Lipid raft-dependent adhesion of Giardia intestinalis trophozoites to a cultured human enterocyte-like Caco-2/TC7 cell monolayer leads to cytoskeleton-dependent functional injuries

Gardia intestinalis, the aetiological agent of giardiasis, one of the most common intestinal diseases in both developing and developed countries, induces a loss of epithelial barrier function and functional injuries of the enterocyte by mechanisms that remain unknown. Three possible mechanisms have been proposed: (i) Giardia may directly alter the epithelial barrier after a close interaction between the trophozoite and polarized intestinal cells, (ii) intestinal functions may be altered by factors secreted by Giardia including an ‘enterotoxin’, proteinases and lectins, and (iii) based on mouse studies, a mechanism involving the intervention of activated T lymphocytes. We used fully differentiated cultured human intestinal Caco‐2/TC7 cells forming a monolayer and expressing several polarized functions of enterocytes of small intestine to investigate the mechanisms by which G. intestinalis induces structural and functional alterations in the host intestinal epithelium. We first report that adhesion of G. intestinalis at the brush border of enterocyte‐like cells involves the lipid raft membrane microdomains of the trophozoite. We report an adhesion‐dependent disorganization of the apical F‐actin cytoskeleton that, in turn, results in a dramatic loss of distribution of functional brush border‐associated proteins, including sucrase‐isomaltase (SI), dipeptidylpeptidase IV (DPP IV) and fructose transporter, GLUT5, and a decrease in sucrose enzyme activity in G. intestinalis ‐infected enterocyte‐like cells. We observed that the G. intestinalis trophozoite promotes an adhesion‐dependent decrease in transepithelial electrical resistance (TER) accompanied by a rearrangement of functional tight junction (TJ)‐associated occludin, and delocalization of claudin‐1. Finally, we found that whereas the occludin rearrangement induced by G. intestinalis was related to apical F‐actin disorganization, the delocalization of claudin‐1 was not.Fil: Humen, Martin Andres. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Perez, Pablo Fernando. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Liévin Le Moal, Vanessa. Université Paris Sud; Francia. Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale; Franci

Mutações em JAK2, MPL e CALR em neoplasias mieloproliferativas: análise de dissociação em alta resolução

La policitemia vera (PV), la trombocitemia esencial (TE) y la mielofibrosisidiopática (MI) constituyen las Neoplasias Mieloproliferativas cromosomaFiladelfia negativas (NMP Ph-neg). La mutación V617F en el exón 14 delgen JAK2 ha sido descripta en un 90% de los casos de PV y en un 50%de TE y MI. Recientemente, se identificaron mutaciones en el exón 10del gen MPL y en el exón 9 del gen CALR, presentes en un 5 y 73% depacientes con TE y MI sin mutaciones en JAK2, respectivamente. En el presentetrabajo se estudió la detección de dichas mutaciones en 52 pacientescon NMP, mediante amplificaciones por PCR en Tiempo Real con posterioranálisis por High Resolution Melting (HRM) y secuenciación. La mutaciónV617F en JAK2 fue registrada en un 83,3% de pacientes con PV y 42,8%con TE y MI. Un 6,25% y 56,25% de pacientes con TE y MI JAK2 negativosresultaron positivos para mutaciones en el exón 10 de gen del receptorde la trombopoyetina (MPL) y el exón 9 de gen de la calreticulina (CALR).El análisis por HRM puede ser considerado como herramienta diagnósticaeficaz para las NMP debido a su alta sensibilidad, bajo costo y tiempo deprocesado, teniendo en cuenta el impacto clínico que podría tener en los pacientes la detección temprana de dichas mutaciones.Polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (TE) and idiopathic myelofibrosis (MI) are Philadelphia chromosome–negative myeloproliferative neoplasms (MPN-Ph. Neg). The presence of the V617F mutation in exon 14 of the JAK2 gene has been described in 90% of cases of PV and 50% of MI and TE. Recently, mutations in exon 10 of the MPL gene and exon 9 of CALR gene have been identified, which are present in 5 to 73% of patients with TE and MI without mutations in JAK2, respectively. In this work, the detection of these mutations was studied in 52 patients with NMP, using real time PCR amplifications with subsequent High Resolution Melting (HRM) analysis and sequencing. A total of 83.3% of patients with PV and 42.8% with MI and TE were recorded as positive for the V617F mutation in JAK2. A total of 6.25% and 56.25% of the patients with MI and TE with non-mutated JAK2 were positive for mutations in MPL exon 10 and CALR exon 9. HRM analysis could be considered an effective diagnostic tool for NMP due to its high sensitivity, low cost and processing time, taking into account the clinical impact that early detection of such mutations could have on patients.Policitemia vera (PV), trombocitemia essencial (TE) e mielofibrose idiopática (MI) constituem as Neoplasias Mieloproliferativas cromossomo Filadélfia negativas (NMP Ph-neg). A mutação V617F no exon 14 do gene JAK2 foi descrita em 90% dos casos de PV e em 50% de TE e MI. Recentemente, foram identificadas mutações no exon 10 do gene MPL e no exon 9 do gene CALR, presentes em 5 a 73% de pacientes com TE e MI sem mutações em JAK2, respectivamente. Neste trabalho foi estudada a detecção de tais mutações em 52 pacientes com NMP, usando amplificações por PCR em Tempo Real, com posterior análise por High Resolution Melting (HRM) e sequenciamento. 83,3% dos pacientes com PV e 42,8% com TE e MI foram positivos para a mutação V617F em JAK2. 6,25% e 56,25% de pacientes com TE e MI JAK2 negativo foram positivos para mutações no exon 10 de gene do receptor da trombopoietina (MPL) e o exon 9 de gene da calreticulina (CALR). A análise por HRM pode ser considerada como ferramenta de diagnóstico eficaz para as NMP, devido à sua alta sensibilidade, baixo custo e tempo de processamento, tendo em conta o impacto clínico que poderia ter a detecção precoce de tais mutações nos pacientes.Fil: Videla, Yanina Paola. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Fares Taie Instituto de Análisis; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Fares Taie Instituto de Análisis; ArgentinaFil: Perez Maturo, Josefina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Fares Taie Instituto de Análisis; ArgentinaFil: Di Gerónimo, Vanesa. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Martin , Nazarena. Clínica Colón; ArgentinaFil: Pagani, Fernando. Clínica Colón; Argentin

Ischemic postconditioning reduces infarct size through the α1-Adrenergic receptor pathway

The α1-adrenergic receptors (α1-ARs) are involved in preconditioning. Given that certain intracellular pathways seem to be shared by preconditioning and postconditioning, it is possible that postconditioning could also be mediated by α1-ARs. The objective was to evaluate, by analyzing infarct size, if α1-ARs activation could trigger postconditioning and also determine Akt and glycogen synthase kinase 3β (GSK-3β) phosphorylation. Langendorff-perfused rat hearts were subjected to 30 minutes of ischemia and 120 minutes of reperfusion (I/R; n = 8). After 30 minutes of global ischemia, we performed 6 cycles of reperfusion/ischemia of 10 seconds each, followed by 120 minutes of reperfusion [ischemic postconditioning group (postcon); n = 9]. In another postcon group, we administered prazosin during postcon protocol (postcon + prazosin; n = 7). Finally, we repeated the I/R group, but prazosin (prazosin; n = 7), phenylephrine (PE; n = 5) and clonidine (CL; n = 6) were administered during the first 2 minutes of reperfusion. Infarct size was measured using the triphenyltetrazolium chloride technique. Total and phosphorylated Akt and mitochondrial GSK-3β expression were measured by Western blot. Infarct size was 58.1 ± 5.1% in I/R. Postcon and PE reduced infarct size to 40.1 ± 2.9% and 35.3 ± 5.5%, respectively (P < 0.05 vs. I/R). Postcon + prazosin administration abolished the beneficial effect on infarct size (61.6 ± 4.5%; P < 0.05 vs. postcon). Cytosolic Akt phosphorylation and mitochondrial GSK-3β phosphorylation were higher in the postcon and PE groups compared with the I/R and postcon + prazosin groups. Prazosin or clonidine administration did not modify neither protein expression nor infarct size. Our data demonstrate that postconditioning decrease infarct size by activation of the α1-AR pathway through Akt and GSK-3β phosphorylation.Fil: Buchholz, Bruno. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiopatologia Cardiovascular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: D'annunzio, Verónica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiopatologia Cardiovascular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Giani, Jorge Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Siachoque Montaño, Nadezda Ann Alexandra. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiopatologia Cardiovascular; ArgentinaFil: Dominici, Fernando Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Turyn, Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Perez, María Virginia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiopatologia Cardiovascular; ArgentinaFil: Donato, Martin Alejandro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiopatologia Cardiovascular; ArgentinaFil: Gelpi, Ricardo Jorge. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiopatologia Cardiovascular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

DisPhaseDB: An integrative database of diseases related variations in liquid–liquid phase separation proteins

Motivation: Proteins involved in liquid–liquid phase separation (LLPS) and membraneless organelles (MLOs) are recognized to be decisive for many biological processes and also responsible for several diseases. The recent explosion of research in the area still lacks tools for the analysis and data integration among different repositories. Currently, there is not a comprehensive and dedicated database that collects all disease-related variations in combination with the protein location, biological role in the MLO, and all the metadata available for each protein and disease. Disease-related protein variants and additional features are dispersed and the user has to navigate many databases, with a different focus, formats, and often not user friendly. Results: We present DisPhaseDB, a database dedicated to disease-related variants of liquid–liquid phase separation proteins. It integrates 10 databases, contains 5,741 proteins, 1,660,059 variants, and 4,051 disease terms. It also offers intuitive navigation and an informative display. It constitutes a pivotal starting point for further analysis, encouraging the development of new computational tools. The database is freely available at http://disphasedb.leloir.org.ar.Fil: Navarro, Alvaro Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Orti, Fernando Ezequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Martinez Perez, Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Alonso, Macarena. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Simonetti, Franco Lucio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Iserte, Javier Alonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Marino Buslje, Cristina. Fundación Instituto Leloir; Argentin

Blood parameters as biomarkers in a Salmonella spp. disease model of weaning piglets

peer-reviewedBackground The weaning pig is used as an experimental model to assess the impact of diet on intestinal health. Blood parameters (BP) are considered a useful tool in humans, but there is very scarce information of such indicators in the weaning pig. The objective of the present study is to evaluate the use of different BP as indicators in an experimental model of salmonellosis. Methodology Seventy-two 28-day-old piglets were divided into four groups in a 2x2 factorial arrangement, with animals receiving or not a probiotic combination based on B. infantis IM1® and B. lactis BPL6 (109 colony forming units (cfu)/d) and orally challenged or not a week later with Salmonella Typhimurium (5x108 cfu). Blood samples of one animal per pen (N = 24) were taken four days post-inoculation for the evaluation of different BP using an I-stat® System and of plasmatic concentrations of zinc, iron and copper. Principal findings Results reported marginal deficiencies of zinc in piglets at weaning. Moreover, plasmatic zinc, copper and iron presented good correlations with weight gain (r 0.57, r -0.67, r 0.54 respectively; P < 0.01). Blood electrolytes (Na+, Cl- and K+) decreased (P < 0.01) only when the performance of the animals was seriously compromised and clinical symptoms were more apparent. Acid-base balance parameters such as HCO3-, TCO2 and BEecf significantly correlated with weight gain, but only in the challenged animals (r -0.54, r -0.55, and r -0.51, respectively; P < 0.05), suggesting metabolic acidosis depending on Salmonella infection. Glucose was affected by the challenge (P = 0.040), while Htc and Hgb increased with the challenge and decreased with the probiotic (P < 0.05). Furthermore, correlations of Glu, Htc and Hgb with weight gain were observed (P < 0.05). Overall, BP could be regarded as simple, useful indexes to assess performance and health of weaning piglets

Probióticos contra patógenos intestinales: mecanismos relevantes y perspectivas

El tracto digestivo constituye un lugar importantísimo para la interacción con diversos microorganismos. En este contexto, se ponen en juego diversas relaciones que pueden traer aparejados efectos adversos o benéficos para el hospedador. A la capacidad de ciertos microorganismos de dar lugar a patologías, se oponen diferentes mecanismos de defensa entre los que la microbiota comensal se destaca especialmente. Es entonces razonable, suponer que la administración de microorganismos benéficos (probióticos) a través de intervenciones nutricionales, puede resultar una estrategia valiosa para la prevención y tratamiento de infecciones intestinales. En el presente capítulo, se describen sistemas en los que se ha demostrado la capacidad de ciertas cepas seleccionadas de microorganismos potencialmente probióticos sobre los factores de virulencia de patógenos intestinales relevantes en el contexto de la infección intestinal.Fil: Minnaard, Jessica. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Departamento de Ciencias Biológicas. Centro de Investigaciones de Fitopatología. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigaciones de Fitopatología; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Hugo, Ayelen Amelia. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; ArgentinaFil: Humen, Martin Andres. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Trejo, Fernando Miguel. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Racedo, Silvia María. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Rolny, Ivanna Sabrina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; ArgentinaFil: Perez, Pablo Fernando. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; Argentin

Nanoinformatics: developing new computing applications for nanomedicine

Nanoinformatics has recently emerged to address the need of computing applications at the nano level. In this regard, the authors have participated in various initiatives to identify its concepts, foundations and challenges. While nanomaterials open up the possibility for developing new devices in many industrial and scientific areas, they also offer breakthrough perspectives for the prevention, diagnosis and treatment of diseases. In this paper, we analyze the different aspects of nanoinformatics and suggest five research topics to help catalyze new research and development in the area, particularly focused on nanomedicine. We also encompass the use of informatics to further the biological and clinical applications of basic research in nanoscience and nanotechnology, and the related concept of an extended ?nanotype? to coalesce information related to nanoparticles. We suggest how nanoinformatics could accelerate developments in nanomedicine, similarly to what happened with the Human Genome and other -omics projects, on issues like exchanging modeling and simulation methods and tools, linking toxicity information to clinical and personal databases or developing new approaches for scientific ontologies, among many others

The tomato mutant ars1 (altered response to salt stress 1) identifies an R1-type MYB transcription factor involved in stomatal closure under salt acclimation

[EN] A screening under salt stress conditions of a T-DNA mutant collection of tomato (Solanum lycopersicum L.) led to the identification of the altered response to salt stress 1 (ars1) mutant, which showed a salt-sensitive phenotype. Genetic analysis of the ars1 mutation revealed that a single T-DNA insertion in the ARS1 gene was responsible of the mutant phenotype. ARS1 coded for an R1-MYB type transcription factor and its expression was induced by salinity in leaves. The mutant reduced fruit yield under salt acclimation while in the absence of stress the disruption of ARS1 did not affect this agronomic trait. The stomatal behaviour of ars1 mutant leaves induced higher Na+ accumulation via the transpiration stream, as the decreases of stomatal conductance and transpiration rate induced by salt stress were markedly lower in the mutant plants. Moreover, the mutation affected stomatal closure in a response mediated by abscisic acid (ABA). The characterization of tomato transgenic lines silencing and overexpressing ARS1 corroborates the role of the gene in regulating the water loss via transpiration under salinity. Together, our results show that ARS1 tomato gene contributes to reduce transpirational water loss under salt stress. Finally, this gene could be interesting for tomato molecular breeding, because its manipulation could lead to improved stress tolerance without yield penalty under optimal culture conditions.This work was funded by a research project (AGL2012-40150-C01/C02/C03) from the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (MINECO). This work was also supported by grant RYC2010-06369 (Ramon y Cajal Programme) from the MINECO to NF-G and grant E-30-2011-0443170 (JAE-Doc Programme) from the Spanish Council of Scientific Research (CSIC) to IE and BP. The authors have no conflict of interests to declareCampos, JF.; Cara, B.; Perez-Martin, F.; Pineda Chaza, BJ.; Egea, I.; Flores, FB.; Fernandez-Garcia, N.... (2016). The tomato mutant ars1 (altered response to salt stress 1) identifies an R1-type MYB transcription factor involved in stomatal closure under salt acclimation. Plant Biotechnology Journal. 14(6):1345-1356. https://doi.org/10.1111/pbi.124981345135614

Accurate and fast identification of Campylobacter fetus in bulls by real-time PCR targeting a 16S rRNA gene sequence

Campylobacter fetus is an important animal pathogen that causes infectious infertility, embryonic mortality and abortions in cattle and sheep flocks. There are two recognized subspecies related with reproductive disorders in livestock: Campylobacter fetus subsp. fetus (Cff) and Campylobacter fetus subsp. venerealis (Cfv). Rapid and reliable detection of this pathogenic species in bulls is of upmost importance for disease control in dairy and beef herds as they are asymptomatic carriers. The aim of the present work was to assess the performance a real-time PCR (qPCR) method for the diagnosis of Campylobacter fetus in samples from bulls, comparing it with culture and isolation methods. 520 preputial samples were both cultured in Skirrow's medium and analyzed by qPCR. The estimated sensitivity of qPCR was 90.9% (95% CI, 69.4%–100%), and the specificity was 99.4% (95% CI, 98.6% - 100%). The proportion of C. fetus positive individuals was 2.1% by isolation and 2.5% by qPCR. Isolates were identified by biochemical tests as Cfv (n = 9) and Cff (n = 2). Our findings support the use of qPCR for fast and accurate detection of C. fetus directly from field samples of preputial smegma of bulls. The qPCR method showed to be suitable for massive screenings because it can be performed in pooled samples without losing accuracy and sensitivity.EEA BalcarceFil: Delpiazzo, Rafael. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Veterinaria. Estación Experimental "Dr. Mario A. Cassinoni"; Uruguay.Fil: Barcellos, Maila. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay.Fil: Barros, Sofía. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay.Fil: Bentacor, Laura. Universidad de la República. Facultad de Medicina; Uruguay.Fil: Fraga, Martín. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria. Estación Experimental La Estanzuela; Uruguay.Fil: Gil, Jorge. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Veterinaria. Estación Experimental "Dr. Mario A. Cassinoni"; Uruguay.Fil: Iraola, Gregorio. Institut Pasteur de Montevideo. Laboratorio de Genómica Microbiana; Uruguay. Universidad Mayor. Facultad de Ciencias; Chile. Wellcome Genome Campus, Wellcome Sanger Institute; United Kingdom.Fil: Morsella, Claudia Graciela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina.Fil: Paolicchi, Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina.Fil: Pérez, Ruben. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay.Fil: Riet-Correa, Franklin. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria. Estación Experimental La Estanzuela; Uruguay.Fil: Sanguinetti, Margarita. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay.Fil: Silva, Alfonso. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay.Fil: Silva Silveira, Caroline da. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria. Estación Experimental La Estanzuela; Uruguay.Fil: Caballeros, Lucía. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay