Mastoparan Polybia-MPII action on muscle fibres and neuromuscular junction a morphological, immunohistochemical and biophysical study

Orientador: Maria Alice da Cruz HoflingTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Venenos e toxinas de animais peçonhentos são importantes ferramentas farmacológicas para o estudo de fenômenos biológicos. Os venenos produzidos por insetos sociais da ordem Hymenoptera têm chamado a atenção de bioquímicos, imunologistas, farmacologistas e neurologistas, tanto do ponto de vista clínico como biotecnológico. Neste trabalho o mastoparano (MP) Polybia-MPII (INWLKLGKMVIDAL-NH2), do veneno da vespa Polybia paulista, serviu de ferramenta para avaliar se o peptídeo tem ação miotóxica e neurotóxica, bem como determinar a natureza dessa ação em biomembranas. A ação miotóxica foi avaliada pela análise morfológica ao microscópio de luz e eletrônico e morfometria durante as fases degenerativa (3 e 24 horas) e regenerativa (3, 7 e 21 dias) após a injeção intramuscular de 0,25 mg/ml do peptídeo. Com o objetivo de identificar os eventos celulares e moleculares que acompanham essas alterações nos diferentes períodos analisados, foi avaliada a expressão das citocinas pró-inflamatórias, o fator de necrose tumoral (TNF-a) e o interferon gama (IFN-g). Em geral, na avaliação da ação local de venenos e toxinas, tem sido dado ênfase à capacidade de induzir mionecrose e tem-se negligenciado a capacidade de induzir apoptose por parte dessas substâncias. No presente trabalho, através da técnica de TUNEL e da imunomarcação de caspases 3 e 9, foi analisado a capacidade do Polybia-MPII em promover morte celular programada por apoptose no músculo tibial anterior. A ação neurotóxica do Polybia-MPII foi avaliada por microscopia confocal e microscopia eletrônica de transmissão e consistiu em investigar a organização da inervação dos terminais em secções longitudinais através da marcação com alfa-bungarotoxina conjugada com tetrametilrodamina (TRITC-aBTX) ou com isotiocianato de fluoresceína (FITC-aBTX), e contra-imunomarcados com sinaptofisina (marcador específico para vesículas sinápticas) e neurofilamentos, e pela contagem de vesículas sinápticas nos terminais colinérgicos. Os resultados mostraram pela primeira vez que o mastoparano de P. paulista é um potente indutor de mionecrose e apoptose. A atividade miotóxica do peptídeo mostrou iniciar-se pela lise do sarcolema seguida por diferentes estados patológicos comprometendo a organização miofibrilar, seguida pela lise das miofibras e das miofibrilas, com preservação da lâmina basal. A indução de apoptose pelo peptídeo foi demonstrada morfologicamente pela técnica de TUNEL, presença de caspase 3 e 9 e pela severa alteração mitocondrial e alteração da cromatina dos núcleos observadas por microscopia eletrônica, as quais coincidiram com expressão aumentada de IFN-g e TNF-a, esta uma citocina que medeia a ativação de uma das via das caspases que leva à morte celular programada por apoptose. Com relação à atividade neurotóxica, os resultados mostraram que o Polybia-MPII possui ação pré-sináptica, devido à significativa diminuição no conteúdo de vesículas sinápticas nos terminais pré-sinápticos, corroborando com dados do nosso grupo que evidenciaram através de estudos eletrofisiológicos a mesma ação neurotóxica pré-sináptica causada pelo veneno bruto de P. paulista. Esses efeitos foram variáveis ao longo dos diferentes períodos analisados, mostrando que as alterações eram transitórias e que os fenômenos regenerativos permitiam o restabelecimento da morfologia original. Os estudos biofísicos feitos em membranas artificiais mostraram que o Polybia-MPII interage com a bicamada lipídica da membrana, provavelmente utilizando o triptofano como ancoragem através de um mecanismo conhecido como ¿carpet¿, desestabilizando o equilíbrio iônico e promovendo a ruptura da membrana. Os estudos biofísicos mostraram-se consistentes com as observações morfológicas ao microscópio de luz e eletrônico. Os dados permitem concluir que o mastoparano Polybia-MPII é um potente indutor de mionecrose em músculo esquelético e sua atividade neurotóxica periférica pode ser qualificada como moderada e pré-sináptica; além de induzir apoptose em fibra muscular, cujo significado precisa ser investigado. A reversibilidade dos efeitos causados pelo mastoparano está de acordo com os dados clínicos observados em acidentes com ferroadas de P. paulista em indivíduos não alérgicos, os quais se caracterizam na maioria por serem de pouca gravidade, curta duração e auto-limitantesAbstract: Venoms and toxins of poisonous animals are important pharmacological tools to study biological phenomena. The venom of social insects as those produced by Hymenoptera get attention from biochemistries, immunologists, biologists, pharmacologists and neurologists, as in a clinic view as biotechnologically. In this study the mastoparan (MP) Polybia-MPII, (INWLKLGKMVIDAL-NH2) from Polybia paulista wasp venom, was used as a tool to analyze if the peptide has myotoxic and neurotoxic effects, as well to determine its action on biomembranes. The myotoxicity of the mastoparan was evaluated during the degenerative phase (3 and 24 hours) and regenerative phase (3, 7 and 21 days) after the intramuscular injection of 0.25 mg/ml of the peptide using light microscopy, transmission electron microscopy and morphometry. With the purpose of determining the cellular and molecular events accompanying the alterations caused by P. paulista wasp mastoparan in these time-points the expression of proinflammatory cytokines, such as the tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interferon gamma (IFN-g) were evaluated. In general, studies on the local effects of venom and toxins have focused on their myotoxic potential, whereas the potential to induce apoptosis has been neglected. In this work, the ability of Polybia-MPII in inducing cell death by apoptosis on the tibial anterior muscle was assessed by TUNEL technique and immunohistochemistry for caspase 3 and caspase 9. The neurotoxic action of Polybia-MPII was evaluated by examining the organization of terminals innervation in longitudinal sections labelled with tetramethylrhodamineconjugated- or isothiocyanate fluorescein-conjugated-alpha-bungarotoxin (TRITC or FITC a-BTX receptor, respectively) and counter labelled with a combination of antisynaptophysin (a specific marker to synaptic vesicles) and anti-neurofilament protein using confocal microscopy and transmission electron microscopy, and by counting the synaptic vesicle within the cholinergic terminals. The results showed for the first time that the Polybia-MPII is a potent inducer of myonecrosis and apoptosis. The myotoxic action of the peptide initiated with the lyses of the sarcolemma followed by the development of different pathologic stages affecting myofibrillar organization, and eventually myofibrils and myofibre lyses, but maintaining unaffected the basal lamina. The ability of the peptide to induce apoptosis was demonstrated by TUNEL technique, immunolabelling of caspase 3 and 9, severe mitochondrial damage and alteration of the structure of nuclei chromatin seen by electron microscopy. Such effects were positively correlated with increased IFN-g and TNF-a expression, being the last one a cytokine which mediates the caspase pathway leading to programmed cell death by apoptosis. Concerning Polybia-MPII neurotoxicity, the results showed a pre-synaptic action of the peptide which was inferred by a decrease in synaptic vesicles content of pre-synaptic terminals, in agreement with electrophysiological studies done by our group with the P. paulista crude venom. These alterations varied along the time intervals analyzed, evidencing that the alterations were transitory and the regenerative phenomena allow to morphological reestablishment. The biophysical studies performed on artificial membranes, showed that the peptide interacted with the lipid bilayer probably anchored by tryptophan and by a mechanism known as carpet. As a result, the ionic balance is impaired inducing membrane leakage. The biophysical data were consistent with the morphological observations by light and electron microscopy. Data allow concluding that Polybia-MPII mastoparan is a mighty inducer of myonecrosis whereas the peripheral neurotoxicity could be considered as moderate and pres-synaptic. Besides, the peptide has an apoptotic-inducing potential on skeletal muscle fibre, the meaning of which deserves further investigation. The reversibility of the mastoparan effects is in accordance with clinical data in non-allergic patients stung by P. paulista, whose outcome is considered of mild, short-lived and self-limiting in severityDoutoradoBiologia CelularDoutor em Biologia Celular e Estrutura

Clínica médica, clínica cirurgica e ambulatório cirúrgico de pequenos animais

Orientador: Aline de Marco ViottMonografia (graduação) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina, Curso de Graduação em Medicina Veterinári

Mulheres negras e internet : do racismo ao ativismo

Trabalho de conclusão de curso (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Direito, 2017.Este trabalho pretende investigar porque mulheres negras vem sendo vítimas de ataques racistas na internet e como a articulação do movimento negro e movimento de mulheres negras na luta por direitos e empoderamento da população negra através do ativismo na internet sinaliza caminhos para o combate à discriminação racial para além da criminalização se apropriando do mesmo espaço onde ocorre a ofensa para ressignificação.The folowing work intents to investigate why black women have been victims of racist attacks on the Internet and how the black movement articulation and the black women movement in the struggle for rights and empowerment of the black population through internet activism signal ways to combat racial discrimination beyond criminalization and using the same place where the offense occurs for redetermination

A avaliação no ensino de inglês como LE : crenças, reflexões e ressignificação

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Letras, Departamento de Línguas Estrangeiras e Tradução, Programa de Pós-Graduação em Linguística Aplicada, 2015.Esta pesquisa tem por objetivo investigar as crenças de um professor de língua inglesa como língua estrangeira no tocante à avaliação de seus alunos, visto que o que se observa hoje no contexto de ensino de língua estrangeira no Brasil, primordialmente no que concerne à avaliação, é uma perpetuação de abordagens tradicionais e técnicas sistêmicas, as quais são muitas vezes baseadas unicamente nas aprendizagens anteriores dos discentes e não contemplam as reais funções da avaliação (BATISTA, 2013; LUCKESI, 2001; LOPES, 2002; PORTO, 2003; SCARAMUCCI 2006; SUASSUNA e BEZERRA, 2010), pois continuam a tentar quantificar resultados através do uso exclusivo de métodos somativos, mantendo o foco avaliativo no produto, e não no processo de ensino e aprendizagem (BARATA, 2006; SCARAMUCCI, 1997). Assim, esta pesquisa, desenvolvida na forma de um estudo de caso interventivo de bases qualitativas, tem por finalidade identificar as crenças de um professor de inglês no que tange à avaliação, observando de que forma as mesmas influenciam a sua prática, além de entender como momentos reflexivos podem propiciar o início da ressignificação de crenças e, por fim, analisar o impacto da presente pesquisa sobre as crenças e a prática deste professor. Os dados analisados foram colhidos através de uma narrativa, de uma entrevista semiestruturada, observações de aulas com gravações em áudio e em vídeo, além das notas de campo da pesquisadora, duas sessões de discussão e duas sessões de visionamentos. Os resultados obtidos demonstram que o participante do estudo possui crenças que concernem não apenas ao seu próprio agir e pensar sobre avaliação, mas também à forma que acredita que seus alunos concebem estes construtos. Além disso, a prática do professor reflete as suas crenças sobre avaliação, demonstrando acentuada conexão entre crenças e ações. Ao término do estudo, foi possível observar o intenso processo reflexivo no qual o professor se encontra, o qual se espelhou tanto na tentativa de implementação de modelos alternativos de avaliação na sua prática discente, quanto na mudança de discurso do professor em relação a alguns aspectos da avaliação. Assim, é possível concluir que durante a pesquisa o professor teve a oportunidade de refletir a respeito da sua própria prática avaliativa, o que propiciou uma abertura para modelos diferenciados de avaliação e o início do processo de ressignificação de algumas crenças sobre avaliação.This research aims to investigate the beliefs of one teacher, regarding the evaluation applied upon his students, since what is widely seen, throughout the foreign language teaching context in Brazil, primarily regarding the evaluation, is a perpetuation of traditional approaches and systemic techniques, which do not embrace the actual principles and functions of evaluation (BATISTA, 2013; LUCKESI, 2001; LOPES, 2002; PORTO, 2003; SCARAMUCCI 2006; SUASSUNA & BEZERRA, 2010) as they continue trying to quantify results through the exclusive use of somative methods, maintaining the evaluation focus on the product, not on the process itself (BARATA, 2006; SCARAMUCCI, 1997). Therefore, this research, shaped as a qualitative and interventional case study, aims to identify the beliefs of an English teacher regarding the evaluation system, observing how these beliefs can influence his practice, besides trying to understand how moments of reflection can propitiate the beginning of the ressignification of beliefs and also analyzing the impact that this study has upon the beliefs and practice of the participant. The data analyzed were collected through a narrative, an interview, class observations together with their recording in audio and in video, field notes, two discussion sessions and two reflective video sessions. The drawn results show that the participant has beliefs concerning not only his own thoughts and acts about evaluation, but also the way he believes students conceive evaluation. Besides, the beliefs of the teacher can be clearly seen in his practice, showing a strong relation between beliefs and actions. At the end of this study, it was possible to observe the intense process of reflection through which the teacher was going. The reflex of this process could be seen in his attempts to implement alternative models of evaluation, as well as in his change of discourse related to the subject. Thus, it is possible to conclude that during this research the teacher had the opportunity to reflect about his own evaluative practice, what provided him with an opening for different perspectives of evaluation, enabling him to start the process of ressignification of some beliefs

Can immunohistochemical biomarkers distinguish epithelial dysplasia degrees in actinic cheilitis? A systematic review and meta-analysis

Actinic cheilitis (AC) is a poten-tially malignant disorder of the lip, characterized by epithelial and connective tissue alterations caused by chronic exposure to ultraviolet radiation. In the past decades, diverse studies have been conducted in lip carcinogenesis and many biomarkers have been identified in lip lesions, yet there is no scientific evidence that determines its usefulness in the clinical setting or in histopatho-logical routine. Therefore, we conducted the first systematic review in this field to summarize the results of published studies on immunohistochemical bi-omarkers in lip carcinogenesis, to evaluate if there is a marker than can distin-guish the different histological grades of AC. Retrospective stud-ies that investigated immunohistochemical biomarkers in AC defined on standardised histological assessment were gathered from five databases and evaluated. Each study was qualitatively evaluated using the Critical Appraisal Tools from SUMARI. The proliferation marker Ki-67 was the most studied biomarker and we observed, through meta-analysis, that it was differently expressed between AC and lip cancer, but not in AC sub-groups. Most articles had a high risk of bias. In summary, the literature lacks quality follow up studies in actinic cheilitis. Multi-centre cohort studies, with patients stratified by treatment type and the use of image analysis soft-ware, could be the solution to further address the issues of investigating poten-tially malignant lesions and help change clinical practice, in terms of individu-alizing patients? treatment and prognosis prediction

O value relevance das informações divulgadas na DVA das empresas do setor do agronegócio listadas na B3

Este estudo teve por objetivo analisar o value relevance do valor adicionado a distribuir por ação (VAA) e da remuneração do capital próprio por ação (RCPA), informações apresentadas na Demonstração do Valor Adicionado (DVA), para as empresas pertencentes ao setor do agronegócio ativas na Bolsa, Brasil e Balcão (B3). Foi utilizada uma abordagem quantitativa, com a aplicação do método estatístico de análise de regressão com dados em painel e de regressão com dados em série temporal, e o período de análise foram os anos de 2012 a 2018. O estudo justifica-se pela presunção da importância informações contidas na DVA – que permitem compreender fatores internos da empresa, assim como seus reflexos macroeconômicos – para a sociedade e para os agentes beneficiadores da informação contábil. No que tange às empresas do agronegócio, no Brasil, essa relevância deve ser destacada, dada a importância do setor em termos produção de bens e serviços na economia nacional. Os resultados indicam que a riqueza gerada pela empresa, ou o valor adicionado a distribuir por ação, é value relevante e supera a relevância da remuneração de capital próprio por ação. Já o valor patrimonial por ação (VPA) e o lucro por ação (LPA) não são value relevantes na determinação do preço da ação no setor do agronegócio

A comunicação enfermeira-cliente no cuidado em unidade de pronto atendimento 24h (upa 24h):uma interpretação em Travelbee

A descriptive survey and a qualitative boarding have as a goal to show the communication nurse-patient and the treatment in nursing that the 24h emergency services and to discuss the aspects of the communication and the interpersonal relationship nurse-patient in the treatment regarding the theoretical reference by Joyce Travelbee. Data were obtained after having being approved in the committee of ethics through the semi-structured interview applied to ten 2nd Lieutenants Military Firewomen Nurses in the District of Belford Roxo. The thematic analysis of the words made possible to demonstrate three categories: the revealed communication in the treatment of nursing; the communication nurse-patient in the spaces of care of the24h Emergency Unit and the aspects of the interpersonal relationship nurse-patient. To sum up, due to the relation human being- human being the communication and the added care in an Emergency Unit occur in its different objective and affective possibilities, instrumental and expressive, respectively, independent of the space of care.Investigación de carácter descriptivo y abordaje cualitativo que tiene por objetivo mostrar la comunicación enfermera-paciente en el cuidado de enfermería en las Unidades de urgencias 24h y discutir los aspectos de la comunicación y de la relación interpersonal enfermera-paciente en el cuidado a la luz del referencial teórico de Joyce Travelbee. Los datos fueron obtenidos después de la apobación en el comité de ética a través de entrevista semi-estructurada aplicada a diez 2º Tenientes Enfermeras Bombero Militar ubicado en el municipio de Belford Roxo. El análisis temático de las palabras posibilitó evidenciar tres categorías: la comunicación revelada en el trato de enfermería; la comunicación enfermera-paciente en los espacios del cuidado de la Unidad de Urgencia 24h y los aspectos de la relación interpersonal enfermera-paciente.En resumen, por tratarse de una relación ser humano-ser humano la comunicación y el cuidado añadido en una Unidad de Urgencia ocurren en sus distintas posibilidades objetiva y afectiva, instrumental y expresiva, respectivamente, independiente del espacio del cuidado.Pesquisa de caráter descritivo, abordagem qualitativa, visa caracterizar a comunicação enfermeira-paciente no cuidado de enfermagem em Unidade de Pronto Atendimento 24h e discutir os aspectos da comunicação e da relação interpessoal enfermeira-paciente no cuidado à luz do referencial teórico de Joyce Travelbee. Os dados foram obtidos após aprovação no comitê de ética através de entrevista semi-estruturada aplicada à dez 2° Tenentes Enfermeiras Bombeiro Militar neste cenário localizado no município de Belford Roxo. A análise temática das falas possibilitou evidenciar três categorias: a comunicação revelada no cuidado de enfermagem; a comunicação enfermeira-paciente nos espaços de cuidado da Unidade de Pronto Atendimento 24h e aspectos da relação interpessoal enfermeira-paciente. Concluindo, por ser uma relação ser humano-ser humano, a comunicação e o cuidado implementados em uma Unidade de Pronto Atendimento 24h acontecem em suas faces objetiva e afetiva, instrumental e expressivo, respectivamente, independente do espaço de cuidado

Neurotoxicity of Tityus bahiensis (brown scorpion) venom in sympathetic vas deferens preparations and neuronal cells

Systemic scorpion envenomation is characterized by massive neurotransmitter release from peripheral nerves mediated primarily by scorpion venoms neurotoxins. Tityus bahiensis is one of the medically most important species in Brazil, but its venom pharmacology, especially regarding to peripheral nervous system, is poorly understood. Here, we evaluated the T. bahiensis venom activity on autonomic (sympathetic) neurotransmission by using a variety of approaches, including vas deferens twitch-tension recordings, electrophysiological measurements (resting membrane potentials, spontaneous excitatory junctional potentials and whole-cell patch-clamp), calcium imaging and histomorphological analysis. Low concentrations of venom (≤ 3 μg/mL) facilitated the electrically stimulated vas deferens contractions without affecting postsynaptic receptors or damaging the smooth muscle cells; transient TTX-sensitive sustained contractions and resting membrane depolarization were mediated mainly by massive spontaneous ATP release. High venom concentrations (≥ 10 μg/mL) blocked the muscle contractions and induced membrane depolarization. In neuronal cells (ND7-23wt), the venom increased the peak sodium current, modified the current-voltage relationship by left-shifting the Nav channel activation curve, thereby facilitating the opening of these channels. The venom also caused a time-dependent increase in neuronal calcium influx. These results indicate that the sympathetic hyperstimulation observed in systemic envenomation is presynaptically driven, probably through the interaction of α- and β-toxins with neuronal sodium channels