Estudo da función da conexina 43 en condrócitos articulares humano. Identificación das proteínas que interaccionan co dominio C-terminal da Cx43

A conexina 43 é unha proteína amplamente distribuída en tódolos tecidos estudados, desenrolando un papel moi importante na comunicación celular. Neste traballo móstranse resultados que verifican a presenza de conexina 43 en cartilaxes articulares humanos, ademáis da existencia de proxeccións citoplasmáticas que comunican fisicamente ós condrócitos en tecido. Os resultados aquí mostrados suxiren que a Cx43 pode viaxar a través do citoplasma utilizando os microtúbulos e os filamentos de actina, alcanzando calquer punto da membrana plasmática incluidas as proxeccións citoplasmáticas. Ademáis, estudando a cartilaxe de pacientes con artrose (OA), puidemos demostrar que os condrócitos OA localizados nas capas superficiais e intermedia do tecido, teñen altos niveles de Cx43. Altos niveis de Cx43 relaciónanse con procesos inflamatorios e dano tisular noutros tecidos. No caso dos condrócitos, a IL1-ß ou altos niveis de glicosa no medio de cultivo desencadearon nun incremento da Cx43. Incrementos da proteína, non sólo afectan á actividade das canles de conexina na membrana citoplasmatica, tamén a outras actividades relacionadas ca Cx43 e que poden ocurrir de forma independente a función das canles. Moitas destas actividades modifican diferentes cascadas de sinalización celular e están relacionadas ca interacción de proteínas co dominio C-terminal da Cx43. Neste traballo utilizando co-inmunoprecipitación e espectometría de masas, identificáronse varias das proteínas que interaccionan ca Cx43 en condrócitos articulares provenientes de doadorees sanos. Traballos previos no noso grupo de investigacion demostraron que moitas das proteínas que interacionan ca Cx43 como por exemplo a alpha-enolasa ou a anexina V, están alteradas en condrócitos de pacientes con OA. Ademáis detectáronse proteínas que suxieren que a Cx43 podría estar exercendo unha función a nivel nuclear encaixando ca localización nuclear da Cx43 detectada en condrócitos en cartilaxe OA.Traballo fin de mestrado (UDC.FCS). Asistencia e investigación sanitaria. Especialidade en fundamentos de investigación biomédica. Curso 2011/201

Funciones del dominio C-terminal de la conexina 43 en condrocitos articulares adultos

Programa Oficial de Doutoramento en Ciencias da Saúde. 5007V01[Resumen] La degeneración de la matriz extracelular (MEC) del cartílago articular es un evento característico de la artrosis (OA). La comunicación celular a través de canales de conexinas (Cxs) es imprescindible para la correcta coordinación y función de cualquier tejido. Los resultados de este trabajo de tesis demuestran que los condrocitos expresan diferentes tipos de Cxs, formando canales funcionales que permiten la comunicación directa entre dos células en contacto o bien entre la célula y la matriz. Además, se han detectado cambios en la expresión y localización de la conexina 43 (Cx43) y la conexina 45 (Cx45) en el caso de condrocitos en el cartílago de pacientes con OA. Los estudios desarrollados en este trabajo sugieren que el dominio C-terminal (CTD) de la Cx43 a través de interacciones con proteínas podría ejercer funciones diferentes en condrocitos sanos y condrocitos con OA. La delección del CTD en modelos animales disminuye la comunicación celular, afecta a la integridad de la matriz y aumenta la proliferación de los condrocitos. Estos resultados sugieren que alteraciones en la función del CTD de la Cx43 podrían estar implicadas en los cambios de fenotipo que se observan en los condrocitos de pacientes con OA y que desencadenan en la degradación de la MEC del tejido.[Resumo] A dexeneración da matriz extracelular (MEC) da cartilaxe articular e un evento característico da artrose (OA). A comunicación celular a través das canles de conexinas (Cxs) é imprescindible para a correcta coordinación e función de calquer tecido. Os resultados deste traballo de tese demostran que os condrócitos expresan diferentes tipos de Cxs, formando canles funcionais que permiten a comunicación directa entre dúas células en contacto ou ben entre a célula e a matriz. Ademais, detectáronse cambios na expresión e localización da conexina 43 (Cx43) e a da conexina 45 (Cx45) no caso de condrócitos illados da cartilaxe de pacientes con OA. Os estudos desenvoltos neste traballo suxiren que o dominio C-terminal (CTD) da Cx43 a través das interaccións con proteínas podería exercer funcións diferentes en condrócitos sans e condrócitos OA. A delección do CTD en modelos animais diminúe a comunicación celular, afecta a integridade da matriz e aumenta a proliferación dos condrócitos. Estes resultados suxiren que alteracións na función do CTD da Cx43 poderían estar implicadas no cambio de fenotipo que se observa nos condrócitos de pacientes con OA e que desencadean a degradación da MEC do tecido.[Abstract]Extracellular matrix (ECM) degeneration of the articular cartilage is characteristic event of osteoarthritis (OA). Cell communication through connexin (Cxs) channels is essential for the correct coordination and function of all tissues. The results of this thesis demonstrate that chondrocytes express different types of Cxs, and form functional channels, which allow the direct communication between two adjacent cells and between the cell and the matrix. Changes in the expression and localization of connexin 43(Cx43) and connexin 45 (Cx45) have been detected in OA chondrocytes. Besides, the interaction of different proteins with the C-terminal domain of Cx43 (CTD) may explain the different functions of Cx43 in healthy chondrocytes and chondrocytes from OA patients. Deletion of the CTD of Cx43 in animal models decreased cell communication, affected the matrix integrity and increase chondrocytes proliferation. These results suggest that changes in the Cx43 functions may be involved in the phenotypic changes observed in chondrocytes from OA patients that trigger cartilage ECM degeneration

3D Reconstruction of the Digestive System in Octopus vulgaris Cuvier, 1797 Embryos and Paralarvae during the First Month of Life

Octopus vulgaris aquaculture is limited due to poor biological knowledge of the paralarval stages (e.g., digestive system functionality), their nutritional requirements (e.g., adequate live diet) and standardization of rearing techniques. These factors are important in explaining the high mortality rate observed in this developmental stage under culture conditions. For a better understanding of nutrition biology of this species, we investigated the 3D microanatomy of the digestive tract of the embryo and paralarvae during the first month of life. O. vulgaris paralarvae digestive system is similar to that in the adult. The “descending branch” has a dorsal position and is formed by the buccal mass, oesophagus and crop. Ventrally, the “ascending branch” is formed by the intestine and the anus. The digestive gland, the posterior salivary glands and the inner yolk sac (in the case of the embryo and hatched paralarvae) are located between the “ascending” and “descending” branches. In the curve of the U-shaped digestive tract, a caecum and the stomach can be found. The reconstructions reveal that anatomically the digestive system is already complete when the paralarvae hatch. The reconstruction of the buccal mass at different post-hatching days has demonstrated that all the necessary structures for food intake are present. However, the radula surface in contact with the pharynx is very small on the first day of life. Although the digestive system has all the structures to feed, the digestive gland and radula take longer to reach full functionality. We have established four development periods: embryonic, early post-hatching, late post-hatching and juvenile-adult. The differentiation between these periods was done by type of feeding (endogenous or exogenous), the state of maturation and hence functionality of the digestive gland, type of growth (linear, no net, or exponential), and measurement of the arm lengths with respect to the mantle length. 3D reconstruction represents a new tool to study the morphology and functionality of the cephalopod digestive system during the first days of life

Organización : Auditoria administrativa como mecanismo para la evalaución y control

El presente documento tiene por tema general: La organización, derivándose el subtema: Auditoria administrativa como mecanismo para la evaluación y el control. Tiene por objetivo general analizar información referente a la auditoria administrativa como mecanismo para la evaluación y control. A su vez objetivos específicos: determinar las generalidades de la auditoria y auditoria administrativa, describir la planeación de la auditoría describir la instrumentación, ejecución, resultado e informe de la auditoria administrativa respectivamente y conocer las etapas complementarias en la Auditoria Administrativa. Se pretende brindar información veraz, confiable y precisa relativo a las operaciones y requerimientos para la aplicación de un estudio exhaustivo a las etapas del proceso administrativo, tratándose de una auditoria administrativa aplicada a una organización que lo requiera y considere conveniente para su constante progreso en búsqueda del éxito. El marco referencial consta de cuatro capítulos en los que se estudiaron diferentes temáticas. El primer capítulo tiene carácter introductorio determinando las generalidades de la auditoria y auditoria administrativa y su agente delegado para el ejercicio del estudio. En el capítulo dos se describe la planeación y los programas que le integran, el proceso y transcurso del preámbulo de la investigación a la organización y sus procedimientos. El capítulo tres está dedicado a la instrumentación, ejecución, resultados e informe cúspide, su implementación y seguimiento, desarrollado por el equipo auditor. El cuarto capítulo da a conocer las etapas complementarias de la auditoria administrativa, especificando entrevista de auditoria y sus técnicas y hallazgos y evaluación de estos en el transcurso de la investigación realizada. Es importante señalar que los datos fueron obtenidos de fuentes secundarias confiables y cabales para la realización de este documento, concluyendo que la auditoria como mecanismo de control es justo y necesario para que toda compañía se desarrolle oportunamente. Concluyendo que una auditoria administrativa es de sumo valor para que una organización cumpla con sus objetivos tanto de crecimiento como operacionales, de esta manera mejorando sustancial y proporcionalmente la categoría de sus productos o servicios mediante procedimientos analizados y mejorados de la planificación, organización, dirección y control dentro de la organización

Propuesta de plan de emprendimiento para la micro empresa “Sirup Natural”, dedicada a la producción y comercialización de siropes medicados naturalmente para artríticos, ubicada en el municipio de Santa Teresa, departamento de Carazo, durante el segundo semestre del año 2017

El plan de innovación y emprendimiento para realizar el seminario de graduación, consiste en la creación de una micro empresa dedicada a la elaboración y comercialización de un nuevo sirope medicado naturalmente para artritis, esta estará ubicada en el municipio de Santa Teresa; el producto se distribuirá en la zona urbana del municipio de Jinotepe y Diriamba. Se realizó el plan de mercado donde se obtuvo información valiosa sobre las características del mercado meta, permitiendo conocer las variables más relevantes, como: competencia directa e indirecta, determinar el volumen de demanda insatisfecha, donde dio un resultado de 44,209 personas. Así mismo se calcula la participación de mercado con un porcentaje de 13.29%, y se diseñan las estrategias del marketing Mix. Por otra parte, se describe el proceso para la elaboración del producto, conociendo la capacidad productiva por mes, se detalla los proveedores de materia prima y los gastos que se incurre en la fabricación. En el plan de organización y gestión, se refleja la parte de legalización y formación de la micro empresa. En el plan financiero, se detalló el monto total de la inversión y se estableció que el capital financiado será el 40%, se proyectaron los ingresos por ventas, gastos y costos originados para la producción y comercialización, todo esto hecho a través de cédulas de costos. Se presenta el flujo de caja detallado mensualmente y proyectado a tres años, de igual manera los estados financieros, por último se evalúa la rentabilidad a través del valor actual neto y la tasa interna de retorno

Role of 99mTc-Sulesomab Immunoscintigraphy in the Management of Infection following Deep Brain Stimulation Surgery

Infection constitutes a serious adverse event in patients submitted to deep brain stimulation, often leading to removal of the device. We set to evaluate the potential role of immunoscintigraphy with 99mTc-labelled antigranulocyte antibody fragments (99mTc-sulesomab) in the management of infection following DBS. 99mTc-sulesomab immunoscintigraphy seems to correlate well with the presence and extent of infection, thus contributing to differentiate between patients who should remove the hardware entirely at presentation and those who could undergo a more conservative approach. Also, 99mTc-sulesomab immunoscintigraphy has a role in determining the most appropriate timing for reimplantation. Finally, we propose an algorithm for the management of infection following DBS surgery, based on the results of the 99mTc-sulesomab immunoscintigraphy

Rapid screening of methicillin-resistant Staphylococcus aureus carrying the mecC gene in a Portuguese hospital

Background: The discovery of mecC gene in MRSA isolates and its report in neighboring Spain and France, advices for monitoring its presence in Portuguese hospitals since changes in local epidemiology can occur quickly. The implementation of rapid procedures based on the automated system VITEK2 allow for simple screening of mecC MRSA isolates with the profile of susceptibility to oxacillin and resistance to cefoxitin signaling positive results for detailed analysis. Methods: This works aims to perform a retrospective study for the presence of suspect mecC MRSA in a Portuguese hospital recurring to the two methodologies included in microbiology laboratories routine. Result: Our results do not suggest the presence of mecC MRSA, but highlight the possibility of introducing a simple method in clinical laboratories with high percentage of S. aureus isolates. Conclusion: The implementation of this simple procedure in the laboratory routine is a rapid and economic way to monitoring the presence of mecC MRSA.publishe

Articular Chondrocyte Network Mediated by Gap Junctions: Role in Metabolic Cartilage Homeostasis

Objective This study investigated whether chondrocytes within the cartilage matrix have the capacity to communicate through intercellular connections mediated by voltage-gated gap junction (GJ) channels. Methods Frozen cartilage samples were used for immunofluorescence and immunohistochemistry assays. Samples were embedded in cacodylate buffer before dehydration for scanning electron microscopy. Co-immunoprecipitation experiments and mass spectrometry (MS) were performed to identify proteins that interact with the C-terminal end of Cx43. GJ communication was studied through in situ electroporation, electrophysiology and dye injection experiments. A transwell layered culture system and MS were used to identify and quantify transferred amino acids. Results Microscopic images revealed the presence of multiple cellular projections connecting chondrocytes within the matrix. These projections were between 5 and 150 μm in length. MS data analysis indicated that the C-terminus of Cx43 interacts with several cytoskeletal proteins implicated in Cx trafficking and GJ assembly, including α-tubulin and β-tubulin, actin, and vinculin. Electrophysiology experiments demonstrated that 12-mer oligonucleotides could be transferred between chondrocytes within 12 min after injection. Glucose was homogeneously distributed within 22 and 35 min. No transfer was detected when glucose was electroporated into A549 cells, which have no GJs. Transwell layered culture systems coupled with MS analysis revealed connexins can mediate the transfer of L-lysine and L-arginine between chondrocytes. Conclusions This study reveals that intercellular connections between chondrocytes contain GJs that play a key role in cell-cell communication and a metabolic function by exchange of nutrients including glucose and essential amino acids. A three-dimensional cellular network mediated through GJs might mediate metabolic and physiological homeostasis to maintain cartilage tissue

Desafios e oportunidades em contexto de pandemia

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Tuning melatonin receptor subtype selectivity in oxadiazolone-based analogues: Discovery of QR2 ligands and NRF2 activators with neurogenic properties

New multi-target indole and naphthalene derivatives containing the oxadiazolone scaffold as a bioisostere of the melatonin acetamido group have been developed. The novel compounds were characterized at melatonin receptors MT1R and MT2R, quinone reductase 2 (QR2), lipoxygenase-5 (LOX-5), and monoamine oxidases (MAO-A and MAO-B), and also as radical scavengers. We found that selectivity within the oxadiazolone series can be modulated by modifying the side chain functionality and coplanarity with the indole or naphthalene ring. In phenotypic assays, several oxadiazolone-based derivatives induced signalling mediated by the transcription factor NRF2 and promoted the maturation of neural stem-cells into a neuronal phenotype. Activation of NRF2 could be due to the binding of indole derivatives to KEAP1, as deduced from surface plasmon resonance (SPR) experiments. Molecular modelling studies using the crystal structures of QR2 and the KEAP1 Kelch-domain, as well as the recently described X-ray free-electron laser (XFEL) structures of chimeric MT1R and MT2R, provided a rationale for the experimental data and afforded valuable insights for future drug design endeavoursThe authors gratefully acknowledge the following financial supports: Spanish Ministry of Science, Innovation and Universities; Spanish Research Agency; and European Regional Development Funds (grants RTI2018-093955-B-C21 and SAF2015-64948-C2-1-R to M.I.R.-F.; RTI2018-095793-B-I00 to M.G.L., SAF2015-64629-C2- 2-R to F.G.), General Council for Research and Innovation of the Community of Madrid and European Structural Funds (grant B2017/BMD-3827 e NRF24ADCM), Health Institute Carlos III (Miguel Servet II ProgramCP16/00014 and grant PI17/01700 to R.L.). CH-A and P.M. thank their PhD fellowships from Spanish Ministry of Education (MEC, PhD grant FPU16/01704 and mobility grant FPUEST17/00233 to CH-A and FPU13/03737 to P.M.)