Elaboración de un kit de separación magnética de células CD3+

Las técnicas de separación magnética son cada vez más importantes, con un amplio rango de aplicaciones en el campo de la biomedicina. La propiedad más notable y atractiva de los materiales magnéticos es que pueden ser aislados de una solución al aplicar un campo magnético externo. El principal objetivo de este proyecto es desarrollar un kit de separación celular utilizando nanopartículas magnéticas (NPm) de Gennova, conjugadas con el anticuerpo anti-CD3 (marcador específico de linfocitos T). Este proceso se realizará mediante la metodología AUTOMACS de Miltenyi. Tomando como referencia los resultados obtenidos por este método, intentaremos mejorarlo utilizando las NPm de Gennova. La primera tarea realizada en este proyecto es la activación de las NP. Partimos de NPm de 100nm, cubiertas por una matriz de polímeros con grupos terminales hidroxilos. Estas NPm deben ser funcionales y para ello son activadas con un novedoso reactivo de Gennova, denominado Smart-Link. Una vez activadas, pueden ser conjugadas con anticuerpos (en nuestro caso anti-CD3). Se utiliza un protocolo de acoplamiento que permite que el anticuerpo se una al reactivo Smart-Link por la región Fb, para que así la región Fab pueda reconocer el marcador celular de interés. A partir de este momento el complejo estará listo para su aplicación. La suspensión celular se obtiene de una cantidad de sangre concentrada (Buffy Coat). Realizaremos una separación en gradiente de densidad utilizando Ficoll para extraer las células mononucleares (nos interesan los linfocitos T). Los linfocitos T expresan en su superficie CD3. Al incubar las células con las NPm conjugadas con anticuerpos, se producirá la unión de ambas, ya que el anticuerpo reconocería al marcador de superficie celular. La separación magnética se realiza utilizando un equipo denominado AUTOMACS. Este dispositivo recoge toda la suspensión celular y separa las células en una fracción positiva (linfocitos T) y una fracción negativa (resto de células), usando un campo magnético. Nos quedaremos con la fracción positiva y realizaremos un recuento celular en la cámara de Neubauer para conocer la cantidad de células separadas. A día de hoy aún no se han obtenido resultados concluyentes pero en un futuro próximo se espera conseguir una separación eficiente de linfocitos T con el uso de las NPm de Gennova y así poder desarrollar el Kit de separación celular correspondiente

Involvement of synaptonemal complex proteins in sex chromosome segregation during marsupial male meiosis

Marsupial sex chromosomes break the rule that recombination during first meiotic prophase is necessary to ensure reductional segregation during first meiotic division. It is widely accepted that in marsupials X and Y chromosomes do not share homologous regions, and during male first meiotic prophase the synaptonemal complex is absent between them. Although these sex chromosomes do not recombine, they segregate reductionally in anaphase I. We have investigated the nature of sex chromosome association in spermatocytes of the marsupial Thylamys elegans, in order to discern the mechanisms involved in ensuring their proper segregation. We focused on the localization of the axial/lateral element protein SCP3 and the cohesin subunit STAG3. Our results show that X and Y chromosomes never appear as univalents in metaphase I, but they remain associated until they orientate and segregate to opposite poles. However, they must not be tied by a chiasma since their separation precedes the release of the sister chromatid cohesion. Instead, we show they are associated by the dense plate, a SCP3-rich structure that is organized during the first meiotic prophase and that is still present at metaphase I. Surprisingly, the dense plate incorporates SCP1, the main protein of the central element of the synaptonemal complex, from diplotene until telophase I. Once sex chromosomes are under spindle tension, they move to opposite poles losing contact with the dense plate and undergoing early segregation. Thus, the segregation of the achiasmatic T. elegans sex chromosomes seems to be ensured by the presence in metaphase I of a synaptonemal complex-derived structure. This feature, unique among vertebrates, indicates that synaptonemal complex elements may play a role in chromosome segregation

Sequential Loading of Cohesin Subunits during the First Meiotic Prophase of Grasshoppers

A previous version of this article appeared as an Early Online Release on January 2, 2007 (doi:10.1371/journal.pgen.0030028.eor).The cohesin complexes play a key role in chromosome segregation during both mitosis and meiosis. They establish sister chromatid cohesion between duplicating DNA molecules during S-phase, but they also have an important role during postreplicative double-strand break repair in mitosis, as well as during recombination between homologous chromosomes in meiosis. An additional function in meiosis is related to the sister kinetochore cohesion, so they can be pulled by microtubules to the same pole at anaphase I. Data about the dynamics of cohesin subunits during meiosis are scarce; therefore, it is of great interest to characterize how the formation of the cohesin complexes is achieved in order to understand the roles of the different subunits within them. We have investigated the spatio-temporal distribution of three different cohesin subunits in prophase I grasshopper spermatocytes. We found that structural maintenance of chromosome protein 3 (SMC3) appears as early as preleptotene, and its localization resembles the location of the unsynapsed axial elements, whereas radiation-sensitive mutant 21 (RAD21) (sister chromatid cohesion protein 1, SCC1) and stromal antigen protein 1 (SA1) (sister chromatid cohesion protein 3, SCC3) are not visualized until zygotene, since they are located in the synapsed regions of the bivalents. During pachytene, the distribution of the three cohesin subunits is very similar and all appear along the trajectories of the lateral elements of the autosomal synaptonemal complexes. However, whereas SMC3 also appears over the single and unsynapsed X chromosome, RAD21 and SA1 do not. We conclude that the loading of SMC3 and the non-SMC subunits, RAD21 and SA1, occurs in different steps throughout prophase I grasshopper meiosis. These results strongly suggest the participation of SMC3 in the initial cohesin axis formation as early as preleptotene, thus contributing to sister chromatid cohesion, with a later association of both RAD21 and SA1 subunits at zygotene to reinforce and stabilize the bivalent structure. Therefore, we speculate that more than one cohesin complex participates in the sister chromatid cohesion at prophase I.This work was supported by grants BFU2005–05668-C03–01, BFU2006–06655, BFU2005–01266, BFU2005–02431, and BFU2006–04406 from Ministerio de Educación y Ciencia, España, and grants 1001160016 and 11/BCB/013 from Universidad Autónoma de Madrid and Comunidad de Madrid. The Department of Immunology and Oncology was founded and is supported by the Spanish Council for Scientific Research (CSIC).Peer reviewe

Estudio geológico del yacimiento prehistórico de la cueva de Amalda y su entorno. Determinación del material litológico excavado y posible procedencia del mismo

El presente trabajo forma parte del estudio interdisciplinar llevado a cabo en el yacimiento prehistórico de la cueva de Amalda.Se ha clasificado, mediante el estudio petrográfico de láminas delgadas, el material litológico de industria humana recuperado en la excavación de los distintos niveles arqueológicos y se ha tratado de determinar su posible procedencia, siguiendo un criterio de proximidad al yacimiento en cuestión. Finalmente, se da un esbozo geológico de la cueva de Amalda, con un estudio geológico de su entorno.Artikulu hau Amalda kobazuloko historiaurreko aztarnategian burututako dizilina-arteko ikerketaren parte da. Maila arkeologiko ezberdinetan egindako indusketan errekuperatutako giza-industriako material litologiko guztia, lamina mehen ikerketa petrografikoa bidez sailkatu da eta izan dezakeen jatorria zehazten saiatu da, inguruko aztarnategiekiko gertutasun-irizpidea jarraituz. Azkenik, ingurunearen ikerketa geologiko batekin batera, Amalda kobazuloaren zirriborro geologikoa ematen da

Sobre unos restos de vertebrados en el Cretácico superior de San Sebastián (Guipúzcoa).

Esta nota precisa y confirma la posición estratigráfica de unos   materiales descritos por J. Gómez de Llarena en 1952, referentes   a unas vértebras de selacio, a la vez que enmienda una cita,   alusiva a dichos materiales, efectuada por J.R. Bataller en 1960. Una parte del material se guarda en la Sociedad de Ciencias   Aranzadi con el número de registro GA-307. Otra muestra, remitida   por Gómez de Llarena, a Bataller, se custodia en el Museo de   Geología del Seminario de Barcelona con el número de registro   12004-MGSB

Estudio geológico del yacimiento prehistórico de Labeko Koba y su entorno (Arrasate, País Vasco)

El presente trabajo forma parte del estudio interdisciplinar llevado a cabo en el yacimiento prehistórico en cueva de Labeko Koba. El yacimiento arqueológico de Labeko Koba se encontraba ubicado en un conjunto cárstico del "complejo Urgoniano" perteneciente a la Unidad Murugain de edad imprecisa, Aptiense inferior - Albiense medio. En el presente estudio, se analiza la relación existente entre los Sedimentos de la Unidad Murugain con sus contemporáneos : Margas de Bilbao y Calizas de Udalaitz, siendo estas últimas las más relevantes ya que en la actualidad constituyen un relieve sobresaliente en el paisaje continental : el macizo calizo (biolitito) de peña Udalaitz, mientras que en el momento de su formación, en el Cretácico Inferior, constituían un banco carbonatado elevado sobre el fondo marino de la época (arrecife pináculo). En este sentido, las calizas de la unidad Murugain se han revelado como un paso lateral del arrecife principal, depositadas a mayor profundidad que las de aquel

Turtles from the Early Cretaceous (Hauterivian-Barremian) of La Rioja (Cameros Basin, Spain)

The information about the turtles from the Early Cretaceous of the Iberian Peninsula is, until now, very poor. We describe here three specimens found in the Lower Cretaceous (Hauterivian-Barremian) of La Rioja, of at least two different taxa, being one of them Salasemys pulcherrima. This study provides new data on the representatives ofthe Spanish Fucryptodiran turtle

Fast-running theropods tracks from the Early Cretaceous of La Rioja, Spain

Theropod behaviour and biodynamics are intriguing questions that paleontology has been trying to resolve for a long time. The lack of extant groups with similar bipedalism has made it hard to answer some of the questions on the matter, yet theoretical biomechanical models have shed some light on the question of how fast theropods could run and what kind of movement they showed. The study of dinosaur tracks can help answer some of these questions due to the very nature of tracks as a product of the interaction of these animals with the environment. Two trackways belonging to fast-running theropods from the Lower Cretaceous Enciso Group of Igea (La Rioja) are presented here and compared with other fast-running theropod trackways published to date. The Lower Cretaceous Iberian fossil record and some features present in these footprints and trackways suggest a basal tetanuran, probably a carcharodontosaurid or spinosaurid, as a plausible trackmaker. Speed analysis shows that these trackways, with speed ranges of 6.5–10.3 and 8.8–12.4 ms−1, testify to some of the top speeds ever calculated for theropod tracks, shedding light on the question of dinosaur biodynamics and how these animals moved