Mare endometrium fibrosis : epigenetics and novel fibrosis markers

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias na especialidade Ciências Biológicas e Biomédicas. Área científica de Morfologia e FunçãoABSTRACT - Endometrosis is a major cause of infertility in mares and involves the excessive deposition of extracellular matrix (ECM) in the mare's endometrium, such as collagen type I (COL1), and type III (COL3). In fibrosis there is an imbalance between metalloproteinases (MMPs) and their tissue inhibitors (TIMPs), resulting in dysregulation between collagen degradation and deposition. Transforming growth factor β1 (TGF-β1) is one of the major pro fibrotic signals for myofibroblast differentiation, identified by the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA), promoting collagen production. Alterations in fibroblast phenotype are associated with epigenetic alterations in chromatin structure. Epigenetic changes can be reversed and therefore extremely promising for therapeutic use. DNA methylation analysis is one of the most used methods to detect epigenetic changes. The aims of this study were to: (i) evaluate if COL1, COL3 and hydroxyproline could serve as possible blood biomarkers of equine endometrosis diagnosis and fertility assessment; (ii) evaluate the existence of a possible correlation between mRNA levels of DNA methyltransferases (DNMTs) and COL1A2 or COL3A1 in different Kenney and Doig’s endometrial categories and at different estrous cycle phases; (iii) evaluate the transcription and locus specific DNA methylation of COL1A1, COL1A2, COL3A1, MMP2, MMP9, TIMP1, and TIMP2 in different mare endometrial categories; (iv) investigate the in vitro epigenetic regulation in endometrial fibroblasts challenged with TGF-β1 and to assess the use of the epigenetic modifier, 5-aza-2′- deoxycytidine (5-aza-dC or decitabine), on endometrial fibroblasts exposed to profibrotic TGF-β1. Serum COL3 concentrations increased with more advanced Kenney and Doig´s endometrial categories. Serum COL3 concentration was also higher in infertile mares, when compared to fertile mares. Both sensibility and specificity of COL3 was most effective to differentiate mares from category I from all other categories. Only COL3 proved to be a possible biomarker of mare endometrial fibrosis. Concerning epigenetic studies, DNMT3B increased with endometrial category grade, and it was independent of estrous cycle phase. There were lower transcription levels of MMP2 and MMP9, simultaneously with higher DNA methylation percentage, in higher endometrial categories. The demethylating drug 5-aza-dC reduced the collagen expression (mRNA and protein) in TGF-β1 treated endometrial fibroblasts. A different approach via epigenetics may provide an alternative means to address mare endometrial fibrosis and a more in-depth knowledge of the pathophysiology of this conditionRESUMO - FIBROSE DO ENDOMÉTRIO DA ÉGUA: EPIGENÉTICA E NOVOS MARCADORES DE FIBROSE - A endometrose é uma das principais causas de infertilidade em éguas e envolve a deposição excessiva de matriz extracelular (ECM) no endométrio, tal como o colagénio do tipo I (COL1), e do tipo III (COL3). Na fibrose existe um desequilíbrio entre as metaloproteinases (MMPs) e os seus inibidores tecidulares (TIMPs), resultando na desregulação entre a degradação e a deposição de colagénio. O factor transformador de crescimento β1 (TGF-β1) é um dos principais sinais pró-fibróticos na diferenciação dos miofibroblastos, identificados pela expressão da α-actina do músculo liso (α-SMA), promovendo a produção de colagénio. As alterações no fenótipo dos fibroblastos estão associadas a modificações epigenéticas. As alterações epigenéticas são reversíveis, sendo por isso extremamente promissoras para uso terapêutico. A análise da metilação do DNA é um dos métodos mais utilizados na detecção de alterações epigenéticas. Os objetivos deste estudo foram: (i) avaliar se o COL1, COL3 e hidroxiprolina poderiam servir como possíveis biomarcadores sanguíneos no diagnóstico de endometrose equina e na avaliação da fertilidade; (ii) avaliar uma possível correlação entre os níveis de mRNA das DNA metiltransferases (DNMTs) e dos COL1A2 e COL3A1 em diferentes categorias de endométrio (Kenney e Doig) e as fases do ciclo éstrico das éguas; (iii) avaliar a transcrição e a metilação do DNA em locais específicos do COL1A1, COL1A2, COL3A1, MMP2, MMP9, TIMP1 e TIMP2 em diferentes categorias de endométrio; (iv) investigar a regulação epigenética, in vitro, em fibroblastos endometriais tratados com TGF-β1 e o uso do agente epigenético, 5-aza-2'- desoxicitidina (5-aza-dC ou decitabina), em fibroblastos previamente expostos a TGF-β1. A concentração sérica de COL3 aumentou nas categorias de endométrio mais avançadas, e foi também maior nas éguas inférteis, quando comparada com as férteis. A sensibilidade e a especificidade do COL3 foram mais eficazes na diferenciação das éguas da categoria I, das éguas das restantes categorias. Apenas o COL3 demostrou ser um possível biomarcador de fibrose endometrial nas éguas. Em relação aos estudos epigenéticos, a DNMT3B aumentou com a categoria endometrial, independentemente da fase do ciclo éstrico. Ocorreu uma menor transcrição da MMP2 e MMP9, concomitante com uma maior metilação do DNA, nas categorias de endométrio com maior grau de fibrose. O desmetilante, 5-aza-dC reduziu a expressão de colagénio (mRNA e proteína) nos fibroblastos endometriais tratados com TGF β1. Uma abordagem diferente da endometrose equina, através da epigenética, pode constituir uma alternativa para um conhecimento mais aprofundado da sua fisiopatologiaN/

O uso das TIC no processo de ensino-aprendizagem de alunos com necessidades educativas especiais

O presente projecto de investigação debruça-se sobre a importância das Tecnologias da Informação e Comunicação (TIC) no processo de ensino-aprendizagem dos alunos com Necessidades Educativas Especiais (NEE), bem como disponibilizar aos docentes um conhecimento mais amplo das diferentes ferramentas tecnológicas que podem ser utilizadas na estruturação e planeamento de uma pedagogia diferenciada. Numa primeira fase partiu-se para um estudo da educação especial, especificamente, quem são os alunos com NEE. Devido à necessidade científica do projecto, procurou-se conhecer e contextualizar, no âmbito legal, o decreto de lei n.º 3 de 7 de Janeiro de 2008, que abriga estas crianças. Nesta linha, procedeu-se a uma investigação acerca das TIC como facilitadoras e promotoras da inclusão de crianças com NEE. De modo a compreender e conhecer a predisposição dos docentes para a utilização das TIC nas suas práticas e intervenções diferenciadas, procedeu-se à elaboração de um inquérito por questionário, tendo os resultados aferidos sido alvo de tratamento. De acordo com essa análise e retiradas as respectivas aferências, foi elaborado o presente projecto educativo de acção e intervenção, onde se procede à contextualização desta problemática, definem-se objectivos e questões a clarificar, bem como se distinguem metodologias de acção e intervenção, recursos humanos e materiais, assim como a forma como este será avaliado. O produto final deste projecto surge sob a forma do blog “A Web 2.0 e a Inclusão” que reúne algumas ferramentas e actividades que poderão ser um recurso útil para os professores. Pretende-se, assim, criar um espaço de partilha, não só de materiais ou recursos, mas também de experiências educativas, através de testemunhos, estando disponível em http://web2-0nee.blogspot.com/This research project focuses on the importance of Information and Communication Technology (ICT) in teaching-learning of pupils with Special Educational Needs (SEN) and provide teachers a broader knowledge of various technological tools that can be used in the structuring and planning of a differentiated pedagogy. Initially went to a study of special education, specifically, who are pupils with SEN. Due to the need of the scientific project, we tried to understand and contextualize, under law, Decree Law No. 3 January 7, 2008, to these children. Along these lines, we proceeded to an inquiry into ICT as enabling and promoting the inclusion of children with SEN. In order to understand and know the interest of the teachers to use ICT in their practices and different interventions, we proceeded to the elaboration of a questionnaire survey and the results were measured target of therapy. According to this analysis and withdrawn their afferents was produced this educational project action and intervention, which carries out the background of this problem, we define objectives and issues to be clarified and distinguished methodologies of action and intervention resources human and material, as well as how it is evaluated. The final product of this project comes in the form of the blog "Web 2.0 and Inclusion" which brings together some tools and activities that may be a useful resource for teachers. The aim is to create a space for sharing, not only of materials or resources, but also of educational experiences through testimonies and is available in http://web2-0nee.blogspot.com

implementação em Associações Mutualistas Portuguesas

A avaliação do desempenho das Organizações sem fins lucrativos (OSFL) tornou-se para os gestores um dos desafios mais importantes na atualidade. O estudo visa analisar a implementação do Balanced Scorecard (BSC) nas associações mutualistas, uma das formas legais de instituição das OSFL. Os principais objetivos são verificar se o BSC é adotado por estas organizações, quais as alterações necessárias para a sua implementação e por último, as vantagens e desvantagens inerentes dessa aplicação. O método de investigação utilizado foi o estudo de caso. Como procedimentos foram selecionados a análise documental, dos decretos-lei e código das Associações Mutualistas, os questionários e uma entrevista. As associações analisadas foram escolhidas com base na sua filiação na União das Mutualidades (UM), uma associação de grau superior. Apesar da evidência recolhida mostrar que o BSC não é implementado, são reconhecidas vantagens superiores às limitações para uma gestão mais eficaz. Adicionalmente os resultados sugerem que a estrutura do BSC teria de ser diversa daquela que está subjacente ao setor empresarial. Inicialmente o BSC era dirigido para organizações com fins lucrativos, pelo que a falta de informação e a necessidade de alteração desta ferramenta de gestão não tenha despertado o interesse na sua implementação. Contudo, os potenciais desta aplicação são reconhecidos.The evaluation of the performance of Nonprofits Organizations (NPO) has become for managers one of the most important challenges today. The study aims to analyze the implementation of the BSC in mutual associations, one of the legal forms of the NPO. The main objectives are to verify it the BSC are adopted by these organizations, what changes necessary for its implementation and finally, the inherent advantages and disadvantages of this application. The research method was used in the case study. As procedure it was selected the document analysis, the decree-laws and code of Mutual Association, questionnaires and interviews. The association analyzed were chosen based on their membership in the Union of Mutual Societies (UM), an association of a higher degree. Despite the evidence collected show that the BSC is not implemented, are superior advantages recognized the limitations to more effective management. In addition, the results suggest that the BSC structure would have to be different from that which underlies the business sector. Initially the BSC was directed to for-profit organizations, so the lack of information and the need to change this management tool has not raised interest in its implementation. However, the potential of this application are recognized

Explorar conexões entre matemática local e matemática global

A integração de aspectos culturais nos currículos é um meio de legitimar vivências dos alunos e de responder à diversidade cultural, em prol de uma maior equidade na aprendizagem matemática com significado (e.g. Bishop, 2005; Gerdes, 2007; Moreira, 2008). Neste artigo, pretendemos destacar o papel da matemática cultural no desenvolvimento da predisposição para estabelecer conexões matemáticas e na comunicação matemática. Tal objectivo enquadra-se numa investigação mais ampla (Latas, 2011), a qual seguiu uma metodologia qualitativa, de natureza interpretativa, incidindo o processo de recolha de dados na observação participante, na entrevista, na análise documental e no desenho de um projecto curricular. A conceptualização do projecto seguiu uma abordagem etnomatemática e foi implementado numa turma de 7.º ano de escolaridade onde a professora desempenhou simultaneamente o papel de investigadora. Os resultados sugerem que os alunos: i) se apropriaram de práticas culturalmente distintas pela relação que estabeleceram com os seus conhecimentos prévios; ii) revelaram gradualmente maior predisposição para o estabelecimento de conexões matemáticas; iii) aprofundaram conhecimentos matemáticos locais e globais na interação entre ambas as dimensões

Avaliação in vitro da biocompatibilidade de ligas de magnésio funcionalizadas para aplicações como implantes ortopédicos

Magnesium alloys have been widely studied and applied in the biomedical field, namely in the orthopedic area, due to their promising properties. Their biocompatibility, biodegradability, mechanical properties and osteogenic properties allow the use of these alloys as alternatives to the currently available materials. However, the uncontrolled corrosion and hydrogen formation in magnesium alloys can cause serious damages when introduced into the human body. In order to meet these challenges, different methods have been developed to control them, such as surface pre-treatments, coatings and alloying. The different systems produced, however, require a detailed assessment of biocompatibility for later use in the medical field. But there is still a gap in the assessment of biocompatibility, especially in the hemocompatibility of such materials. This work was conducted in the scope of the MAGICOAT project and aimed to assess the biocompatibility (cytotoxicity and hemocompatibility) of a multilayer system composed of a Mg1Ca alloy, pre-treated with hydroxyapatite, with a subsequent polyetherimide (PEI) coating containing calcium-loaded gelatin microcapsules or calcium carbonate particles. As both calcium-loaded gelatin microcapsules and calcium carbonate particles were to be included in the PEI coating, their morphology, release profile and their cytoto xicity were assessed prior to the biocompatibility assays of the complete system. The complete multilayer system was initially tested for cytotoxicity, analyzing the integrity of the cell membrane and cell proliferation, through LDH and WST-1 assays. After the results proved that the multilayer system was non-toxic, hemocompatibility tests were carried out. In vitro tests to verify the occurrence of hemolysis and activation of the complement system confirmed the hemocompatibility of the system after 4 hours of contact with the blood.As ligas de magnésio têm sido amplamente estudadas e aplicadas no campo da biomedicina, nomeadamente na área ortopédica, devido às suas propriedades promissoras. A biocompatibilidade, biodegradabilidade, propriedades mecânicas e osteogénicas destas ligas, permitem o seu uso como alternativas aos materiais atualmente disponíveis. No entanto, a corrosão descontrolada e a formação de hidrogénio, nas ligas de magnésio, podem causar sérios danos quando introduzidas no corpo humano. Para enfrentar estes desafios, diferentes métodos foram desenvolvidos de forma a controlá-los, como pré-tratamentos de superfície, revestimentos e diferentes elementos de liga. Os diferentes sistemas produzidos, no entanto, requerem uma avaliação detalhada da sua biocompatibilidade para uso posterior na área médica. Porém, existe uma lacuna na avaliação da biocompatibilidade, principalmente na hemocompatibilidade destes materiais. Este trabalho foi realizado no âmbito do projeto MAGICOAT e teve como objetivo avaliar a biocompatibilidade (citotoxicidade e hemocompatibilidade) de um sistema multicamada composto por uma liga de Mg1Ca, pré-tratada com hidroxiapatite, e um revestimento, subsequente, de poliéterimida (PEI) contendo microcápsulas de gelatina com cálcio ou partículas de carbonato de cálcio. Como as microcápsulas de gelatina carregadas de cálcio e as partículas de carbonato de cálcio deveriam ser incluídas no revestimento PEI, a sua morfologia, perfil de libertação de cálcio e sua citotoxicidade foram avaliadas antes dos ensaios de biocompatibilidade do sistema completo. O sistema multicamada completo foi inicialmente testado relativamente à sua citotoxicidade, analisando-se a integridade da membrana celular e a proliferação celular, através dos ensaios de LDH e WST-1. Após os resultados comprovarem que o sistema multicamadas não era tóxico, foram realizados testes de hemocompatibilidade. Testes in vitro para verificar a ocorrência de hemólise e a ativação do sistema complemento confirmaram a hemocompatibilidade do sistema após 4 horas de contato com o sangue.Mestrado em Materiais e Dispositivos Biomédico

Streaming Engagement: How sense of community generates customer engagement?

Dissertation presented as the partial requirement for obtaining a Master's degree in Information Management, specialization in Marketing IntelligenceIn our generation, the feeling of belonging is a feeling we encounter every day because we always achieve to be part of something that everyone does. More and more, this feeling is rising in our generation, and the main reason is the rapid spread of information through social media and the power that social influence has gained. Social media plays an important role in connecting everyone around the world. However, this influence is affecting customers' behaviors, in a way never expected from brands, so their focus has to change because people learn more about things from other people. Nowadays, the target is the communities that will lead and expose others their way, changing the behavior, and recommending things. To reach this scope, this study aims to investigate how the sense of community generates customer engagement. More specifically, how the feeling of belonging in society or in a group can increase and create customer engagement on streaming platforms, and what is the cause of this influence on people

Creative teaching methods in marketing higher education: A case study of a portuguese marketing school

This dissertation investigates the creative teaching methods applied in marketing courses. Its purpose is to understand how marketing higher education institutions can improve the students’ learning experience by using creative teaching methods. A qualitative approach was used, and an exploratory case study was conducted, which contributed to getting a deeper insight into the problem. Data were collected through document analysis, and eleven interviews were conducted with marketing higher education students of IPAM Porto, to understand (1) the creative teaching methods applied in marketing courses, (2) the specific application of each method, (3) their influence on the students’ learning experience, and (4) the improvement of the learning experience of students by innovating methods’ application. The findings of this study can support marketing higher education institutions and teachers understanding how the application of creative teaching methods improves the students’ learning experience. Suitable and contextualized creative teaching methods that promote direct contact with the business world, adaptation to new situations, teamwork, the development of creative skills, and that are seen as a new challenge, enrich the learning experience of students. Due to this study’s approach, the number of interviewees, and the fact that interviews were conducted mainly online, these findings may not be generalized.The high demand for marketers’ creative skills, as well as the lack of studies and depthless understanding of the improvement of the students’ learning experience through the application of creative teaching methods, reveal the relevance of this research