Characterization of the major autolysin in Staphylococcus aureus

Para as células bacterianas crescerem e se dividirem, o peptidoglicano sofre clivagem por hidrolases específicas de modo a que novas subunidades possam ser incorporadas na parede celular. A hidrolase mais importante de Staphylococcus aureus, um agente patogénico humano oportunista, é a proteína bifuncional ATL composta por dois domínios, AM e GL, que são processados extracelularmente e se ligam à superfície da bactéria em locais precisos da superfície equatorial. Com base em observações que mostraram que para mutantes de atl, construídos em diferentes linhagens de S. aureus, a formação de biofilme não é em todos prejudicada, colocou-se a hipótese de que os papéis fisiológicos da ATL podem ser específicos da estirpe. Diferentes abordagens foram usadas para caracterizar a proteína ATL em diferentes estirpes de S. aureus: (i) o gene atl foi sequenciado com o intuito de encontrar diferenças de aminoácidos na proteína que poderiam alterar a atividade ou sofrer clivagem proteolítica diferente; (ii) analisou-se o tamanho das diferentes formas processadas do ATL, bem como o compartimento da célula em que o mesmo ocorre; (iii) a expressão de ATL foi analisada ao longo do tempo por Western Blot; (iv) determinou-se o impacto do DNA na atividade lítica do GL em células inativadas, na parede celular e no peptidoglicano, através de ensaios de lise com a proteína purificada GL. Os resultados obtidos permitiram identificar padrões distintos de expressão da proteína de ATL e clivagem proteolítica que pode ser a base para as diferenças fenotípicas primárias.For bacterial cells to enlarge and divide, peptidoglycan must be cleaved by specific hydrolases so that new subunits can be incorporated into the mature cell wall. The most important murein hydrolase of the opportunistic human pathogen Staphylococcus aureus is ATL, a 137.5 kDa bifunctional protein with two domains: AM and GL that are extracellularly processed and bind to the staphylococcal surface at precise locations of the equatorial surface rings. Based on observations that showed that atl mutants, constructed in different S. aureus genetic backgrounds, are not all impaired in biofilm formation, and that the GL-DNA interaction impacts biofilm formation in a strain specific way, we hypothesized that the physiological roles of ATL may be strain-specific. Different approaches were used to characterize ATL in different S. aureus strains: (i) the atl gene was sequenced to identify amino acid differences in the protein that could change its activity or undergo different proteolytic cleavage; (ii) the size of the different ATL processed forms and the cell compartment where they accumulate was assessed; (iii) the expression of ATL was analyzed over time by western blotting; (iv) the impact of DNA on GL lytic activity was determined for heat-inactivated cells, cell wall and peptidoglycan, through lytic assays with the GL purified protein. The results obtained allowed to identify distinct patterns of ATL protein expression and of proteolytic cleavage that may be the basis for the primary phenotypic differences

Creative Technologies for Behaviour Change

behaviour change; motivational interviewing; motivation; physical activity; exercise; qualitative research; computer-assisted therapy; robotics; social robotics; virtual coaching; video coaching; functional imagery trainingThis thesis presents innovative uses of technology to support motivation, using motivational interviewing (MI) and functional imagery training (FIT) scripts developed specifically for remote delivery. MI scripts aimed to develop discrepancy, evoke solutions and promote self-efficacy. FIT scripts included multi-sensory mental imagery exercises at key points in the MI scripts. Four methods of delivery were developed: a human video-counsellor, a NAO robot programmed with Choregraphe software, a video robot counsellor for comparison with the human video-counsellor, and a life-sized two dimensional 'holographic' projection. Four empirical studies tested these developments in participants wanting to become more physically active. Study 1 (N=18) and Study 2 (N=20) used qualitative methods to explore the usability and acceptability of MI delivered by a pre-recorded human video counsellor and NAO robot respectively. Analysis of participants' verbal dialogue with the video counsellor in Study 1 showed high levels of change talk, an important ingredient of effective MI. In both studies, participants reported that voicing their goals aloud was helpful but they were somewhat frustrated by the lack of personalised response. Participants positively appraised the non-judgemental aspect of the interview with the robot. Study 3 tested if virtual FIT would be more acceptable and effective than virtual MI. Ninety-eight participants received FIT or MI delivered by a video robot, and compared to a wait-list control group. In Study 4, 104 participants were randomized to a monologue version of FIT delivered by a human counsellor projected as a two-dimensional life-size hologram, or on a computer screen, or a wait-list control condition. Neither Study 3 or 4 found any quantitative effect of virtual counselling on physical activity, self-efficacy, or motivation. As in studies 1 and 2, although participants found the technological interaction somewhat impersonal, qualitative responses were largely positive: participants liked the opportunity to voice their goals, reported a motivational boost, and perceived the virtual coaches as non-judgmental. This research has shown that people perceive benefits from speaking aloud about their goals and problems, and even engaging silently in imagery-based counselling. There is potential to deliver a brief motivational intervention that is fully-automated and acceptable to participants

Caracterização molecular e funcional de variantes genéticas em factores de transcrição da tiróide em formas familiares de cancro da tiróide

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Humana e Ambiente). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011As formas familiares de carcinomas não-medulares da tiróide (Familial Nonmedullary Thyroid Carcinomas – FNMTC) representam cerca de 5% de todos os casos de cancro da tiróide. Estudos de linkage, que abrangeram todo o genoma, em famílias com FNMTC, permitiram o mapeamento de 7 regiões cromossómicas de susceptibilidade, não tendo ainda sido identificados os genes responsáveis. Genes que codificam factores de transcrição, envolvidos na diferenciação celular durante a embriogénese, quando desregulados podem contribuir para a tumorigénese. Os factores de transcrição NKX2-1, FOXE1, HHEX e PAX8 desempenham um papel crítico na morfogénese da tiróide e na manutenção da diferenciação da tiróide. Estudos de associação demonstraram correlações entre polimorfismos dos genes NKX2-1 e FOXE1 e o risco para o cancro da tiróide esporádico. Recentemente, foi identificada uma mutação germinal no gene NKX2-1, em duas famílias com FNMTC, constituindo a primeira evidência do envolvimento deste gene no cancro da tiróide familiar. Este projecto teve como objectivo o estudo do envolvimento dos factores de transcrição da tiróide em FNMTC. Procedeu-se à pesquisa de variantes genéticas nos genes NKX2-1, FOXE1, HHEX e PAX8, através da sequenciação do DNA constitucional dos probandos de 60 famílias com FNMTC. Nesta série, foram identificadas 15 variantes nos genes FOXE1, HHEX e PAX8. Duas destas variantes, identificadas nos genes FOXE1 (c.743C>G, p.A248G) e HHEX (c.361G>A, p.G121S), não foram descritas na literatura ou em bases de dados de variantes genéticas. Estas variantes segregavam com a doença nas famílias e afectavam resíduos de aminoácidos conservados na evolução, sugerindo que seriam patogénicas. Estudos in vitro demonstraram que a variante p.A248G do gene FOXE1 promovia a proliferação e a migração celular, em clones de células PCCL3. Estudos in silico da variante p.G121S do gene HHEX previram a abolição do donor splice site, que poderá alterar o mecanismo de splicing. Neste estudo, foram identificadas duas variantes genéticas possivelmente patogénicas nos genes FOXE1 e HHEX, que poderão constituir a primeira evidência do envolvimento destes factores de transcrição na susceptibilidade para o cancro da tiróide familiar.The familial forms of nonmedullary thyroid carcinomas (FNMTC) represent about 5% of all cases of thyroid cancer. Genome-wide linkage analyses in families with FNMTC have already mapped 7 chromosomal regions of susceptibility, although the causative genes have not yet been identified. Genes encoding transcription factors involved in cell differentiation during embryogenesis, when deregulated, can contribute to tumorigenesis. The transcription factors NKX2-1, FOXE1, HHEX and PAX8 have a critical role in thyroid morphogenesis and in maintenance of the thyroid differentiation. Association studies have shown a correlation between NKX2-1 and FOXE1 polymorphisms and the risk to develop sporadic thyroid cancer. Recently, a germline mutation in the NKX2-1 gene was identified in two families with FNMTC, representing the first evidence for the involvement of this gene in the susceptibility to familial thyroid cancer. The aim of this project was to study the involvement of thyroid specific transcription factors in FNMTC. We searched for molecular changes, in genes that encode the transcription factors NKX2-1, FOXE1, HHEX and PAX8, in 60 probands from Portuguese families with FNMTC. We identified 15 variants in the FOXE1, HHEX and PAX8 genes. Two of these variants, identified in FOXE1 (c.743C>G, p.A248G) and HHEX (c.361G>A, p.G121S), were not described in the literature or in genetic variants databases. These variants segregated with disease in the families and involved amino acid residues conserved in evolution, suggesting that they were pathogenic. Functional in vitro assays showed that the variant p.A248G in the FOXE1 gene was able to promote cellular proliferation and migration, in PCCL3 clones. In silico studies of variant p.G121S in the HHEX gene predicted the abolition of a donor splice site, which may affect the mechanism of splicing. In this project, two possibly pathogenic variants were identified in the FOXE1 and HHEX genes, which may represent the first evidence of the involvement of these transcription factors in the susceptibility to familial thyroid cancer

Uma Proposta para o Contexto Pedagógico

Atualmente, é cada vez mais imperativo formar jovens em cidadãos leitores. É notória a preocupação das escolas na formação dos alunos e a prova está nos resultados que têm chegado dos estudos que se têm feito. Como tal, cabe aos professores continuar a trabalhar para os resultados serem cada vez melhores. No entanto, um professor não pode trabalhar apenas com o programa que lhe é apresentado. Para a criação de jovens leitores é necessário extravasar o programa, aproximando assim os alunos à realidade que os rodeia. Um aluno não pode ser um jovem leitor se não conhecer os escritores da sua região. É, por isso, essencial levar às salas de aula os autores das regiões, pois um aluno só deveria trabalhar os autores canónicos depois de ter trabalhado aqueles que nasceram na sua cidade. Procedemos ao enquadramento teórico, onde abordamos temáticas como o Cânone, as Literaturas de Margem, a importância dos estudos em literacia, a importância dos mediadores na formação dos jovens e a importância da educação literária. Apresenta-se, ainda, uma proposta para ser levada ao contexto pedagógico sobre uma obra de Marmelo e Silva, bem como a componente prática do estágio pedagógico onde incluímos a descrição da escola onde decorreu o estágio, as turmas atribuídas, a descrição do núcleo de estágio e a descrição do estágio na disciplina de português e na disciplina de espanhol, onde apresentamos um projeto aplicado a uma unidade didática de português e a outra de espanhol, sendo estas unidades propostas no manual.Actualmente, es cada vez más importante formar jóvenes en ciudadanos lectores. Es notoria la preocupación de las escuelas en la formación de los alumnos y la prueba está en los resultados que llegaron de los estudios que se hicieron. Por eso, los profesores tienen el papel de seguir trabajando para que los resultados sean cada vez mejores. Sin embargo, un profesor no puede trabajar sólo con el programa que se le presenta. Para la creación de jóvenes lectores es necesario ir más allá del programa, acercando así a los alumnos a la realidad que los rodea. Un alumno no puede ser un joven lector si no conoce a los escritores de su región. Es, por lo tanto, esencial llevar a las clases a los autores de las regiones, pues un alumno sólo debería trabajar los autores canónicos después de haber trabajado aquellos que nacieron en su ciudad. Procedemos al encuadramiento teórico, donde hablamos temáticas como el Canon, las Literaturas de Margen, la importancia de los estudios en alfabetización, la importancia de los mediadores en la formación de los jóvenes y la importancia de la educación literaria. Se presenta, aun, una propuesta para ser llevada al contexto pedagógico sobre una obra de Marmelo e Silva, así como el componente práctico de la práctica docente, que incluye una descripción de la escuela donde tuvo lugar la formación, las clases repartidas, la descripción del grupo de prácticas y la descripción de las prácticas en la asignatura de portugués y la asignatura de español, donde presentamos un proyecto propuesto aplicado a una unidad de enseñanza del portugués y otra de español, siendo estas unidades propuestas en el manual.Nowadays, it is increasingly imperative to form young people in reading citizens. The school’s concern about the students formation is evident, and the proof of that is in the results that have come from the studies that have been done. So, it is up to teachers to continue working to make better results. However, a teacher can not only work with the program that is presented to him. For the creation of young readers, it is necessary to go beyond the program, bringing the students closer to the reality that surrounds them. A student cannot be a young reader if he does not know the writers of his region. It is, therefore, essential to bring the authors of the students regions to the classrooms, because a student should only work the canonical authors after having worked those who were born in his city. We proceeded to the theoretical framework, where we approached topics such as the Canon, Margin Literatures, the importance of studies in literacy, the importance of mediators in the formation of young people and the importance of literary education. It is also presented a proposal to be taken to the pedagogical context about a work of Marmelo e Silva, as well as the practical component of the pedagogic stage where we include the description of the school where the internship took place, the assigned classes, the description of the nucleus of stage and the description of the internship in the Portuguese and Spanish classes, where we present a project applied to a didactic unit of Portuguese and to another one of Spanish, being these units proposed in the manual

Cuidadores informais de pessoas com Acidente Vascular Cerebral

O Acidente Vascular Cerebral (AVC) é uma síndrome neurológica muito frequente em adultos e idosos, sendo responsável pelo maior índice de incapacidade, dependência funcional e deterioração das capacidades físicas, cognitivas, emocionais e sociais da população portuguesa. Neste sentido, o cuidador detém, um papel fulcral, uma vez que o doente com AVC pode necessitar de apoio para efetuar as atividades relacionadas com o seu autocuidado, bem como requerer uma assistência diferenciada. Este estudo pretende analisar a sobrecarga de cuidadores informais de pessoas com AVC. Participaram no estudo 48 cuidadores, com idades entre 23 e 75 anos (M=49,98; DP=13,259), sendo 39 do género feminino e 9 do sexo masculino. Os instrumentos utilizados foram Questionário Sociodemográfico; Escala de Atividades de Vida Diária (Center for the Study of Aging and Human Development, 1972 adaptado para a população Portuguesa por Rodrigues, 2008); Questionário de Avaliação da sobrecarga do Cuidador Informal (Martins, Ribeiro & Garrett, 2003) e Escala de Satisfação com a Vida (Diener, Emmons, Larsen & Griffin, 1985 adaptado para a população Portuguesa por Simões, 1992). Os resultados destacam que os cuidadores que cuidam mais de 16 horas da pessoa dependente com AVC apresentam uma média superior (M=95,75; DP=20,57) à das pessoas cuidam menos tempo, sendo estas diferenças estatisticamente significativas (p=0,000). Constatou-se, também, que os indivíduos com problemas de sono têm um nível de sobrecarga média (M=93,29; DP=22,46) superior ao dos cuidadores sem problemas de sono (M=73,23; DP=16,57), sendo estas diferenças estatisticamente significativas (p=0,002). A análise da relação entre a satisfação com a vida e a sobrecarga física, emocional e social indicou uma correlação negativa moderada e estatisticamente significativa (r= - 0,564; p=0,000) entre estas dimensões. Os resultados alertam, assim, para a existência de possíveis fatores de risco relacionados com a sobrecarga dos cuidadores e para a sua relação com a satisfação com a vida. Estes resultados sugerem a necessidade de estratégias/mecanismos de apoio aos cuidadores informais de pessoas com AVC.The stroke is a very frequent neurological syndrome in adults and the elderly, being responsible for the highest percentage of incapacity, functional dependency and deterioration of physical, cognitive, emotional and social ability of the Portuguese population. In this sense, the caregiver has a crucial role, since the patient with stroke may require assistance to perform activities related to self-care, as well as require a differentiated assistance. This study aims to analyze the overload of informal caregivers of people with stroke. Participated in the study 48 caregivers, aged between 23 and 75 years (M=49,98; SD=13,259), being 39 female and 9 male. The instruments used were Sociodemographic Questionnaire; Scale of daily life activities (Center for the Study of Aging and Human Development, 1972 adapted for Portuguese population by Rodrigues, 2008); Questionnaire for evaluating the Informal Caregiver overload (Martins, Ribeiro & Garrett, 2003) and Scale of Satisfaction with Life (Diener, Emmons, Larsen & Griffin, 1985 adapted for the Portuguese population by Simões, 1992). The results highlight that the caregivers who care for more than 16 hours of the dependent person with CVA have a higher mean (M = 95.75, SD = 20.57) to the people who care less time, being these differences statistically significant (p = 0.000). It was found also that individuals with sleep problems have a medium level of overload (M = 93.29, SD = 22.46) higher than caregivers without sleep problems (M = 73.23; DP = 16.57), being these differences statistically significant (p = 0.002). The analysis of the relation between satisfaction with life and physical, emotional and social overload indicated a moderate and negative statistically significant correlation (r =-0.564; p = 0.000) between these dimensions. The results alert to the existence of possible risk factors relating to the overhead of caregivers and to your relation with life satisfaction. These results suggest the need for strategies / mechanisms for supporting informal caregivers of people with CVA

Determinantes da contabilidade criativa e seu impacto na qualidade da informação financeira e no sucesso da tomada de decisão

Creative accounting is known and applied worldwide. However, its practice can have consequences for financial reporting and economic decision-making. On the other hand, there are several factors that contribute to the development of creative accounting. In this context, this research aims to analyze whether the individual characteristics of the manager (gender, age, education, professional experience, religion and ethical attitude) influence the practice of creative accounting. In addition, it aims to analyze whether the practice of creative accounting has an impact on the quality of financial information and, consequently, on the success of decision-making. The methodology used in this study is quantitative in nature. An online survey was applied to managers of Portuguese companies. Structural equation model is used to analyze the relationship between variables. The results indicate that managers who have more academic qualifications, more years of professional experience and ethical attitude are the most reluctant to practice creative accounting, those who have access to quality financial information and those who make successful economic decisions. This study will contribute to the enrichment of the literature in the sense that it identifies the factors that influence the practice of creative accounting and its impact on the quality of financial information as well as on successful decision making. The results of this research are also important for the practice, i.e., for companies, because it identifies the characteristics of managers who are more averse to the practice of creative accounting, with a consequent positive impact on the reporting of financial information and decision-making, and for entities working towards accounting standardization, because it suggests the need to change accounting standards in order to reduce the practice of creative accounting.A contabilidade criativa é conhecida e aplicada a nível mundial. No entanto, a sua prática pode ter consequências ao nível do reporting financeiro e tomada de decisões económicas. Por outro lado, existem diversos fatores que contribuem para o desenvolvimento de contabilidade criativa. Neste contexto, esta investigação visa analisar se as características individuais do gestor (género, idade, habilitações académicas, experiência profissional, religião e atitude ética) influenciam a prática de contabilidade criativa. Além disso, pretende analisar se a prática de contabilidade criativa tem impacto na qualidade da informação financeira e, consequentemente, no sucesso da tomada de decisão. A metodologia utilizada neste estudo é de natureza quantitativa. Um inquérito online foi aplicado aos gestores de empresas portuguesas. O modelo de equações estruturais é usado para analisar a relação entre as variáveis. Os resultados indicam que os gestores que possuem mais habilitações académicas, mais anos de experiência profissional e atitude ética são os mais reticentes à prática de contabilidade criativa, os que têm acesso a informação financeira de qualidade e os que tomam decisões económicas com sucesso. Este estudo contribuirá para o enriquecimento da literatura, no sentido de que identifica os fatores que influenciam a prática de contabilidade criativa e o seu impacto na qualidade da informação financeira, bem como no sucesso da tomada de decisão. Os resultados desta investigação são também importantes para a prática, isto é, para empresas, porque identifica as características dos gestores que são mais avessas à prática de contabilidade criativa, com consequente impacto positivo no reporting de informação financeira e tomada de decisão, e para entidades que trabalham em prol da normalização contabilística, pois sugere a necessidade de se alterar o normativo contabilístico no sentido de se fazer reduzir a prática de contabilidade criativa