Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Quantification of ARID1A in Tissue Lysates

ARID1A is a subunit of the mammalian SWI/SNF complex, which is thought to regulate gene expression through restructuring chromatin structures. Its gene ARID1A is frequently mutated and ARID1A levels are lowered in several human cancers, especially gynecologic ones. A functional ARID1A loss may have prognostic or predictive value in terms of therapeutic strategies but has not been proposed based on a quantitative method. Hardly any literature is available on ARID1A levels in tumor samples. We developed an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for ARID1A based on the current EMA and FDA criteria. We demonstrated that our ELISA provides the objective, accurate, and precise quantification of ARID1A concentrations in recombinant protein solutions, cell culture standards, and tissue lysates of tumors. A standard curve analysis yielded a ‘goodness of fit’ of R2 = 0.99. Standards measured on several plates and days achieved an inter-assay accuracy of 90.26% and an inter-assay precision with a coefficient of variation of 4.53%. When tumor lysates were prepared and measured multiple times, our method had an inter-assay precision with a coefficient of variation of 11.78%. We believe that our suggested method ensures a high reproducibility and can be used for a high sample throughput to determine the ARID1A concentration in different tumor entities. The application of our ELISA on various tumor and control tissues will allow us to explore whether quantitative ARID1A measurements in tumor samples are of predictive value

Electric field effects on proteins Novel perspectives on food and potential health implications

Electric fields (EF) technologies have been establishing a solid position in emergent food processing and have seen as serious alternatives to traditional thermal processing. During the last decades, research has been devoted to elucidation of technological and safety issues but also fundamental aspects related with interaction of electric fields (EF) with important macromolecules, such as proteins. Proteins are building blocks for the development of functional networks that can encompass health benefits (i.e. nutritional and bioactive properties) but may be also linked with adverse effects such as neurodegenerative diseases (amyloid fibrils) and immunological responses. The biological function of a protein depends on its tridimensional structure/conformation, and latest research evidences that EF can promote disturbances on protein conformation, change their unfolding mechanisms, aggregation and interaction patterns. This review aims at bringing together these recent findings as well as providing novel perspectives about how EF can shape the behavior of proteins towards the development of innovative foods, aiming at consumers health and wellbeing.This study was supported by the Portuguese Foundation for Science and Technology (FCT) under the scope of the strategic funding of UID/ BIO/04469/2019 and UIDB 50006/2020 with funding from FCT/ MCTES through national funds, BioTecNorte operation (NORTE-01- 0145-FEDER-000004) funded by the European Regional Development Fund under the scope of Norte2020 - Programa Operacional Regional do Norte. This work was also supported by the projects AlleRiskAssess – PTDC/BAA-AGR/31720/2017 and NORTE-01-0145-FEDER-031720. Zita Avelar acknowledge the Foundation for Science and Technology (FCT) for its fellowship SFRH/BD/146347/2019info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Untersuchungen zur Biokompatibilität eines gepulsten 532 nm-Nd:YVO4-Lasers anhand humaner dermaler Fibroblasten

Einleitung: Die optische Stimulation des Hörorgans unter Ausnutzung des optoakustischen Effekts ist zentraler Schwerpunkt unserer Arbeitsgruppe.Im Tierversuch (TV) konnten wir bei optischer Stimulation des Trommelfells mittels gepulstem 532 nm-Nd:YVO4-Laser eine frequenzspezifische Aktivierung der Hörbahn zeigen. Methoden: Zur Untersuchung hinsichtlich der Biokompatibilität bestrahlten wir humane dermale Fibroblasten (NHDF) über eine Dauer von 120 Sekunden mit den von uns im TV maximal applizierten Laserparametern (Pulsrate: 32kHz; Modulationsraten: 2,4,8,10,12 kHz).Zu jeder Kultur wurde jeweils eine unbehandelte Kontrolle angelegt. Eine Positivkontrolle (PC) wurde durch den Einsatz eines optischen Filters generiert.Die Zellviabilität (ZV) wurde photometrisch mittels Water Soluble Tetrazolium-1-Assay und fluoreszenzmikroskopisch hinsichtlich Induktion von Apoptose und Nekrose mittels Annexin-V-, Ethidium-Homodimer-III und Hoechst 33342-Färbung untersucht.Eine Positivkontrolle für Apoptosen wurde mittels Staurosporin erzielt.Ergebnisse: Die Untersuchungen zeigten bei allen im TV eingesetzten Laserparametern keinen signifikanten Unterschied bezüglich der ZV zwischen bestrahlter und unbehandelter Kultur, während erste ZV-Einschränkungen bei durchgehender pulsierter Bestrahlung ab 125 mW beobachtet wurden. Nekrosen konnten ab 125 mW fluoreszenzmikroskopisch nachgewiesen werden, während sich selbst bei maximalen Laserintensitäten keine Apoptosen zeigten.Schlussfolgerungen: Die Ergebnisse legen nahe, dass diese Effekte thermischer Art und jeweils abhängig von der in das Gewebe eingebrachten Energie pro Puls sind.Welche Wellenlängen und Energien die optimale Stimuationsstrategie für optische Hörprothesen bietet, ist Gegenstand unserer weiteren geplanten Untersuchungen.Unterstützt durch: Die Forschungsarbeiten, die zu diesen Ergebnissen geführt haben, wurden gemäß der Finanzhilfevereinbarung Nr. [311469] im Zuge des Siebten Rahmenprogramms der Europäischen Union (RP7/2007-2013) gefördert.Der Erstautor gibt keinen Interessenkonflikt an