Lipid-mediated membrane binding properties of Disabled-2

AbstractDisabled-2 (Dab2) is an adaptor protein involved in several biological processes ranging from endocytosis to platelet aggregation. During endocytosis, the Dab2 phosphotyrosine-binding (PTB) domain mediates protein binding to phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PtdIns(4,5)P2) at the inner leaflet of the plasma membrane. As a result of platelet activation, Dab2 is released from α-granules and associates with both the αIIbβ3 integrin receptor and sulfatide lipids on the platelet surface through its N-terminal region including the PTB domain (N-PTB), thus, modulating platelet aggregation. Thrombin, a strong platelet agonist, prevents Dab2 function by cleaving N-PTB within the two basic motifs required for sulfatide association, a reaction that is prevented when Dab2 is bound to these sphingolipids. We have characterized the membrane binding properties of Dab2 N-PTB using micelles enriched with Dab2 lipid ligands, sulfatides and PtdIns(4,5)P2. Remarkably, NMR spectroscopy studies suggested differences in lipid-binding mechanisms. In addition, we experimentally demonstrated that sulfatide- and PtdIns(4,5)P2-binding sites overlap in Dab2 N-PTB and that both lipids stabilize the protein against temperature-induced unfolding. We found that whereas sulfatides induced conformational changes and facilitated Dab2 N-PTB penetration into micelles, Dab2 N-PTB bound to PtdIns(4,5)P2 lacked these properties. These results further support our model that platelet membrane sulfatides, but not PtdIns(4,5)P2, protect Dab2 N-PTB from thrombin cleavage

External Lipid PI3P Mediates Entry of Eukaryotic Pathogen Effectors into Plant and Animal Host Cells

Coverage of RAD sequences. (PDF 224 kb

Estudio de la serina hidroximetiltransferasa de tripanosomátidos (Crithidia Fasciculata y Trypanosoma cruzi) : Purificación y propiedades cinéticas y físico-químicas

La serina hidroximetiltransferasa (SHMT) cataliza la interconversión de serina y glicina transfiriendo una unidad carbonada al tetrahidrofolato requerida para la síntesis de purinas, timidilato, metionina y colina. La mayor parte de las SHMTs estudiadas son dependientes de piridoxal-5'-fosfato(PLP). La SHMT en eucariontes existe como isoformas mitocondrial y citosólica, codificadas por genes diferentes. También ha sido demostrada una tercera SHMT, presente en cloroplastos. El presente trabajo es el primero que informa la purificación y caracterización de una SHMT a partir de tripanosomátidos y en particular, se demuestra la presencia de tres formas moleculares de la enzima (las cuales se designaron SHMT I, II y III) en Crithidia fasciculata. Las isoformas fueron purificadas a homogeneidad de acuerdo al análisis por SDS-PAGE. Los pesos moleculares nativos de las SHMTs I, II y III, calculados por el método de Andrews, dieron valores de 226, 173 y 211 kDa, respectivamente. Los pesos moleculares de sus subunidades fueron: 53,8, 50,7 y 51,7 kDa respectivamente, sugiriendo una estructura homotetramérica de las proteínas, coincidente con las SHMTs de hongos, plantas y mamíferos. Las tres isoformas fueron dependientes de PLP, aunque presentaron diferentes comportamientos cinéticos. También fue parcialmente purificada y caracterizada la SHMT de Trypanosoma cruzi. Se ha detectado una sola forma de la enzima en este parásito, utilizando la misma metodología. La SHMT, de 69 kDa, fue altamente inestable, aunque presentó,en algunos casos, similares propiedades a las estudiadas en C.fasciculata. Por otra parte, fue parcialmente purificado y caracterizado un inhibidor endógeno de la SHMT a partir de T.cruzi, similar al aislado de semillas de Vigna radiata

Structure of the GAT domain of the endosomal adapter protein Tom1

Cellular homeostasis requires correct delivery of cell-surface receptor proteins (cargo) to their target subcellular compartments. The adapter proteins Tom1 and Tollip are involved in sorting of ubiquitinated cargo in endosomal compartments. Recruitment of Tom1 to the endosomal compartments is mediated by its GAT domain’s association to Tollip’s Tom1-binding domain (TBD). In this data article, we report the solution NMR-derived structure of the Tom1 GAT domain. The estimated protein structure exhibits a bundle of three helical elements. We compare the Tom1 GAT structure with those structures corresponding to the Tollip TBD- and ubiquitin-bound states

Evolution of cell entry function in oomycete and fungal effectors

absen

Evolution of cell entry function in oomycete and fungal effectors

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