Cytokine gene expression and cellular immune response in dogs with leishmaniosis before and under the two first-line treatment protocols : new insights into the animal disease

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias, especialidade de Ciências Biológicas e Biomédicas. Universidade de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária 2020Canine leishmaniosis (CanL) caused by Leishmania infantum is a zoonotic visceral disease of worldwide concern. The drugs used for its treatment improve the animal’s clinical condition, although, in most cases, the parasites are not completely destroyed. The current study aimed to evaluate the immune response of the dog with leishmaniosis before and during treatment with first-line drugs, by analyzing the profile of cytokines and subsets of CD4+ and CD8+ T-cells in peripheral blood, lymph node and bone marrow. Two groups of six dogs diagnosed with CanL were treated with either miltefosine or meglumine antimoniate in combination with allopurinol. Simultaneously, another group of ten clinically healthy dogs was used as a control group. Upon diagnosis and during the following three months of treatment, clinical signs, hematological and biochemical parameters, urinalysis results and anti-Leishmania antibody titers using IFAT were recorded. Furthermore, peripheral blood, popliteal lymph node and bone marrow mononuclear cells were collected to evaluate the gene expression of IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, TNF-α, TGF-β and IFN-γ by qPCR. In parallel, these cells were also immunophenotypically analyzed be flow cytometry, using surface monoclonal antibodies anti-CD45, CD3, CD4, CD8, CD25 and intracellular monoclonal antibody anti-nuclear factor FoxP3. Both treatment protocols promoted the remission of clinical signs, normalization of hematological and biochemical parameters and urinalysis values. Sick dogs showed a generalized increase in IFN-γ gene expression and a decrease of IL-2, IL-4, and TGF-β. The expression of IL-12, TNF-α, IL-5, and IL-10 showed variations between groups of dogs and the tissue analyzed. CanL also resulted in an overall increase in the percentage of CD8+ T-cells in all tissues. In the peripheral blood there was also a decrease in CD4+ T-cells and an increase of CD4+CD25+FoxP3+ and CD8+CD25+FoxP3+ T-cells, with the latter also increasing on the bone marrow. CD4+CD25-FoxP3- T-cells showed a marked decrease in blood and bone marrow. During treatment, a trend towards normalization of cytokine gene expression and T-cell subsets was observed. However, high levels of IFN-γ gene expression were still observed in all tissues. In turn, the treatments caused an increase in the percentage of CD4+CD25+FoxP3+ and a decrease in CD8+CD25-FoxP3- T-cells, leading to normalization of CD4+ and CD8+ T cells in all tissues. Furthermore, the effect of treatment on gene expression of cytokines that were not significantly altered by infection indicates that these combined treatment protocols directly affect cytokine production. Both combined treatments are effective in remitting clinical sings and appear to influence the dog’s immune response, sustaining a pro-inflammatory immune environment while promoting the normalization of T-cell subsets. These findings indicate that L. infantum may be able to manipulate elements of the dog's immune system to avoid differentiating an efficient protective response, preventing the rapid development of severe pathology while ensuring the parasite’s survival and securing the possibility of several transmission cycles. Allied to these results, other studies carried out in collaboration with the working group on the role of neutrophils, hepatocytes and Kupffer cells in CanL, as well as the evaluation of treatment in feline leishmaniosis, have allowed to enhance the knowledge in the area of animal leishmaniosis.RESUMO - Expressão génica de citocinas e resposta imune celular em cães com leishmaniose antes e sob os dois protocolos de tratamento de primeira linha: novas informações sobre a doença animal - A leishmaniose canina (LCan) causada por Leishmania infantum é uma doença visceral zoonótica de interesse mundial. Os fármacos utilizados para o tratamento melhoram o estado clínico do animal, embora, muitas das vezes, os parasitas não sejam totalmente eliminados. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a resposta imunitária do cão com leishmaniose antes e durante o tratamento com fármacos de primeira linha, através da análise do perfil de citocinas e subconjuntos de células T CD4+ e CD8+ no sangue periférico, linfonodo e medula óssea. Dois grupos de seis cães diagnosticados com LCan foram tratados com antimoniato de meglumina ou miltefosina em associação com alopurinol. Em simultâneo, outro grupo de dez cães clinicamente saudáveis foi usado como grupo controlo. Aquando do diagnóstico e durante os três meses consecutivos de tratamento, foram registados os sinais clínicos, parâmetros hematológicos e bioquímicos, resultados de urianálise e títulos de anticorpos anti-Leishmania obtidos por IFAT. Células mononucleares do sangue periférico, linfonodo e medula óssea foram recolhidas para avaliação da expressão génica de IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, TNF-α, TGF-β e IFN-γ por qPCR. Em paralelo, estas células foram também analisadas imunofenotipicamente por citometria de fluxo, com anticorpos monoclonais de superfície anti-CD45, CD3, CD4, CD8, CD25 e anticorpo mononuclear intracelular anti-factor nuclear FoxP3. Ambos os protocolos de tratamento promoveram a remissão dos sinais clínicos, a normalização dos parâmetros hematológicos, bioquímicos e dos valores de urianálise. Cães doentes mostraram um aumento generalizado da expressão génica de IFN-γ e diminuição de IL-2, IL-4 e TGF-β. A expressão de IL-12, TNF-α, IL-5 e IL-10 apresentou variações entre os grupos de cães e o tecido analisado. A LCan levou também a um aumento generalizado da percentagem de células T CD8+ em todos os tecidos. No sangue verificou-se ainda diminuição de células T CD4+ e aumento de células T CD4+CD25+FoxP3+ e CD8+CD25+FoxP3+, com estas últimas aumentando também na medula. As células CD4+CD25-FoxP3- mostraram diminuição acentuada no sangue e medula óssea. Durante o tratamento, foi observada uma tendência para a normalização da expressão génica de citocinas e subconjuntos celulares. No entanto, níveis elevados da expressão génica de IFN-γ foram observados em todos os tecidos. Por sua vez, os tratamentos causaram um aumento da percentagem de células T CD4+CD25+FoxP3+ e diminuição de células T CD8+CD25-FoxP3-, levando à normalização os valores de células T CD4+ e CD8+ em todos os tecidos. Adicionalmente, o efeito do tratamento na expressão génica de citocinas, que não se encontravam alteradas aquando da infeção, é indicador de que estas terapêuticas combinadas afetam diretamente a produção de citocinas. Ambas as terapêuticas combinadas são eficazes na remissão dos sinais clínicos e parecem influenciar a resposta imunitária do cão, sustentando um ambiente imunológico pró-inflamatório e promovendo a normalização de subconjuntos de linfócitos T. Estes resultados indicam que L. infantum poderá ser capaz de manipular elementos do sistema imunológico do cão para impedir a diferenciação de uma resposta protetora eficaz, evitando o rápido desenvolvimento de patologia grave, enquanto assegura a sobrevivência do parasita, garantindo a possibilidade de vários ciclos de transmissão. Aliado a estes resultados, estudos realizados em colaboração pelo grupo de trabalho sobre o papel dos neutrófilos, hepatócitos e células de Kupffer na LCan, assim como a avaliação do tratamento na leishmaniose felina, permitiram agregar mais conhecimentos na área da leishmaniose animal.N/

Adaptive admission control in real-time systems

In real-time service provisioning platforms the existence of an efficient and flexible admission control mechanism is essential for providing quality of service in a reliable and stable way, avoiding congestion scenarios caused by indiscriminate and uncontrolled service request admission. The capability of modeling and regulating the rate of call acceptance, and provide service differentiation allow indirect control of the load submitted to the platform. This paper presents a service differentiated admission control solution that allows to limit and modulate the rate by which service requests are submitted into a service provisioning platform. The solution is focused on providing a fair level of bandwidth sharing among service classes, in a configurable and dynamic way so that it can adapt the distribution by which service requests are served. To sustain the design decisions of our solution, major scheduling disciplines and rate control mechanisms, some of them proposed recently, are studied and compared. The solution was submitted to unit and charge tests, whose results show its effectiveness and robustness

MUSCULAR ANATOMY OF THE THORAX AND THORACIC LIMB OF Caiman Crocodilus (LINNAEUS, 1758) (CROCODYLIA: ALLIGATORIDAE) BY MEANS OF DIGITAL DISSECTION AND THREE-DIMENSIONAL MODELS

The Caiman crocodilus , popularly known as alligator , is a species of crocodilian, which has a crest or "forehead" described as "in crescent shape", observed, immediately, dorsal in relation to the eyes, as well as above the dorsal region of the snout, with an ossified crust rostral to the orbicular region. The present study aimed to describe the muscular anatomy of the thorax with emphasis on the thoracoappendicular muscles, and Caiman crocodilus thoracic limb , with the aid of X-Ray (RX), Ultrasonography (US), and detailed manual dissection; identified the thickness of the muscle groups of the thorax and thoracic limb of the Caiman crocodilus , through Ultrasonography, and, at the end, three-dimensional models of the muscular anatomy of the thorax were built, with emphasis on the thoracoappendicular muscles, and the thoracic limb of the Caiman crocodilus , with finalization in three-dimensional PDF. Anatomical descriptions have greatly favored interventions in wild animals, as well as the use of imaging tests such as X-ray and US. In addition, 3D schematic models clarify topographical relationships and highlight muscle depth, for example. In this way, it is possible to identify anatomical differences and intervene in case of diagnoses and prognoses, such as in US, even in real time.The Caiman crocodilus , popularly known as alligator , is a species of crocodilian, which has a crest or "forehead" described as "in crescent shape", observed, immediately, dorsal in relation to the eyes, as well as above the dorsal region of the snout, with an ossified crust rostral to the orbicular region. The present study aimed to describe the muscular anatomy of the thorax with emphasis on the thoracoappendicular muscles, and Caiman crocodilus thoracic limb , with the aid of X-Ray (RX), Ultrasonography (US), and detailed manual dissection; identified the thickness of the muscle groups of the thorax and thoracic limb of the Caiman crocodilus , through Ultrasonography, and, at the end, three-dimensional models of the muscular anatomy of the thorax were built, with emphasis on the thoracoappendicular muscles, and the thoracic limb of the Caiman crocodilus , with finalization in three-dimensional PDF. Anatomical descriptions have greatly favored interventions in wild animals, as well as the use of imaging tests such as X-ray and US. In addition, 3D schematic models clarify topographical relationships and highlight muscle depth, for example. In this way, it is possible to identify anatomical differences and intervene in case of diagnoses and prognoses, such as in US, even in real time

A Importância do Marketing Sensorial no Setor do Retalho

Os sentidos são manipulados e trabalhados pelos retalhistas com o objetivo de convencer o cliente a formalizar compras através do que ele ouve, toca, vê, cheira e prova. A área do marketing que trabalha e estuda como os sentidos podem influenciar o comportamento de compra do consumidor é o marketing sensorial. No âmbito desta dissertação é apresentada uma revisão de literatura que aborda o marketing sensorial nas diferentes vertentes que podem ser aplicadas no ponto de venda. Este trabalho de investigação apresenta um estudo empírico de caracter quantitativo, através da aplicação de um questionário a um conjunto de consumidores. Os resultados obtidos refletem as respostas dos inquiridos que comprovam ser sensíveis aos estímulos dos cinco sentidos no ponto de venda sendo influenciados no momento da compra

Desenvolvimento de métodos moleculares para detecção de Theileria annulata

Dissertação para a obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e BiomedicinaA theileriose tropical (ou mediterrânica) é uma doença transmitida por carraças e que afecta bovinos, resultando em elevadas perdas económicas na produção e comércio internacional destes animais. O agente da doença é o hemoparasita Theileria annulata e a sua detecção em animais infectados é habitualmente realizada através de exame microscópico de esfregaços de sangue, que apresenta baixa sensibilidade na identificação de animais portadores, onde apenas um número diminuto de eritrócitos se mantém infectado. O objectivo deste estudo foi desenvolver métodos melhorados de detecção de T. annulata em amostras de sangue de bovino, baseados nas tecnologias de PCR em tempo real e de amplificação isotérmica de ácidos nucleicos (LAMP). Foram desenhados oligonucleótidos iniciadores com alvos complementares no gene Tams1, específico de T. annulata,para o método de LAMP. O DNA foi extraído a partir de amostras de sangue de bovino, usando métodos comerciais robotizados e kits de extracção, e foi usado como molde nas reacções de PCR em tempo real (com o corante intercalante EvaGreen®) e LAMP. Estas amostras de DNA encontravam-se testadas para a presença de parasitas dos géneros Theileria e Babesia, usando um método de hibridação reversa em membrana (Reverse Line Blotting – RLB). A detecção de T. annulata por PCR em tempo real nestas amostras revelou uma especificidade e sensibilidade de 100% e 80%,respectivamente, usando o teste de RLB como referência. A técnica de LAMP, por sua vez, conseguiu detectar uma amostra com baixa parasitémia correspondente a 0,03%. Ambas as técnicas usadas neste trabalho demonstraram ser eficientes na detecção de T. annulata, constituindo a técnica de PCR em tempo real um bom método de detecção em laboratórios bem equipados e a técnica de LAMP uma promissora ferramenta em laboratórios de diagnóstico com menores recursos.Apoiado pelo Deputado Europeu Rui Tavares através do financiamento de uma bolsa de estud

Caracterização geológica e geofísica da área do porto da Figueira da Foz

Mestrado em Ciências do Mar e das Zonas CosteirasNo âmbito de um projeto realizado para a Administração Portuária do Porto da Figueira da Foz, foram recolhidos dados geofísicos no offshore da costa da Figueira da Foz, utilizando um sistema combinado de sonar de varrimento lateral e de sísmica de alta resolução com o objetivo de compreender a distribuição de sedimentos ao longo do fundo marinho e assim entender melhor a sua origem. Os dados de varrimento lateral foram processados, analisados e representados em mosaicos recorrendo ao software integrado TRINTON Prespective. Foram colhidas 10 amostras de sedimentos de fundo que foram analisadas do ponto de vista granulométrico e que foram usadas para a calibração dos mosaicos do sonar de varrimento lateral de modo a produzir um mapa semi-quantitativo de classificação dos sedimentos de fundo. Os dados de reflexão sísmica foram processados e analisados através dos softwares SPW e RadExPro. Os mapas de sonar de varrimento lateral produzidos (mosaicos) mostram uma relação entre o tamanho de grão e composição dos depósitos de plataforma interna e os processos geológicos que ocorrem na zona costeira adjacente. Também se verifica uma relação entre a orientação da costa e a sua consequente exposição às ondas incidentes, e como isso afeta e altera a distribuição do tamanho grão. Neste contexto, a interpretação combinada dos mosaicos do sonar de varrimento lateral com os dados de granulometria e a batimetria dos sedimentos permitiram uma cartografia interpretativa detalhada da morfologia do mar, uma melhor compreensão do controlo da linha costeira na propagação das ondas e correntes e, por conseguinte, na transferência de sedimento no litoral. Os dados de sísmica permitem ainda verificar a espessura das várias camadas geológicas em profundidade.In the scope of a project done for the Harbor Administration of the Figueira da Foz harbor, geophysical data was acquired offshore the cost of Figueira da Foz, using a combined sidescan and sub-bottom profiling system with the aim to image the sediment distribution across the sea floor to better understand their origin. The sidescan sonar data was processed, analyzed and mosaiced using the integrated TRITON Perspective software. It was conducted grain size analyzes in ten seabed sediment grab samples that were and used to ground-truth the sidescan mosaics and produce a semi-quantitative seabed classification map. The sub-bottom profiling data were processed and analyzed using the SPW and RadExPro softwares. The resulted sidescan maps (mosaics) show a close relationship between the grain-size and composition of inner shelf deposits and geological processes occurring in the adjacent coastal area. Also is verified a relation between the orientation of the coast and its consequent exposure to the incident wave, and how this affects and alters the grain size distribution. In this context, combined interpretation of the sidescan sonar mosaics with the sediment granulometry and bathymetry data allow a detailed interpretative cartography of the sea morphology, a better understanding of the morphological coastline control on waves and currents propagation and therefore on sediment transference between littoral binds. The seismic data allows the verification of the thickness of the different sediment layers

Adaptive admission control in a NGN service platform

http://wts2010.eng.usf.edu/In NGN service-provisioning platforms the existence of an efficient and flexible admission control mechanism is essential for providing quality of service in a reliable and stable way, avoiding congestion scenarios caused by indiscriminate and uncontrolled service requests. The capability of modulating and regulating the rate of call acceptance, and provide service differentiation allow indirect control of the load submitted to the platform. This paper presents a service admission control solution that enables to differentiate, limit and modulate the rate by which service requests are submitted into a NGN service-provisioning platform. The solution is focused on providing a fair level of bandwidth sharing among service classes, in a configurable and dynamic way so that it can adapt the distribution by which service requests are served. To sustain the design goals of our solution, major scheduling disciplines and rate control mechanisms are here studied and compared in order to elect the more adequate components. The implemented solution was submitted to unit and charge tests; the results show its effectiveness and robustness in controlling and differentiating incoming service calls

Análise de defeitos em vidrados de pavimento

Mestrado em Engenharia de MateriaisO presente trabalho propõe-se relatar a actividade realizada tendo em vista a caracterização de defeitos em vidrados de peças de pavimento, tendo sido elaborado com base num estágio que teve como duplo objectivo a integração em ambiente industrial (Cinca) e o estudo de um problema com interesse prático. O trabalho aborda a vertente formativa decorrente do estágio, em termos de conhecimento do processo produtivo, envolvendo uma descrição da empresa e do processo de fabrico, seguindo-se um enquadramento sobre vidros, vidrados e seus defeitos, com destaque para as razões de natureza física e química que os podem originar, e respectivo aspecto. No final é abordado o caso de estudo levado a cabo na Cinca, é explicada a metodologia seguida, sendo apresentados e comentados os resultados. Os defeitos estudados foram caracterizados principalmente por Microscopia Electrónica de Varrimento combinada com espectroscopia de dispersão de energia de raios-X. Os resultados obtidos apontaram para a presença de espécies químicas alheias às matérias-primas, indiciando contaminação por cobre. Uma análise sistemática das eventuais fontes de contaminação permitiu concluir que somente em algumas válvulas se poderia encontrar uma liga rica neste metal, ficando por isso delimitada a zona de intervenção tendo em vista a resolução do problema detectado.The present report describes the activity undertaken to identify and characterize one specific type of defect in glazed floor tiles. This study was developed during an internship that had the dual purpose of integration in industrial environment (Cinca) and the study of a problem of practical interest. The report covers the formative aspect resulting from the internship, in terms of knowledge of the production process, involving the description of the company and corresponding manufacturing process. One second set of information is dedicated to glasses, glazes and their defects, with emphasis on the physical and chemical reasons that can cause defects, and their appearance. In the end, the case study undertaken in Cinca is shortly presented, starting from the methodology used, and the results are presented and commented. The defects were studied by scanning electron microscopy combined with energy-dispersive X-ray spectroscopy. The results obtained pointed to the presence of chemical species unrelated to raw materials, indicating contamination by copper. A systematic analysis of the possible sources of contamination concluded that only in some valves could be found an alloy rich in this metal; therefore the area of intervention was reduced with the goal of solving the problem detected