Exploring insect cells versatility for production of influenza virus-like particles

A potential strategy to produce safer and broadly protective influenza vaccines is to co-express, in the same cell host, multiple hemagglutinins (HA) with a matrix protein (M1) which self-assemble in virus-like particles (VLPs). This study demonstrates the suitability of combining stable expression and the baculovirus-expression vector system (BEVs) in insect Hi5 cells for production of such multi-HA Influenza VLPs. Stable pools of Hi5 cells expressing two HAs were generated and later infected with a M1-encoding baculovirus at two cell concentrations (CCIs; 2×106 cells/mL and 3×106 cells/mL). The HA concentration in culture supernatant was followed over time, with more productive infections observed at higher CCIs. To extend the culture time, a re-feed strategy was implemented based on the identification of key nutrients which were exhausted during cell growth. Afterwards, supplemented cultures infected at a CCI of 4×106 cells/mL allowed a 4-fold increase in HA concentration, at harvest, when compared to cultures infected at a CCI of 2×106 cells/mL. The production of multi-HA influenza VLPs using the aforementioned strategy could be successfully scaled-up to 2L bioreactor cultures with even higher volumetric (1.5-fold) HA yields. To surpass the unpredictability of gene expression promoted by the random integration strategy mentioned above, the recombinase-mediated cassette exchange (RMCE) technology was explored. The feasibility of having two cassettes flanked by distinct pairs of flippase recognition target sites (FRTs) was evaluated. Unfortunately, significant cross-interaction was observed between the selected pairs. To circumvent this bottleneck, a backup strategy consisting in the co-expression of two genes from the same locus after implementation of one cassette system, in insect Sf9 cells, was attempted. However, the isolated clones showed low expression of both M1 and HA proteins. Ongoing work focuses on the isolation of clones tagged in high expression loci by fluorescence activated cell sorter technology. This work demonstrates how the versatility of insect cell expression technology can be explored to produce Influenza VLPs as vaccine candidates.A co-expressão de várias hemaglutininas (HA) e proteína da matriz (M1), no mesmo hospedeiro, formando partículas semelhantes a vírus (VLPs), constitui uma importante estratégia para desenvolver vacinas contra o vírus da gripe. Este trabalho mostra a combinação de uma linha celular estável de células de insecto com o sistema de expressão mediada por baculovírus para a produção deste tipo de VLPs. Foram estabelecidas duas populações de células de insecto Hi5, expressando duas HAs, posteriormente infectadas com um baculovírus contendo a proteína M1, a duas concentrações celulares diferentes (CCI; 2 e 3×106 cells/mL) sendo que a mais elevada demostrou ser a mais produtiva. De seguida, implementou-se uma estratégia baseada na adição de nutrientes específicos para prolongar o tempo de cultura. As culturas previamente suplementadas e infectadas a uma CCI de 4×106 células/mL produziram 4x mais HA comparativamente às culturas infectadas a uma CCI de 2×106 células/mL, não suplementadas. Esta estratégia foi também aplicada num biorreactor de 2L permitindo 1,5x mais produção, volumétrica, de HA comparativamente a experiências em pequena escala. De forma a ultrapassar a imprevisibilidade de uma integração aleatória, foi explorado o sistema de troca de cassete mediado por recombinase (RMCE). A viabilidade de um sistema com duas cassetes integradas flanqueadas por diferentes locais de reconhecimento (FRTs) foi avaliada, tendo sido observada a interação entre ambos os pares selecionados. Como segunda estratégia, foi implementado um sistema com uma cassete para co-expressão de dois genes em simultâneo, em células de insecto Sf9. Porém, os clones isolados mostram fraca expressão de M1 e HA, pelo que uma estratégia de isolamento de clones com expressão génica mais forte está em desenvolvimento utilizando uma tecnologia de sorteamento. Assim, este trabalho demonstra a versatilidade da tecnologia aplicada em células de insecto, que pode ser explorada para produzir VLPs multivalentes, com potencial para se tornar a próxima geração de vacinas para o vírus da gripe

Dispneia : problema do coração? ou talvez não... : a propósito de um caso clínico

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2016A dispneia é um sintoma muito frequente que pode resultar de várias causas, sendo uma delas as massas do tórax com efeitos compressivos sobre as estruturas vizinhas. Entre os vários tipos de massas torácicas existentes destacam-se os quistos broncogénicos (QB). Dada a sua raridade e o vasto leque de sintomas que podem originar, os QB habitualmente não constituem uma das primeiras hipóteses diagnósticas em casos de dispneia. Assim, a propósito de um caso clínico em que inicialmente foi colocada a suspeita diagnóstica de tamponamento cardíaco e que depois se veio a confirmar tratar-se afinal de um QB com necessidade de intervenção cirúrgica urgente, é feita uma revisão sobre os quistos broncogénicos, em particular a sua apresentação clínica, o desafio que constitui o seu diagnóstico e as diferentes abordagens terapêuticas, com o objectivo de alertar para a existência desta entidade clínica, nomeadamente devido à possibilidade dos doentes poderem apresentar um início súbito de sintomas e de necessitarem de terapêutica urgente e invasiva.Dyspnea is a very common symptom that may result from many causes, being one of them chest masses with compressive effects over the surrounding structures. Among the different existing types of thoracic masses, we emphasize the bronchogenic cysts (QB). Given their rarity and the large set of symptoms that they can cause, QB usually are not considered as a first diagnostic hypothesis in the setting of dyspnea. In this work, an interesting and dramatic clinical case initially suspected as being a cardiac tamponade and later confirmed as a QB is reported. A review is performed, emphasizing several aspects of QB, such as their clinic presentation, the challenge in their diagnostic and different therapeutic approaches, with the goal at raising awareness to the existence of this clinical entity, namely due to the possibility of some patients to present a sudden onset of symptoms and the need of urgent invasive treatment

A preferência por remuneração variável dos gestores de PMEs portuguesas

Mestrado em Contabilidade, Fiscalidade e Finanças EmpresariaisEste estudo analisa a relação entre variáveis demográficas dos gestores de topo de PMEs portuguesas e a sua preferência por remuneração variável (incentivos) no total da remuneração. Estudos anteriores na área da gestão e da economia analisaram a influência de algumas variáveis demográficas em situações de risco ou de mudança, mas existe pouca literatura sobre a relação das mesmas com os incentivos recebidos pelos gestores. Assim este estudo relaciona as características pessoais dos gestores com a percentagem de incentivos desejada por esses mesmos gestores. Para tal foram utilizadas 2.353 respostas de gestores de PMEs a um questionário online. Os resultados mostram que os executivos preferem em médiauma remuneração variável superior à que recebem. Relativamente às variáveis demográficas, os resultados sugerem que quanto maior a antiguidade dos executivos na empresa e quanto menor é a sua idade, maior é a preferência por remuneração variável. Contudo, quando a variável dependente é a diferença entre o incentivo desejado e o efectivamente obtido, observa-se que os executivos do sexo masculino e os que apresentam uma menor antiguidade, são os que têm uma maior preferência por remuneração variável face ao que actualmente recebem.This study analyses the relationship between demographic variables of top managers from Portuguese SMEs and their preference for variable pay(incentives) in percentage of their total income. Former studies in the management and economics literatures have analyzed the influence of some demographic variables in situations of risk and change, but there are very few published works on the relationship between these demographic variables and the incentive received. Thus, this study links the managers' personal characteristics and the percentage of incentives that managers would like to receive. For that, the study used 2.353 responses from managers from SMEs, collected via an online questionnaire. The results show that, on average, the executives opt for a higher variable pay than the one they are currently receiving. Regarding the demographic variables, the results suggest that the higher the executives' tenure in the organization and the lower their age, the higher the desired variable pay. However, when the dependent variable is the difference between the desired and the actual incentive obtained, we observe that the male and the low tenured executives prefer more variable pay compared to what they currently receive

O stress parental e a ansiedade nas crianças em idade pré-escolar : A relação com a estrutura familiar

Dissertação de Mestrado apresentada ao ISPA - Instituto UniversitárioEsta investigação analisou a relação entre o stress parental e a ansiedade nas crianças tendo em conta a estrutura familiar (famílias nucleares ou monoparentais). A amostra é constituída por cerca de 137 indivíduos, do sexo feminino e masculino, pais de crianças que frequentam o ensino pré-escolar com idades compreendidas entre os 3 e os 6 anos. Este estudo é do tipo correlacional, transversal, de carácter descritivo e comparativo. Foram utilizados três instrumentos de avaliação, um Questionário Sócio- Demográfico (Paixão e Patrão, 2012), uma Escala Ansiedade para Crianças em idade Pré-Escolar (Spence, Rapee, McDonald & Ingram, 2001) e uma Escala de Stress Parental (Berry & Jones,1995). Os resultados evidenciaram uma relação entre o stress parental e a ansiedade nas crianças em idade pré-escolar. A grande maioria dos pais apresentaram níveis de stress parental intermédios e as crianças, níveis de ansiedade acima da média. A estrutura familiar demonstrou apenas ter impacto na ansiedade das crianças em idade pré-escolar, nomeadamente, ao nível da ansiedade de danos físicos e da ansiedade generalizada, em famílias cujo pai da criança não se encontra presente.ABSTRACT: The present study analyzed the relationship between parental stress and child anxiety regarding family structure (nuclear families or single parents). The sample covered 137 individuals, males and females, parents of children attending pre-school educational establishments, from both genders, aged between 3 and 6 years. This is a correlational, transversal, descriptive and comparative study. The instruments used were a Social-Demographic Questionnaire (Paixão e Patrão, 2012), the Preschool Anxiety Scale (Spence, Rapee, McDonald & Ingram, 2001) and the Parental Stress Scale (Berry & Jones, 1995). The results showed a relationship between parental stress and child anxiety in preschoolers. Most of the parents presented medium levels of parental stress, and the children revealed anxiety levels above the average, namely, at anxiety of physical injury fears and generalized anxiety, in families where the father isn’t present

Risco de incêndio florestal: características, perceções e medidas necessárias

O projeto de investigação ‘Pessoas e Fogo’ visou desenvolver e testar um quadro analítico de apoio à avaliação e promoção de políticas de gestão florestal e de desenvolvimento territorial que, centradas nas pessoas, levem à redução do risco de incêndio rural-florestal, no Pinhal Interior. Até recentemente tem sido dada prioridade ao combate direto aos incêndios ativos. A sua prevenção, através da gestão de combustível e do ordenamento florestal, e consequente diminuição da exposição e vulnerabilidade das pessoas, têm sido relegadas para segundo plano. Não se tem conseguido, assim, reduzir as áreas ardidas nem os danos causados pelos incêndios, cujo aumento reflete, em larga medida, o declínio da gestão ativa da floresta, a extrema fragmentação da propriedade e a contração da área agrícola. Face a este cenário, o projeto ‘Pessoas e Fogo’ pretendeu, entre outros objetivos, envolver os diversos atores locais e o seu conhecimento local na conceção conjunta de políticas e estratégias para promover práticas de redução de risco.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Estado nutricional, atividade física e qualidade de vida de crianças e adolescentes com infeção pelo vírus da imunodeficiência humana

ABSTRACT - Introduction: The growth and cellular immune function of the human immunodeficiency virus (HIV) infected children are impaired by their nutritional status. The majority experience nutrition deficits and malnutrition, but with longer follow-up metabolic syndrome have been described. The aim of the study was to assess nutritional status, physical activity, and quality of life in HIV-infected children and adolescents. Methods: Cross-sectional study. 31 HIV-infected patients were assessed based on anthropometry: weight, height, body mass index (BMI), triceps skinfolds (TSF), and mid-upper arm circumference (MUAC). Body composition obtained by electrical bioimpedance and expressed as fat mass (FM) and lean body mass (LBM); dietary intake through recall 24-hour, physical activity (PA) through BQHPA, and health-related quality of life (HRQoL) through Kidscreen 27. Statistical analysis IBM® SPSS® v.25. Results: Z-scores of BMI: 25% overweight and 7,1% obese. Dietary intake of critical vitamins, nutrients, minerals, sugar, and energy does not correspond to DRI’s. BQHPA demonstrated that males PA are higher than females. Differences by gender were found in physical well-being (p<0,05) and psychological well-being (p<0,05), with males being associated with better well-being, they also presented higher physical and psychological well-being, autonomy & parent relation, and social support & pears. Higher BMI z-score values were associated with lower values of resistance, reactance, fiber intake, physical well-being. Discussion: Patients presented an unbalanced dietary intake. However, most were eutrophic. The subjects follow the trends of healthy children concerning physical activity, the same is not seen about health-related quality of life.RESUMO - Introdução: O crescimento e a função imunológica das crianças com infeção pelo vírus da imunodeficiência humana são afetados pelo seu estado nutricional. A maioria apresenta défices nutricionais e desnutrição, no entanto com maior follow-up, na literatura têm sido descritos casos de síndrome metabólica. O objetivo do estudo foi avaliar o estado nutricional, atividade física e qualidade de vida em crianças e adolescentes com infeção por VIH. Métodos: Estudo transversal com uma amostra de 31 crianças e adolescentes com infeção pelo vírus da imunodeficiência humana, avaliadas antropometricamente: peso, altura, índice de massa corporal, prega cutânea tricipital e circunferência do braço. A composição corporal foi medida por bioimpedância elétrica e expressa em massa gorda e massa magra, ingestão dietética recall 24 horas, atividade física pelo questionário de atividade física habitual de Baecke e qualidade de vida pelo Kidscreen-27. Resultados: Z-score do índice de massa corporal 25% excesso de peso e 7,1% com obesidade. A ingestão dietética de vitaminas, nutrientes, minerais, açúcar e energia não corresponde à ingestão diária recomendada. O questionário de Baecke demonstrou que a atividade física do sexo masculino é maior. Diferenças entre sexos foram encontradas no bem-estar físico (p<0.05) e bem-estar psicológico (p<0.05), sendo que o sexo masculino foi associado a um melhor bem-estar, bem-estar físico e psicológico, autonomia e relação com os pais e apoio social. Valores maiores de z-score do índice de massa corporal foram associados a valores mais baixos de resistência, reatância, ingestão de fibra e bem-estar físico. Discussão: A amostra apresentou uma ingestão dietética desequilibrada. No entanto, a maioria era eutrófica. Os sujeitos seguem as tendências das crianças saudáveis em relação à atividade física, o mesmo não se verifica em relação à qualidade de vida.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Global variation in postoperative mortality and complications after cancer surgery: a multicentre, prospective cohort study in 82 countries

© 2021 The Author(s). Published by Elsevier Ltd. This is an Open Access article under the CC BY-NC-ND 4.0 licenseBackground: 80% of individuals with cancer will require a surgical procedure, yet little comparative data exist on early outcomes in low-income and middle-income countries (LMICs). We compared postoperative outcomes in breast, colorectal, and gastric cancer surgery in hospitals worldwide, focusing on the effect of disease stage and complications on postoperative mortality. Methods: This was a multicentre, international prospective cohort study of consecutive adult patients undergoing surgery for primary breast, colorectal, or gastric cancer requiring a skin incision done under general or neuraxial anaesthesia. The primary outcome was death or major complication within 30 days of surgery. Multilevel logistic regression determined relationships within three-level nested models of patients within hospitals and countries. Hospital-level infrastructure effects were explored with three-way mediation analyses. This study was registered with ClinicalTrials.gov, NCT03471494. Findings: Between April 1, 2018, and Jan 31, 2019, we enrolled 15 958 patients from 428 hospitals in 82 countries (high income 9106 patients, 31 countries; upper-middle income 2721 patients, 23 countries; or lower-middle income 4131 patients, 28 countries). Patients in LMICs presented with more advanced disease compared with patients in high-income countries. 30-day mortality was higher for gastric cancer in low-income or lower-middle-income countries (adjusted odds ratio 3·72, 95% CI 1·70–8·16) and for colorectal cancer in low-income or lower-middle-income countries (4·59, 2·39–8·80) and upper-middle-income countries (2·06, 1·11–3·83). No difference in 30-day mortality was seen in breast cancer. The proportion of patients who died after a major complication was greatest in low-income or lower-middle-income countries (6·15, 3·26–11·59) and upper-middle-income countries (3·89, 2·08–7·29). Postoperative death after complications was partly explained by patient factors (60%) and partly by hospital or country (40%). The absence of consistently available postoperative care facilities was associated with seven to 10 more deaths per 100 major complications in LMICs. Cancer stage alone explained little of the early variation in mortality or postoperative complications. Interpretation: Higher levels of mortality after cancer surgery in LMICs was not fully explained by later presentation of disease. The capacity to rescue patients from surgical complications is a tangible opportunity for meaningful intervention. Early death after cancer surgery might be reduced by policies focusing on strengthening perioperative care systems to detect and intervene in common complications. Funding: National Institute for Health Research Global Health Research Unit

Effects of hospital facilities on patient outcomes after cancer surgery: an international, prospective, observational study

© 2022 The Author(s). Published by Elsevier Ltd. This is an Open Access article under the CC BY 4.0 licenseBackground: Early death after cancer surgery is higher in low-income and middle-income countries (LMICs) compared with in high-income countries, yet the impact of facility characteristics on early postoperative outcomes is unknown. The aim of this study was to examine the association between hospital infrastructure, resource availability, and processes on early outcomes after cancer surgery worldwide. Methods: A multimethods analysis was performed as part of the GlobalSurg 3 study—a multicentre, international, prospective cohort study of patients who had surgery for breast, colorectal, or gastric cancer. The primary outcomes were 30-day mortality and 30-day major complication rates. Potentially beneficial hospital facilities were identified by variable selection to select those associated with 30-day mortality. Adjusted outcomes were determined using generalised estimating equations to account for patient characteristics and country-income group, with population stratification by hospital. Findings: Between April 1, 2018, and April 23, 2019, facility-level data were collected for 9685 patients across 238 hospitals in 66 countries (91 hospitals in 20 high-income countries; 57 hospitals in 19 upper-middle-income countries; and 90 hospitals in 27 low-income to lower-middle-income countries). The availability of five hospital facilities was inversely associated with mortality: ultrasound, CT scanner, critical care unit, opioid analgesia, and oncologist. After adjustment for case-mix and country income group, hospitals with three or fewer of these facilities (62 hospitals, 1294 patients) had higher mortality compared with those with four or five (adjusted odds ratio [OR] 3·85 [95% CI 2·58–5·75]; p<0·0001), with excess mortality predominantly explained by a limited capacity to rescue following the development of major complications (63·0% vs 82·7%; OR 0·35 [0·23–0·53]; p<0·0001). Across LMICs, improvements in hospital facilities would prevent one to three deaths for every 100 patients undergoing surgery for cancer. Interpretation: Hospitals with higher levels of infrastructure and resources have better outcomes after cancer surgery, independent of country income. Without urgent strengthening of hospital infrastructure and resources, the reductions in cancer-associated mortality associated with improved access will not be realised. Funding: National Institute for Health and Care Research