis, a disease that affects sheep, cattle and occasionally humans. B. melitensis strain M5-90, a live attenuated vaccine cultured from B. melitensis strain M28, has been used as an effective tool in the control of brucellosis in goats and sheep in China. However, the molecular changes leading to attenuated virulence and pathogenicity in B. melitensis remain poorly understood. In this study we employed the Illumina Genome Analyzer platform to perform genome-wide digital gene expression (DGE) analysis of mouse peritoneal macrophage responses to B. melitensis infection. Many parallel changes in gene expression profiles were observed in M28- and M5-90-infected macrophages, suggesting that they employ similar survival strategies, notably the induction of anti-inflammatory and antiapoptotic factors. Moreover, 1019 differentially expressed macrophage transcripts were identified 4 h after infection with the different B. melitensis strains, and these differential transcripts notably identified genes involved in the lysosome and mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathways. Further analysis employed gene ontology (GO) analysis: high-enrichment GOs identified endocytosis, inflammatory, apoptosis, and transport pathways. Path-Net and Signal-Net analysis highlighted the MAPK pathway as the key regulatory pathway. Moreover, the key differentially expressed genes of the significant pathways were apoptosis-related. These findings demonstrate previously unrecognized changes in gene transcription that are associated with B. melitensis infection of macrophages, and the central signaling pathways identified here merit further investigation. Our data provide new insights into the molecular attenuation mechanism of strain M5-90 and will facilitate the generation of new attenuated vaccine strains with enhanced efficacy

Brucella abortus Induces the Premature Death of Human Neutrophils through the Action of Its Lipopolysaccharide

Most bacterial infections induce the activation of polymorphonuclear neutrophils (PMNs), enhance their microbicidal function, and promote the survival of these leukocytes for protracted periods of time. Brucella abortus is a stealthy pathogen that evades innate immunity, barely activates PMNs, and resists the killing mechanisms of these phagocytes. Intriguing clinical signs observed during brucellosis are the low numbers of Brucella infected PMNs in the target organs and neutropenia in a proportion of the patients; features that deserve further attention. Here we demonstrate that B. abortus prematurely kills human PMNs in a dose-dependent and cell-specific manner. Death of PMNs is concomitant with the intracellular Brucella lipopolysaccharide (Br-LPS) release within vacuoles. This molecule and its lipid A reproduce the premature cell death of PMNs, a phenomenon associated to the low production of proinflammatory cytokines. Blocking of CD14 but not TLR4 prevents the Br-LPS-induced cell death. The PMNs cell death departs from necrosis, NETosis and classical apoptosis. The mechanism of PMN cell death is linked to the activation of NADPH-oxidase and a modest but steadily increase of ROS mediators. These effectors generate DNA damage, recruitments of check point kinase 1, caspases 5 and to minor extent of caspase 4, RIP1 and Ca++ release. The production of IL-1β by PMNs was barely stimulated by B. abortus infection or Br-LPS treatment. Likewise, inhibition of caspase 1 did not hamper the Br-LPS induced PMN cell death, suggesting that the inflammasome pathway was not involved. Although activation of caspases 8 and 9 was observed, they did not seem to participate in the initial triggering mechanisms, since inhibition of these caspases scarcely blocked PMN cell death. These findings suggest a mechanism for neutropenia in chronic brucellosis and reveal a novel Brucella-host cross-talk through which B. abortus is able to hinder the innate function of PMN.Fondo Especial de la Educación Superior/[0500-13]/FEES/Costa RicaFondo Especial de la Educación Superior/[0504-13]/FEES/Costa RicaFondo Especial de la Educación Superior/[0505-13]/FEES/Costa RicaFondo Especial de la Educación Superior/[0248-13]/FEES/Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Centro de Investigación en Enfermedades Tropicales (CIET)UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP)UCR::Vicerrectoría de Docencia::Salud::Facultad de Microbiologí

Marcadores genéticos de virulencia en el Virus de la Leucosis Bovina: Un enfoque filogenético.

Marcadores genéticos de virulencia en el Virus de la Leucosis Bovina. Un enfoque filogenético. Rodriguez, SM1; Zwerdling A1; Jones, LR1; Trono, K1 1Instituto de Virología, CICVyA, INTA-Castelar. CC 25 (1712), Castelar. El virus de la leucosis bovina (Bovine Leukemia Virus, BLV) es un retrovirus oncogénico B-linfocitotrópico perteneciente al genero Deltaretrovirus que afecta al ganado bovino. Junto a los virus responsables de la leucemia de células T de los humanos (Human T-Cell Lymphotropic Virus-1 y Human T-Cell Lymphotropic Virus-2) y de los simios (Simian T-lymhotropic Virus), están clasificados dentro de la familia Retroviridae. Estos virus están asociados con malignidades de células B o T del sistema inmune. La mayoría de los individuos infectados con BLV son portadores asintomáticos en los que la infección pasa clínicamente desapercibida (AL). Cerca del 30% de los animales infectados desarrolla una proliferación benigna policlonal de células B, denominada Linfocitosis Persistente (LP). Sólo un pequeño porcentaje de los animales infectados (1 a 5%) desarrolla linfomas malignos o linfosarcomas (LS) de origen clonal. Realizando comparaciones entre las regiones genómicas 5' Long Terminal Repeats (5' LTR), involucradas en la regulación de la expresión génica viral, observamos la existencia de una correlación entre algunos sitios nucleotídicos y el desarrollo de casos de LS. Si bien esta correlación sugiere la presencia de marcadores de patogenia en la región LTR, es necesario analizar en un contexto histórico (cladograma) la aparición independiente de dicho marcador en conjunto con el desarrollo de LS. Con ese objetivo, se obtuvieron secuencias correspondientes a las regiones genómicas codificantes para las proteínas Env (utilizada en varios trabajos para realizar estudios comparativos) y Px. Las secuencias fueron alineadas mediante el programa ClustalX y los alineamientos fueron utilizados para obtener cladogramas mediante las rutinas de máxima parsimonia del programa PAUP*. El análisis de los árboles obtenidos sugiere que la adquisición del marcador en el sector LTR y el desarrollo de LS en diferentes aislamientos serían independientes, apoyando la hipótesis de la existencia de un marcador de patogenia en dicho sector. Sin embargo, el análisis debe ser ampliado incluyendo más aislamientos del virus y posiblemente otras regiones genómicas, para posibilitar la realización de análisis estadísticos de la correlación y confirmar los resultados del análisis filogenético. Cabe destacar que las topologías obtenidas a partir de las regiones genómicas Env y Px presentan diferencias, lo cual abre la discusión acerca de qué región utilizar para realizar estudios comparativos y filogenéticos para estudiar este virus. Palabras Claves: BLV, LTR, Env, pX, cladogram

Análisis cladístico de la correlación entre patogenia y marcadores moleculares en la región 5’ LTR del Virus de la Leucosis Bovina

ANALISIS CLADISTICO DE LA CORRELACION ENTRE PATOGENIA Y MARCADORES MOLECULARES EN LA REGION 5’ LTR DEL VIRUS DE LA LEUCOSIS BOVINA. SM Rodriguez1; A Zwerdling1; LR Jones1; K Trono1 1Instituto de Virología, CICVyA, INTA-Castelar. CC 25 (1712), Castelar, Argentina. El virus de la leucosis bovina (Bovine Leukemia Virus, BLV) es un miembro de la familia Retroviridae. Esta familia incluye los virus responsables de la leucemia de células T de los humanos (Human T-Cell Lymphotropic Virus-1 y -2) y de los simios (Simian T-lymhotropic Virus). BLV afecta al ganado bovino produciendo en un reducido numero de animales (2-5%) una neoplasia linfoproliferativa de células B de origen clonal conocida como Leucosis Bovina Enzootica (LBE). La mayoría de los individuos infectados con BLV son portadores asintomáticos (AL), cursando la infección sin signos clínicos aparentes. Alrededor del 30% de los animales infectados desarrolla una proliferación benigna policlonal de células B, denominada Linfocitosis Persistente (LP). En nuestro laboratorio hemos secuenciado la zona R-U5 del sector 5' LTR de aislamientos provenientes de 36 animales presentando diferentes formas clínicas. El resultado de estos estudios reveló la presencia de 4 bases covariantes para provirus aislados de linfosarcoma (LS). Estas modificaciones están ausentes en la mayoría (16/22) de los provirus aislados de formas asintomáticas (AL/PL). Si bien esta aparente correlación entre los cambios de nucleótidos y los cuadros clínicos sugiere la presencia de marcadores de patogenia, es necesario analizar dentro de un contexto histórico (cladograma) la aparición independiente de dicho marcador en conjunto con el desarrollo de LS. Para ello, se obtuvieron las secuencias correspondientes a la región genómica codificante env y pX para algunos de estos aislamientos de LS y AL/PL. Las secuencias fueron alineadas mediante el programa ClustalX y los alineamientos fueron utilizados para obtener cladogramas mediante las rutinas de máxima parsimonia del programa PAUP*. El análisis de los árboles obtenidos sugiere que la adquisición del marcador en la región LTR y el desarrollo de LS en diferentes aislamientos serían independientes, apoyando la hipótesis de la existencia de un marcador de patogenia en dicha zona regulatoria