Avaliacao de quatro metodos diferentes de extracao de DNA em isolados clinicos de estafilococos coagulase negativos (SCoN)

Currently there are several methods to extract bacterial DNA based on different principles. However, the amount and the quality of the DNA obtained by each one of those methods is highly variable and microorganism dependent, as illustrated by coagulase-negative staphylococci (CoNS) which have a thick cell wall that is difficult to lyse. This study was designed to compare the quality and the amount of CoNS DNA, extracted by four different techniques: two in-house protocols and two commercial kits. DNA amount and quality determination was performed through spectrophotometry. The extracted DNA was also analyzed using agarose gel electrophoresis and by PCR. 267 isolates of CoNS were used in this study. The column method and thermal lyses showed better results with regard to DNA quality (mean ratio of A260/280 = 1.95) and average concentration of DNA (), respectively. All four methods tested provided appropriate DNA for PCR amplification, but with different yields. DNA quality is important since it allows the application of a large number of molecular biology techniques, and also it's storage for a longer period of time. In this sense the extraction method based on an extraction column presented the best results for CoNS.Atualmente, para extrair o DNA bacteriano, existem diversos métodos baseados em diferentes princípios. Entretanto, a quantidade e qualidade do DNA obtido por cada um destes métodos é variável e depende do tipo de micro-organismo em questão; os estafilococos coagulase-negativos (CoNS), por exemplo, possuem parede celular espessa difícil de lisar. O objetivo deste estudo foi comparar a quantidade e a qualidade do DNA extraído de isolados clínicos de CoNS utilizando quatro metodologias diferentes: dois protocolos caseiros e dois kits comerciais. A determinação da quantidade e da qualidade do DNA foi realizada por espectrofotometria. O DNA extraído também foi analisado em eletroforese em gel de agarose e por PCR. A concentração média de DNA foi mais alta no método de lise térmica (). Entretanto, com relação à qualidade do DNA, o kit comercial que utiliza um método de extração baseado em uma coluna de separação apresentou melhor resultado (média da relação A260/280 = 1,95). As quatro técnicas testadas forneceram DNA passível de amplificação por PCR, porém com diferentes rendimentos. A qualidade do DNA extraído de bactérias é importante, pois possibilita a realização de maior número de técnicas de biologia molecular e também armazenamento do material por maior período de tempo. Neste sentido, a técnica de extração por coluna de separação apresentou melhor desempenho frente aos CoNS

Avaliacao de quatro metodos diferentes de extracao de DNA em isolados clinicos de estafilococos coagulase negativos (SCoN)

Currently there are several methods to extract bacterial DNA based on different principles. However, the amount and the quality of the DNA obtained by each one of those methods is highly variable and microorganism dependent, as illustrated by coagulase-negative staphylococci (CoNS) which have a thick cell wall that is difficult to lyse. This study was designed to compare the quality and the amount of CoNS DNA, extracted by four different techniques: two in-house protocols and two commercial kits. DNA amount and quality determination was performed through spectrophotometry. The extracted DNA was also analyzed using agarose gel electrophoresis and by PCR. 267 isolates of CoNS were used in this study. The column method and thermal lyses showed better results with regard to DNA quality (mean ratio of A260/280 = 1.95) and average concentration of DNA (), respectively. All four methods tested provided appropriate DNA for PCR amplification, but with different yields. DNA quality is important since it allows the application of a large number of molecular biology techniques, and also it's storage for a longer period of time. In this sense the extraction method based on an extraction column presented the best results for CoNS.Atualmente, para extrair o DNA bacteriano, existem diversos métodos baseados em diferentes princípios. Entretanto, a quantidade e qualidade do DNA obtido por cada um destes métodos é variável e depende do tipo de micro-organismo em questão; os estafilococos coagulase-negativos (CoNS), por exemplo, possuem parede celular espessa difícil de lisar. O objetivo deste estudo foi comparar a quantidade e a qualidade do DNA extraído de isolados clínicos de CoNS utilizando quatro metodologias diferentes: dois protocolos caseiros e dois kits comerciais. A determinação da quantidade e da qualidade do DNA foi realizada por espectrofotometria. O DNA extraído também foi analisado em eletroforese em gel de agarose e por PCR. A concentração média de DNA foi mais alta no método de lise térmica (). Entretanto, com relação à qualidade do DNA, o kit comercial que utiliza um método de extração baseado em uma coluna de separação apresentou melhor resultado (média da relação A260/280 = 1,95). As quatro técnicas testadas forneceram DNA passível de amplificação por PCR, porém com diferentes rendimentos. A qualidade do DNA extraído de bactérias é importante, pois possibilita a realização de maior número de técnicas de biologia molecular e também armazenamento do material por maior período de tempo. Neste sentido, a técnica de extração por coluna de separação apresentou melhor desempenho frente aos CoNS

Enhancement of antistaphylococcal activities of six antimicrobials against sasG-negative methicillin-susceptible Staphylococcus aureus: an in vitro biofilm model

AbstractThis study was designed to evaluate antimicrobial activities against methicillin-susceptible Staphylococcus aureus in both sessile and planktonic forms and to detect genes associated with this biofilm phenotype. Minimal biofilm inhibition and eradication concentrations (MBIC and MBEC, respectively) were determined by an in vitro biofilm model, and icaA, atlA, and sasG genes were detected by polymerase chain reaction. Vancomycin and tigecycline presented better biofilm inhibitory activity (MBIC range: 4–8 μg/mL) (P ≤ 0.05) and lower MBEC/MIC ratios (P ≤ 0.001) than other antimicrobials. All isolates harbored icaA and atlA, whereas sasG was present only in strong biofilm formers (P ≤ 0.05). Interestingly, antimicrobial activities against sasG− weak biofilm formers were significantly higher than those against sasG+ strong biofilm formers (P ≤ 0.05), demonstrating that number of cells in a biofilm matrix affected the antimicrobial activity, which was also variable, and might be associated with specific genetic determinants. To our knowledge, this was the first study reporting the presence of sasG in clinical isolates of S. aureus in South America

Extração das proteínas de sementes e polpa de Cucurbita maxima: uma análise experimental / Extraction of proteins from Cucurbita maxima seeds and pulp: an experimental analysis

As abóboras (Cucurbitaceae) estão distribuídas em mais de 120 gêneros e 800 espécies. Acredita-se que as abóboras foram cultivadas pela primeira vez no México, em 5.550 a.C. Devido ao melhoramento genético, hoje, as abóboras são cultivadas nas mais variadas condições climáticas em todo o mundo. Por este motivo, estudos acerca do potencial anti-helmíntico, anti-hipertensivo, hipoglicêmico, antimicrobiano e antioxidante de diversas espécies de abóboras são crescentes. Do ponto de vista nutricional, as Cucurbitáceas são fontes de vitaminas A, B, cálcio, ferro, silício e magnésio. Neste estudo descrevemos o processo de extração das proteínas presentes no endosperma das sementes e na polpa de Cucurbita maxima, variedade Duchesne (moranga). A farinha do endosperma das sementes foi utilizada para a extração de proteínas, utilizando tampão fosfato de potássio (KH2PO4) 0,1 M contendo 0,3 M de NaCl, pH7,6. Uma segunda metodologia de extração foi realizada utilizando água destilada. A extração em tampão fosfato apresentou um rendimento de 10,5%, enquanto a extração aquosa apresentou rendimento próximo de 0,6%. A partir da polpa, a recuperação de proteínas foi inversa: 0,2% para o extrato salino e 1,7% para o extrato aquoso. Dado o elevador teor de proteínas presente nas sementes, propomos seu uso como forma de suplementação nutricional e/ou probiótica, sendo necessárias análises complementares para investigar seu valor biológico, bem como as propriedades antimicrobianas e antifúngicas. 

Permanência de dente canino decíduo em gato-do-mato-pequeno (Leopardus guttulus)

Malformações dentárias são comuns em mamíferos silvestres, entretanto, são pouco documentadas na literatura científica. Nesse sentido, o conhecimento das condições patológicas dentárias em espécies de vida livre é fundamental para a medicina veterinária, permitindo o diagnóstico e tratamento destas enfermidades. O objetivo deste estudo foi relatar a persistência de dente canino decíduo em gato-do-mato-pequeno (Leopardus guttulus), doado pela polícia militar ambiental ao Laboratório de Zoologia do Centro Universitário Cesumar - UniCesumar, Maringá, Paraná, Brasil. Analisou-se o crânio de um felino macho (comprimento da face: 2 cm; comprimento do crânio: 6,3cm; comprimento total do crânio: 7,5cm; largura da face: 4,5cm; largura do crânio: 5,3 cm). Observando a dentição e discretas fusões de suturas cranianas, foi estimado que era um animal juvenil. O espécime apresentou persistência dos dentes caninos decíduos maxilares direito e esquerdo, localizados caudalmente aos caninos permanentes. Ambos os caninos decíduos mandibulares apresentaram uma fenda na coroa, que não se estendeu à região da raiz dentária. Os caninos decíduos e permanentes maxilares direito e esquerdo ocupavam o mesmo alvéolo. Os pré-molares decíduos maxilares estavam projetados, mas não os mandibulares, assim como os molares maxilares e mandibulares. Devido à falta de informações sobre a idade em que os dentes decíduos esfoliam e os definitivos sofrem erupção em L. guttulus e em outras espécies brasileiras, estudos devem ser conduzidos em filhotes mantidos em cativeiro, visando avaliar enfermidades orais e dentais e como estas se manifestam em felinos silvestres

FERTILIDADE DO SOLO SOB DIFERENTES USOS AGROFLORESTAIS NA REGIÃO CENTRAL DE RONDÔNIA, BRASIL

Conduziu-se o presente experimento com o objetivo de avaliar a fertilidade do solo de diferentes usos agroflorestais na região central de Rondônia, Brasil. Adotou-se o delineamento experimental em blocos casualizados, com três repetições. Os tratamentos avaliados foram: T1: Sistema agroflorestal com cacaueiros e fruteiras perenes; T2: Trilhamento na capoeira com abertura de faixas de plantio de essências florestais; T3: Capoeira enriquecida com essências florestais e T4:  Floresta nativa. O cálcio e o alumínio foram os nutrientes que mais variaram nos diferentes tipos de cobertura e profundidades do solo. As propriedades pH, fósforo e matéria orgânica não apresentaram diferenças entre a floresta e os demais tratamentos

Espumas vítreas produzidas a partir de resíduos sólidos

  O crescimento populacional aliado ao consumo elevado tem aumentado consideravelmente a geração de resí-duos sólidos. Diversos são os impactos negativos gerados pela destinação incorreta desses rejeitos. Logo, a utilização de resíduos é cada vez mais atraente tanto no âmbito econômico quanto no ambiental. Neste senti-do, no presente trabalho é demonstrada a produção de espumas vítreas, com baixo impacto ambiental, utili-zando como matéria-prima resíduos de vidro de lâmpadas fluorescentes e casca de ovo vermelho como agen-te espumante. Os agentes precursores tiveram as suas composições químicas, estruturas cristalinas e granu-lometrias elucidadas através das técnicas de fluorescência de raios X, difração de raios X e análise de disper-são a laser, respectivamente. A análise termogravimétrica foi utilizada para avaliar a perda de massa da casca de ovo vermelha durante o aquecimento. As espumas vítreas foram formuladas com 7% em massa de agentes espumantes, conformadas por prensagem uniaxial e queimados entre 650 ºC e 850 ºC, com taxa de aqueci-mento de 2,5 °C/min. A influência da temperatura de queima na expansão, na densidade e na porosidade dos corpos cerâmicos obtidos foi avaliada. As espumas tiveram a suas expansões volumétricas avaliadas, sendo suas microestruturas caracterizadas por microscopia óptica. Os resultados mostraram a produção de espumas vítreas altamente porosas, com alta expansão, entre de 122 a 266%, e com baixa densidade, variando de 0,37 a 0,65 g.cm-3, sendo que os melhores resultados foram alcançados a 750 °C. O material obtido possui grande potencial para aplicações na indústria civil, como isolante térmico e acústico, além de minimizar os impactos ambientais causados pelo descarte indevido de lâmpadas fluorescentes e dos resíduos da casca de ovos.Palavras-chave: Resíduos sólidos, temperatura de queima, expansão volumétrica, porosidade, material sus-tentável

Head and neck radiotherapy in patients with oral rehabilitation by dental implants: analysis of implant survival

Radiotherapy (RT) plays an important role in the treatment of patients with head and neck cancer. Clinical changes in the surrounding healthy tissue are often inevitable. The deleterious effects on the bones of the jaws have been considered a contraindication for rehabilitation with dental implants. However, in recent years, the installation of implants in irradiated patients has been consolidated as a valuable treatment option. The aim of this study was to evaluate the effect of RT on the survival of osseointegrated dental implants in patients with head and neck cancer. The applied methodology involved an electronic search in the MEDLINE database during the last five years.  We identified 67 scientific documents related to the keywords: "radiotherapy", "dental implants" and "head and neck cancer", four articles were selected and reviewed, composing this analysis.  It is concluded that dental implants installed in irradiated bone in the oral cavity have a high survival rate, 97.37%, provided that rigorous monitoring is instituted in RT in order to be successful in the long term. The percentage of dental implant failures tended to be higher in the group of irradiated patients

A new Kunitz trypsin inhibitor from Erythrina poeppigiana exhibits antimicrobial and antibiofilm properties against bacteria

Erythrina poeppigiana belongs to Fabaceae family (subfamily Papillionoideae) and is commonly found in tropical and subtropical regions in Brazil. Herein, we described the purification and characterization of a new Kunitz-type inhibitor, obtained from E. poeppigiana seeds (EpTI). EpTI is composed by three isoforms of identical aminoterminal sequences with a molecular weight ranging from 17 to 20 kDa. The physicochemical features showed by EpTI are common to Kunitz inhibitors, including the dissociation constant (13.1 nM), stability against thermal (37–100 ◦C) and pH (2–10) ranging, and the presence of disulfide bonds stabilizing its reactive site. Furthermore, we investigated the antimicrobial, anti-adhesion, and anti-biofilm properties of EpTI against Grampositive and negative bacteria. The inhibitor showed antimicrobial activity with a minimum inhibitory concentration (MIC, 5–10 μM) and minimum bactericidal concentration (MBC) of 10 μM for Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, and Staphylococcus haemolyticus. The combination of EpTI with ciprofloxacin showed a marked synergistic effect, reducing the antibiotic concentration by 150%. The increase in crystal violet uptake for S. aureus and K. pneumoniae strains was approximately 30% and 50%, respectively, suggesting that the bacteria plasma membrane is targeted by EpTI. Treatment with EpTI at 1x and 10 x MIC significantly reduced the biofilm formation and prompted the disruption of a mature biofilm. At MIC/2, EpTI decreased the bacterial adhesion to polystyrene surface within 2 h. Finally, EpTI showed low toxicity in animal model Galleria mellonella. Given its antimicrobial and anti-biofilm properties, the EpTI sequence might be used to design novel drug prototypes