Correntes aniónicas em protoplastos de grãos de pólen de Arabidopsis thaliana e Lilium longiflorum

Tese de doutoramento, Biologia (Biologia do Desenvolvimento), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011Upon hydration in a simple medium, pollen grains germinate and develop a cytoplasmic extension designated as the pollen tube, the growth rate of which can reach up to 4 μm s-1, making it one of the fastest polarized cellular growths in nature. This apical growth is oscillatory and its control has been systematically shown to be underlined by ion dynamics, namely ion fluxes across the membrane and cytoplasmatic ionic gradients. These phenomena were identified and characterized by means of imaging techniques and by Self Referencing Vibrating Probes. Thus far the ions known to be involved are Chloride (Cl-), Calcium (Ca2+), Proton (H+) and Potassium (K+), which apical fluxes oscillate with the same frequency as that of the apical growth. Zonia et al. (2002) identified and characterized the Cl- fluxes in growing pollen tubes from two species, Lilium longiflorum and Nicotiana tabacum, showing that this ion leaves the pollen tube through an oscillating efflux at the tip and enters through a non-oscillating influx at the shank of the tube, starting at approximately 15 μm from the tip. These authors also associated the efflux of Cl- to the Ins(3,4,5,6)P4 (Inositol 3,4,5,6 tetra-kis-phosphate) signaling pathway. This compound, known for inhibiting receptor mediated Ca2+ dependent Cl- currents, inhibited the pollen tube growth, induced the increase of the cellular volume and compromised the normal efflux of Cl-. Other inhibitors were also tested: DIDS (4,4'-di-iso-tiocianate-stilbeno-2,2'-disulfonic acid), o NPPB (5-nitro-2-(3-fenil-propil-amino)benzoic acid) and niflumic acid completely inhibited the pollen tube growth, the cytoplasmic streaming and caused the increase of the cellular volume. Nevertheless, only DIDS completely abolished the oscillatory effluxes of Cl-. Zonia et al. (2002) showed that the Cl- fluxes are essential to the pollen tube growth due to its role in the maintenance of the cellular volume. This observation let to the hypothesis that the fluxes of water through the plasma membrane follow the fluxes of Cl-. The work developed in this thesis lay with the isolation and characterization of the anionic currents present in the pollen grain protoplasts of two species, Arabidopsis thaliana and Lilium longiflorum. The first species was chosen due to the fact that it is the biological model for plants, endowing it with the necessary molecular tools for the latter identification of the channel or channels responsible for the Cl- fluxes reported in Zonia et al. (2002). The second species was chosen not only because it has been recurrently used as a model in the study of development of pollen tubes, but also because it would allow for a comparison between the same type of currents in two very different species. The necessity of developing specific protocols for the isolation of the anionic currents in this system stemmed from the fact that, although there was already published reports on anionic currents in plant cell protoplasts, namely from leaf meristem, from stomata and from apical root cells, the existing protocols were inadequate, for producing quality protoplasts and for not allowing the patch clamp technique to be applied. It was necessary to adjust the time of incubation in the enzyme solution, and the time and speed of the centrifugation steps in the protocol for the production and isolation of protoplasts. For the isolation of the anionic currents it was necessary to adjust the osmolarity of the bath and pipette solutions, their ionic content. The anionic currents found in the plasma membrane of pollen grain protoplasts from Arabidopsis thaliana and Lilium longiflorum were characterized by means of the Whole Cell (WC) configuration of the patch clamp technique, under symmetrical anionic concentrations, in which Cl- was the permeable anion in greater concentration. Under these experimental conditions, it was possible to identify, in the protoplasts of Arabidopsis thaliana, three different anionic current populations, all with a strong outward rectification. These were ICl1 (current lost during rundown, after the establishment of the WC configuration), ICl2 (current insensitive to the inhibitor NPPB), and ICl3 (current inhibited by 100 μM of NPPB). ICl2 and ICl3 were measured after rundown. Despite the strong outward rectification, the putative channels responsible for the detected anionic currents allow the passage of current in both directions (inwardly and outwardly), since both negative and positive currents suffered rundown and were inhibited by NPPB. The currents presented a time dependent activation for the more positive membrane potentials (Vm), that is, an activation induced by depolarizing Vm. This can be described by three current components, one which is instantaneous - Iinst (sub millisec) and two which are time dependent - I1 e I2, characterized by the time constants 1 (hundreds of millisec) and 2 (tens of millisec), respectively. Using a tail protocol it was possible to observe that these currents are also characterized by a hyperpolarizing time dependent deactivation. The variation of the cord conductance (G) with Vm was also studied, by fitting a Boltzmann equation to the values of G when plotted against Vm. This analysis revealed that ICl1 has a different sensitivity to variation in Vm. By diminishing the Cl- concentration in the bath solution ([Cl-]out) after the rundown, it was possible, not only to confirm the anionic nature of the currents but also to determine that ICl1 and ICl3 are regulated by [Cl-]out. The ionic selectivity of the two populations of currents was studied by replacing part of the [Cl-]out by NO3-. It was possible to conclude that the permeability to NO3- was two times higher than to Cl- (PNO3-/PCl-). The effect of three different intracellular calcium concentrations ([Ca2+]in, in the nM, μM and mM range), was studied showing that all three currents increased in intensity with increasing [Ca2+]in, while their sensitivity to NPPB decreased. The sensitivity of G to variations in Vm was not changed. The populations of anionic currents - ICl1, ICl2 and ICl3 – with very similar characteristics were also found in pollen grain protoplasts from Lilium longiflorum. These differed, not only in the response to [Ca2+]in, but also in the sensitivity to NPPB, which was inferior, since the minimal NPPB concentration needed was 500 μM. Other differences laid with the PNO3-/PCl-, which in these currents was 1.2, and with the fact that these were not regulated by [Cl-]out. From the values of the currents it was possible to calculate the anionic fluxes that these could originate. By varying the Vm and [Ca2+]in is was possible to oscillate the values of the calculated fluxes in a manner compatible with the observed Cl- fluxes reported by Zonia et al. (2002) in growing pollen tubes from Lilium longiflorum. It was not possible to perform the same comparison for Arabidopsis thaliana, since the Cl- fluxes in growing pollen tubes haven’t been characterized in this species yet. Nevertheless it is possible to claim with some level of confidence that the anionic currents here described can be responsible for the observed fluxes. The identification of the channel or channels responsible for the observed anionic currents was also attempted. Through the analysis of the pollen grain transcriptomic it was possible to isolate the following gene candidates: CLC-c, CLC-d, MSL10, ALMT12, SLAH2, SLAH3 and CaCC. The first two genes, CLC-c and CLC-d, were eliminated in a second selection phase, not only because they were both localized in intracellular membranes, namely the tonoplast and the trans-Golgi network, but also because all the CLC channels so far characterized revealed themselves as anion:H+ cotransporters. MSL10 was also eliminated because these channels aren’t regulated by cytoplasmic Ca2+ or by Vm. ALMT12 was eliminated because, unlike the currents elicited by this channel, the anionic currents described here suffered a decrease in intensity when 5 mM of malate was added to the bath solution, indicating a smaller permeability to this anion. The candidates SLAH2 and SLAH3, homologues of SLAC1, were not selected because they have yet to be electrophysiologically characterized. The best candidate was CaCC, since the currents in the animal homologues have been characterized, revealing themselves very similar to the ones described in this thesis. Unfortunately it was impossible to confirm this identification due to a lack of a true KO mutant for this gene.Ao germinar, o grão de pólen forma uma extensão citoplasmática designada por tubo polínico, cujo crescimento é polarizado e apical, podendo atingir os 4 μm s-1. Este crescimento distingue-se por ser oscilatório e por estar intimamente associado a fluxos iónicos através da membrana plasmática e aos gradientes citoplasmáticos que os fluxos originam. Estes fenómenos foram identificados e caracterizados através de técnicas de Imagiologia e de Sondas Vibráteis Auto Referenciáveis. Até à data os iões que se sabem estar envolvidos são o Cloreto (Cl-), Cálcio (Ca2+), Protão (H+) e Potássio (K+), cujos fluxos apicais oscilam com a mesma frequência que o crescimento. Zonia e colaboradores (2002) identificaram e caracterizaram os fluxos de Cl- em tubos polínicos de duas espécies, Lilium longiflorum e Nicotiana tabacum, mostrando que este ião sai do tubo polínico através de um efluxo oscilante no ápice e entra através de um influxo não oscilante nos lados do tubo, e que tem inicio a aproximadamente 15 μm da ponta. Estes autores associaram o efluxo de Cl- à via de sinalização do Ins(3,4,5,6)P4 (Inositol 3,4,5,6 tetra-kis-fosfato). Este composto, conhecido por inibir correntes de Cl- dependentes de Ca2+ e mediadas por receptores, inibiu o crescimento do tubo polínico, induziu o aumento do volume celular e comprometeu o normal efluxo de Cl-. Outros inibidores de correntes aniónicas também foram testados: o DIDS (ácido 4,4'-di-iso-tiocianato-stilbeno-2,2'-disulfónico), o NPPB (ácido 5-nitro-2-(3-fenil-propil-amino)benzóico) e o ácido niflúmico inibiram completamente o crescimento do tubo polínico, o streaming citoplasmático e causaram o aumento do volume celular. No entanto, apenas o DIDS conseguiu destruir os efluxos oscilatórios de cloreto. Com este artigo, Zonia e colaboradores (2002) mostraram que os fluxos de Cl- são essenciais ao crescimento do tubo devido ao seu papel na manutenção do volume celular. Esta observação levou à hipótese de que os fluxos de água através da membrana plasmática seguiam os fluxos de Cl-. O trabalho desenvolvido durante o meu doutoramento e que conduziu a esta tese prendeu-se com o isolamento e a caracterização das correntes aniónicas em protoplastos de grão de pólen de duas espécies, a Arabidopsis thaliana e o Lilium longiflorum. A primeira espécie foi escolhida por ser o modelo biológico das plantas e por possuir as ferramentas moleculares necessárias à identificação dos possíveis canais responsáveis pelos fluxos de Cl- descritos por Zonia e colaboradores (2002). A segunda espécie foi escolhida não só por ser um modelo recorrentemente utilizado no estudo do desenvolvimento em tubos polínicos, mas também por permitir uma comparação entre o mesmo tipo de correntes em duas espécies tão distintas. A necessidade de desenvolver protocolos específicos para o isolamento das correntes aniónicas neste sistema surgiu do facto de, apesar de já se ter estudado correntes aniónicas em protoplastos de células vegetais, nomeadamente do meristema da folha, dos estomas e da raiz apical, os protocolos existentes eram desadequados, quer por não produzirem protoplastos de qualidade, quer por impedirem a aplicação da técnica de patch clamp. No protocolo para a produção e isolamento de protoplastos foi necessário ajustar os tempos de incubação na solução enzimática e a velocidade e tempo de centrifugação. Para o isolamento das correntes aniónicas foi necessário ajustar a osmolaridade das soluções de banho e de pipeta, ajustar as concentrações dos iões em solução. As correntes aniónicas presentes na membrana plasmática dos protoplastos de grãos de pólen de Arabidopsis thaliana e Lilium longiflorum foram caracterizadas na configuração de célula inteira (Whole-Cell, WC) da técnica de retalho controlado (patch clamp), sob condições simétricas de concentração aniónica, sendo o Cl-, o ião permeável presente em maior quantidade. Nestas condições experimentais foram identificadas nos protoplastos de Arabidopsis thaliana três populações diferentes de correntes aniónicas, todas com rectificação positiva: ICl1 (corrente perdida por rundown depois da entrada em WC – diluição de factores intracelulares para a pipeta por difusão), ICl2 (corrente insensível a NPPB), e ICl3 (corrente inibida por 100 μM de NPPB). ICl2 e ICl3 foram medidas depois do rundown. Apesar da forte rectificação outward, os possíveis canais responsáveis pelas correntes aniónicas detectadas permitem a passagem de corrente em ambas as direcções (inward e outward), já que quer as correntes positivas, quer as negativas sofrem perda de intensidade por rundown e são inibidas por NPPB. As correntes apresentam também uma activação dependente do tempo para os potenciais de membrana (Vm) mais positivos, isto é, induzida por potenciais de membrana (Vm) depolarizantes, podendo esta ser descrita com três componentes, uma instantânea - Iinst (sub milissegundos) e duas dependentes do tempo - I1 e I2, caracterizadas pelas constantes 1 (centenas de milissegundos) e 2 (dezenas de milissegundos), respectivamente. Utilizando um protocolo de cauda, foi possível observar que estas correntes sofrem também uma desactivação dependente do tempo, desta vez induzida por Vm hiperpolarizantes. A variação da condutância corda (G) destas correntes com Vm também foi estudada. Aos resultados obtidos foi ajustada uma equação de Boltzmann, cujos parâmetros demonstraram uma sensibilidade diferente de ICl1 a variações no Vm. Diminuindo a concentração de Cl- na solução de banho ([Cl-]out), depois de o rundown terminar, permitiu descobrir que as populações ICl2 e ICl3 são reguladas por [Cl-]out. A selectividade iónica das populações ICl2 e ICl3 foi estudada através da substituição de parte da [Cl-] na solução de banho por NO3-, chegando-se à conclusão que a permeabilidade ao NO3- era duas vezes maior que a permeabilidade ao Cl- (PNO3-/PCl-). Foi também averiguado o efeito de três concentrações intracelulares de cálcio diferentes ([Ca2+]in, na gama de nM, μM e mM), mostrando que as três diferentes populações de correntes viram a sua intensidade aumentar com o aumento de [Ca2+]in, enquanto a sensibilidade ao NPPB diminuía. A sensibilidade da condutância corda a variações do Vm não se modificou. Três populações de correntes aniónicas - ICl1, ICl2 e ICl3 - com características semelhantes foram medidas em protoplastos de grãos de pólen de Lilium longiflorum. Estas diferiram não só na resposta ao [Ca2+]in mas também na sensibilidade ao NPPB, que era inferior, já que a concentração mínima de NPPB necessária foi de 500 μM. Outras diferenças prenderam-se com PNO3-/PCl-, que no caso destas populações de correntes foi de 1.2, e com o facto de estas não serem reguladas por [Cl-]out. A partir dos valores das correntes foi possível calcular os fluxos aniónicos que estas poderiam originar. Fazendo variar o Vm e a [Ca2+]in foi possível fazer oscilar os valores dos fluxos calculados de forma compatível com os fluxos de Cl- descritos em tubos polínicos em crescimento de Lilium longiflorum. Não foi possível realizar a mesma comparação para a Arabidopsis thaliana, uma vez que os fluxos de Cl- ainda não foram descritos para esta espécie. Apesar disso é possível afirmar com alguma segurança que as correntes aniónicas aqui descritas podem ser responsáveis pelos fluxos observados. Durante o meu doutoramento também foi realizada uma tentativa de identificar o canal ou canais responsáveis pelas correntes observadas. Através da análise transcriptómica dos grãos de pólen de Arabidopsis foi possível isolar numa primeira fase os seguintes candidatos: CLC-c, CLC-d, MSL10, ALMT12, SLAH2, SLAH3 e CaCC. Os dois primeiros candidatos, CLC-c e CLC-d, foram eliminados numa segunda fase, não só por terem sido localizados em membranas intracelulares, nomeadamente no tonoplasto e nas vesículas trans-Golgianas, mas também porque até à data os CLC caracterizados revelaram-se cotransportadores anião:H+. O MSL10 foi eliminado uma vez que estes canais não são regulados pelo Ca2+ citosólico ou pela voltagem. O ALMT12 foi eliminado como candidato pois, ao se adicionar 5mM de malato às correntes aniónicas encontradas nos protoplastos de grãos de pólen de Arabidopsis thaliana, estas sofreram uma diminuição na sua intensidade, indicando que estes canais são menos permeáveis ao malato, ao contrário dos ALMT12. Os possíveis canais SLAH2 e SLAH3, homólogos ao canal SLAC1, acabaram por não ser escolhidos uma vez que os respectivos canais ainda não foram caracterizados. O candidato que se revelou ser o melhor foi o CaCC, uma vez que as correntes dos homólogos em animais já foram caracterizadas, tendo-se revelado muito semelhantes às descritas nesta tese. Infelizmente foi impossível confirmar esta identificação devido à falta de um verdadeiro mutante KO para o gene em questão.Fundação para a Ciência e a Tecnologia(FCT, SFRH/BD/27399/2006

The Importance of Zebrafish in Biomedical Research

FUNDING SOURCE - PTDC/SAU-OBD/103981/2008 and SFRH/BPD/772587/2011Introduction: Zebrafish (Danio rerio) is an ideal model organism for the study of vertebrate development. This is due to the large clutches that each couple produces, with up to 200 embryos every 7 days, and to the fact that the embryos and larvae are small, transparent and undergo rapid external development. Material and Methods: Using scientific literature research tools available online and the keywords Zebrafish, biomedical research, human disease, and drug screening, we reviewed original studies and reviews indexed in PubMed. Results: In this review we summarized work conducted with this model for the advancement of our knowledge related to several human diseases. We also focused on the biomedical research being performed in Portugal with the zebrafish model. Discussion: Powerful live imaging and genetic tools are currently available for zebrafish making it a valuable model in biomedical research. The combination of these properties with the optimization of automated systems for drug screening has transformed the zebrafish into "a top model" in biomedical research, drug discovery and toxicity testing. Furthermore, with the optimization of xenografts technology it will be possible to use zebrafish to aide in the choice of the best therapy for each patient. Conclusion: Zebrafish is an excellent model organism in biomedical research, drug development and in clinical therapy.publishersversionpublishe

Os cuidados de enfermagem voltados para pacientes com doença de Fabry - revisão integrativa da literatura / Nursing cares for patients with Fabry's disease - integrative literature review

Objetivo: Demostrar os principais cuidados de enfermagem voltados para o paciente portador da doença de fabry, e destacar os diversos cuidados realizados pela equipe de enfermagem. Metodologia: Trata-se de um estudo com coleta de dados a partir de fontes base de dados secundárias, por meio de levantamento bibliográfico, como referencial metodológico para a realização da pesquisa. Resultados: Em uma sociedade altamente evoluída, onde a maioria da população possui acesso livre a uma grande variedade de fontes de informações e tecnologias, existem patologias que ainda permanecem totalmente desconhecidas para maioria das pessoas, os enfermeiros são fundamentais no tratamento da doença de Fabry. O cuidar culturalmente congruente com as necessidades de crianças e adolescentes renais crônicos pode ser descrito como uma ação intencional de cuidar estabelecida pela interação dos saberes científicos e a valorização dos saberes culturais dessa clientela. Conclusão: Conclui-se que, diante dos estudos, a doença de fabry (DF) além de rara, é uma doença complexa e que exige um tratamento especifico. Os profissionais de enfermagem são fundamentais nos cuidados da DF pois com seu conhecimento teórico e prático realizam assistências que possibilitam uma orientação e procedimento seguros para melhora na qualidade de vida do paciente. Doença de Fabry, Cuidado de Enfermagem, Doenças Raras

Síndrome de Torsades de Pointes: análise de casos: Torsades de Pointes Syndrome: case analysis

A Síndrome de Torsades de Pointes (TdP) é uma taquiarritmia ventricular polimórfica de pacientes com um intervalo QT longo congênito ou induzido por fármacos, cujo eletrocardiograma possui aspecto de “torção das pontas” e os sinais e sintomas característicos são síncope, palpitação ou mesmo evolução para fibrilação ventricular e morte súbita. O sexo mais frequentemente acometido é o feminino, o diagnóstico se baseia no eletrocardiograma e o tratamento preconizado é o sulfato de magnésio (MgSO4) intravenoso, a correção dos distúrbios eletrolíticos, principalmente a hipocalemia e o tratamento da causa base, na TdP farmacoinduzida. O objetivo do estudo é analisar os casos de Síndrome de Torsades de Pointes em pacientes com alterações do intervalo QT no eletrocardiograma. Trata-se de uma revisão bibliográfica integrativa, do tipo quantitativa, que utilizou as plataformas do PubMed, SciELO e Cochrane Library como bases de dados para seleção dos artigos, todos na língua inglesa. Foram utilizadas literaturas publicadas com recorte temporal de 2017 a 2022. De acordo com as literaturas analisadas, conclui-se que a TdP é uma taquiarritmia ventricular polimórfica com um mau prognóstico se não tratada precocemente com o MgSO4 intravenoso e, por ter diversas etiologias, é primordial que o diagnóstico preciso seja estabelecido de forma rápida, devido ao alto índice de mortalidade. Pacientes portadores da síndrome do QT longo congênita, bradicardia sinusal e bloqueio atrioventricular de 1º grau possuem predisposição para o desenvolvimento de TdP. Observa-se escassez na literatura a respeito das formas adequadas de prevenção da TdP, já que muitos pacientes que participam das triagens, muitas das vezes inefetivas, adquirem a síndrome após o uso de drogas que a predispõem, com prolongamento do intervalo QT, ou não sabem que possuem uma SQTL pré-existente, obrigatória para o desenvolvimento da TdP

Síndrome de DiGeorge (deleção do cromossomo 22q11.2): manejo e prognóstico

A síndrome de DiGeorge (SDG), também conhecida como síndrome velocardiofacial, é uma condição neurogenética autossômica dominante de interesse global caracterizada pela microdeleção do cromossomo 22q11.2, na qual não há predileção por gênero ou raça. A doença é conhecida pela tríade clássica as cardiopatias congênitas, timo hipoplásico – ou aplásico – e hipocalcemia decorrente da hipoplasia paratireoidiana O diagnóstico da síndrome baseia-se em dois exames laboratoriais, a Hibridização Genômica Comparativa baseada em microarray (aCGH) e a Hibridização por Fluorescência in situ (FISH), ambas com a finalidade de investigar o distúrbio genético e o tratamento consiste em tratar as alterações decorrentes da patologia. O objetivo estudo é analisar o manejo e o prognóstico da síndrome de DiGeorge por meio de um apanhado de casos clínicos. Trata-se de uma revisão bibliográfica integrativa, de natureza quantitativa, que utilizou as plataformas PubMed (Medline), Scientific Eletronic Library On-line (SciELO) e Cochrane Library como bases de dados para a seleção dos artigos, todos na língua inglesa. Foram utilizadas literaturas publicadas com recorte temporal de 2017 a 2022. De acordo com as literaturas analisadas, foi observado que a SDG requer diligência por parte dos profissionais da saúde no que concerne ao seu manejo, vide os vários fenótipos, desde leves a graves, da patologia. Por ter envolvimento multissistêmico, é essencial que, mesmo antes do diagnóstico, os distúrbios inerentes à síndrome sejam tratados e sujeitos à suspeição por intermédio da equipe, a qual necessita ter conhecimento acerca dessa possibilidade, haja vista a eventualidade de um pior prognóstico aos pacientes portadores

Uma história de conceitos na saúde pública: integralidade, coordenação, descentralização, regionalização e universalidade A history of public health concepts: integrity, coordination, decentralization, regionalization, and universality

O Sistema Único de Saúde conferiu visibilidade a uma série de conceitos próprios da organização de sistemas de saúde. Entre eles a integralidade, que delimita fronteiras comuns com quase todos os demais princípios do Sistema, tem sido objeto de ampla literatura no Brasil. Com base em extensa revisão de fontes primárias e secundárias, este artigo apresenta uma recuperação histórica dos conceitos de integralidade, descentralização, regionalização e universalidade - ideias e conceitos que em grande parte se conformam e se interligam no ideário da organização dos serviços sanitários pelo modelo dos Centros de Saúde distritais.<br>Brazil's Unified Health System (Sistema Único de Saúde) has highlighted a series of concepts specific to the organization of healthcare systems. Among these, integrity - which shares boundaries with almost all other System principles - has been the object of much academic production in Brazil. Based on an extensive review of primary and secondary sources, the article offers a historical recovery of the concepts of integrity, decentralization, regionalization, and universality - ideas and concepts that in good measure are shaped by and interlinked with the set of ideals of the organization of sanitary services according to the district health centers model

Em busca de um horizonte : narrativas sobre educação, artes e resistência

"APRESENTAÇÃO - Os textos reunidos no livro Em busca de um Horizonte: narrativas sobre educação, arte e resistência foram inspirados nos debates realizados durante o evento VI Simpósio Internacional Horizontes Humanos, que aconteceu na Faculdade de Educação da Universidade de Brasília, em 2018. O livro está dividido em quatro partes: Resistências cotidianas para além da utopia, Demasiado humano: as diferentes linguagens artísticas e culturais, A educação como um horizonte, Educação ambiental e ancestralidade: para continuar caminhando. Apesar da divisão em seções (sempre arbitrária), as produções - bastante diversas nas temáticas, metodologias e referenciais teóricos adotados – compartilham um alinhamento ao adotar um posicionamento político em defesa da diversidade, dos direitos humanos, da ancestralidade, do meio ambiente, da educação com valores democráticos, dos saberes populares e das diferentes linguagens artísticas. Assim, o livro se apresenta como um convite à resistência em tempos atrozes. Os organizadores

Development and validation of the MMCD score to predict kidney replacement therapy in COVID-19 patients

Abstract Background Acute kidney injury (AKI) is frequently associated with COVID-19, and the need for kidney replacement therapy (KRT) is considered an indicator of disease severity. This study aimed to develop a prognostic score for predicting the need for KRT in hospitalised COVID-19 patients, and to assess the incidence of AKI and KRT requirement. Methods This study is part of a multicentre cohort, the Brazilian COVID-19 Registry. A total of 5212 adult COVID-19 patients were included between March/2020 and September/2020. Variable selection was performed using generalised additive models (GAM), and least absolute shrinkage and selection operator (LASSO) regression was used for score derivation. Accuracy was assessed using the area under the receiver operating characteristic curve (AUC-ROC). Results The median age of the model-derivation cohort was 59 (IQR 47–70) years, 54.5% were men, 34.3% required ICU admission, 20.9% evolved with AKI, 9.3% required KRT, and 15.1% died during hospitalisation. The temporal validation cohort had similar age, sex, ICU admission, AKI, required KRT distribution and in-hospital mortality. The geographic validation cohort had similar age and sex; however, this cohort had higher rates of ICU admission, AKI, need for KRT and in-hospital mortality. Four predictors of the need for KRT were identified using GAM: need for mechanical ventilation, male sex, higher creatinine at hospital presentation and diabetes. The MMCD score had excellent discrimination in derivation (AUROC 0.929, 95% CI 0.918–0.939) and validation (temporal AUROC 0.927, 95% CI 0.911–0.941; geographic AUROC 0.819, 95% CI 0.792–0.845) cohorts and good overall performance (Brier score: 0.057, 0.056 and 0.122, respectively). The score is implemented in a freely available online risk calculator ( https://www.mmcdscore.com/ ). Conclusions The use of the MMCD score to predict the need for KRT may assist healthcare workers in identifying hospitalised COVID-19 patients who may require more intensive monitoring, and can be useful for resource allocation