Real-time imaging of DNA damage in yeast cells using ultra-short near-infrared pulsed laser irradiation

Analysis of accumulation of repair and checkpoint proteins at repair sites in yeast nuclei has conventionally used chemical agents, ionizing radiation or induction of endonucleases to inflict localized damage. In addition to these methods, similar studies in mammalian cells have used laser irradiation, which has the advantage that damage is inflicted at a specific nuclear region and at a precise time, and this allows accurate kinetic analysis of protein accumulation at DNA damage sites. We show here that it is feasible to use short pulses of near-infrared laser irradiation to inflict DNA damage in subnuclear regions of yeast nuclei by multiphoton absorption. In conjunction with use of fluorescently-tagged proteins, this allows quantitative analysis of protein accumulation at damage sites within seconds of damage induction. PCNA accumulated at damage sites rapidly, such that maximum accumulation was seen approximately 50 s after damage, then levels declined linearly over 200-1000 s after irradiation. RPA accumulated with slower kinetics such that hardly any accumulation was detected within 60 s of irradiation, and levels subsequently increased linearly over the next 900 s, after which levels were approximately constant (up to ca. 2700 s) at the damage site. This approach complements existing methodologies to allow analysis of key damage sensors and chromatin modification changes occurring within seconds of damage inception

Estudio de pre-factibilidad para la creación de una empresa de servicios de infraestructura tecnológica en el departamento de Managua.

La importancia del estudio radica en que se toman en cuenta las necesidades actuales y futuras del sector empresarial con respecto a infraestructura tecnológica que facilite sus operaciones y disminuya sus costos. La creación de una empresa que brindará con confianza y seguridad servicios que se adapten a estas necesidades. La razón del estudio considera que estas empresas estarían dispuestas a adquirir infraestructura tecnológica si se les acompaña en el proceso de evaluación y capacitación sobre la importancia que tiene la misma dentro de las entidades y cómo esta cambia radicalmente las actividades a corto y largo plazo

Efectos del genotipo, tamaño de la camada y el sexo sobre las características de la canal y el perfil de ácidos grasos en corderos de pelo

The effect of the genotype (Pelibuey vs Katahdin), type of lambing (single vs. double) and sex (males vs. females) on the characteristics of the carcass and its cuts, in addition to the fatty acid profile of the loin were evaluated in 66 lambs slaughtered at weaning. The yield of the carcass and ribs were higher (P<0.05) in the Pelibuey breed. Slaughter weight, carcass weight and rib yield were higher (P<0.01) in single-born lambs, while the yield of shoulder and leg were lower (P<0.01) than in double-born lambs. The proportion of soft tissue of the different cuts was higher (P<0.05), but that of bone was lower (P< 0.05) in single-born lambs than in double-born lambs. Females had a higher (P<0.05) proportion of soft tissue and a lower proportion of bone (P<0.01) than males. The concentrations of C18:1n7 and C20:4n-6 were higher (P<0.05) in the Pelibuey breed than in the Katahdin breed, while the C22:5n-3 and C22:6n-3 were lower. The percentage of monounsaturated fatty acids was higher (P<0.05) in the meat of single-born lambs, while that of total polyunsaturated fatty acids and n-3 was higher (P<0.05) in double-born lambs. The characteristics of the carcass, the tissue composition of the commercial cuts and the fatty acid profile in hair sheep slaughtered at weaning varied more due to the type of lambing than due to the genotype or sex.El efecto del genotipo (Pelibuey vs Katahdin), tipo de parto (simple vs dobles) y sexo (machos vs. hembras) sobre las características de la canal y de sus cortes, además del perfil de ácidos grasos del lomo fueron evaluados en 66 corderos sacrificados al destete. El rendimiento de la canal y del costillar fue mayor (P<0.05) en la raza Pelibuey. El peso al sacrificio, peso de canal y rendimiento del costillar fue mayor (P<0.01) en crías de parto simple, mientras que el rendimiento de paleta y pierna fue menor (P< 0.01) que en crías de parto doble. La proporción del tejido blando de los diferentes cortes fue mayor (P<0.05), pero el de hueso fue menor (P< 0.05) en crías de parto simple que las de parto doble. Las hembras tuvieron mayor (P<0.05) proporción de tejido blando y menor proporción de hueso (P<0.01) que los machos. Las concentraciones de C18:1n7 y C20:4n-6 fueron mayores (P< 0.05) en la raza Pelibuey que, en la Katahdin, mientras que los C22:5n-3 y C22:6n-3 fueron menores. El porcentaje de ácidos grasos monoinsaturados fue mayor (P<0.05) en la carne de crías de partos simples, en tanto que el de los ácidos grasos poliinsaturados totales y n-3 fue mayor (P<0.05) en crías de partos dobles. Las características de la canal, la composición tisular de los cortes comerciales y el perfil de ácidos grasos en ovinos de pelo sacrificados al destete mostraron más cambios por el tipo de parto que por el genotipo o el sexo

Generation of organotypic multicellular spheres by magnetic levitation : model for the study of human hematopoietic stem cells microenvironment

Q4Q3Background and Objective: The characteristics of human hematopoietic stem cells are conditioned by the microenvironment of the bone marrow, where they interact with other cell populations, such as mesenchymal stem cells and endothelial cells; however, the study of this microenvironment is complex. The objective of this work was to develop a 3D culture system by magnetic levitation that imitates the microenvironment of human HSC. Methods and Results: Human bone marrow-mesenchymal stem cells, umbilical cord blood-hematopoietic stem cells and a non-tumoral endothelial cell line (CC2811, LonzaⓇ) were used to develop organotypic multicellular spheres by the magnetic levitation method. We obtained viable structures with an average sphericity index greater than 0.6, an average volume of 0.5 mm3 and a percentage of aggregation greater than 70%. Histological studies of the organotypic multicellular spheres used hematoxylin and eosin stains, and an evaluation of vimentin expression by means of immunohistochemistry demonstrated an organized internal structure without picnotic cells and a high expression of vimentin. The functional capacity of human hematopoietic stem cells after organotypic multicellular spheres culture was evaluated by multipotency tests, and it was demonstrated that 3D structures without exogenous Flt3L are autonomous in the maintenance of multipotency of human hematopoietic stem cells. Conclusions: We developed organotypic multicellular spheres from normal human cells that mimic the microenvironment of the human hematopoietic stem cells. These structures are the prototype for the development of complex organoids that allow the further study of the biology of normal human stem cells and their potential in regenerative medicine.https://orcid.org/0000-0002-9152-5552https://orcid.org/0000-0003-3075-9854https://orcid.org/0000-0002-0084-0339https://orcid.org/0000-0003-1881-9367N/

FERTILIZACIÓN CON MAGNESIO EN PLÁTANO ‘BARRAGANETE’ (MUSA AAB) ECUADOR

El cultivo de plátano es importante por el aporte que genera en la socio-economía y seguridad alimentaria de Ecuador, pues suministra alimentos ricos en energía a la mayor parte de la población. Además, se hace necesario realizar manejos de la fertilización que permitan una mejor utilización de este recurso e incrementar los rendimientos. Por ello, se evaluó la fertilización con magnesio en plátano ‘Barraganete’ (Musa AAB) en El Carmen, Manabí, Ecuador. La investigación se condujo en la Granja Experimental “Rio Suma”, Universidad Laica Eloy Alfaro de Manabí, extensión en El Carmen, ubicada a 260 msnm, temperatura promedio de 24 C, precipitación anual de 2 684 mm. Se aplicaron seis niveles de MgO (0, 25, 50, 75, 100, 125 kg ha1) para conocer su efecto sobre la morfo-fisiología y el rendimiento de las plantas. Se utilizó un diseño de bloques completos al azar con seis tratamientos y tres repeticiones; la siembra se realizó con un distanciamiento de 2,50 m 1,80 m (2 222 plantas ha1), y las variables de crecimiento vegetativo se evaluaron como medidas repetidas en el tiempo. Los resultados demostraron diferencias en todas las variables morfo-fisiológicas, lo que demostró que la fertilización con 30% de MgO afectó el crecimiento de las plantas; no obstante, las variables reproductivas no fueron afectadas por las dosis aplicadas; la dosis de 25 kg ha1 generó los mejores rendimientos, eficiencia agronómica y factor parcial de productividad.//Plantain is an important crop for Ecuador due to its contribution in socio-economy and food security of this country, supplying rich-energy food to most of the population; in addition, it is necessary to carry out fertilization management that allows a better use of this resource and increase the yield. Magnesium fertilization in ‘Barraganete’ (Musa AAB) plantain was evaluated in El Carmen, Manabí, Ecuador. The research was conducted in the Experimental Farm “Rio Suma”, Universidad Laica Eloy Alfaro de Manabí, Extension El Carmen, located at 260 masl, average temperature of 24 C, annual rainfall of 2 684 mm. Six levels of MgO (0, 25, 50, 75, 100, 125 kg ha1) were applied to know its effect on morpho-physiology and plant yield. A completely randomized block design with six treatments and three replications was used; the sowing was carried out with a distance of 2.50 m 1.80 m (2 222 plants ha1), and the variables of vegetative growth were evaluated as repeated measures over time. The results demonstrated significant differences in all the morpho-physiological variables, which showed that fertilization with 30% MgO affected the growth of the plants; however, the reproductive variables were not affected by the applied doses; the 25 kg ha1 dose generated the best yields, agronomic efficiency and partial productivity factor

Lo glocal y el turismo. Nuevos paradigmas de interpretación.

El estudio del turismo se realiza desde múltiples escalas y enfoques, este libro aborda muchos temas que es necesario discutir desde diversas perspectivas; es el caso de la reflexión sobre la propia disciplina y sus conceptos, así como los asuntos específicos referidos al impacto territorial, los tipos de turismo, las cuestiones ambientales, el tema de la pobreza, la competitividad, las políticas públicas, el papel de las universidades, las áreas naturales protegidas, la sustentabilidad, la cultura, el desarrollo, la seguridad, todos temas centrales documentados y expuestos con originalidad y dominio del asunto. Lo multiescalar es básico para la comprensión del sistema turístico, sistema formado de procesos globales, regionales y locales. El eje de discusión del libro es lo glocal, esa interacción entre lo nacional y local con lo global

Incidencia de la alveolitis dental en pacientes con afecciones reumáticas

Introducción: La alveolitis es una complicación frecuente en las extracciones dentales, múltiples son los factores de riesgo que pueden aumentar su expresión, dentro de ellos juegan un papel preponderante aquellas afecciones que debido a su etiopatogenia o al tratamiento que reciben causan estados de inmunodepresión en los pacientes, en este último grupo se encuentran las afecciones reumáticas. Objetivo: Determinar  la incidencia de alveolitis en pacientes con afecciones reumáticas.Metodología: Estudio descriptivo en 53 pacientes con diagnóstico de enfermedades  reumáticas atendidos en consulta estomatológica y a los cuales se les realizó extracción dentaria. Resultados: La edad  promedio fue de 56.55 años. La mayor frecuencia de género correspondió al género femenino con  un 77,36. El tiempo de evolución más frecuente fue el comprendido entre 1 y 5 años y la afección reumática más frecuente fue la artritis reumatoide. Conclusiones: La presencia de enfermedades reumáticas aumenta la aparición de complicaciones como la alveolitis, mientras mayor sea el tiempo de evolución mayor será la probabilidad de aparición de esta complicación. La artritis reumatoide es la afección reumática en la que con mayor porciento aparece la alveolitis

Histone H3 and GFP-NLS are not accumulated in the damage site of the ablated nucleus.

<p>(<b>A</b>) Cells expressing histone H3-GFP or GFP-NLS were irradiated with powers of 15% and 19%, and intensity of fluorescence was measured and plotted as in <a href="http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0113325#pone-0113325-g001" target="_blank">Figure 1A</a>. Between 10 and 15 cells per power and per strain were analyzed. (<b>B</b>) Histone H3-GFP (upper panels) or GFP-NLS (lower panels) expressing cells were laser-irradiated with indicated powers and images from indicated time points are shown. Arrows show sites of irradiation.</p

PCNA is recruited at the site of DNA damage in a dose-dependent manner.

<p>(<b>A</b>) GFP-PCNA expressing cells were subjected to micro-irradiation with indicated powers (P) and live series of images over a time period of 150 seconds were recorded. The average intensity of GFP-PCNA in the entire nucleus (blue), at the irradiated site (green) and in the area of the nucleus that was not irradiated (black) was quantified as described in <a href="http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0113325#s2" target="_blank">Materials and Methods</a>. Between 10 and 20 cells were processed for every power; error bars show standard deviation. The relationship between laser power and energy delivered is shown in <a href="http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0113325#pone.0113325.s003" target="_blank">Figure S3A</a>. (<b>B</b>) GFP-PCNA expressing cells were exposed to laser micro-irradiation with powers shown and images were acquired at the indicated times. Arrows indicate sites of irradiation. (<b>C</b>) Total amount of protein accumulation for every power was calculated as described in <a href="http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0113325#s2" target="_blank">Materials and Methods</a> (<b>D</b>) Half life of PCNA accumulation values for every power, calculated as described in <a href="http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0113325#s2" target="_blank">Materials and Methods</a>.</p