Maturação e fecundação in vitro de ovócitos de caninos domésticos (Canis familiaris)

Este estudo foi realizado com os objetivos de 1) determinar a eficácia de duas temperaturas (37 0 C e 390 C) e três intervalos de tempo (48, 72 e 96h) na maturação in vitro (MIV) de ovócitos caninos, 2) verificar o efeito de FSH, estradiol, somatotropina humana (hST), albumina sérica bovina (BSA), soro de vaca em estro (SVE) e soro de cadela em estro (SCE) na MIV de ovócitos caninos, 3) observar a influência da condição reprodutiva das doadoras de ovários sobre os índices de MIV, 4) verificar a habilidade para fecundação in vitro (FIV) e desenvolvimento embrionário in vitro de ovócitos coletados de fêmeas em diferentes estágios do ciclo estral. O meio de maturação usado foi TCM-199 com Hepes, SVE, gentamicina, bicarbonato de sódio, ácido pirúvico, estradiol, FSH e hCG. O meio de maturação era modificado de acordo com a proposta experimental. Os resultados do primeiro experimento não mostraram diferença no índice de meiose de ovócitos maturados à 37oC ou à 39oC em quaisquer dos intervalos testados. No segundo experimento, os índices mais elevados de retomada da meiose após 72 horas da MIV foram obtidos, quando TCM-199 era suplementado com BSA. Ovócitos maturados em TCM-199 com SCE não se desenvolveram até o estádio de metáfase II (MII). No terceiro experimento, os resultados de maturação dos ovócitos não mostraram diferença na progressão do material nuclear até MII entre os ovócitos provenientes de cadelas em várias condições reprodutivas. No experimento de FIV, os ovócitos foram distribuídos em 3 grupos de acordo com o estágio do ciclo estral da doadora em folicular, anestro e luteal. Após maturação, os ovócitos eram fecundados e cultivados in vitro. O índice de ovócitos desenvolvendo-se em embriões foi de 10,1%. O índice de clivagem foi similar nas fases reprodutivas. Foi verificada influência da fase folicular sobre o desenvolvimento de pronúcleos. Não foi estabelecida correlação entre a proporção de espermatozóides capacitados ou com reação acrossômica e formação pronuclear e/ou percentagem de clivagem. Concluiu-se que: a) ovócitos caninos podem ser maturados in vitro a 39oC e 37oC. b) a adição de FSH, estradiol, hST, BSA, SVE e SCE ao meio TCM-199 não eleva os índices de maturação nuclear até MII de ovócitos caninos maturados in vitro. c) em cães, a seleção de ovócitos com base na coleta dentro de um estágio específico do ciclo estral não deve ser usada para prever índices de meiose ou habilidade para desenvolvimento embrionário in vitro. d) ovócitos caninos maturados, fecundados e cultivados in vitro podem se desenvolver a zigotos com até 8 células

Influência da secreção prostática autóloga sobre a viabilidade de espermatozóides caninos no pós-descongelamento

Effects of homologous prostatic secretion on post-thaw motility, membrane integrity and agglutination of cryopreserved canine spermatozoa diluted in TRIS-egg-yolk and in TRIS-BSA semen extenders were investigated. The study demonstrates that the addition of prostatic secretion resulted in beneficial effect on the acrosome integrity of the spermatozoa. There werent changes regarding sperm motility rate, and exposure of spermatozoa to prostatic secretion didnt lead to a significant reduction on sperm agglutination. However, after incubation for 60 minutes at 37ºC, the addition seemed showing better sperm dissociation in TRIS-BSA 0.25% (60% of the samples). At this time, sperm survival in extenders was observed at different rates: in TRIS-egg-yolk diluent (40% of the samples), in TRIS-BSA 0.25% diluent (80% of the samples), in TRIS-BSA 0.50% diluent (40% of the samples), and in TRIS-BSA 1.00% diluent (50% of the samples).Investigou-se o efeito da secreção prostática autóloga na motilidade pós-descongelamento, na integridade de acrossomo e na adesão intercelular de espermatozóides criopreservados em diluidores com TRIS-gema de ovo e com TRIS-BSA. O experimento mostrou que a adição de secreção prostática promoveu um efeito benéfico sobre a manutenção da integridade dos acrossomos. Não foram observadas alterações com referência à motilidade e à exposição dos espermatozóides frente à secreção prostática, também não levou a uma redução significativa da adesão interespermática. No entanto, após 60 minutos de incubação a 37ºC, a presença da fração prostática parece ter favorecido a dissociação espermática dos ejaculados diluídos com TRIS-BSA 0,25% (60% das amostras). Ao final do período de observação, foram verificadas diferentes percentagens de sobrevivência espermática nas amostras diluídas com TRIS-gema de ovo (40% das amostras), com TRIS-BSA 0,25% (80% das amostras), com TRIS-BSA 0,50% (40% das amostras) e com TRIS-BSA 1,00% (50% das amostras)

Prevalence of cutaneous neoplasms in dogs from the metropolitan area of Porto Alegre, RS, Brazil : 1,017 cases (2002-2007)

O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo retrospectivo sobre neoplasias cutâneas diagnosticadas em cães. A avaliação foi realizada pela análise dos arquivos diagnósticos do Setor de Patologia Veterinária (SPV) da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), Brasil, considerando-se um intervalo de seis anos (2002 a 2007). Neste intervalo, um total de 1.869 (37,3%) amostras de pele canina foram obtidas de 5.016 amostras variadas de tecidos de cães encaminhadas ao SPV. Dentre as amostras cutâneas, 1.002 pertenciam a cães diagnosticados com um tipo de neoplasia cutânea e 15 animais apresentaram mais de uma neoplasia de pele, totalizando 1.017 (20,3%) amostras. Os resultados revelaram que 50,5% (514/1017) das neoplasias cutâneas apresentaram origem mesenquimal, 45,1% (459/1017) para epitelial e 3,9% (40/1017) para melanocítica. Mastocitoma foi o tipo neoplásico cutâneo mais frequente, diagnosticado em 228 casos (22,4%), seguido por carcinoma de células escamosas (7,5%), lipoma (7,3%), adenoma de glândula perianal (7,1%) e tricoblastoma (5,8%). Cocker Spaniel, Boxer, Poodle e Pastor Alemão foram as raças mais representadas em diversos neoplasmas. Os dados obtidos, comparados aos estudos prévios, ressaltam as variáveis raças, idade e sexo, relacionadas a alguns tumores cutâneos e salientam a importância e prevalência dos diferentes tipos de neoplasia cutânea em cães. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACTThe aim of this study was to perform a retrospective study of cutaneous neoplasms diagnosed in dogs. The evaluation was established by analyzing the diagnostic files at the Veterinary Pathology Sector, UFRGS, Brazil, over a 6-year period (2002 to 2007). During this period a total of 1869 (37.3%) skin samples were obtained from 5016 different tissue samples of dogs submitted for examination. Among the referred skin samples, 1002 were from dogs with the diagnosis of cutaneous neoplasia and 15 dogs exhibited more than one type of skin tumor, what amounted to a total of 1017 (20.3%) cutaneous tumor samples. Results confirmed 50.5% (514/1017), 45.1% (459/1017), and 3.9% (40/1017) of respectively mesenquimal, epithelial, and melanocytic origin. Mast cell tumor was the most frequent neoplasia, diagnosed in 228 cases (22.4%), and was followed by squamous cell carcinoma (7.5%), lipoma (7.3%), perianal gland adenoma (7.1%), and trichoblastoma (5.8%). Purebred dogs such as Cocker Spaniel, Boxer, Poodle and German Sheepdog were the most representative breeds affected by various neoplasms. The data obtained, compared to data from previous studies, emphasize the variables breed, age and sex related to some skin tumors, and reinforce the importance and prevalence of different types of skin tumors in dogs

Maturação e fecundação in vitro de ovócitos de caninos domésticos (Canis familiaris)

Este estudo foi realizado com os objetivos de 1) determinar a eficácia de duas temperaturas (37 0 C e 390 C) e três intervalos de tempo (48, 72 e 96h) na maturação in vitro (MIV) de ovócitos caninos, 2) verificar o efeito de FSH, estradiol, somatotropina humana (hST), albumina sérica bovina (BSA), soro de vaca em estro (SVE) e soro de cadela em estro (SCE) na MIV de ovócitos caninos, 3) observar a influência da condição reprodutiva das doadoras de ovários sobre os índices de MIV, 4) verificar a habilidade para fecundação in vitro (FIV) e desenvolvimento embrionário in vitro de ovócitos coletados de fêmeas em diferentes estágios do ciclo estral. O meio de maturação usado foi TCM-199 com Hepes, SVE, gentamicina, bicarbonato de sódio, ácido pirúvico, estradiol, FSH e hCG. O meio de maturação era modificado de acordo com a proposta experimental. Os resultados do primeiro experimento não mostraram diferença no índice de meiose de ovócitos maturados à 37oC ou à 39oC em quaisquer dos intervalos testados. No segundo experimento, os índices mais elevados de retomada da meiose após 72 horas da MIV foram obtidos, quando TCM-199 era suplementado com BSA. Ovócitos maturados em TCM-199 com SCE não se desenvolveram até o estádio de metáfase II (MII). No terceiro experimento, os resultados de maturação dos ovócitos não mostraram diferença na progressão do material nuclear até MII entre os ovócitos provenientes de cadelas em várias condições reprodutivas. No experimento de FIV, os ovócitos foram distribuídos em 3 grupos de acordo com o estágio do ciclo estral da doadora em folicular, anestro e luteal. Após maturação, os ovócitos eram fecundados e cultivados in vitro. O índice de ovócitos desenvolvendo-se em embriões foi de 10,1%. O índice de clivagem foi similar nas fases reprodutivas. Foi verificada influência da fase folicular sobre o desenvolvimento de pronúcleos. Não foi estabelecida correlação entre a proporção de espermatozóides capacitados ou com reação acrossômica e formação pronuclear e/ou percentagem de clivagem. Concluiu-se que: a) ovócitos caninos podem ser maturados in vitro a 39oC e 37oC. b) a adição de FSH, estradiol, hST, BSA, SVE e SCE ao meio TCM-199 não eleva os índices de maturação nuclear até MII de ovócitos caninos maturados in vitro. c) em cães, a seleção de ovócitos com base na coleta dentro de um estágio específico do ciclo estral não deve ser usada para prever índices de meiose ou habilidade para desenvolvimento embrionário in vitro. d) ovócitos caninos maturados, fecundados e cultivados in vitro podem se desenvolver a zigotos com até 8 células

Survival of vitrified mouse blastocysts loaded into glass micro-capillaries¤ Sobrevivencia embrionaria de blastocistos murinos vitrificados en microcapilares de vidrio Sobrevivência embrionária de blastocistos murinos vitrificados em micro capilares de vidro

The purpose of this study was to determine the in vitro expansion and hatching rates of vitrified mouse blastocysts loaded into glass micro-capillaries (Brand® - 5 &mu;L). Early morning on day 4 of pregnancy, blastocysts were collected from donors, morphologically evaluated, and then allocated in three groups: Group 1 (Control): embryos were transferred into 100 &mu;L of KSOM medium drops and in vitro cultured during 72 h; Groups 2 and 3: embryos initially exposed to the equilibration solution (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) for 1 min, and then to vitrification solution (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) for 30 sec. After that, blastocysts were loaded into glass micropipettes (GMP) or glass microcapillaries (GMC) and plunged into super-cooled liquid nitrogen (-200 &deg;C). Embryo warming and cryoprotectant dilution were carried out into 500 &mu;L droplets of PBSm supplemented with 0.25 M sucrose maintained at 37 &deg;C. After 5 min embryos were transferred to 100 mL droplets of KSOM medium and cultured in vitro for 72 h. Blastocyst expansion rates after in vitro culture were 77% (138/177) and 74% (131/175), for blastocysts vitrified in GMP and GMC, respectively. Blastocyst hatching rate (control group) was 91% (134/146), which was higher than for embryos loaded in GMP 61% (108/177) and GMC 53% (93/175). ICM number in control group embryos contained 25.7 &plusmn; 2.5 cells and did not differ from the mean cell number observed in vitrified embryos loaded in GMP (24.2&plusmn;2.3) or GMC (22.5&plusmn;2.59). Regarding the trophoectoderm cell number, Group 1 embryos displayed 63.1&plusmn;3.0 cells, and also not differ from the cell numbers of the embryos loaded into GMP (58.0&plusmn;1.8) or GMC (58.0&plusmn;.3.7). In conclusion, manufactured GMC (Brand®) tested in this study showed same efficiency as GMP for vitrification of mouse blastocysts.<br>El objetivo de este estudio fue determinar las tazas de expansión y eclosión in vitro de los blastocistos murinos vitrificados en micro-capilares de vidrio (Brand® - 5 &mu;L). En el día 4 de preñez, los blastocistos eran colectados de las donantes, evaluados morfológicamente y localizados en tres diferentes grupos: Grupo 1 (Control): compuesto por los embriones que eran transferidos a gotas de 100 &mu;L de medio KSOM y cultivados in vitro por un periodo de 72 h; Grupos 2 y 3: compuesto por los embriones que eran expuestos inicialmente a la solución de equilibrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) por 1 min, y posteriormente a la solución de vitrificación (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por un periodo de 30 seg. Posteriormente, los blastocistos, eran almacenados dentro de micro-pipetas de vidrio (GMP) o micro-capilares de vidrio (GMC) y sumergidos en nitrógeno líquido (-200 &deg;C). La dilución de los crioprotectores y desvitrificación de los embriones fue realizada al colocarlos en gotas de 500 &mu;L de PBSm suplementado con 0.25 M de sacarosa a una temperatura de 37 &deg;C. Después de 5 minutos los embriones fueron transferidos a gotas de 100 &mu;L de medio KSOM y cultivados in vitro por 72 h. Las tazas de expansión de los blastocistos, posteriores al cultivo fueron de 77% (138/177) y 74% (131/175), para los blastocistos vitrificados en GMP y GMC, respectivamente. Las tazas de eclosión fueron de 91% (134/146) para el grupo control, siendo mayores que para los embriones vitrificados en GMP 61% (108/177) y GMC 53% (93/175). El número del índice de masa celular interna (ICM) para los embriones del grupo control fue de 25.7 &plusmn; 2.5 células, no teniendo diferencia significativa con el número de células observado en los embriones vitrificados en GMP (24.2&plusmn;2.3) ó GMC (22.5&plusmn;2.59). Además, las células del trofoectodermo, en el grupo control presentaron 63.1&plusmn;3.0 células, no siendo tampoco diferentes de las células de los embriones vitrificados en GMP (58.0&plusmn;1.8) ó GMC (58.0&plusmn;.3.7). En conclusión, las GMC comerciales (Brand®) probadas en este estudio muestran la misma eficiencia que las GMP para la vitrificación de embriones murinos.<br>O objectivo de este estudo foi determinar as taxas de expansão e eclosão in vitro dos blastocitos murinos vitrificados em micro capilares de vidro (Brand® - 5 &mu;L). No quarto dia de prenhes, os blastocitos foram colectados das doadoras, avaliados morfologicamente e localizados em três diferentes grupos: Grupo 1 (Controle): composto por os embriões que foram transferidos a gotas de 100 &mu;L de KSOM e cultivados in vitro por um período de 72 h; Grupos 2 e 3: composto por os embriões que foram expostos inicialmente á solução de equilíbrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH e 0.5% PVA) por 1 min, e posteriormente á solução de vitrificação (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por um período de 30 seg. Posteriormente, os blastocistos, foram armazenados dentro de micro pipetas de vidro (GMP) ou micro capilares de vidro (GMC) e submergidos em nitrogénio líquido super-resfriado (-200&deg;C). A diluição dos crioprotetores e desvitrificação dos embriões foi realizada ao colocar-lhos em gotas de 500 &mu;L de PBSm suplementado com 0.25 M de sacarose a uma temperatura de 37 &deg;C. Depois de 5 minutos, os embriões foram transferidos a gotas de 100 &mu;L de KSOM e cultivados in vitro por 72 h. As taxas de expansão dos blastocistos, posteriores ao cultivo foram de 77% (138/177) e 74% (131/175), para os blastocistos vitrificados em GMP e GMC, respectivamente. As taxas de eclosão foram de 91% (134/146) para o grupo controle, e foram maiores os embriões vitrificados em GMP 61% (108/177) e GMC 53% (93/175). O número do índice de massa celular interna (ICM) para os embriões do grupo controle foi de 25.7 &plusmn; 2.5 células, não havendo diferencia significativa com o número de células observado em embriões vitrificados em GMP (24.2&plusmn;2.3) ou GMC (22.5&plusmn;2.59). Alem do mais, as células do trofoectodermo, no grupo controle apresentaram 63.1&plusmn;3.0 células, no sendo diferente às células dos embriões vitrificados em GMP (58.0&plusmn;1.8) ou GMC (58.0&plusmn;.3.7). Em conclusão, as GMC comerciais (Brand®) provadas neste estudo indicam a mesma eficiência que as GMP para a vitrificação de embriões murinos

Sobrevivencia embrionaria de blastocistos murinos vitrificados en microcapilares de vidrio

The purpose of this study was to determine the in vitro expansion and hatching rates of vitrified mouse blastocysts loaded into glass micro-capillaries (Brand® - 5 ìL). Early morning on day 4 of pregnancy, blastocysts were collected from donors, morphologically evaluated, and then allocated in three groups: Group 1 (Control): embryos were transferred into 100 ìL of KSOM medium drops and in vitro cultured during 72 h; Groups 2 and 3: embryos initially exposed to the equilibration solution (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) for 1 min, and then to vitrification solution (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) for 30 sec. After that, blastocysts were loaded into glass micropipettes (GMP) or glass microcapillaries (GMC) and plunged into super-cooled liquid nitrogen (-200 °C). Embryo warming and cryoprotectant dilution were carried out into 500 ìL droplets of PBSm supplemented with 0.25 M sucrose maintained at 37 °C. After 5 min embryos were transferred to 100 mL droplets of KSOM medium and cultured in vitro for 72 h. Blastocyst expansion rates after in vitro culture were 77% (138/177) and 74% (131/175), for blastocysts vitrified in GMP and GMC, respectively. Blastocyst hatching rate (control group) was 91% (134/146), which was higher than for embryos loaded in GMP 61% (108/177) and GMC 53% (93/175). ICM number in control group embryos contained 25.7 ± 2.5 cells and did not differ from the mean cell number observed in vitrified embryos loaded in GMP (24.2±2.3) or GMC (22.5±2.59). Regarding the trophoectoderm cell number, Group 1 embryos displayed 63.1±3.0 cells, and also not differ from the cell numbers of the embryos loaded into GMP (58.0±1.8) or GMC (58.0±.3.7). In conclusion, manufactured GMC (Brand®) tested in this study showed same efficiency as GMP for vitrification of mouse blastocysts.O objectivo de este estudo foi determinar as taxas de expansao e eclosao in vitro dos blastocitos murinos vitrificados em micro capilares de vidro (BrandR - 5 �ÊL). No quarto dia de prenhes, os blastocitos foram colectados das doadoras, avaliados morfologicamente e localizados em tres diferentes grupos: Grupo 1 (Controle): composto por os embrioes que foram transferidos a gotas de 100 �ÊL de KSOM e cultivados in vitro por um periodo de 72 h; Grupos 2 e 3: composto por os embrioes que foram expostos inicialmente a solucao de equilibrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH e 0.5% PVA) por 1 min, e posteriormente a solucao de vitrificacao (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por um periodo de 30 seg. Posteriormente, os blastocistos, foram armazenados dentro de micro pipetas de vidro (GMP) ou micro capilares de vidro (GMC) e submergidos em nitrogenio liquido super-resfriado (-200��C). A diluicao dos crioprotetores e desvitrificacao dos embrioes foi realizada ao colocar-lhos em gotas de 500 �ÊL de PBSm suplementado com 0.25 M de sacarose a uma temperatura de 37 ��C. Depois de 5 minutos, os embrioes foram transferidos a gotas de 100 �ÊL de KSOM e cultivados in vitro por 72 h. As taxas de expansao dos blastocistos, posteriores ao cultivo foram de 77% (138/177) e 74% (131/175), para os blastocistos vitrificados em GMP e GMC, respectivamente. As taxas de eclosao foram de 91% (134/146) para o grupo controle, e foram maiores os embrioes vitrificados em GMP 61% (108/177) e GMC 53% (93/175). O numero do indice de massa celular interna (ICM) para os embrioes do grupo controle foi de 25.7 �} 2.5 celulas, nao havendo diferencia significativa com o numero de celulas observado em embrioes vitrificados em GMP (24.2�}2.3) ou GMC (22.5�}2.59). Alem do mais, as celulas do trofoectodermo, no grupo controle apresentaram 63.1�}3.0 celulas, no sendo diferente as celulas dos embrioes vitrificados em GMP (58.0�}1.8) ou GMC (58.0�}.3.7). Em conclusao, as GMC comerciais (BrandR) provadas neste estudo indicam a mesma eficiencia que as GMP para a vitrificacao de embrioes murinos.El objetivo de este estudio fue determinar las tazas de expansion y eclosion in vitro de los blastocistos murinos vitrificados en micro-capilares de vidrio (BrandR - 5 �ÊL). En el dia 4 de prenez, los blastocistos eran colectados de las donantes, evaluados morfologicamente y localizados en tres diferentes grupos: Grupo 1 (Control): compuesto por los embriones que eran transferidos a gotas de 100 �ÊL de medio KSOM y cultivados in vitro por un periodo de 72 h; Grupos 2 y 3: compuesto por los embriones que eran expuestos inicialmente a la solucion de equilibrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) por 1 min, y posteriormente a la solucion de vitrificacion (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por un periodo de 30 seg. Posteriormente, los blastocistos, eran almacenados dentro de micro-pipetas de vidrio (GMP) o micro-capilares de vidrio (GMC) y sumergidos en nitrogeno liquido (-200 ��C). La dilucion de los crioprotectores y desvitrificacion de los embriones fue realizada al colocarlos en gotas de 500 �ÊL de PBSm suplementado con 0.25 M de sacarosa a una temperatura de 37 ��C. Despues de 5 minutos los embriones fueron transferidos a gotas de 100 �ÊL de medio KSOM y cultivados in vitro por 72 h. Las tazas de expansion de los blastocistos, posteriores al cultivo fueron de 77% (138/177) y 74% (131/175), para los blastocistos vitrificados en GMP y GMC, respectivamente. Las tazas de eclosion fueron de 91% (134/146) para el grupo control, siendo mayores que para los embriones vitrificados en GMP 61% (108/177) y GMC 53% (93/175). El numero del indice de masa celular interna (ICM) para los embriones del grupo control fue de 25.7 �} 2.5 celulas, no teniendo diferencia significativa con el numero de celulas observado en los embriones vitrificados en GMP (24.2�}2.3) o GMC (22.5�}2.59). Ademas, las celulas del trofoectodermo, en el grupo control presentaron 63.1�}3.0 celulas, no siendo tampoco diferentes de las celulas de los embriones vitrificados en GMP (58.0�}1.8) o GMC (58.0�}.3.7). En conclusion, las GMC comerciales (BrandR) probadas en este estudio muestran la misma eficiencia que las GMP para la vitrificacion de embriones murinos