Cytotoxic dendritic cells generated from cancer patients.

International audienceKnown for years as professional APCs, dendritic cells (DCs) are also endowed with tumoricidal activity. This dual role of DC as killers and messengers may have important implications for tumor immunotherapy. However, the tumoricidal activity of DCs has mainly been investigated in animal models. Cancer cells inhibit antitumor immune responses using numerous mechanisms, including the induction of immunosuppressive/ tolerogenic DCs that have lost their ability to present Ags in an immunogenic manner. In this study, we evaluated the possibility of generating tumor killer DCs from patients with advanced-stage cancers. We demonstrate that human monocyte-derived DCs are endowed with significant cytotoxic activity against tumor cells following activation with LPS. The mechanism of DC-mediated tumor cell killing primarily involves peroxynitrites. This observed cytotoxic activity is restricted to immature DCs. Additionally, after killing, these cytotoxic DCs are able to activate tumor Ag-specific T cells. These observations may open important new perspectives for the use of autologous cytotoxic DCs in cancer immunotherapy strategies

Splenic TFH expansion participates in B-cell differentiation and antiplatelet-antibody production during immune thrombocytopenia

Antiplatelet-antibody-producing B cells play a key role immune thrombocytopenia (ITP) pathogenesis; however, little is known about T-cell dysregulations that support B-cell differentiation. During the past decade, T follicular helper cells (TFHs) have been characterized as the main T-cell subset within secondary lymphoid organs that promotes B-cell differentiation leading to antibody class-switch recombination and secretion. Herein, we characterized TFHs within the spleen of 8 controls and 13 ITP patients. We show that human splenic TFHs are the main producers of interleukin (IL)-21, express CD40 ligand(CD154), and are located within the germinal center of secondary follicles. Compared with controls, splenic TFH frequency is higher in ITP patients and correlates with germinal center and plasma cell percentages that are also increased. In vitro, IL-21 stimulation combined with an anti-CD40 agonist antibody led to the differentiation of splenic B cells into plasma cells and to the secretion of antiplatelet antibodies in ITP patients. Overall, these results point out the involvement of TFH in ITP pathophysiology and the potential interest of IL-21 and CD40 as therapeutic targets in ITP

Etude des populations lymphocytaires T au cours de l’anémie hémolytique auto immune

Warm autoimmune hemolytic anemia (wAIHA) is a rare acquired autoimmune disease mediated by antibodies targeting red blood cells. The involvement of CD4 T helper (Th) cells has been scarcely explored, with most findings extrapolated from animal models. Although it is still debated, wAIHA is thought to be associated with a pro-inflammatory Th17 polarization and a quantitative deficit of regulatory T cells (Treg).In this work, we performed the first concomitant quantification of circulating effector T lymphocytes (Teff) and Treg, associated with functional and transcriptomic analyses of Treg in human wAIHA at diagnosis. We observed a shift towards a Th17 polarization of Teff and a decrease in circulating Treg, notably effector Treg. This quantitative deficit was associated with an impairment of Treg capability to inhibit Teff proliferation and promoted the Th17 skewing. Treg deficiency was related to the diminished Foxp3 protein level, the master transcription factor maintaining phenotype stability and suppressive functions of Treg.The transcriptomic profile of patients' Treg revealed: |1. A strong engagement of TNF signaling pathways in Treg, consistent with serum TNF-α increase in patients. |2. A possible role of post-translational mechanisms leading to Foxp3 downregulation accounting for Treg dysfunctions.Through this work, we report two novel and major observations for the understanding of wAIHA pathophysiology: the increase of serum TNF-α in patients at diagnosis, and both a quantitative and functional deficit of circulating Treg. Although the mechanistic aspects and the links between these two observations remain to be clarified, they allow us to consider new therapeutic axes for patients such as Treg strengthening and/or the neutralization of TNF-α production.L'anémie hémolytique auto-immune à auto-anticorps chaud (AIHA) est une maladie auto-immune rare et acquise, médiée par des anticorps ciblant les globules rouges. L'implication des lymphocytes T helper (Th) CD4+ dans la physiopathologie a été peu étudiée et la plupart des résultats sont extrapolés de modèles murins. Bien que cela soit encore débattu, l’AIHA pourrait être associée à une polarisation pro-inflammatoire de type Th17 et à un déficit quantitatif en lymphocytes T régulateurs (Treg).Au cours de ce travail, nous avons réalisé la première étude concomitante des LT effecteurs et des Treg circulants, ainsi qu’une étude fonctionnelle et transcriptomique des Treg de patients atteints d’AHAI au diagnostic.Nous avons observé une orientation des LT effecteurs vers une polarisation Th17 accompagnée d’une diminution des Treg circulants, principalement des Treg effecteurs. Ce déficit quantitatif est associé à une diminution de la capacité des Treg à inhiber la prolifération des LT effecteurs, ce qui semble favoriser d’avantage la polarisation Th17.Le déficit en Treg est associé à une diminution du niveau d’expression de la protéine Foxp3, le facteur de transcription dominant des Treg, qui assure la stabilité de leur phénotype et le maintien de leurs fonctions suppressives. Le profil transcriptomique des Treg des patients a révélé : |1. Un fort engagement des voies de signalisation du TNF dans les Treg, en accord avec une augmentation significative du TNF-α sérique chez les patients. |2. Un rôle possible de mécanismes post-traductionnels conduisant à la dégradation de Foxp3 à l’origine des dysfonctionnements des Treg.A travers ce travail nous rapportons deux observations inédites et importantes pour la compréhension de la physiopathologie de l’AHAI, l’augmentation du TNF-α sérique chez les patients AHAI au diagnostic ainsi que le déficit quantitatif et fonctionnel des Treg circulants. Bien que les aspects mécanistiques ou les liens entre ces deux observations restent à préciser, elles nous permettent d’ores et déjà d’envisager de nouveaux axes thérapeutiques pour les patients tels que le renforcement des populations Treg et/ou la neutralisation de la production du TNF-α

T cell lymphocytes in warm autoimmune hemolytic anemia

L'anémie hémolytique auto-immune à auto-anticorps chaud (AIHA) est une maladie auto-immune rare et acquise, médiée par des anticorps ciblant les globules rouges. L'implication des lymphocytes T helper (Th) CD4+ dans la physiopathologie a été peu étudiée et la plupart des résultats sont extrapolés de modèles murins. Bien que cela soit encore débattu, l’AIHA pourrait être associée à une polarisation pro-inflammatoire de type Th17 et à un déficit quantitatif en lymphocytes T régulateurs (Treg).Au cours de ce travail, nous avons réalisé la première étude concomitante des LT effecteurs et des Treg circulants, ainsi qu’une étude fonctionnelle et transcriptomique des Treg de patients atteints d’AHAI au diagnostic.Nous avons observé une orientation des LT effecteurs vers une polarisation Th17 accompagnée d’une diminution des Treg circulants, principalement des Treg effecteurs. Ce déficit quantitatif est associé à une diminution de la capacité des Treg à inhiber la prolifération des LT effecteurs, ce qui semble favoriser d’avantage la polarisation Th17.Le déficit en Treg est associé à une diminution du niveau d’expression de la protéine Foxp3, le facteur de transcription dominant des Treg, qui assure la stabilité de leur phénotype et le maintien de leurs fonctions suppressives. Le profil transcriptomique des Treg des patients a révélé : |1. Un fort engagement des voies de signalisation du TNF dans les Treg, en accord avec une augmentation significative du TNF-α sérique chez les patients. |2. Un rôle possible de mécanismes post-traductionnels conduisant à la dégradation de Foxp3 à l’origine des dysfonctionnements des Treg.A travers ce travail nous rapportons deux observations inédites et importantes pour la compréhension de la physiopathologie de l’AHAI, l’augmentation du TNF-α sérique chez les patients AHAI au diagnostic ainsi que le déficit quantitatif et fonctionnel des Treg circulants. Bien que les aspects mécanistiques ou les liens entre ces deux observations restent à préciser, elles nous permettent d’ores et déjà d’envisager de nouveaux axes thérapeutiques pour les patients tels que le renforcement des populations Treg et/ou la neutralisation de la production du TNF-α.Warm autoimmune hemolytic anemia (wAIHA) is a rare acquired autoimmune disease mediated by antibodies targeting red blood cells. The involvement of CD4 T helper (Th) cells has been scarcely explored, with most findings extrapolated from animal models. Although it is still debated, wAIHA is thought to be associated with a pro-inflammatory Th17 polarization and a quantitative deficit of regulatory T cells (Treg).In this work, we performed the first concomitant quantification of circulating effector T lymphocytes (Teff) and Treg, associated with functional and transcriptomic analyses of Treg in human wAIHA at diagnosis. We observed a shift towards a Th17 polarization of Teff and a decrease in circulating Treg, notably effector Treg. This quantitative deficit was associated with an impairment of Treg capability to inhibit Teff proliferation and promoted the Th17 skewing. Treg deficiency was related to the diminished Foxp3 protein level, the master transcription factor maintaining phenotype stability and suppressive functions of Treg.The transcriptomic profile of patients' Treg revealed: |1. A strong engagement of TNF signaling pathways in Treg, consistent with serum TNF-α increase in patients. |2. A possible role of post-translational mechanisms leading to Foxp3 downregulation accounting for Treg dysfunctions.Through this work, we report two novel and major observations for the understanding of wAIHA pathophysiology: the increase of serum TNF-α in patients at diagnosis, and both a quantitative and functional deficit of circulating Treg. Although the mechanistic aspects and the links between these two observations remain to be clarified, they allow us to consider new therapeutic axes for patients such as Treg strengthening and/or the neutralization of TNF-α production

ÉTUDE DES CELLULES LYMPHOÏDES INNÉES SPLÉNIQUES HUMAINES ET DE LEURS IMPLICATIONS AU COURS DE LA THROMBOPÉNIE IMMUNOLOGIQUE

ÉTUDE DES CELLULES LYMPHOÏDES INNÉES SPLÉNIQUES HUMAINES ET DE LEURS IMPLICATIONS AU COURS DE LA THROMBOPÉNIE IMMUNOLOGIQUEDe découverte récente, les ILC ont été caractérisées comme cellules effectrices de l’immunité innéecapables de moduler les réponses lymphocytaires T et B dans les muqueuses. Cependant, leur rôle ausein des organes lymphoïdes chez l’Homme au cours des maladies auto-immunes n’a pas été étudié.La thrombopénie immunologique est une maladie auto-immune responsable d’une destructionpériphérique des plaquettes associée à une production médullaire inadaptée. La rate joue un rôlecentral dans la physiopathologie en étant le site principal de la destruction des plaquettes et du maintiende la réponse auto-immune. La splénectomie faisant partie du traitement de cette maladie, cela donneune occasion unique d’étudier la réponse immunitaire au sein d’un organe lymphoïde secondaire aucours d’une maladie auto-immune chez l’Homme.Dans le cadre de ce projet nous avons étudié le phénotype des ILC spléniques dans des conditionsphysiologiques et au cours du PTI.L’étude du compartiment splénique humain dans des conditions physiologiques nous a permis dequantifier les ILC totales qui représentent 0,24 % des cellules lymphoïdes et d’identifier les différentessous populations d’ILC spléniques. Les ILC totales expriment majoritairement le récepteur de chémokineCCR6 et sécrètent d’importantes quantités de TNF-α. Les ILC3 sont les plus représentées, constituéesessentiellement d’ILC3 NCR-, tandis que les ILC2 sont très peu nombreuses dans la rate.Au cours du PTI, la fréquence des ILC spléniques totales est similaire à celle des témoins, en revancheelles sont plus nombreuses à exprimer CD62L, ligand de MadCam, exprimé dans la zone marginale.Les ILC1, plus nombreuses dans les rates des patients, contribuent vraisemblablement à alimenterl’environnement pro-inflammatoire splénique. Elles sont plus nombreuses à exprimer CXCR3, CD62L età sécréter de l’IL-2 et de l’IFN-γ. La fréquence des ILC3 spléniques totales est similaire entre les patientset les témoins mais la proportion de cellules sécrétant du GM-CSF est plus importante au cours du PTI.De même, la sous-population d’ILC3 « naïves » NCR-CD62L+, est augmentée et sa fréquence est corréléeà celle des ILC1 CD62L+.Enfin, la répartition des sous-populations d’ILC spléniques des patients non répondeurs à lasplénectomie diffère des patients répondeurs par une diminution des ILC3 NCR-CD62L+, des ILC3 NCR+et ILC1 CD62L+, au profit des ILC3 NCR-HLA-DR+. L’augmentation de cette population d’ILC3 NCR-HLADR+n’exprimant pas ou peu les molécules de costimulation et l’augmentation de la proportion d‘ILC3sécrétant de l’IL-10 et peu d’IL-2 sont autant de signes en faveur d’un rôle principalement régulateurdes ILC3 dans la rate des patients non répondeurs à la splénectomie.Ces résultats viennent enrichir les connaissances sur la physiopathologie du PTI et sur la contributiondes ILC1 et des ILC3 à l’environnement pro-inflammatoire splénique. Ils ouvrent également de nouvellesperspectives sur une possible implication des ILC3 dans le maintien de la tolérance, notamment chezles patients non répondeurs à la splénectomie

Etude des populations lymphocytaires T au cours de l’anémie hémolytique auto immune

Warm autoimmune hemolytic anemia (wAIHA) is a rare acquired autoimmune disease mediated by antibodies targeting red blood cells. The involvement of CD4 T helper (Th) cells has been scarcely explored, with most findings extrapolated from animal models. Although it is still debated, wAIHA is thought to be associated with a pro-inflammatory Th17 polarization and a quantitative deficit of regulatory T cells (Treg).In this work, we performed the first concomitant quantification of circulating effector T lymphocytes (Teff) and Treg, associated with functional and transcriptomic analyses of Treg in human wAIHA at diagnosis. We observed a shift towards a Th17 polarization of Teff and a decrease in circulating Treg, notably effector Treg. This quantitative deficit was associated with an impairment of Treg capability to inhibit Teff proliferation and promoted the Th17 skewing. Treg deficiency was related to the diminished Foxp3 protein level, the master transcription factor maintaining phenotype stability and suppressive functions of Treg.The transcriptomic profile of patients' Treg revealed: |1. A strong engagement of TNF signaling pathways in Treg, consistent with serum TNF-α increase in patients. |2. A possible role of post-translational mechanisms leading to Foxp3 downregulation accounting for Treg dysfunctions.Through this work, we report two novel and major observations for the understanding of wAIHA pathophysiology: the increase of serum TNF-α in patients at diagnosis, and both a quantitative and functional deficit of circulating Treg. Although the mechanistic aspects and the links between these two observations remain to be clarified, they allow us to consider new therapeutic axes for patients such as Treg strengthening and/or the neutralization of TNF-α production.L'anémie hémolytique auto-immune à auto-anticorps chaud (AIHA) est une maladie auto-immune rare et acquise, médiée par des anticorps ciblant les globules rouges. L'implication des lymphocytes T helper (Th) CD4+ dans la physiopathologie a été peu étudiée et la plupart des résultats sont extrapolés de modèles murins. Bien que cela soit encore débattu, l’AIHA pourrait être associée à une polarisation pro-inflammatoire de type Th17 et à un déficit quantitatif en lymphocytes T régulateurs (Treg).Au cours de ce travail, nous avons réalisé la première étude concomitante des LT effecteurs et des Treg circulants, ainsi qu’une étude fonctionnelle et transcriptomique des Treg de patients atteints d’AHAI au diagnostic.Nous avons observé une orientation des LT effecteurs vers une polarisation Th17 accompagnée d’une diminution des Treg circulants, principalement des Treg effecteurs. Ce déficit quantitatif est associé à une diminution de la capacité des Treg à inhiber la prolifération des LT effecteurs, ce qui semble favoriser d’avantage la polarisation Th17.Le déficit en Treg est associé à une diminution du niveau d’expression de la protéine Foxp3, le facteur de transcription dominant des Treg, qui assure la stabilité de leur phénotype et le maintien de leurs fonctions suppressives. Le profil transcriptomique des Treg des patients a révélé : |1. Un fort engagement des voies de signalisation du TNF dans les Treg, en accord avec une augmentation significative du TNF-α sérique chez les patients. |2. Un rôle possible de mécanismes post-traductionnels conduisant à la dégradation de Foxp3 à l’origine des dysfonctionnements des Treg.A travers ce travail nous rapportons deux observations inédites et importantes pour la compréhension de la physiopathologie de l’AHAI, l’augmentation du TNF-α sérique chez les patients AHAI au diagnostic ainsi que le déficit quantitatif et fonctionnel des Treg circulants. Bien que les aspects mécanistiques ou les liens entre ces deux observations restent à préciser, elles nous permettent d’ores et déjà d’envisager de nouveaux axes thérapeutiques pour les patients tels que le renforcement des populations Treg et/ou la neutralisation de la production du TNF-α

Immune Thrombocytopenia: Recent Advances in Pathogenesis and Treatments

Immune thrombocytopenia (ITP) is a rare autoimmune disease due to both a peripheral destruction of platelets and an inappropriate bone marrow production. Although the primary triggering factors of ITP remain unknown, a loss of immune tolerance—mostly represented by a regulatory T-cell defect—allows T follicular helper cells to stimulate autoreactive splenic B cells that differentiate into antiplatelet antibody-producing plasma cells. Glycoprotein IIb/IIIa is the main target of antiplatelet antibodies leading to platelet phagocytosis by splenic macrophages, through interactions with Fc gamma receptors (FcγRs) and complement receptors. This allows macrophages to activate autoreactive T cells by their antigen-presenting functions. Moreover, the activation of the classical complement pathway participates to platelet opsonization and also to their destruction by complement-dependent cytotoxicity. Platelet destruction is also mediated by a FcγR-independent pathway, involving platelet desialylation that favors their binding to the Ashwell-Morell receptor and their clearance in the liver. Cytotoxic T cells also contribute to ITP pathogenesis by mediating cytotoxicity against megakaryocytes and peripheral platelets. The deficient megakaryopoiesis resulting from both the humoral and the cytotoxic immune responses is sustained by inappropriate levels of thrombopoietin, the major growth factor of megakaryocytes. The better understanding of ITP pathogenesis has provided important therapeutic advances. B cell-targeting therapies and thrombopoietin-receptor agonists (TPO-RAs) have been used for years. New emerging therapeutic strategies that inhibit FcγR signaling, the neonatal Fc receptor or the classical complement pathway, will deeply modify the management of ITP in the near future

Altered distribution and function of splenic innate lymphoid cells in adult chronic immune thrombocytopenia

IF 7.607International audienceInnate lymphoid cells (ILCs) have been characterized as innate immune cells capable to modulate the immune response in the mucosae. Human ILCs have been rarely described in secondary lymphoid organs except in tonsils. Moreover, their function and phenotype in human secondary lymphoid organs during autoimmune diseases have never been studied. We took advantage of splenectomy as a treatment of immune thrombocytopenia (ITP) to describe and compare splenic ILC from 18 ITP patients to 11 controls. We first confirmed that ILC3 represented the most abundant ILC subset in human non-inflamed spleens, accounting for 90% of total ILC, and that they were mostly constituted of NKp44- cells. On the contrary, proportions of ILC1 and ILC2 in spleens were lower than in blood. Splenic IL-2- and IFN-γ-producing ILC1 were increased in ITP. While the frequencies of total splenic ILC3 were similar in the two groups, splenic GM-CSF-producing ILC3 were increased in ITP. This is the first description of human ILC in a major secondary lymphoid organ during an autoimmune disease, ITP. We observed an expansion of splenic ILC1 that could participate to the Th1 skewing, while the increased production of GM-CSF by splenic ILC3 could stimulate splenic macrophages which play a key role in ITP pathophysiology

T Lymphocyte Inhibition by Tumor-Infiltrating Dendritic Cells Involves Ectonucleotidase CD39 but Not Arginase-1

T lymphocytes activated by dendritic cells (DC) which present tumor antigens play a key role in the antitumor immune response. However, in patients suffering from active cancer, DC are not efficient at initiating and supporting immune responses as they participate to T lymphocyte inhibition. DC in the tumor environment are functionally defective and exhibit a characteristic of immature phenotype, different to that of DC present in nonpathological conditions. The mechanistic bases underlying DC dysfunction in cancer responsible for the modulation of T-cell responses and tumor immune escape are still being investigated. Using two different mouse tumor models, we showed that tumor-infiltrating DC (TIDC) are constitutively immunosuppressive, exhibit a semimature phenotype, and impair responder T lymphocyte proliferation and activation by a mechanism involving CD39 ectoenzyme