STAT1 en la apoptosis inducida por fludarabina e inhibidores de Jak Kinasas en las celulas de LLC-B : Papel de las celulas adherentes en la apoptosis inducida por fludarabina /

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Utilidad de los biomarcadores para la valoración de los tratamientos en inmunoterapia del cáncer.

El empleo de tratamientos inmunoterápicos contra el cáncer es una alternativa terapéutica cada vez más habitual en la práctica clínica. En concreto, las terapias basadas en el bloqueo de los "immune checkpoints" se presentan como una opción eficaz frente a otros tratamientos más agresivos, tóxicos o que han mostrado resistencias con anterioridad en pacientes con distintos tipos de cáncer. Sin embargo, la efectividad de este tipo de terapias no siempre es la esperada, ya que en ocasiones la tasa de respuesta es escasa. Puesto que se trata de terapias que implican un moderado riesgo de toxicidad y un alto coste, ha surgido la necesidad de desarrollar y validar biomarcadores que permitan predecir en qué pacientes la relación riesgo/beneficio es suficiente como para administrar este tipo de tratamientos. A lo largo de este trabajo de revisión se valorarán los biomarcadores predictivos de respuesta y los biomarcadores de resistencia más importantes desarrollados en la actualidad, su mecanismo de acción, sus ventajas y sus limitaciones. En concreto, en el presente trabajo se analizarán la expresión de PD-L1, la TMB, las alteraciones en el microambiente tumoral por la variación en las concentraciones de IFN-γ, LDH, IDO1, los linfocitos T CD8+ y las mutaciones concretas de algunos oncogenes.<br /

Síndrome de liberación de citoquinas. ¿Qué es y cómo manejarlo?

Se conoce como síndrome de liberación de citoquinas a la hiperinflamación sistémica generada tras una infección, tratamiento o enfermedad en la cual los niveles de citoquinas se elevan de forma desmesurada, produciendo fiebre, cefalea, diarrea, fallo orgánico e incluso muerte.Su diagnóstico y tratamiento temprano es clave en el pronóstico final, para lo cual existen ciertas tablas y guías diagnósticas, así como tratamientos específicos contra las citoquinas principalmente implicadas como la IL-6, IL-1, IL-18, TNF o IFN-ɣ, que serán revisados a lo largo de este trabajo. El tratamiento mayormente utilizado consiste en un tratamiento de soporte según las necesidades del paciente, antibioterapia en caso de infección, y en ocasiones tratamiento inmunomodulador, siendo unos de los más habitualmente empleados los bloqueantes de IL-6.Existen ciertas variaciones, tanto en los criterios diagnósticos como en el tratamiento, en los síndromes de liberación de citoquinas asociados a determinadas patologías como es el caso de ciertas enfermedades autoinmunes o el reciente COVID-19.Este trabajo pretende realizar una revisión del conocimiento actual sobre los principales aspectos del CRS, tanto de forma general como en el contexto de distintas patologías específicas.<br /

Inmunoedición tumoral y sus aplicaciones terapéuticas

La idea de que el sistema inmune puede ejercer control sobre los procesos oncológicos ha sido objeto de debate durante casi un siglo. Data de principios del siglo XX la primera tesis que defendía el rol del sistema inmune en la supresión de tumores. Debió pasar medio siglo para cuando surgiesen líneas de investigación comprometidas con la cuestión que, con altibajos, consolidarían su posición en la comunidad científica con el actual campo de especialización de la Inmuno-Oncología. A día de hoy, reconocemos que el sistema inmunitario juega un importante rol en la prevención del cáncer . Tiene la capacidad de eliminar células neoplásicas, debido a que las células en proceso de degeneración maligna habitualmente expresan conjuntamente ligandos para receptores de células de la inmunidad innata, y antígenos tumorales, que son reconocidos por los linfocitos en la respuesta adaptativa. Esto constituye la hipótesis de la inmunovigilancia. Sin embargo, una de las consignas más desconcertantes, a la par que potentes, del nuevo paradigma de la Inmunología es la dualidad de los resultados derivados de la supervisión inmunológica de los procesos cancerosos. De hecho, el sistema inmune puede facilitar la degeneración neoplásica o modificar la inmunogenicidad de los tumores, como contrapartida a su función preventiva y contenedora sobre el crecimiento tumoral. El descubrimiento de que la inmunidad juega un papel central en la regulación de los eventos neoplásicos ha constituido un hito en la Inmunología. La estrecha relación entre los elementos inmunológicos con las células tumorales y su estroma configura un microambiente tumoral esencial, que en virtud de las cualidades de cada uno de los agentes participantes, determinará la supervivencia o la desaparición de la neoformación El estudio de estos circuitos de relación ha propiciado un interés desmesurado, y enormemente prolífico en materia de investigación, en capitalizar el modelo de la inmunoedición tumoral en nuevos recursos terapéuticos contra el cáncer. La inmunoterapia engloba estrategias pasivas: como la infusión de anticuerpos monoclonales contra dianas específicas (CD20, Her-1, VEGF...), o terapia de linfocitos T adoptivos; estrategias activas: como la vacunación con antígenos asociados a tumores; y la inmunomodulación, que incluye la manipulación de las vías de inhibición de la respuesta inmune donde destacan CTLA-4 y PD-1. Esta última categoría suscita un interés mayor a medida que se describen los mecanismos de evasión tumoral.<br /

Expresión y secreción del ligando mortal TRAIL en células efectoras del sistema inmune

Los ligandos mortales juegan un papel importante en la regulación del sistema inmune. FasL/CD95L es quién realiza la mayor contribución en esta función, mientras que la actuación de Apo2L/ TRAIL no se halla completamente caracterizada. En los linfocitos T activados, ambos ligandos (FasL y TRAIL) se encuentran asociados con vesículas lipídicas denominadas exosomas, que preservan intacto su potencial citotóxico. Estos exosomas conteniendo los ligandos mortales, son almacenados en los cuerpos multivesiculares (MVB) y se secretan rápidamente al medio extracelular tras la re-estimulación de los linfocitos T activados. Se analizó mediante proteómica el contenido proteico de exosomas provenientes de la línea celular Jurkat y de los blastos T, observándose una expresión diferencial en la proteína VCP/p97. Entre los procesos celulares en los que VCP/p97 participa, resulta particularmente interesante su papel en el tráfico vesicular y podría estar involucrada en la diferente secreción de exosomas entre los linfocitos T normales y las células leucémicas. En este trabajo, se utilizó un inhibidor específico de VCP/p97 (DBeQ) con el propósito de profundizar en el papel de esta proteína en el transporte de los exosomas. Se analizó la expresión de TRAIL tanto en los linfocitos T activados como en las células Jurkat, así como su capacidad citotóxica y la de sus sobrenadantes tras el pre-tratamiento con DBeQ. Los resultados obtenidos sugieren que la VCP/p97 está implicada en el tráfico vesicular de las células Jurkat, pero no en el de los linfocitos T activados

DR5 Up-Regulation Induced by Dichloroacetate Sensitizes Tumor Cells to Lipid Nanoparticles Decorated with TRAIL

Cancer resistance to treatments is a challenge that researchers constantly seek to overcome. For instance, TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) is a potential good prospect as an anti-cancer therapy, as it attacks tumor cells but not normal cells. However, treatments based in soluble TRAIL provided incomplete clinical results and diverse formulations have been developed to improve its bioactivity. In previous works, we generated a new TRAIL formulation based in its attachment to the surface of unilamellar nanoliposomes (LUV-TRAIL). This formulation greatly increased apoptosis in a wide selection of tumor cell types, albeit a few of them remained resistant. On the other hand, it has been described that a metabolic shift in cancer cells can also alter its sensitivity to other treatments. In this work, we sought to increase the sensitivity of several tumor cell types resistant to LUV-TRAIL by previous exposure to the metabolic drug dichloroacetate (DCA), which forces oxidative phosphorylation. Results showed that DCA + LUV-TRAIL had a synergistic effect on both lung adenocarcinoma A549, colorectal HT29, and breast cancer MCF7 cells. Despite DCA inducing intracellular changes in a cell-type specific way, the increase in cell death by apoptosis was clearly correlated with an increase in death receptor 5 (DR5) surface expression in all cell lines. Therefore, DCA-induced metabolic shift emerges as a suitable option to overcome TRAIL resistance in cancer cells

Liposomas decorados con Apo2L/TRAIL como tratamiento antitumoral de tumores sólidos

El propósito principal de este trabajo de fin grado consiste en llevar a cabo la purificación de la proteína Apo2L/TRAIL (TRAIL) y unirla a la superficie de nanopartículas lipídicas (LUV-TRAIL) con el objetivo de usarla como tratamiento antitumoral en tumores sólidos, en concreto de colon, para lo cual se utilizó la línea celular HCT-116 y de riñón empleando la línea celular Caki-1. Para ello, se ha llevado a cabo la purificación de dicha proteína, y la generación de las nanopartículas lipídicas y posteriormente se unió la proteína a su superficie para analizar su bioactividad y capacidad como tratamiento antitumoral comparándola con la proteína soluble. Apo2l/TRAIL es un ligando mortal que interaccionan con sus receptores pro-apoptóticos en células tumorales activando la vía extrínseca de la apoptosis e induciendo la muerte de células cancerosas. Por ello, antes de llevar a cabo los ensayos de citotoxicidad se estudió en ambas líneas la expresión de los receptores de Apo2L/TRAIL. Una vez confirmada ésta, se llevaron a cabo estudios de la citotoxicidad de los LUV-TRAIL comparándolos con TRAIL soluble realizando ensayos dosis-respuesta y se analizó la muerte de las células tumorales mediante citometría de flujo y MTT. También se emplearon durante estos experimentos un anticuerpo bloqueante específico de TRAIL; RIK, con el objetivo de demostrar que la muerte inducida por los LUV-TRAIL en dichas líneas se debe específicamente a TRAIL. Para estudiar los cambios morfológicos nucleares que sufren las células tras el tratamiento con los LUV-TRAIL se realizó una tinción nuclear empleando la sonda fluorescente Hoechst y se analizó mediante microscopía de fluorescencia. Se observó en ambas líneas celulares que tras el tratamiento con los LUV-TRAIL se producían los eventos característicos de la apoptosis como la condensación de la cromatina, la fragmentación del núcleo y la formación de burbujas nucleares llamadas “blebs”. Finalmente, para analizar la capacidad de los LUV-TRAIL de inducir apoptosis se analizó su capacidad de activarlas principales caspasas implicadas en la vía extrínseca de la apoptosis. Para ello, se realizó un Western Blot para ambas líneas celulares tratadas con los LUV-TRAIL para analizar la activación de la caspasa 8 y la caspasa 3, y se realizaron experimentos de citotxicidad empleando los inhibidores de caspasas ZVAD (inhibidor general de caspasas) e IETD (inhibidor específico de caspasa 8), con el objetivo de demostrar que la muerte inducida por los LUV-TRAIL en dichas líneas se produce como consecuencia de la activación de caspasas

Cardiovascular mortality and risk behaviours by degree of urbanization before, during and after the economic crisis in Spain

BACKGROUND: To estimate the relationship of the degree of urbanization to cardiovascular mortality and to risk behaviours before, during and after the 2008 economic crisis in Spain. METHODS: In three areas of residence - large urban areas, small urban areas and rural areas - we calculated the rate of premature mortality (0-74 years) from cardiovascular diseases before the crisis (2005-2007), during the crisis (2008-2010 and 2011-2013) and after the crisis (2014-2016), and the prevalence of risk behaviours in 2006, 2011 and 2016. In each period we estimated the mortality rate ratio (MRR) and the prevalence ratio, taking large urban areas as the reference. RESULTS: In men, no significant differences were observed in mortality between the two urban areas, while the MRR in rural areas went from 0.92 [95% confidence interval, 0.90-0.94) in 2005-2007 to 0.94 (0.92-0.96) in 2014-2016. In women, no significant differences were observed in mortality between the rural and large urban areas, whereas the MRR in small urban areas decreased from 1.11 (1.08-1.14) in 2005-2007 to 1.06 (1.02-1.09) in 2014-2016. The rural areas had the lowest prevalence of smoking, obesity and physical inactivity in men, and of obesity in women. No significant differences were observed in smoking or physical inactivity by area of residence in women. CONCLUSION: The pattern of cardiovascular mortality by degree of urbanization was similar before and after the crisis, although in women the excess mortality in small urban areas with respect to large urban areas was smaller after the crisis. The different pattern of risk behaviours in men and women, according to area of residence, could explain these findings.This work was supported by the Instituto de Salud Carlos III (PI16/00455) y el European Regional Development Fund. The funders had neither role in study design, data collection, analysis, decision to publish, nor preparation of the manuscript.S

Caracterización fenotípica y funcional de células natural killer. Implicación en senescencia del sistema inmune y artritis reumatoide

Cada vez más estudios se centran en el papel que juegan las células NK en la inmunosenescencia, así como en patologías de tipo autoinmune como la artritis reumatoide (AR), debido a su función no sólo citotóxica sino también secretora y de inmunoregulación del sistema inmune innato y adaptativo. Este trabajo se ha centrado en el estudio fenotípico y citotóxico de las células NK y su variación con la edad y en el estudio comparativo del fenotipo y citotoxicidad de las células NK de sangre periférica (SP), -representativo de la respuesta inmunológica sistémica-, y de líquido sinovial (LS), -representativo de la respuesta inmunológica local-, de pacientes candidatos a cirugía ortopédica. También se realizó el análisis comparativo de la capacidad citotóxica de las células NK en SP y LS de un paciente de AR. El conocimiento del fenotipo y actividad de células del sistema inmune asociado a la edad podría ser útil para establecer biomarcadores de riesgo inmune para prevención de enfermedades asociadas a la edad. Los resultados obtenidos parecen revelar que las células NK adquieren un fenotipo de “activación temprana” con la edad que no permite la ejecución de su función citotóxica de forma eficiente. Respecto al análisis comparativo entre SP y LS en pacientes candidatos a cirugía ortopédica, los datos sugieren que las células NK en LS muestran un fenotipo “activado” mantenido en el tiempo e “inmunosecretor” con una reducida capacidad citotóxica diferente a las células NK presentes en SP. Este hecho pone de manifiesto la importancia de estudiar una población celular en el entorno en el que realiza su función, ya que no tiene por qué coincidir con lo observado en esa población a nivel sistémico

Estudio de la expresión, secreción y mecanismos inductores de apoptosis de los ligandos mortales en células hematológicas

Apo2L/TRAIL es un ligando mortal inductor de apoptosis vía extrínseca. Entre otras funciones, TRAIL, junto con FasL, son secretados asociados a exosomas y regulan la respuesta inmune. El objetivo de este trabajo ha sido profundizar en el papel de TRAIL en los procesos de regulación del sistema inmune. Se analizó la expresión de este ligando mortal así como su secreción y la contribución de TRAIL expresado en superficie o secretado a la capacidad citotóxica de linfocitos T normales activados obtenidos a partir de sangre periférica antes y después de ser reestimulados, comparándolo con la expresión y secreción en células tumorales de estirpe hematológica. También se analizó el efecto que tiene la inhibición de la proteína VCP (valosin-containing protein) implicada en la secreción de exosomas en células de origen tumoral mediante el uso de un inhibidor específico, DeBQ. Por último, se generaron líneas celulares tumorales de estirpe hematológica provenientes de mieloma múltiple resistentes a TRAIL para profundizar en el estudio de los mecanismos de resistencia que las células tumorales desarrollan frente a este ligando mortal. Se vieron diferencias entre los patrones de expresión de TRAIL en superficie e intracelular entre la línea celular tumoral Jurkat y los linfocitos T normales activados (blastos T) así como entre las subpoblaciones de blastos T CD4+ y CD8+. Se observó que la contribución principal de los ligandos mortales a la citotoxicidad de los blastos T se realiza a través de su secreción asociada a exosomas, sin apenas contribución de los ligandos mortales de superficie. Por último se vio que el inhibidor de la proteína VCP DeBQ utilizado a dosis subtóxica fue capaz de inhibir la expresión de TRAIL en superficie en la línea celular tumoral Jurkat pero no en blastos T, indicando que el DeBQ podría inhibir los mecanismos de transporte de TRAIL a superficie. Finalmente, se vio que uno de los mecanismos de adquisición de resistencia a TRAIL en líneas hematológicas provenientes de mieloma múltiple fue la disminución de la expresión de DR5 (receptor pro-apoptótico de TRAIL) en superficie