Social media networks in the third sector : the road to sustainability

Mestrado em MarketingUm dos grandes desafios do Terceiro Setor é a sua sustentabilidade financeira. Esta dissertação explora o status quo de organizações do Terceiro Setor com diferentes dimensões, de modo a reconhecer limitações comuns, dependências e de que forma as redes sociais podem atenuar obstáculos e quão profundo é o conhecimento sobre o Retorno Social do Investimento de cada uma. Esta investigação exploratória é baseada numa abordagem qualitativa. O método de recolha de dados consistiu em treze entrevistas em profundidade semiestruturadas aos líderes de algumas organizações do Terceiro Setor. Os resultados sugerem que independentemente do tamanho da organização, as maiores e transversais dependências e limitações são: restrições financeiras, de tempo e alcance, sujeição ao pro-bono e ao trabalho voluntário. A natureza não lucrativa do Setor também impõe uma limitação económica e ética na forma como podem explorar os seus esforços de marketing. Para ultrapassar estes reptos, o social media marketing é crucial para diversificar as fontes de receita e obter outros benefícios, tais como notoriedade da marca e credibilidade; potenciais novos doadores e leads. Não obstante, o impacto da medição do Retorno Social do Investimento revela falta de conhecimento e nível de confiança entre os membros das organizações. Esta investigação fornece valiosos insights sobre o estado da arte do tema e conhecimento sobre quais as áreas que as organizações devem focar para tomarem o caminho mais viável para a sua sustentabilidadeOne of the main challenges of the Third Sector is its economic sustainability. This dissertation explores the status quo of the Third sector organisations with different dimensions in order to recognise common constraints, dependencies and how social media networks can ease the obstacles and how deep is the knowledge on social media return on investment. This exploratory research is based on a qualitative approach. The data collection method consisted of thirteen semi-structured non-standardised in-depth interviews to the leaders of some Third Sector organisations. The findings suggest that regardless the dimension of the organisation the major and transversal dependencies and limitations are: financial, time and reach constraints, reliance on pro bono and on volunteer workforce. The non-profit nature of the Third Sector also imposes a limitation on how economical and ethical marketing efforts can be explored. Social media marketing is important to diversify income sources and also to obtain other benefits such as brand awareness and credibility; new potential donors and leads. Nevertheless, the impact measurement of social return on investment is lacking of knowledge and trust among organization members. The contributions of this study provide valuable insights about the state-of-the-art on the subject and knowledge in which areas should the organisations focus to take the most viable road to their sustainability.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Functional analysis of the Burkholderia cepacia bceN gene encoding a GDP-D-mannose dehydratase involved in Cepacian biosynthesis

Tese de mestrado. Biologia (Microbiologia Aplicada). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011A diversidade e multifuncionalidade dos exopolissacáridos (EPSs) produzidos pelos organismos procariotas são consideráveis, supondo-se que estes têm um papel fundamental na protecção dos microrganismos que os produzem. Mais de 70% das estirpes pertencentes ao complexo Burkholderia cepacia (Bcc), consideradas importantes patogénios oportunistas em doentes com fibrose quística (FQ) ou com doença granulomatosa crónica, são produtoras do EPS Cepaciano. O Bcc é um grupo de bactérias da subdivisão _-proteobacteria, que são genotipicamente distintas, mas fenotipicamente semelhantes, estando estas divididas em pelo menos 17 espécies diferentes. Recentemente, vários estudos têm evidenciado o papel do Cepaciano como um factor de virulência que contribui para a patogenicidade global dos membros do Bcc e portanto para o seu sucesso como patogénios. Observou-se que a produção de EPS por um isolado clínico mucóide de B. cenocepacia interfere com a fagocitose das bactérias pelos neutrófilos humanos e facilita a persistência bacteriana nos ratinhos BALB/c, usados como modelo de infecção. Por outro lado, usando-se os ratinhos gp91phox-/- como modelo de infecção, verificou-se que os mutantes relativamente à produção de EPS eram menos virulentos ou completamente avirulentos quando comparados com a estirpe selvagem produtora de EPS. Estes resultados sugerem que a produção de EPS por bactérias do Bcc pode contribuir para a persistência das infecções pulmonares. Foi também descrito que o Cepaciano produzido por um isolado clínico de B. cenocepacia interfere com a função dos neutrófilos humanos in vitro, inibe a quimiotaxia e a produção de espécies reactivas de oxigénio, que são componentes essenciais da resposta imune inata do hospedeiro. Vários estudos têm demonstrado a capacidade das bactérias do Bcc para formarem biofilmes sozinhas ou em associação com outras bactérias. Estudos realizados com mutantes defectivos na produção de EPS demonstraram que apesar de não ser requerido para a formação inicial dos biofilmes, o EPS é importante para a formação de biofilmes espessos e maduros. O Cepaciano é composto por uma unidade repetitiva heptassacarídica ramificada e acetilada apresentando na sua constituição D-ramnose, D-manose, D-glucose, D-galactose e ácido Dglucurónico, numa proporção de 1:1:1:3:1. Curiosamente este polímero apresenta duas características incomuns, a presença de um D-isómero da ramnose que é mais comum no antigénio O dos lipopolissacáridos e a presença de um resíduo de ácido glucorónico tri-substituído, que confere ao polímero uma estrutura secundária rígida e alongada. Só após ter sido proposta a via biossintética dos precursores dos nucleótidos de açúcar do Cepaciano, é que se tentaram identificar os genes codificantes das enzimas intervenientes nesta via, estando estes localizados nos agrupamentos de genes bce-I e bce-II do cromossoma 2 do Bcc. O agrupamento bce-I foi identificado após mutagénese aleatória através da inserção de plasposões e seleccionando os mutantes defectivos na produção de EPS. O agrupamento bce-II foi identificado posteriormente recorrendo a análises bioinformáticas e a genómica comparativa. Ainda que tenham sido identificados cinco dos genes que codificam proteínas provavelmente envolvidas na síntese dos precursores dos nucleótidos de açúcar (BceA, BceC, BceM, BceN e BceT), apenas as proteínas BceA e BceC foram funcionalmente caracterizadas. A via biossintética da D ramnose não se encontra ainda caracterizada nas bactérias do Bcc. No entanto, análises bioinformáticas sugerem que o gene bceN, que se encontra no agrupamento genético bce-II, codifica para uma proteína com actividade de GDP-D-manose 4,6-desidratase (GMD), envolvida na síntese do precursor GDP-D-ramnose a partir de GDP-D-manose. Desta forma, as actividades descritas no presente trabalho visam a análise funcional do gene bceN e o estudo do seu papel na síntese do EPS Cepaciano, bem como o seu envolvimento na formação de biofilmes. As sequências aminoacídicas das proteínas BceN de B. cepacia IST408 e B. cenocepacia J2315 foram analisadas bioinformaticamente, verificando-se a presença de motivos conservados da família das proteínas Desidrogenases/reductases de cadeia curta (SDR), nomeadamente o motivo de Wierenga, importante para a ligação do co-factor; a tríade catalítica, essencial para a catálise; e o domínio de Rossman, igualmente associado à ligação do co-factor à região N-terminal da proteína. Os motivos e os resíduos típicos das enzimas com actividade GMD, nomeadamente os resíduos conservados glutamato (posição 133) e arginina (posição 190), e a região do “RR loop”, também estão presentes na proteína BceN. Com vista a confirmar os resultados bioinformáticos obtidos o gene bceN foi clonado num vector de expressão, e a proteína BceN foi sobrexpressa com cauda de histidinas e purificada por cromatografia de afinidade. Através da análise dos produtos obtidos por espectroscopia de ressonância magnética nuclear (NMR), demonstrou-se in vitro que a proteína BceN catalisa a conversão de GDP-D-manose em GDP-4-ceto-6-desoxi-D-manose, tendo portanto actividade GDP-Dmanose 4,6-desidratase. Ainda que os resultados obtidos sugerissem que esta proteína apresenta um modelo cinético de inibição pelo substrato, os ensaios realizados não possibilitaram a determinação dos parâmetros cinéticos da proteína BceN. No entanto foi possível constatar que a actividade GMD desta proteína é bastante dependente da presença de iões bivalentes Mg2+, que os co-factores oxidados NAD e NADP não são essenciais para a actividade da mesma e que esta é inibida pelo substrato GDP-D-manose. Ainda que algumas proteínas com actividade GMD tenham a capacidade de catalisar a reacção de desidratação e redução que leva à formação de GDP-Dramnose a partir de GDP-D-manose, os ensaios realizados sugerem que a proteína BceN não tem dupla actividade. Um outro objectivo deste trabalho consistiu no estudo do papel da proteína BceN na produção do EPS Cepaciano na estirpe clínica mucóide B. cepacia IST408, construindo-se para tal um mutante de inserção do gene bceN. Uma vez que este gene está envolvido na síntese da ramnose, um dos açúcares que constituem o Cepaciano, seria de esperar que a capacidade de produzir EPS fosse afectada na estirpe mutante. Todavia, a capacidade de produzir EPS é mantida pela estirpe mutada, sendo a quantidade de EPS produzida apenas ligeiramente inferior à da estirpe selvagem. Ainda que não se tenha determinado a composição do EPS produzido pelo mutante relativamente à estirpe selvagem, os resultados obtidos sugerem que a proteína BceN não é essencial para a síntese do EPS Cepaciano. A capacidade da estirpe mutante para produzir EPS sugere assim que outros genes funcionais homólogos ao gene bceN possam existir no genoma de B. cepacia IST408. A pesquisa destes genes nas sequências genómicas disponíveis de 14 estirpes do género Burkholderia revelou a presença de um, dois ou três genes que possivelmente codificam proteínas com actividade GMD. Esta constatação sugere assim que a mutação do gene bceN em B. cepacia IST408 pode ser compensada por homólogos funcionais deste gene. Uma vez que a produção de EPS está envolvida na formação de biofilmes e esta por sua vez está relacionada com a motilidade por swarming, estes dois últimos comportamentos multicelulares foram comparados entre a estirpe selvagem e o mutante no gene bceN de B. cepacia IST408. A quantidade de biofilmes produzida pelo mutante foi inferior à produzida pela estirpe selvagem, o que é consistente com a ligeira redução da capacidade do mutante para produzir o Cepaciano, e com o requerimento deste para a formação de biofilmes de dimensões máximas. Por outro lado a mutação do gene bceN também afectou a motilidade por swarming, apresentando o mutante uma diminuição desta capacidade. Com base nos estudos realizados e com vista a melhorar a percepção do papel da actividade GDP-D-manose 4,6-desidratase na virulência das bactérias do Bcc seria necessária a construção de uma estirpe mutante em que todos os genes homólogos ao gene bceN estivessem inactivados.Burkholderia cepacia complex (Bcc) bacteria have gained notoriety as pathogens in cystic fibrosis (CF) because they are easily transmitted among CF individuals, difficult to identify and almost impossible to eradicate. Isolates of the Bcc may produce large amounts of the exopolysaccharide (EPS) Cepacian, a virulence factor contributing to the overall pathogenicity of Bcc members and thus to their success as pathogens. The genes required for Cepacian biosynthesis by Bcc strains are located in clusters bce-I and bce-II of chromosome 2. One of the clustered genes, bceN, encodes a 39 kDa protein with GDP-D-mannose 4,6- dehydratase (GMD) activity. This dehydratase activity of BceN protein is strongly dependent on the presence of Mg2+ ions, is unaffected by the addition of exogenous NAD(P) and is susceptible to inhibition by the substrate GDP-D-mannose. This protein appears to have the substrate inhibition kinetic model, however additional assays are required to confirm this hypothesis and to determine kinetic parameters. The disruption of the B. cepacia IST408 bceN gene resulted in a slightly reduced EPS production yield compared to the wild type strain. The search for putative bceN homologues revealed the presence of one, two or three bceN orthologues in the Burkholderia genomes available. This suggests that in B. cepacia IST408 putative bceN functional homologues may compensate the bceN mutation. However, the size of the biofilm produced in vitro by the bceN mutant strain is smaller than the size of the biofilm formed by the parental strain and the mutant showed a decreased swarming ability

Burkholderia cepacia Complex Infections Among Cystic Fibrosis Patients: Perspectives and Challenges

The Burkholderia cepacia complex (Bcc) is a group of closely related bacterial species that emerged in the 1980s as the etiological agents of severe and often lethal respiratory infections among cystic fibrosis (CF) patients. After several outbreaks in CF centers in Europe and North America, segregation measures were introduced to avoid patient-to-patient transmission. Presently, the prevalence of Bcc infections among CF patients worldwide is below 5% in the majority of CF centers, although exceptions are registered in some European countries. Infections by these pathogens remain problematic due to the high resistance to antimicrobials, the easy patient-to-patient transmission, and the unpredictable outcome of infections that range from asymptomatic carriage to the cepacia syndrome, a fulminating pneumonia often associated with septicemia that can lead to the decease of patients within a period of time as short as 1 week. In this chapter, we review the evolving epidemiology of Bcc infections in CF patients, the virulence traits and mechanisms used by these bacteria, and the recent developments in vaccine and vaccine components research to prevent Bcc infections

Tuning the Biological Activity of Camphorimine Complexes through Metal Selection

This research was funded by FCT—Fundação para a Ciência e a Tecnologia, through projects CQE (UIDB/00100/2020 and UIDP/00100/2020) and C2TN (UID/MULTI/04349/2019), the projects of the Research Unit Institute for Bioengineering and Biosciences—iBB (UIDB/04565/2020 and UIDP/04565/2020), the project LA/P/0140/2020 of the Associate Laboratory Institute for Health and Bioeconomy—i4HB, and a PhD grant to J.P.C. (UI/BD/152244/2021).The cytotoxic activity of four sets of camphorimine complexes based on the Cu(I), Cu(II), Ag(I), and Au(I) metal sites were assessed against the cisplatin-sensitive A2780 and OVCAR3 ovarian cancer cells. The results showed that the gold complexes were ca. one order of magnitude more active than the silver complexes, which in turn were ca. one order of magnitude more active than the copper complexes. An important finding was that the cytotoxic activity of the Ag(I) and Au(I) camphorimine complexes was higher than that of cisplatin. Another relevant aspect was that the camphorimine complexes did not interact significantly with DNA, in contrast with cisplatin. The cytotoxic activity of the camphorimine complexes displayed a direct relationship with the cellular uptake by OVCAR3 cells, as ascertained by PIXE (particle-induced X-ray emission). The levels of ROS (reactive oxygen species) formation exhibited an inverse relationship with the reduction potentials for the complexes with the same metal, as assessed by cyclic voltammetry. In order to gain insight into the toxicity of the complexes, their cytotoxicity toward nontumoral cells (HDF and V79 fibroblasts) was evaluated. The in vivo cytotoxicity of complex 5 using the nematode Caenorhabditis elegans was also assessed. The silver camphorimine complexes displayed the highest selectivity coefficients (activity vs. toxicity).publishersversionpublishe

Evaluating the quality of life in patients with refractory chronic heart failure undergoing cardiac resynchronization regarding the type of therapeutic response

The benefits of cardiac resynchronization therapy (CRT) in the quality of life have been largely demonstrated in selected patients with severe congestive heart failure (CHF). However, the differences between responders and non-responders, with regard to the effect of CRT in the various dimensions of quality of life is still a matter of discussion. Objective: to evaluate the impact of CRT on the quality of life of patients with CHF refractory to optimal pharmacological therapy, within 6 months after CRT

The afc antifungal activity cluster, which is under tight regulatory control of ShvR, is essential for transition from intracellular persistence of Burkholderia cenocepacia to acute pro-inflammatory infection.

The opportunistic pathogen Burkholderia cenocepacia is particularly life-threatening for cystic fibrosis (CF) patients. Chronic lung infections with these bacteria can rapidly develop into fatal pulmonary necrosis and septicaemia. We have recently shown that macrophages are a critical site for replication of B. cenocepacia K56-2 and the induction of fatal pro-inflammatory responses using a zebrafish infection model. Here, we show that ShvR, a LysR-type transcriptional regulator that is important for biofilm formation, rough colony morphotype and inflammation in a rat lung infection model, is also required for the induction of fatal pro-inflammatory responses in zebrafish larvae. ShvR was not essential, however, for bacterial survival and replication in macrophages. Temporal, rhamnose-induced restoration of shvR expression in the shvR mutant during intramacrophage stages unequivocally demonstrated a key role for ShvR in transition from intracellular persistence to acute fatal pro-inflammatory disease. ShvR has been previously shown to tightly control the expression of the adjacent afc gene cluster, which specifies the synthesis of a lipopeptide with antifungal activity. Mutation of afcE, encoding an acyl-CoA dehydrogenase, has been shown to give similar phenotypes as the shvR mutant. We found that, like shvR, afcE is also critical for the switch from intracellular persistence to fatal infection in zebrafish. The closely related B. cenocepacia H111 has been shown to be less virulent than K56-2 in several infection models, including Galleria mellonella and rats. Interestingly, constitutive expression of shvR in H111 increased virulence in zebrafish larvae to almost K56-2 levels in a manner that absolutely required afc. These data confirm a critical role for afc in acute virulence caused by B. cenocepacia that depends on strain-specific regulatory control by ShvR. We propose that ShvR and AFC are important virulence factors of the more virulent Bcc species, either through pro-inflammatory effects of the lipopeptide AFC, or through AFC-dependent membrane properties

Health related quality of life in patients with refractory chronic heart failure undergoing cardiac resynchronization: type of therapeutic response

The benefits of cardiac resynchronization therapy (CRT) in the health-related quality of life (HRQL) are largely demonstrated in selected patients with severe congestive heart failure (CHF). However, the differences between responders and non-responders, with regard to the effect of CRT in the various dimensions that constitute HRQL are still a matter of discussion. Objective: To evaluate the impact of CRT on the HRQL of patients with CHF refractory to optimal pharmacological therapy, within 6 months after CRT. Methods: 43 patients, submitted to successful implantation of CRT, were evaluated in hospital just before intervention and in the outpatient clinic within 6 months after CRT. HRQL was analyzed based on the Kansas City Cardiomyopathy Questionnaire (KCCQ). Patients were classified as super-responders (ejection fraction of left ventricle - LVEF - ≥45% post-CRT), n=15, responders (sustained improvement in functional class and LVEF increased by 15%), n=19, and non-responders (no clinical or LVEF improvement), n=9. Results: In the group of super-responders, CRT was associated with an improvement in HRQL for the various fields and sums assessed (ρ<0.05); in responders, CRT has been associated with an improvement of HRQL in the various fields and sums, except in the self-efficacy dimension (ρ<0.05); in non-responders, CRT was not associated with improvement of HRQL. Conclusion: In a population with severe CHF undergoing CRT, the patients with clinical and echocardiographic positive response, obtained a favorable impact in all dimensions of HRQL, while the group without response to CRT showed no improvement. These data reinforces the importance of HRQL as a multidimensional tool for assessment of benefits in clinical practice

Avaliação da qualidade de vida em doentes com insuficiência cardíaca submetidos a terapêutica com cardioversor desfibrilhador implantável

O cardioversor desfibrilhador implantável (CDI) tem sido associado à redução da morte súbita. O impacto nas dimensões da qualidade de vida (QV) permanece controverso. Método: 36 doentes foram submetidos a implantação de CDI. Foram avaliados antes da intervenção e após ao 3º e 6º mês pelo Kansas City Cardiomiophathy Questionnaire. Resultados: Os sintomas e conhecimento da situação clínica não se modificaram. Ao 3º mês, houve melhoria das actividades de vida diária, funcionalidade e QV, não mantida aos 6 meses. Aos 3º e 6º meses houve melhoria da percepção da satisfação com a vida e estilo de vida. A esperança associou-se à melhoria da percepção da satisfação com a vida. Conclusão: A implantação de CDI, associa-se a um benefício mantido na dimensão social e de percepção pessoal da QV e a um benefício transitório da condição física e percepção global da QV, sem influenciar os sintomas e conhecimento da condição clínica