Localização de mRNA em Drosophila melanogaster: estudo da proteína Ypsilon Schachtel

Dissertação apresentada para a obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina, pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ciências e TecnologiaPretendeu-se com este trabalho, a clonagem do gene ypsilon schachtel (yps) e a consequente expressão e purificação da respectiva proteína para posterior resolução da estrutura tridimensional, pela técnica de cristalografia de raios-X. A proteína yps pertence à família das proteínas Y-box, conhecida pela capacidade de ligação ao elemento Y-box do DNA. Recentemente, constatou-se que a yps faz parte de um complexo ribonucleoproteico envolvido na localização de mRNA nas regiões anterior e posterior do oócito de Drosophila melanogaster. Aparenta ter um papel activo e abrangente neste processo, desconhecendo-se ainda os mecanismos através dos quais o desempenha. A resolução da estrutura tridimensional da proteína, permitiria a análise do seu arranjo e reconhecimento de regiões que poderão estar envolvidas nas hipotéticas interacções entre a proteína e o complexo que constitui, e/ou entre a proteína e o mRNA que é transportado. Atendendo essencialmente ao tamanho da proteína, a cristalografia de raios-X apresenta-se como o melhor método para o estudo pretendido. Para tal, é necessário proceder-se à clonagem do cDNA do gene yps em vector apropriado; sobre-expressar, isolar, purificar e cristalizar a proteína nele codificada. Em estudos anteriores, verificou-se que o grau de ordem de uma proteína afecta directamente o seu processo de cristalização: proteínas mais ordenadas constituem cristais mais ordenados e consequentemente, obtêm-se conjuntos de dados de melhor resolução. Assim, recorreu-se a diversas ferramentas bioinformáticas disponíveis com o intuito de se antever a globularidade da proteína yps. Verificou-se que se prevê alguma ordem apenas nos primeiros 121 aminoácidos e, deste modo, esta região constitui o objecto de estudo do trabalho aqui exposto. Esta tese, contempla o estudo desde a clonagem do gene yps à purificação da proteína yps. Amplificaram-se dois fragmentos distintos da região globular mencionada, e ensaiou-se a sua clonagem em três vectores de clonagem e expressão: pGEX-6P1, pET-14b e pET-15b. Apenas com este último, a clonagem foi bem-sucedida. Transformou-se o vector recombinante em células competentes apropriadas e expressou-se a proteína em Escherichia coli, pelos métodos de indução e auto-indução. Por fim, a proteína alvo foi isolada e purificada por cromatografia de afinidade com metal imobilizado

Infecção por Aelurostrongylus abstrusus e Angiostrongylus vasorum (Nematoda: Angiostrongylidae) em gatos e cães no distrito de Lisboa, Portugal

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaO número de casos de parasitoses respiratórias nos nossos animais de companhia, causadas por nemátodes pulmonares, tem aumentado nos últimos anos em várias áreas geográficas, incluindo a Europa. Aelurostrongylus abstrusus e Angiostrongylus vasorum têm assumido especial importância nos gatos e cães, respectivamente. Ambos podem provocar pneumonia verminosa no animal, de gravidade variável, mas a infecção por A. vasorum pode resultar ainda em alterações neurológicas e da coagulação. Diversos estudos têm sido realizados de modo a averiguar a prevalência destas parasitoses, as quais aparentam estar subestimadas em vários países. Este trabalho foi elaborado com o intuito de avaliar a situação epidemiológica de A. abstrusus em gatos e A. vasorum em cães no distrito de Lisboa. Para isso foi realizada uma pesquisa em 100 amostras (50 de gatos e 50 de cães), maioritariamente fecais, mas também pulmonares de animais necropsiados. As amostras foram analisadas através da técnica de Baermann, actualmente considerado o método de eleição no diagnóstico destas parasitoses. A sua detecção e identificação foram baseadas na morfologia das larvas L1. Os resultados obtidos foram 12% (6/50) para A. abstrusus em gatos e 2% (1/50) para A. vasorum em cães. Estes dados realçam a presença de A. abstrusus e A. vasorum em gatos e cães, respectivamente, no distrito de Lisboa, em Portugal. Assim, este facto deve ser tido em consideração pelo médico veterinário na prática clínica, assim como a utilização rotineira da técnica de Baermann para o diagnóstico destes parasitas.ABSTRACT - Aelurostrongylus abstrusus and Angiostrongylus vasorum (Nematoda: Angiostrongylidae) infection in cats and dogs from Lisbon, Portugal - The number of cat and dog lungworm reported cases has increased in various geographic areas, including Europe. Aelurostrongylus abstrusus and Angiostrongylus vasorum assume special importance in cats and dogs, respectively. Both cause verminous pneumonia, with different levels of severity, but the infection by A. vasorum may also result in neurological and coagulation problems. Several studies have been conducted in order to determine their prevalence, which seems to be underestimated in many countries. This study aimed to assess the epidemiological situation of A. abstrusus and A. vasorum in cats and dogs in the Lisbon area. A research was performed in 100 samples (50 cats and 50 dogs), mostly fecal, but also from lungs of necropsied animals. All samples were screened with Baermann technique, currently considered the gold standard in their diagnosis. L1’s detection and identification was based on their morphology. The results showed a prevalence of 12% (6/50) for A. abstrusus in cats and 2% (1/50) for A. vasorum in dogs. These data emphasize the presence of A. abstrusus and A. vasorum, respectively in cats and dogs in the Lisbon area, Portugal. Therefore, it should be taken into consideration for veterinarians in clinical practice, as the routine use of Baermann’s technique for the diagnosis of these parasites

Análise da viabilidade de deslocalização de produção de STJ para a fábrica de Macau

A Hovione desde 1959 tem colocado no mercado soluções inovadoras para o tratamento de várias doenças através do constante investimento na investigação e no desenvolvimento de novos processos químicos e dispositivos médicos. A inovação e a qualidade são duas apostas permanentes da Hovione. O presente plano de negócios tem como principal objetivo o estudo de viabilidade económicofinanceira do investimento da deslocalização da produção do produto STJ para a fábrica já existente em Macau. No futuro, o objetivo é fazer com que a unidade produtiva sediada em Macau seja considerada como segundo fornecedor onde são mantidos os mesmos parâmetros de qualidade da fábrica em Portugal. A empresa portuguesa com este investimento pretende aumentar a sua capacidade de resposta a novos clientes aumentando assim nível de produção e as vendas.Hovione since 1959 has been putting innovative solutions for the treatment of several diseases due to continuous investment in the research and development of new chemical processes and medical devices. Innovation and quality are two of Hovione's permanent thoughts. The main goal with this business plan is to study the economic and financial investment’s viability with the relocation of the production of the STJ product to an existing plant located in Macao. In the future, the aim is to ensure that the Macao-based production unit is considered as the second source supplier where the same quality parameters of the factory in Portugal are maintained. The Portuguese company with this investment intends to increase its capacity to respond to new customers thus increasing its production rate and sales

TERT promoter mutations in pancreatic endocrine tumours are rare and mainly found in tumours from patients with hereditary syndromes

One of the hallmarks of cancer is its unlimited replicative potential that needs a compensatory mechanism for the consequential telomere erosion. Telomerase promoter (TERTp) mutations were recently reported as a novel mechanism for telomerase re-activation/expression in order to maintain telomere length. Pancreatic endocrine tumors (PETs) were so far recognized to rely mainly on the alternative lengthening of telomeres (ALT) mechanism. It was our objective to study if TERTp mutations were present in pancreatic endocrine tumors (PET) and could represent an alternative mechanism to ALT. TERTp mutations were detected in 7% of the cases studied and were mainly associated to patients harbouring hereditary syndromes. In vitro, using PET-derived cell lines and by luciferase reporter assay, these mutations confer a 2 to 4-fold increase in telomerase transcription activity. These novel alterations are able to recruit ETS transcription factor members, in particular GABP-α and ETV1, to the newly generated binding sites. We report for the first time TERTp mutations in PETs and PET-derived cell lines. Additionally, our data indicate that these mutations serve as an alternative mechanism and in an exclusive manner to ALT, in particular in patients with hereditary syndromes.Fundação para a Ciência e a Tecnologia; Norte 2020 – Programa Operacional Regional do Norte project: (“Advancing cancer research: from basic knowledgment to application” - grant: NORTE-01-0145-FEDER-000029); Associate Laboratory of the Portuguese Ministry of Science, Technology and Higher Education: (I3S)

Woody biomass production lags stem-girth increase by over one month in coniferous forests

Wood is the main terrestrial biotic reservoir for long-term carbon sequestration1, and its formation in trees consumes around 15% of anthropogenic carbon dioxide emissions each year2. However, the seasonal dynamics of woody biomass production cannot be quantified from eddy covariance or satellite observations. As such, our understanding of this key carbon cycle component, and its sensitivity to climate, remains limited. Here, we present high-resolution cellular based measurements of wood formation dynamics in three coniferous forest sites in northeastern France, performed over a period of 3 years. We show that stem woody biomass production lags behind stem-girth increase by over 1 month. We also analyse more general phenological observations of xylem tissue formation in Northern Hemisphere forests and find similar time lags in boreal, temperate, subalpine and Mediterranean forests. These time lags question the extension of the equivalence between stem size increase and woody biomass production to intra-annual time scales3–6. They also suggest that these two growth processes exhibit differential sensitivities to local environmental conditions. Indeed, in the wellwatered French sites the seasonal dynamics of stem-girth increase matched the photoperiod cycle, whereas those of woody biomass production closely followed the seasonal course of temperature. We suggest that forecasted changes in the annual cycle of climatic factors7 may shift the phase timing of stem size increase and woody biomass production in the future