MicroRNA involvement in breast cancer susceptibility and progression

RESUMO: Os microRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs não codificantes com função reguladora que regulam a expressão génica ao ligar-se a sequências específicas na região 3’ UTR dos mRNAs. Diversos estudos mostraram que os miRNAs regulam mecanismos fundamentais para o normal funcionamento celular, como crescimento celular, proliferação, diferenciação e apoptose. A expressão de alguns miRNAs é alterada em diversos tipos de cancro, nomeadamente em cancro da mama. Estudos de análise funcional em linhas celulares mostraram que os miRNAs podem funcionar como supressores de tumor ou ter actividade oncogénica. Assim, o valor clínico dos miRNAs como potenciais marcadores para cancro da mama está a ser amplamente estudado de momento. No entanto, apenas se conhecem efeitos de alguns miRNAs. A maior dificuldade, neste âmbito, depreende-se com a identificação de possíveis alvos com relevância biológica para cancro da mama. Visto que os programas bioinformáticos predizem um elevado número de falsos positivos e falsos negativos, é de extrema importância identificar experimentalmente alvos relevantes. Nesta tese procuramos explorar diferentes abordagens da influência de miRNAs em cancro da mama. Começamos por estudar os mecanismos que estão por trás da regulação dos próprios miRNAs. Colocámos a hipótese de serem mecanismos epigenéticos, tais como a metilação de citosinas no DNA, que estão a influenciar os níveis de expressão dos miRNAs. Para tal, tratámos linhas celulares de mama com um agente capaz de desmetilar o DNA e verificámos que os níveis de miRNAs são alterados. Contudo, não conseguimos encontrar uma associação entre a metilação de ilhas CpG nas regiões promotoras dos genes que codificam para os miRNAs. No entanto, não podemos excluir a possibilidade de os níveis de expressão de miRNAs estarem a ser regulados por metilação das suas zonas promotoras, dado que não estudámos todas as regiões promotoras existentes. De seguida, abordámos a influência de dois miRNAs, miR-200c e miR-203, na resistência para fármacos dirigidos a cancro da mama, nomeadamente, Paclitaxel e 5-fluoruacil. Para tal fizemos expressar ambos os miRNAs na linha celular MDA-MB-231 e inibir os mesmos na linha celular MCF-7. Infelizmente não fomos capazes de encontrar significado estatístico nos resultados obtidos. Contudo pudemos concluir que o miR-200c parece ter um efeito contrário nas linhas MCF-7 e MDA-MB-231 no que diz respeito ao tratamento com Paclitaxel e o miR-203 parece aumentar a resistência para o mesmo comporto na linha celular MDA-MB-231. O tratamento com 5-fluoruacil não mostrou qualquer diferença em ambas as linhas. Dado que os estudos in vitro, nesta área, devem ser transpostos para humanos e/ou tecidos humanos, seguidamente procurámos estudar os níveis de expressão do miR-200c e do miR-203 em tecido tumoral mamário, bem como a expressão de dois alvos hipotéticos encontrados utilizando ferramentas bioinformáticas, SIX1 e SOX2. Relativamente ao miR-200c, não encontrámos quaisquer diferenças entre tecido normal e tecido tumoral de mama, nem conseguimos relacionar este miRNA com características clinicopatológicas. Comparativamente detectaram-se diferenças para o miR-203 e conseguimos relacionar este com os estadios iniciais de desenvolvimento tumoral. Conseguimos também demonstrar que o miR-203 pode ser um potencial marcador para discriminar os tumores lobulares invasivos. No que diz respeito à expressão do SOX1 e SOX2, observámos que ambos possuem uma incidência baixa na nossa população e que não se associam com a expressão dos miRNAs em estudo. Por último, procurámos validar alguns alvos do miR-200c e do miR-203. Para tal, efectuámos um estudo comparativo de proteómica, onde fizemos expressar o miR-200c e o miR-203 na linha celular MDA-MB-231 e inibimos os mesmos miRNAs na linha celular MCF-10A. Este estudo exploratório, ainda por terminar, revelou aproximadamente 3000 proteínas diferentemente expressas nas linhas celulares. No entanto, até ao momento conseguimos reduzir esta vasta lista para uma menor com aproximadamente 10 proteínas para cada linha celular. De futuro, serão seguidas outras abordagens para validar estes alvos hipotéticos. Devido ao facto da população recolhida ser recente, o seguimento clínico nos próximos anos permitirá tirar algumas conclusões relativas à resistência à terapia utilizada e a sua relação com a expressão dos miRNAs em estudo.ABSTRACT: MicroRNAs (miRNAs) are small non-coding regulatory RNAs that modulate gene expression by binding to their target mRNAs. By these means, miRNAs control normal rates of all major cellular pathways. A subset of miRNAs, which are differentially detected between normal and tumour tissue samples, has been identified in breast cancer, and functional analysis in cell line systems has revealed tumour suppressive and oncogenic functions of some of these miRNAs. Hence, the clinical value of these as novel biomarkers for cancer is being actively investigated. However, the function of only a few of these miRNAs in breast cancer has been investigated. One major difficulty is the identification of target mRNAs and proteins with biological significance in breast cancer and consequently the identifications of the pathways they influence. Given the relatively high rates of both false-positives and false-negatives from current miRNAs targets prediction programs, it is critically important to experimentally identify relevant miRNAs targets and the pathways involved in carcinogenesis. In this thesis our main goal was to study the role of miRNAs in breast cancer. Thus, we started by addressing the mechanisms behind regulation of miRNAs expression levels. We hypothesized if that epigenetic mechanisms, such as DNA methylation, could influence miRNAs expression levels. Therefore, we treated breast cell lines with demethylating agents and observed that miRNAs expression levels were altered. However, we failed to prove a direct correlation between the methylation of CpG islands in promoter regions of the miRNAs studied and their expression. Nevertheless, we cannot exclude the possible regulation of miRNAs levels by methylation since we did not study all possible promoter regions of miRNAs genes as their promoter regions have not been fully identified. Next, we addressed the possible effect of miRNAs in breast cancer therapy resistance. For that, we treated breast tumour cell lines with Paclitaxel and 5-fluoruacil, two known chemotherapeutics used in breast cancer, with the ectopic expression or inhibition of miR-200c and miR-203. Unfortunately, we did not find any statistical difference between untreated and treated cells. However, miR-200c seems to have contrary effects in MCF-7 and MDA-MB-231 cells regarding treatment with Paclitaxel and miR-203 seem to augment resistance to Paclitaxel in MDA-MB-231 cells. Both miRNAs did not show any effect in cells treated with 5-Fluoruacil. Since in vitro studies, always lack studies using human tissues. We subsequently studied the expression levels of miR-200c and miR-203 in breast tumour tissues and two putative targets found by bioinformatics tools, SIX1 and SOX2. Concerning miR-200c, we did not detect significant differences between normal breast and tumour tissues in our population. Additionally, we failed to correlate miR-200c with clinicopathological features. Regarding miR-203, we detect statistically differences between normal and tumour tissue and it seems that miR-203 is involved in breast cancer development, mainly in early stages of development. We also show that miR-203 might be a potential marker to discriminate stages in invasive lobular carcinoma. About the expression levels of SIX1 and SOX2, we observe relatively low levels of both proteins through immunohistochemistry and do not found any statistically difference between their expression and their regulators, miR-200c and miR-203. Finally, we address the validation of putative targets of the miR-200c and miR-203. Thus, we conducted a comparative proteomic study to find differently expressed proteins when miR-200c and miR-203 were ectopically expressed or inhibited in breast cell lines. This exploratory study, until now, revealed a small list out of approximately 3000 proteins that are putative targets of both miRNAs and are differently expressed. Further studies will be conducted in order to validate these putative targets. With this thesis, we believe we provide new insight into the involvement of miRNAs in breast cancer and also important knowledge of how miRNAs levels are being regulated and also in the discovery of new targets. We also gathered a considerable study population during this thesis, which allow future correlations on therapy outcomes and survival with the biomarkers studied

Otimização de um processo de tingimento com corantes naturais

Dissertação de mestrado integrado em Engenharia TêxtilHoje em dia, é notória uma evolução do mercado têxtil que procura adaptar-se às necessidades que aparecem constantemente. Como tal, o setor de beneficiamento de tecidos, no qual se inclui o tingimento, é um dos mais impactantes da indústria têxtil, em função da grande quantidade de água e produtos químicos usados durante todo este processo. Para colmatar este problema, o mercado tem manifestado um crescente interesse em agregar valor às matérias têxteis com produtos naturais. O tingimento natural apresenta-se como uma ótima alternativa para a inserção de práticas sustentáveis na cadeia têxtil, uma vez que utiliza corantes naturais que são renováveis, biodegradáveis e não tóxicos. Por conseguinte, o presente estudo tem como principal objetivo a otimização de tingimentos com corantes naturais nos quais se obtenham bons resultados de solidez à luz, solidez à lavagem, solidez às lavagens múltiplas e solidez à fricção a seco e a húmido. Visando atingi-lo, procedeu-se à otimização de um processo de tingimento que permitisse a obtenção de substratos têxteis tingidos uniformemente e com as características relativas à solidez supramencionadas. Numa primeira fase, foi escolhido um corante natural obtido através das folhas da amoreira, sendo este utilizado em todos os tingimentos efetuados neste estudo. Posteriormente, foram estudados quais os fatores que seriam alterados durante o processo de tingimento. Para aumentar a afinidade entre as fibras têxteis e a molécula de corante estudou-se um processo de cationização utilizando sais de amónio quaternário, que foi, em seguida, comparado com um processo utilizando o mordente alúmen de potássio e de seguida o mordente sumagre. Visando a melhoria dos resultados obtidos, foi estudada a possibilidade de incrementar algumas etapas pós-tingimento no sentido de melhorar a solidez à luz e a solidez à lavagem. Os estudos realizados permitiram a avaliação das propriedades de maior interesse como o rendimento colorístico, uniformidade do tingimento obtido, resultados da solidez à luz e resultados de solidez às lavagens múltiplas. A análise destes resultados revelou que o tingimento a pH alcalino, a baixa temperatura (30ºC), com 5% do fixador catiónico foi o que obteve melhores resultados.Nowadays, there is a notorious evolution in the textile market which seeks to adapt itself to the needs that constantly arise. As such, the sector of fabric processing, in which dyeing is included, is one of the most impacting in the textile industry, due to the large amount of water and chemical products used throughout this process. To overcome this problem, the market has shown a growing interest in adding value to textile materials with natural products. Natural dyeing presents itself as an excellent alternative for the implementation of sustainable practices in the textile chain, since it uses natural dyes which are renewable, biodegradable and non-toxic. Thus, this study’s main goal consists of the optimization of dyeing with natural dyes which obtain satisfactory results regarding light fastness, fastness to washing, fastness to multiple washings and fastness to both dry and wet rubbing. Aiming to achieve this, a dyeing process was optimized to obtain uniformly dyed textile substrates with the aforementioned fastness characteristics. In an initial stage, a natural dye obtained from mulberry leaves was chosen, and it was used in all the dyeing processes carried out in this study. Afterwards, the factors that would be altered during the dyeing process were studied. In order to increase the affinity between the textile fibres and the dye molecule, a cationization process was studied using quaternary ammonium salts. This was subsequently compared to a process using the mordant potassium alum and then the mordant sumac. Aiming towards the improvement of the results obtained, the possibility of increasing some post-dyeing steps was studied so as to improve the light fastness and the fastness to washing. The studies performed allowed the evaluation of the most noteworthy properties, such as colour yield, uniformity of the dyeing obtained, light fastness results and multiple wash fastness results. The analysis of these results revealed that the dyeing at alkaline pH, at a low temperature (30ºC), with 5% of the cationic fixative was the one which obtained the best results

Contencioso eleitoral - uma análise em direito comparado - Portugal versus Brasil

O tema Contencioso Eleitoral é de enorme importância para os países democráticos no período contemporâneo. A presente tese busca deliberar, à luz da Teoria Geral do Direito Constitucional Eleitoral e do Direito Comparado, como funcionam os sistemas eleitorais no Brasil e em Portugal para, a partir disso, efetuar uma análise da atuação do Estado - Poder Judiciário e Órgãos Administrativos Eleitorais - enquanto responsáveis pelos julgamentos de requerimentos e ações durante as eleições. A experiência comparada tem o desígnio de avaliar o organograma de competência processual eleitoral em ambos os países, esquadrinhando individualmente os remédios previstos em ambas as legislações, de modo a ponderar os meios e limites para a atuação do Estado. Nesse ponto, mister indicar a forma jurídica que compatibiliza a evolução do direito eleitoral processual e a preservação da segurança jurídica nas eleições, apontando os fundamentos legais e constitucionais, e a eficácia para que seja atingido o objetivo fim: eleições céleres, justas e isonômicas. Defende-se, por conseguinte, tendo em vista que o direito processual eleitoral tenha seus baluartes oriundos majoritariamente das Constituições de ambos os países, a legislação infraconstitucional assume uma grande importância no regimento das eleições, assumindo o papel de regulamentadora das normas e postulados constitucionais. Em face dessas constatações, apresenta-se a necessidade de que hajam reformas e adaptações nas constituições e legislações a fim de que ambos os países - Brasil e Portugal - se adaptem à realidade moderna

Partidos políticos e compliance

Divulgação dos SUMÁRIOS das obras recentemente incorporadas ao acervo da Biblioteca Ministro Oscar Saraiva do STJ. Em respeito à Lei de Direitos Autorais, não disponibilizamos a obra na íntegra.Localização na estante: 342.8:343.352 C837

O palco confinado: a virtualização do teatro durante a pandemia do COVID-19

Está dissertação investiga o fenómeno ocorrido ao longo da pandemia do COVID-19, no qual diversos estabelecimentos foram forçados a encerrar suas atividades por mais de uma vez. Neste período a incerteza pairou e possibilitou alguns fenómenos, entre eles: a liberação massiva dos mais diversos acervos em vídeo de encenações dos mais diversos coletivos e instituições teatrais e a inserção massiva da construção cénica no ecrã, fosse pelo acervo liberado ou pelas novas produções realizadas. Se o teatro-filmado era algo mal visto pela classe artística, o teatro online tornou-se discussão quase que obrigatória pelos trabalhadores da cultura e levou alguns a experimentarem esta linguagem que a internet possibilitou dentro da impossibilidade do encontro físico, in loco. Se é ou não teatro, é uma questão que esta pesquisa não busca responder. O que se busca nas próximas páginas é investigar aquilo que foi feito neste período pandémico, as diferenças entre as grandes e pequenas estruturas e como estas produções buscaram preservar a teatralidade que o vídeo e a internet são capazes de proporcionar.The objective of this paperwork is to understand the phenomena that occurred during the COVID-19 pandemic, in which several establishments were forced to close their activity more than once. In this period uncertainty hovered and enabled some phenomena like the liberation of several video catalog of plays from many theatrical groups and cultural institutions, and also the massive entering of the theatrical making into the screen, by the vídeo catalog or by the new theatrical productions that were made. If filmed-theater was something disliked for the theatrical class, the online theatre became an almost mandatory discussion among the cultural workers and made some artists try this way that internet made possible in the impossibility of the physical meeting, in loco. If it is or isn´t theater, that is a question this work will not answer. What this work investigates in the next pages is what was made in this pandemic period, the difference between big and small structures, and how these productions try to preserve the theatricality that video and the internet are capable of

O vazio como gerador de projeto

No ano letivo de 2018-2019 durante o primeiro semestre da unidade curricular de projeto V foi elaborado o projeto “Construir o Molde”, que mais tarde se submeteu a concurso “Prémio Universidades Trienal de Lisboa Millennium bcp” organizado pela Trienal de Arquitetura de Lisboa. Este concurso, já concluído, teve como finalidade projetar um Centro Comunitário e Interpretativo para Marvila, Lisboa. Neste projeto eram requeridas duas escalas relacionadas com o local de intervenção: I) a escala coletiva, estando esta dentro de uma dimensão metropolitana específica da condição futura do local; II) uma escala comunitária, esta numa dimensão doméstica, tendo especial atenção com a dimensão humana. O projeto entregue formou-se com base nessas mesmas escalas, apresentando-se num objeto que cria dois espaços distintos, um direcionado para a comunidade, estando ela focada com as necessidades do dia-a-dia dos seus residentes e outro mais focado no programa mais específico da escala coletiva. Fruto desta escolha de escalas sobre o local de intervenção aliada a uma perceção, por parte do autor desta dissertação de o programa definido não ser o mais adequado, procurou-se perceber, o motivo da escolha destas mesmas escalas por parte da Trienal de Arquitetura de Lisboa e averiguar se o projeto realizado correspondia a estes pressupostos, a partir de uma análise mais rigorosa sobre o lugar, a posteriori. O tema do vazio teve um papel relevante na conceção deste projeto, funcionando como matriz geradora do conceito, criando um volume que define vários espaços, numa abordagem semelhante à criação de moldes. Assim, com esta dissertação, perspetiva-se uma análise às potencialidades do espaço vazio e explorar como este pode ser parte integrante na conceção do projeto de arquitetura. Para isso, são analisados autores e projetos onde o vazio é parte integrante nos seus conceitos, explorando também a componente conceptual de um projeto de arquitetura, focando algumas das diferentes formas de o abordarIn the academic year 2018-2019 during the first semester of project unit V, the project “Construir o Molde” was prepared, which was later submitted to the competition “Prémio Universidades Trienal de Lisboa Millennium bcp” organized by the Lisbon Architecture Triennale. This contest, already concluded, aimed to design a Community and Interpretive Center for Marvila, Lisbon. In this project, two scales related to the intervention site were required: I) the collective scale, which is within a specific metropolitan dimension of the future condition of the site; II) a community scale, this in a domestic dimension, paying special attention to the human dimension. The project delivered was based on these same scales, presenting itself in an object that creates two distinct spaces, one directed to the community, focused on the daily needs of its residents and another focused on the program more specific to the collective scale. As a result of this choice of scales on the place of intervention allied to a perception by the author of this dissertation that the defined program is not the most appropriate, we tried to understand the reason for choosing these same scales by the Architecture Triennale of Lisbon and find out if the project carried out corresponded to these assumptions, from a more rigorous analysis of the place. The theme of emptiness played a relevant role in the conception of this project, functioning as a generating matrix of the concept, creating a volume that defines several spaces, in a similar approach to the creation of molds. Thus, with this dissertation, we analyze the potentialities of empty space and explore how it can be an integral part in the design of the architectural project. For this, authors and projects are analyzed where emptiness is an integral part of their concepts, also exploring the conceptual component of an architecture project, focusing on some of the different ways of approaching it

Direito regulatório: desafios e perspectivas para a Administração Pública

- Divulgação dos SUMÁRIOS das obras recentemente incorporadas ao acervo da Biblioteca Ministro Oscar Saraiva do STJ. Em respeito à Lei de Direitos Autorais, não disponibilizamos a obra na íntegra.- Localização na estante: 35.08(81) D598r- Coordenado por: Reynaldo Soares da Fonseca e Daniel Castro Gomes da Costa

Localization and navigation of an omnidirectional mobile robot: the robot@factory case study

The Robot@Factory competition was recently included in Robotica, the main Portuguese Robotics Competition. This robot competition takes place in an emulated factory plant, where Automatic Guided Vehicles (AGVs) must cooperate to perform tasks. To accomplish their goals, the AGVs must deal with localization, navigation, scheduling and cooperation problems that must be solved autonomously. This robot competition can play an important role in education due to its inherent multidisciplinary approach, which can motivate students to bridge different technological areas. It can also play an important role in research and development, because it is expected that its outcomes will later be transferred to real-world problems in manufacturing or service robots. By presenting a scaled-down factory shop floor, this competition creates a benchmark that can be used to compare different approaches to the challenges that arise in this kind of environments. The ability to alter the environment, in some restricted areas, can usually promote the test and evaluation of different localization mechanisms, which is not possible in other competitions. This paper presents one of the possible approaches to build a robot capable of entering this competition. It can be used as a reference to current and new teams.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

LUDICIDADE E EDUCAÇÃO PSICOMOTORA: CONTRIBUIÇÕES DE UM ESTADO DO CONHECIMENTO PARA AS AULAS DE EDUCAÇÃO FÍSICA ESCOLAR

Esta é uma pesquisa bibliográfica que objetivou compreender o atual estado do conhecimento científico da ludicidade como componente nuclear da educação psicomotora nas séries iniciais do ensino fundamental e, para atingi-lo, utilizou-se das etapas de construção do Estado do Conhecimento, propostas por Morosoni (2015). Foram explorados os bancos de dados: Google Scholar, Scielo, BDTD, Portal de Periódicos da Capes e 48 Revistas Quallis Capes da área da Educação Física. Utilizou-se Bardin (2011) para a análise dos textos, sendo produzidas as categorias: 1) Ludicidade e educação psicomotora - possíveis aprendizagens; e 2) O professor e a educação física na construção de uma educação psicomotora lúdica. Concluiu-se que uma educação psicomotora lúdica na escola se torna relevante quando o professor de educação física planeja, organiza e excuta atividades lúdicas voltadas para o desenvolvimento integral dos escolares, utilizando novas metodologias e didática

Visceral leishmaniasis : retrospective study on factors associated with lethality

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral é um problema de saúde pública, com grau de letalidade alcançando 10%. Para o tratamento medicamentoso, é recomendado o antimoniato de metilglucamina. Este estudo tem como objetivo avaliar o uso de medicamento em casos de leishmaniose visceral atendidos no Serviço de Infectologia do Núcleo de Hospital Universitário de Campo Grande Estado do Mato Grosso do Sul. MÉTODOS: Para coleta de dados, foram pesquisados prontuários de 76 pacientes com diagnóstico de leishmaniose visceral atendidos pelo Serviço de Infectologia do Hospital Universitário de Campo Grande. RESULTADOS: Foram analisados prontuários de 76 (28,9%) pacientes (56 homens e 20 mulheres) apresentavam comorbidades. Como droga de 1ª escolha, 88,2% dos pacientes utilizaram o antimoniato-N-metil glucamina com evolução para óbito de 18,4%. A análise de sobrevida mostrou diferença estatisticamente significativa em pacientes com e sem comorbidades (p< 0,0001) e com comorbidade que fizeram uso de Glucantime® (p <0,0009). A letalidade de 18,4% sinaliza ineficiência das medidas de assistência a saúde adotadas. CONCLUSÕES: Os resultados sugerem que o prognóstico da doença torna-se ruim quando associado à presença de comorbidades e que o tratamento deve ser criterioso, para minimizar a letalidade._________________________________________________________________________________ ABSTRACTINTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a public health problem, with lethality reaching 10%. The recommended drug treatment is methylglucamine antimoniate. This study aimed to evaluate drug use for cases of visceral leishmaniasis treated at the Infectology Clinic of the Campo Grande University Hospital Center, State of Mato Grosso do Sul. METHODS: To collect data, we examined the medical records of 76 patients with a diagnosis of visceral leishmaniasis treated at this Infectology Clinic. RESULTS: The medical files of 76 patients (56 men and 20 women; 28.9%) showed comorbidities. The first choice drug for 88.2% of the patients was N-methylglucamine antimoniate, with a fatal outcome for 18.4%. Survival analysis showed a statistically significant difference between patients with and without comorbidities (p <0.0001) and with comorbidities who used Glucantime® (p < 0.0009). The fatality rate of 18.4% indicates the low efficiency of the healthcare measures used. CONCLUSIONS: The results suggest that the prognosis becomes poor when associated with the presence of comorbidities, and that the treatment needs to be carefully administered to minimize mortality