Green synthesis of 2-Oxazoline-based polymers with antimicrobial activity using scCO2

Using a green methodology, 17 different poly(2-oxazolines) were synthesized starting from four different oxazoline monomers. The polymerization reactions were conducted in supercritical carbon dioxide under a cationic ring-opening polymerization (CROP) mechanism using boron trifluoride diethyl etherate as the catalyst. The obtained living polymers were then end-capped with different types of amines, in order to confer them antimicrobial activity. For comparison, four polyoxazolines were end-capped with water, and by their hydrolysis the linear poly(ethyleneimine) (LPEI) was also produced. After functionalization the obtained polymers were isolated, purified and characterized by standard techniques (FT-IR, NMR, MALDI-TOF and GPC). The synthesized poly(2-oxazolines) revealed an unusual intrinsic blue photoluminescence. High concentration of carbonyl groups in the polymer backbone is appointed as a key structural factor for the presence of fluorescence and enlarges polyoxazolines’ potential applications. Microbiological assays were also performed in order to evaluate their antimicrobial profile against gram-positive Staphylococcus aureus NCTC8325-4 and gram-negative Escherichia coli AB1157 strains, two well known and difficult to control pathogens. The minimum inhibitory concentrations (MIC)s and killing rates of three synthesized polymers against both strains were determined. The end-capping with N,N-dimethyldodecylamine of living poly(2- methyl-2-oxazoline) and poly(bisoxazoline) led to materials with higher MIC values but fast killing rates (less than 5 minutes to achieve 100% killing for both bacterial species) than LPEI, a polymer which had a lower MIC value, but took a longer time to kill both E.coli and S.aureus cells. LPEI achieved 100% killing after 45 minutes in contact with E. coli and after 4 hours in contact with S.aureus. Such huge differences in the biocidal behavior of the different polymers can possibly underlie different mechanisms of action. In the future, studies to elucidate the obtained data will be performed to better understand the killing mechanisms of the polymers through the use of microbial cell biology techniques

Gellan microspheres application for capture or purification of plasmid DNA vaccine

Cervical cancer is the 4th cause of death among women worldwide and is profoundly associated with HPV infection, due to apoptosis inhibition and uncontrolled cell proliferation caused by oncoproteins E6 and E7 action. At the moment, some prophylactic vaccines are available in the market, but that are only capable of preventing HPV infection. Thus, the development of effective treatment for HPV-infected individuals is fundamental. DNA vaccines emerged as a promising way to prevent and treat several diseases since it can stimulate both cellular and humoral immune responses. The biotechnological process for obtaining plasmid DNA (pDNA) includes several steps, which present an environmental impact and makes it quite expensive to the pharmaceutical industry. Therefore, it is crucial to explore new alternatives. In this work, copper-crosslinked gellan microspheres were produced through a water-in-oil emulsion in order to capture pDNA directly from the Escherichia coli (E. coli) lysate seeking a reduction in the recovery and clarification-associated costs. The lowest diameter of gellan microspheres was achieved with 1.41 % of an aqueous gellan gum solution, previously heated at 90ºC, and dripped through a syringe to the oil solution formerly heated at 100 ºC with constant stirring of 750 rpm at a flow rate of 75 µL/min. Afterwards batch method optimization, the gellan microspheres captured 15.61 % of pDNA with 2.42 % of purity by a strategy based on immobilized metal affinity chromatography (IMAC), by manipulating the pH and ionic strength of binding and elution buffers. Another strategy was developed in order to increase the pDNA capture by precipitating the E. coli lysate with ammonium sulfate. The elimination of major impurities improved the recovery percentage to 32.41 % and the purity degree to 12.43 %. Moreover, copper-crosslinked gellan microspheres were functionalized with polyethylenimine (PEI), in order to increase the pDNA capture by increasing the functional groups in the microspheres surface. This allowed an improvement in the recovery percentage to 88.09 %, but the same did not happen to the purity percentage, 3.18 %. Thus, if the central aim is total pDNA capture from crude lysates without resorting to salts or organic solvents, the strategy in which the microspheres were functionalized with PEI showed great potential. On the other hand, if the main objective is to capture pDNA with higher purity, it is recommended to perform a prior step to the capture with ammonium sulfate, where copper-crosslinked microspheres may be applied or also the ones functionalized with PEI. In conclusion, these simple, fast and low-cost strategies allow lysate clarification since an E. coli lysate usually has 1.07 % of pDNA.O vírus do papiloma humano (HPV) é um vírus sexualmente transmissível e a persistência da sua infeção é considerada a maior causa para o desenvolvimento do cancro do colo do útero. Este potencial oncogénico do HPV está diretamente relacionado com a expressão das oncoproteínas E6 e E7, visto que estas têm a capacidade de interferir na desregulação do ciclo celular, indução da apoptose, entre outros fenómenos biológicos. O cancro do colo do útero corresponde à 4º maior causa de morte nas mulheres a nível mundial. No entanto, com as evoluções alcançadas ao nível científico tem sido possível melhorar e desenvolver novas terapias à base de DNA para tratar vários problemas de saúde como cancro e doenças genéticas. Sendo uma delas, as vacinas de DNA, uma vez que estas têm a capacidade de despoletar todos os tipos de imunidade desejada, através da resposta celular e resposta humoral, evitando a evolução da doença, o que é uma vantagem em relação às vacinas convencionais. Os vetores de DNA plasmídico (pDNA) codificantes de determinados antigénios têm sido muito explorados como vacinas de DNA, uma vez que apresentam baixa toxicidade e são mais simples de desenvolver. O processo biotecnológico de preparação do biofármaco de pDNA compreende etapas sequenciais de produção, clarificação e purificação com objetivo de obter a isoforma superenrolada (sc) com o grau de pureza recomendado pelas agências reguladoras, já que é considerada a conformação de pDNA biologicamente ativa. Contudo, este processo é bastante dispendioso para a indústria farmacêutica e apresenta um impacto ambiental acentuado, devido ao uso de elevadas quantidades de solventes orgânicos (isopropanol) e sais caotrópicos (sulfato de amónio e sulfato de sódio). Desta forma, é fundamental desenvolver novas estratégias de captura ou purificação do pDNA sc de modo a simplificar a amostra e evitar o uso de determinados reagentes, tornando o processo mais “green” e económico. A goma gelana é um exopolissacárido microbiano aniónico que tem a capacidade de, em determinadas condições (presença de catiões, concentração de polímero, temperatura), alterar a sua estrutura conformacional e formar uma rede tridimensional dando origem a um gel termorreversível com diferentes características estruturais e propriedades, consoante o objetivo desejado. A gelana apresenta diversas aplicações na indústria alimentar (espessante, gelificante), farmacêutica (formulações oftálmicas), cosmética (loções, cremes), biotecnológica (substituinte do agar), e devido, a características como a sua biocompatibilidade, hidrofilicidade, porosidade e versatilidade tem vindo a ser explorada nos últimos anos como matriz cromatográfica. Recentemente foi explorada e otimizada por desenho experimental a formulação de microsferas de gelana através do método de emulsão água-em-óleo e reforço com iões divalentes para capturar proteínas em função da sua carga ou afinidade. Assim, o objetivo central deste trabalho foi formular as microsferas de gelana e desenvolver uma estratégia de captura de pDNA sc a partir de um lisado bruto de Escherichia coli (E. coli) aplicando o método de batch. Para tal, a amostra de lisado foi obtida através de uma fermentação em E. coli, com posterior lise alcalina. As microesferas de gelana foram preparadas pelo método de emulsão água–em–óleo, reforçadas com alguns iões divalentes, cobre, níquel, zinco, cobalto, e algumas formulações foram posteriormente funcionalizadas com o polímero de polietilenoimina (PEI). O menor diâmetro das formulações foi obtido com 1.41 % de uma solução aquosa de gelana, previamente aquecida a 90 ºC que foi gotejada através de uma seringa para uma solução de óleo aquecida anteriormente a 100 ºC sob constante agitação de 750 rpm a uma velocidade de 75 µL/min. Ambas as formulações foram caracterizadas relativamente ao diâmetro médio (microscopia de semiótica), à morfologia (SEM), à carga global (potencial zeta) e à composição elementar (EDX e FTIR). Dos resultados obtidos quanto à morfologia, ambas as topologias de microesferas apresentam uma forma esférica e consistente. A estabilidade das duas formulações foi avaliada pela medição do diâmetro médio ao longo de vinte dias e ambas se apresentam estáveis ao longo do período em análise. Em relação ao diâmetro médio, as microesferas funcionalizadas com PEI apresentam um menor diâmetro que as microesferas reforçadas com cobre, o que pode ser devido à formação de uma ligação de coordenação entre o PEI e o cobre tornando a sua estrutura mais compacta. Esta ligação pode ter também um efeito na composição elementar pois, as microesferas reforçadas com cobre apresentam cerca de 9 % de cobre e as que foram funcionalizadas com PEI, apresentam 17 % de aminas e apenas 0.62 % de cobre. As microesferas reforçadas com cobre apresentam uma carga superficial de cerca de – 5 mV e as que que foram funcionalizadas com PEI, apresentam uma carga superficial de cerca de + 5 mV. As estratégias de captura desenvolvidas tiveram por base a interação entre os iões metálicos reticulados nas microesferas e o pDNA presente no lisado celular, uma vez que a carga negativa do polímero de gelana repele os ácidos nucleicos. Após inúmeros estudos de otimização, as melhores condições de ligação do pDNA sc às microesferas de gelana reticuladas com cobre foram obtidas a pH 5.0 e a eluição com 200 mM NaCl em 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0, permitindo assim recuperar 15.61 % de pDNA sc com 2.42 % de pureza. Adicionalmente, outra estratégia desenvolvida para melhorar a captura de pDNA consistiu na precipitação do lisado de E. coli com 2,5 M de sulfato de amónio. Ao eliminar a maior parte das impurezas (RNA e proteínas) a quantidade de pDNA sc capturado aumentou para 32.41 % com um grau de pureza de 12.43 %. Por fim, as microesferas de gelana foram funcionalizadas com PEI, com objetivo de melhorar a captura de pDNA, tendo em conta o aumento de grupos funcionalizados para interagirem com DNA na superfície das microesferas. Nas microsferas funcionalizadas com PEI, o passo de ligação foi realizado com um tampão de 10 mM MES a pH 5.0 e a eluição com 200 mM NaCl em 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 10.5. Nestas condições, foi possível a captura total do pDNA presente na amostra de lisado e uma recuperação/eluição 88.09 % de pDNA sc. Contudo, também ocorreu a retenção de grande parte do RNA da amostra que resultou num decréscimo do grau de pureza para 3.18 %. Assim sendo, se o objetivo principal for a captura total de pDNA de lisados brutos sem recorrer a sais ou solventes orgânicos, a estratégia que apresenta grande potencial é aquela em que as microesferas foram funcionalizadas com PEI. Por outro lado, se o objetivo principal for a captura de pDNA com um grau de pureza mais elevado, é recomendado realizar um passo prévio de tratamento com sulfato de amónio antes do passo de captura, sendo que neste se pode aplicar as microesferas reticuladas com cobre ou também as funcionalizadas com PEI. Concluindo, estas estratégias simples e de baixo custo permitiram a clarificação do lisado sem ser necessário recorrer a solventes orgânicos como o isopropanol, visto que o lisado de E. coli normalmente apresenta cerca de 1.07 % de pDN

Relações públicas e/ou diplomacia pública: FAP em missões de paz

A partir de uma revisão da literatura e de uma análise dos documentos produzidos tanto pelas entidades titulares das Forças Armadas Portuguesas (FAP) como pela imprensa portuguesa no último semestre de 2014, e tendo como método a Qualitative Content Analysis, percebeu-se que as FAP em missões de paz são entendidas enquanto actores de Diplomacia Pública (DP), mas que este aspecto não é comunicado estrategicamente. Defende-se que a DP beneficiaria em ser tratada como uma área de desempenho do profissional de Relações Públicas (RP) / Comunicação Estratégica.ABSTRACT: From a review of the literature and a Qualitative Content Analysis of documents from the Portuguese Armed Forces (FAP) holder entities, as well as of Portuguese press in the last semester of 2014, we realised that the FAP deployed in peacekeeping missions are understood as actors of Public Diplomacy (DP) but this is not strategically communicated. We defend that DP would benefit from being treated as a performance area of the Public Relations (RP) / Strategic Communication professional.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

The effect of green human resources management practices on employees’ affective commitment and work engagement: The moderating role of employees’ biospheric value

Organizational Sustainability is an increasingly important movement in the business world because of its social impact and also for the obligations imposed by state agendas and programs by global entities, such as the United Nations. At the forefront of such a movement is the Human Resources function, given its boundary activities with several critical internal and external stakeholders. The term Green Human Resource Management (GHRM) has been used to describe people management with a focus on green issues. The main objective of this research was to explore the relationship between personal values associated with sustainable behaviors (altruistic, biospheric, egoistic, and hedonic values), organizational outcomes such as engagement and commitment, and GHRM. A questionnaire was prepared and used to collect 532 responses from employees from various organizations. Results show that of the four personal values only the biospheric one moderates the relationship between GHRM practices and affective commitment so that the relationship between HRM and affective commitment is stronger when biospheric values score higher. This is an important finding, as it shows that when people value the biosphere, the effect of GHRM practices on affective commitment and work engagement is stronger than when people value other matters.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Quality assessment of snacks obtained by extrusion of whole amaranth grains or defatted amaranth flour and their mixtures with corn grits

Despite its nutritional benefits and potential as a functional food, amaranth is still little known in Brazil. In order to increase its consumption, the inclusion of amaranth in the formulation of conventional products has been recommended, such as in extruded snacks, which are being prepared with defatted amaranth flour. There has been little research on the direct extrusion of whole amaranth grains, which would eliminate the grinding and defatting processes. Thus, this study evaluated and compared the quality of snacks obtained by the extrusion of whole amaranth grains and defatted amaranth flour and their mixtures with 25 and 50% corn grits. The lipid content present in the amaranth grain (8%) impaired the expansion and texture of the extrudates. Even with the addition of corn, the snacks based on whole amaranth grains were not well accepted (overall acceptability between 3 and 4 on a nine point hedonic scale), due to their low expansion, hard texture, dark color and strong aftertaste. On the other hand, snacks made with defatted amaranth flour and its mixtures with corn grits showed good expansion and had a crunchy texture and lighter color, and were therefore better accepted (overall acceptability > 5). It was concluded that under the present experimental conditions, it was not possible to develop an acceptable snack based on whole amaranth grains, but the production of snacks based on defatted amaranth flour provided products better accepted by the consumers.Apesar dos benefícios nutricionais e de seu potencial como alimento funcional, o amaranto ainda é um alimento pouco difundido no Brasil. Para o aumento do consumo desta matéria-prima, preconiza-se a sua incorporação na formulação de produtos convencionais, como os snacks extrudados que vêm sendo elaborados com a farinha de amaranto desengordurada. Pouco tem sido pesquisado sobre a extrusão direta do grão integral de amaranto, o que permitiria eliminar as etapas de moagem e de desengorduramento. Assim, a pesquisa avaliou e comparou a qualidade tecnológica de snacks obtidos por extrusão de grão integral de amaranto e de farinha de amaranto desengordurada, e suas misturas com 25 e 50% de fubá de milho. Verificou-se que o teor de lipídeos presentes no grão de amaranto (8%) prejudicou a expansão e a textura dos extrudados. Mesmo com a adição de fubá de milho, os snacks extrudados à base de grão integral de amaranto foram rejeitados sensorialmente (aceitação global entre 3 e 4, numa escala hedônica estruturada de nove pontos), pois apresentaram baixa expansão, textura dura, cor escura e forte sabor residual. Já os snacks extrudados obtidos com farinha de amaranto desengordurada isoladamente e em combinação com fubá de milho apresentaram maior expansão, textura crocante e cor mais clara, e, por isso, maior aceitabilidade (aceitação global > 5). Conclui-se, nas condições do experimento, que não foi possível obter snacks extrudados à base de grãos de amaranto de boa aceitação e que a produção de snacks extrudados à base de farinha de amaranto desengordurada proporciona produtos com melhor aceitação por parte do consumidor.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Departamento de Biociências Campus Baixada SantistaUniversidade de São Paulo Faculdade de Saúde Pública Departamento de NutriçãoUNIFESP, Depto. de Biociências Campus Baixada SantistaSciEL

SATISFAÇÃO DOS CLIENTES ESTUDO DE CASO SOCIEDADE COMERCIAL VASCONCELOS LOPES, L DA

A globalização fez com que aumentasse o nível de competitividade entre as empresas, em que a preocupação maior é conseguir manter no mercado, a partir da conquista e fidelização dos seus clientes. Sendo assim, a satisfação dos clientes revela numa das chaves para o sucesso das empresas, na medida que é necessário que as empresas procurem compreender e avaliar os seus atributos mais importantes, a fim de proporcionar o máximo de satisfação aos seus clientes. O presente estudo foi realizado com o objetivo de identificar o nível de satisfação dos clientes da Sociedade Comercial Vasconcelos Lopes, Lda., da ilha de São Vicente, com vista a avaliar o desempenho da empresa em satisfazer os seus clientes, bem como a sua postura no mercado. Para desenvolver o estudo, foi realizado um estudo de caso na referida empresa, em que foi utilizado uma metodologia de pesquisa descritiva, que teve como instrumento de coleta de dados um questionário, com 20 perguntas fechadas, numa amostra de 200 inquiridos, direcionado para os clientes da empresa, e os resultados foram analisados e interpretados pelo Software estatístico SPSS (Statistical Package for Social Sciences). A partir da coleta dos dados foi possível identificar que os clientes apresentam um alto nível de satisfação com os produtos, atendimento, preço, promoções e com a localização, contudo a empresa precisa melhorar a gestão da sua relação com os mesmos. Foi possível analisar que a localização é um dos motivos que mais leva os clientes a comprar na empresa, o que possibilita reter mais clientes e mantê-los fiéis a empresa. Dos resultados obtidos, foi possível constatar que a empresa tem um bom desempenho em satisfazer os seus clientes, o que significa que a empresa está a obter ganhos competitivos e com isso conseguir atingir o sucesso empresarial

Genetic Markers for Alzheimer's Disease

This report aims to inform on the progression of research into the genetic factors involved in the development of Alzheimer’s disease (AD). AD is a life-altering disease that affects millions of individuals from varying races and ethnic backgrounds1. According to the National Institute on Aging, a faculty of the U.S. Department of Health and Human Services, AD has been ranked as the third leading cause of death in the United States, only behind cancer and heart failure. It is predicted that by 2050, approximately one in 45 Americans will be afflicted with the disease5.            Distinctive physical indications of the onset of AD include neuron loss, amyloid plaques and neurofibrillary tangles5. Onset is not frequent prior to 60 years of age but can be caused by one of two reasons. The first is a mutation in the amyloid precursor protein (APP) gene on chromosome 21. This gene is responsible for the regulation of the production of amyloid beta (Aβ) proteins, which are known to be abundant in the brains of AD patients. A mutation in the gene leads to an inappropriate regulation of this protein. The second, and more common cause is a result of an unidentified gene on chromosome 14 in AD patients2. It has been confirmed that there is involvement of chromosome 19 in late onset AD (LOAD)  as well1. Most of the genes that are associated with the development of AD have yet to be identified, but the research is bringing society closer and closer to that goal everyday.Ce rapport vise à fournir de l’information sur la progression de la recherche au sujet des facteurs génétiques impliqués dans le développement de la maladie d'Alzheimer (MA). La MA est une maladie bouleversant la vie de la personne et qui affecte des millions d’individus de diverses races et ethnicité1. Selon l'Institut national sur le vieillissement, un corps professoral du département américain de la santé et des services sociaux, la MA a été classée comme la troisième cause de décès aux États-Unis, ne cédant le pas qu’au cancer et à l'insuffisance cardiaque. Il est prévu que d'ici l'an 2050, environ une personne sur 45 Américains sera affligée avec cette maladie5.Des indications visuelles distinctives de l'apparition de la MA comprennent la perte des neurones, les plaques amyloïdes et des enchevêtrements neurofibrillaires5. L'apparition précoce n’est pas fréquente avant 60 ans, mais peut être causée par l'une des deux raisons. La première raison est une mutation dans le gène de la protéine précurseur de l'amyloïde (PPA) sur le chromosome 21. Ce gène est responsable de la régulation de la production de protéines bêta-amyloïde (Aß), qui sont connues pour être abondant dans le cerveau des patients atteints de la MA. Une mutation dans le gène conduit à une régulation inappropriée de cette protéine. La seconde cause, et celle-là plus communes sont le résultat d'un gène inconnu sur le chromosome 142. Il a été confirmé qu'il y a aussi une participation du chromosome 19 dans l'apparition tardive de la MA (ATMA)1. La plupart des gènes qui sont associés avec le développement de la MA n’ont pas encore été identifiés, mais la recherche rapproche la société de cet objectif de plus en plus tous les jours

METHODOLOGICAL DISCUSSION AND PILOTING OF LCA-BASED ENVIRONMENTAL INDICATORS FOR PRODUCT STAGE ASSESSMENT OF BRAZILIAN BUILDINGS

The International Energy Agency (IEA)’s Annex 57 was established to advance on evaluation of embodied energy and GHG emissions for building construction. Its activities include recommendation of common calculation methods and disclosure of regional benchmarks. Process-based, input-output or hybrid life cycle assessment (LCA) can support such calculations. Identification of the major products that describe key building typologies plays a strategic role in the tasks of streamlining indicators’ monitoring scope and LCI data gathering in contexts with little LCA practice consolidation. Given these motivations and backdrops, our main goals are (i) to calculate a selected set of LCA-based indicators to synthetically describe environmental performance of construction products for three functionally equivalent case studies; (ii) to detect the major contributors to embodied energy (EE) and emissions (EGWP); and (iii) to examine the implications of considering embodied CO2 versus total GHG emissions. The selected metrics include – besides EE and EGWP targeted by Annex 57 – the blue water footprint (bWF), non-renewable primary material consumption (NRc) and volatile organic compounds (VOC) emissions. Production cycle modeling used previously collected national data, as well as secondary data extracted from national and international literature or adapted from international databases whenever considered as reasonably similar to Brazilian processes. EE and EGWP results were calculated using the Cumulative Energy Demand (CED) method and the CML 2001 baseline v. 2.05 method, respectively, and are presented for the top contributing products. NRc, bWF and VOC calculations were directly derived from the inventories and discussed in more detail for cement and concrete. Around 80% of the total embodied energy was related to seven construction products, while four of them also responded for around 80% of embodied GWP. Enlarging the database to encompass ten core products would increase coverage to over 93%. For cement and concrete, partial replacement of clinker by ground granulated blast furnace slag brought substantial reductions in the calculated values for all indicators but bWF, which unveils the effect of the water-intensive granulation process. Further research is expected to advance in LCI development and validation to enable the use of life cycle-based metrics to support decision-making within the national building sector