Avaliação do potencial de diferenciação das células da polpa dentária de humanos

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.O desenvolvimento dentário ocorre através de interações sequenciais entre o epitélio oral e o mesênquima. O epitélio oral dá origem aos ameloblastos que secretam o esmalte dentário, enquanto à formação da polpa dentária é derivada das células mesenquimais. Acredita-se que o tecido mesenquimal seja originado a partir das células da crista neural (CN). A CN compreende uma população de células altamente pluripotente que possuem propriedades migratórias dando origem a uma grande variedade de tipos celulares. Células tronco com característica da CN vem sendo encontradas em vários tecidos adultos como na polpa dentária humana de dentes permanentes. Devido a capacidade das células derivadas da CN de se diferenciarem em tipos celulares derivados, as células tronco encontradas na polpa dentária podem potencialmente ser utilizadas para fins terapêuticos em diversas áreas médicas. Neste trabalho avaliamos o potencial das células da polpa dentária de originar células com características de células tronco embrionárias e com características de células neuronais através da utilização de diferentes meios de cultivo indutivos. As células da polpa dentária foram obtidas de terceiros molares de indivíduos adultos humanos. As culturas celulares foram mantidas em passagens baixas e altas em meio de cultura padrão (α- MEM acrescido de SFB a 10%) e meios indutivos para fenótipo neural e para células tronco embrionárias. As análises foram realizadas através de imunocitoquímica, marcação por BrdU (proliferação celular) e pela presença de unidades formadoras de colônias (UFCs). A análise de imunocitoquimica foi realizada para marcadores característicos de células indiferenciadas (Nanog, Sox 2 e Oct-4), marcadores celulares para progenitor neural (Nestina e β- tubulina III), para células gliais (P0), células características de CN (p75) e para actina de músculo liso (α-SMA). Nossos resultados demonstraram presença de células positivas para Nanog, Sox 2, Oct-4, Nestina e β- tubulina III em todas as condições analisadas em cerca de 95% das células, sem diferenças significativas entre elas sugerindo a presença de células tronco/progenitoras O marcador α-SMA apresentou redução em passagens baixas e altas quando cultivados no meio de células tronco neurais (CTN). Apesar de não termos encontrado diferenças entre a expressão fenotípicas, observamos diferenças morfológicas celulares entre os diferentes meios. As células mantidas em meio para CTN apresentaram prolongamentos citoplasmáticos maiores quando comparado aos outros meios, e há uma tendência desses prolongamentos aumentarem com as passagens. Observamos ainda diminuição da proliferação celular e de UFCs em passagens altas neste meio. Em conjunto estes dados sugerem um possível processo de diferenciação celular neuronal quando as células são cultivadas por cerca de 10 passagens em CTN.Teeth development occurs through sequential interactions between oral epithelium and mesenchyme. The oral epithelium gives rise to ameloblasts that secrete enamel, whereas dental pulp cells are derived from mesenchyme. It is believed that the mesenchymal tissue is originated from neural crest cells (NC). The NC comprises a population of pluripotent cells with have highly migratory properties, with can give rise to a wide variety of cell types. Stem cells with NC characteristics have been found in various adult tissues such as the human dental pulp of permanent teeth. Due to the ability of NC-derived cells to differentiate in to multiple cells lineages, stem cells found in the dental pulp can potentially be used for therapeutic purposes in various medical fields. In this study we analyzed the potentiality of dental pulp cells to give rise to cells with characteristics of embryonic and neural stem cells through the use of different commercial inductive culture media. Dental pulp cells were obtained from third molars of human’s adult. Cell cultures were maintained at low and high passages either in control medium (α-MEM plus 10% FCS) or inductive medium for neural stem cells (NSC) or embryonic stem cells inductive medium (ESC). Analyses were performed by immunocytochemistry for BrdU labeling and the formation of Colony Forming Units (CFUs). Immunocytochemistry analyses were performed in order to detect the protein levels of Nanog, Sox 2 and Oct-4 (markers characteristic of undifferentiated cells), Nestin and β-tubulin III (neural progenitor cells), P0 (glial cells), p75 (characteristics of CN) and smooth muscle actin (α-SMA). Our results showed that the protein expression levels for Nanog, Sox 2, Oct-4, Nestin and β-tubulin III were higher in all samples and they were kept constant among the three different conditions tested. However, morphological differences were observed among groups: cells maintained in NSC medium showed longer cytoplasmatic process when compared to other treatments. Also we observed a tendency to increase these processes when the passages number increase. The analysis of the cells proliferation and CFU also showed a decrease in high passages in medium for NSC. These data together with the morphological differences found suggest the occurrence of a process of cellular differentiation that is for neural cells, and that was caused by the exposure off cell to the inductive medium used. Statistical differences between the control and ESC medium were not found

School leadership: from practice to policy

Across many OECD countries, until recently, one of the few requirements for becoming a school leader was to be a teacher for a minimum amount of years, without any specific kind of training or support beyond that required for teaching. Yet, school leaders’ tasks have become increasingly complex, as a result of globalisation, a shift towards knowledge based economies, greater student diversity and an increased government focus on education policy reforms targeting and affecting schools. The role of school principals has moved from administrative leadership towards focusing on student outcomes, with more autonomy and accountability, and increased responsibilities for implementing policy reforms in schools and classrooms. This article focuses on how policies can ensure that school leaders contribute to school improvement. It builds on an international OECD study on school leadership which analysed practices across 22 education systems in 2008 and explores developments since to propose policy options that can contribute to support the professionalization of school leadership. Among the key strategies suggested that many countries have been taking up are clarifying the role of school leaders based on the tasks that make most difference on school outcomes, ensuring there is specialised training and development, that working conditions are attractive to ensure that there are quality professionals in exercise and to make it a sustainable profession that is well supported

Reformas educativas: el caso del liderazgo escolar en perspectiva comparada

Esta tesis explora los factores que influyen en la adopción de reformas del liderazgo escolar a través de los países de la OCDE. Su objetivo es responder a la pregunta: ¿es el liderazgo escolar una prioridad de la política y la reforma educativa? El papel de los directores de escuela, tanto de la Enseñanza Primaria como Secundaria, ha evolucionado en los últimos veinte años, dejando de lado la función administrativa en favor del liderazgo dirigido a la mejora de los resultados escolares. Esta tesis entiende por reformas de liderazgo escolar las medidas adoptadas por los Gobiernos dirigidas a profesionalizar su función mediante un marco que las defina y desarrolle como una profesión concreta dentro del sistema educativo y ofrezca una formación específica. El estudio comienza con un análisis que muestra que la investigación en materia de reformas del liderazgo escolar es muy reciente. Si bien hay artículos que han aclarado la contribución significativa de los directores a la mejora educativa (Robinson, Rowe, & Lloyd, 2009; Branch, Hanushek, & Rivkin, 2013), son varios los autores que coinciden en solicitar el estudio más profundo de los procesos de reforma de la dirección para entender el contexto (Bell & Stevenson, 2015; Diem & Young, 2015). Esta tesis pretende completar este espacio de investigación, analizando los factores que han influido en la reforma del liderazgo escolar a través de países de la OCDE. Partiendo de las teorías existentes en materia de políticas públicas y educativas (Bell & Stevenson, 2015; Sabatier & Weible, 2014), la tesis desarrolla un marco teórico para el análisis de las reformas del liderazgo escolar. El marco propone que las reformas del liderazgo escolar están relacionadas con el contexto político y educativo, con políticas complementarias y con la participación de determinados actores clave. Para probar esta hipótesis, se ha empleado la metodología de «métodos mixtos» (mixed methods), y se ha llevado a cabo los siguientes análisis..

Education reforms: school leadership in comparative perspective

Tesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Ciencias Políticas y Sociología, leída el 21-04-2017Esta tesis explora los factores que influyen en la adopción de reformas del liderazgo escolar a través de los países de la OCDE. Su objetivo es responder a la pregunta: ¿es el liderazgo escolar una prioridad de la política y la reforma educativa? El papel de los directores de escuela, tanto de la Enseñanza Primaria como Secundaria, ha evolucionado en los últimos veinte años, dejando de lado la función administrativa en favor del liderazgo dirigido a la mejora de los resultados escolares. Esta tesis entiende por reformas de liderazgo escolar las medidas adoptadas por los Gobiernos dirigidas a profesionalizar su función mediante un marco que las defina y desarrolle como una profesión concreta dentro del sistema educativo y ofrezca una formación específica. El estudio comienza con un análisis que muestra que la investigación en materia de reformas del liderazgo escolar es muy reciente. Si bien hay artículos que han aclarado la contribución significativa de los directores a la mejora educativa (Robinson, Rowe, & Lloyd, 2009; Branch, Hanushek, & Rivkin, 2013), son varios los autores que coinciden en solicitar el estudio más profundo de los procesos de reforma de la dirección para entender el contexto (Bell & Stevenson, 2015; Diem & Young, 2015). Esta tesis pretende completar este espacio de investigación, analizando los factores que han influido en la reforma del liderazgo escolar a través de países de la OCDE. Partiendo de las teorías existentes en materia de políticas públicas y educativas (Bell & Stevenson, 2015; Sabatier & Weible, 2014), la tesis desarrolla un marco teórico para el análisis de las reformas del liderazgo escolar. El marco propone que las reformas del liderazgo escolar están relacionadas con el contexto político y educativo, con políticas complementarias y con la participación de determinados actores clave. Para probar esta hipótesis, se ha empleado la metodología de «métodos mixtos» (mixed methods), y se ha llevado a cabo los siguientes análisis...This thesis explores the factors that influence the adoption of school leadership policy reform across OECD countries. It aims to respond to the question: is school leadership an education policy reform priority? The role of school leaders (school directors in primary and secondary schools) has evolved in the past 20 years from more administrative towards leadership centred in school outcomes. School leadership reform refers to actions taken by governments towards their professionalization, through actions that define and develop their role as a concrete profession and provide specific training. The thesis begins with a literature review of school leadership reform, which proves to be a multidisciplinary research topic. It organizes the research into four categories: education policy, school improvement, school leadership and comparative policy. The research shares some common findings: the evolution of school leadership responds to more general trends towards decentralisation, autonomy and accountability; there has been a shift on the role of school leaders from administration towards a pedagogical leadership role; and there is a need to invest in school leaders, as they play a key role in reform implementation or in educational improvement. The analysis also shows that research on school leadership reforms is very recent, and while the important contribution of school directors to school improvement has been recognised (Robinson, Rowe, & Lloyd, 2009; Branch, Hanushek, & Rivkin, 2013), a number of authors call on the need to delve further on researching school leadership reform contexts (Bell & Stevenson, 2015; Diem & Young, 2015). This thesis aims to complete this research gap, by analysing the factors that have influenced the adoption of school leadership reform across OECD countries. Building on public policy and education policy theory (Bell & Stevenson, 2015; Sabatier & Weible, 2014), this thesis develops a theoretical framework for analysis of school leadership reforms which proposes that school leadership reforms are related to their political and education context, to complementary policies and to the role of key policy actors. To test this, the thesis uses mixed methods analysis to undertake...Fac. de Ciencias Políticas y SociologíaTRUEunpu

Treatment of pregnant rats with oleoyl-estrone slows down pup fat deposition after weaning

BACKGROUND: In rats, oral oleoyl-estrone (OE) decreases food intake and body lipid content. The aim of this study was to determine whether OE treatment affects the energy metabolism of pregnant rats and eventually, of their pups; i.e. changes in normal growth patterns and the onset of obesity after weaning. METHODS: Pregnant Wistar rats were treated with daily intragastric gavages of OE in 0.2 ml sunflower oil from days 11 to 21 of pregnancy (i.e. 10 nmol oleoyl-estrone/g/day). Control animals received only the vehicle. Plasma and hormone metabolites were determined together with variations in cellularity of adipose tissue. RESULTS: Treatment decreased food intake and lowered weight gain during late pregnancy, mainly because of reduced adipose tissue accumulation in different sites. OE-treated pregnant rats' metabolic pattern after delivery was similar to that of controls. Neonates from OE-treated rats weighed the same as those from controls. They also maintained the same growth rate up to weaning, but pups from OE-treated rats slowed their growth rate afterwards, despite only limited differences in metabolite concentrations. CONCLUSION: The OE influences on pup growth can be partially buffered by maternal lipid mobilization during the second half of pregnancy. This maternal metabolic "imprinting" may condition the eventual accumulation of adipose tissue after weaning, and its effects can affect the regulation of body weight up to adulthood

Education policy implementation : A literature review and proposed framework

This literature review focuses on education policy implementation, its definition, processes and determinants. It aims to clarify what implementing policies involve in complex education systems to support policy work, building on the literature and country examples. An introduction delves into the reasons behind the need to update the concept of education policy implementation, which is defined as a purposeful and multidirectional change process aiming to put a specific policy into practice and which affects an education system on several levels. The paper then analyses the determinants that hinder or facilitate the process and groups them under four dimensions which support effective implementation: smart policy design, inclusive stakeholder engagement, conducive context and a coherent implementation strategy. Based on these dimensions, the paper proposes a generic framework and a complementary set of questions and principles for action that can guide policy makers to design, analyse and carry out their education policy implementation processes

Avaliação do potencial ectomesenquimal das células da polpa dentária

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2013A formação dentária ocorre através de interações sequenciais entre o epitélio oral e o mesênquima facial. O epitélio oral dá origem aos ameloblastos, enquanto a formação da polpa dentária é derivada das células mesenquimais. A maior parte do tecido mesenquimal na região cefálica é formado pelas células da crista neural (CN). A CN compreende uma população de células altamente multipotentes. Células tronco com característica da CN vem sendo encontradas em vários tecidos adultos como na polpa dentária humana de dentes permanentes. As células tronco encontradas na polpa dentária apresentam potencial de utilização para fins terapêuticos em diversas áreas médicas. Neste trabalho, avaliamos o potencial de diferenciação celular da polpa dentária, in vivo e in vitro, durante o desenvolvimento embrionário e em adultos. Para esse fim, lâminas histológicas de dentes de ratos foram analisadas, através de imunohistoquímica, em 3 fases do desenvolvimento: idade fetal de 17 dias (F17), 4 dias após o nascimento (D4) e em idade adulta. As análises ocorreram por imunohistoquímica para os marcadores de pluripotencialidade (Oct4 e Nanog) e de CN (Sox10, HNK1 e p75). Além disso, células da polpa dentária humana obtida de terceiros molares de indivíduos adultos foram analisadas por RT-PCR para os mesmos marcadores de pluripotencialidade e para os marcadores de CN Sox10, p75, Nestina e Snail. Estas células foram ainda cultivadas em meio de cultura padrão (aMEM acrescido de SFB a 10%) e meio indutivo neural (MCTN) e analisadas por imunocitoquímica para os marcadores de pluripotencialidade descritos acima, marcadores neurais (Nestina e ßTubulina III) e marcador mesodermal (aSMA) e ainda para a capacidade de originar Unidades Formadoras de Colônias (UFCs). Os resultados demonstram que as células da PD de ratos expressam os marcadores de pluripotencialidade Oct4 e Nanog, assim como o marcador de CN Sox10, em F17, D4 e no adulto. Marcação para p75 e HNK1 foram observados em D4 e no adulto respectivamente. Os resultados demonstraram ainda que as células da PD adulta de humanos apresentam expressão gênica dos marcadores de pluripotencialidade analisados e de CN Sox10, Snail e Nestina. Após cultivo, a células de apresentam expressão proteica de OCT4, dos marcadores neurais (ectodermais) ßTubulinaIII e Nestina, e de músculo liso (mesodermal) aSMA. Além disso, as células de PD apresentam capacidade clonogênica, originando colônias com potencial ectomesenquimal (com células positivas para aSMA, ßTubulinaIII e Nestina). O cultivo em meio indutivo neural promoveu alterações morfológicas, e diminuição na proporção de células positivas para aSMA. Em conjunto, nossos resultados sugerem que a PD contém população de células multipotentes, clonogênicas com potencial ectomesenquimal, aparentando estarem presentes desde o início do desenvolvimento até a fase adulta. Ao mesmo tempo, essas células apresentam potencial de diferenciação neural. Desse modo, nossos dados demonstram que as células da PD apresentam um real potencial terapêutico.2013-12-06T00:05:40

Análise do secretoma de linhagens celulares originadas de tumores gástricos : identificação de novos potenciais alvos terapêuticos e biomarcadores

As neoplasias malignas são responsáveis por milhões de mortes todos os anos, sendo que os problemas acarretados por tumores gástricos representam a terceira causa de morte por câncer a nível mundial. Um dado preocupante em relação ao câncer gástrico é em relação a sobrevida global de 5 anos que é de apenas 30%, aproximadamente. Um dos principais fatores que acarretam em taxas tão alarmantes é que em estágios iniciais o câncer gástrico é assintomático, fazendo com que o seu diagnóstico ocorra normalmente em estágios mais tardios. Além disso, prognósticos ruins mesmo em estágios iniciais da doença são comuns neste tipo de câncer, principalmente devido ao alto índice de resistência das células tumorais aos tratamentos convencionais. Com a necessidade de novos biomarcadores e novas modalidades de tratamentos, o estudo do secretoma de células tumorais vem sendo amplamente explorado. Este tipo de estudo é utilizado como meio de identificar novas moléculas que possam ser utilizadas em diagnósticos mais precoces assim como novos alvos terapêuticos. Por isso, o objetivo desse trabalho foi analisar o perfil do secretoma de células tumorais derivadas de linhagens de câncer gástrico (ACP02 e ACP03), em comparação com uma linhagem de mucosa gástrica normal (MN01), buscando novas moléculas que possam servir de biomarcadores, bem como fonte para novos alvos terapêuticos. Para o alcance desse objetivo o meio condicionado das diferentes linhagens celulares foi coletado, e as proteínas presentes foram concentradas através de ultrafiltração e identificadas através de análises por Q-Tof LC/MS/MS. A análise de espectrometria de massas identificou 333 proteínas secretadas, sendo 86 exclusivamente secretadas por ambas as linhagens de câncer gástrico. Após a identificação, as proteínas foram analisadas através de biologia de sistemas e, devido a sua importância, as proteínas PDIA6, GDF15 e HSP47 foram escolhidas para análises por Western blot e qPCR. A análise de Western blot confirmou que as proteínas GDF15 e HSP47 são secretadas apenas pelas linhagens de adenocarcinomas gástricos. Porém quando analisamos a proteína PDIA6 não conseguimos comprovar a sua secreção diferencial pelas linhagens de adenocarcinomas. Com estes resultados, resolvemos analisar a proteína HSP47 como possível alvo terapêutico, através do efeito do seu silenciamento nas linhagens de câncer gástrico pela técnica de CRISPR. Estas análises demonstraram que o silenciamento da proteína HSP47 reduziu a capacidade migratória, invasiva e de formação de esferas nas células tumorais. Em síntese, os resultados demonstraram que a HSP47 pode ser um possível alvo terapêutico no tratamento do câncer gástrico, e que HSP47 e GDF15 possuem potencial para serem utilizadas como biomarcadores devido a sua secreção diferencial pelas células tumorais.The malignant neoplasms are responsible for millions of deaths every year, and the gastric cancer is the third leading cause of cancer deaths worldwide. An alarming finding regarding gastric cancer is the five-year survival rate of only 30%. One of the main problems related to gastric cancer is that it is asymptomatic in the initial phases of the disease, making their diagnosis usually occur in later stages. Also, poor prognoses even in the early stages of the disease are frequent in this type of cancer, mainly due to the high resistance of tumor cells to conventional treatments. The study of the secretome of tumor cell lines has been extensively explored to discover new biomarkers and new modalities of treatments, that can be used in earlier diagnoses as well as new therapeutic targets. Then, the present study aimed to characterize the secretome of two human gastric cancer cell lines (ACP02 and ACP03) in order to compare their differences concerning the non-neoplastic gastric cell line (MN01). For this purpose, we collected the conditioned medium of these cell lines and concentrated the secreted proteins by ultrafiltration. After that, the identification of the proteins was made by ultra-performance Q-Tof LC/MS/MS. Mass spectrometry-based proteomics identified 333 proteins in the three cell lines of which 86 proteins are identified exclusively from the two carcinoma cell lines. After the identification, the proteins were analyzed through system biology and, due to their importance, the proteins PDIA6, GDF15 e HSP47 were chosen for western blot and qPCR analyzes. The Western blot analysis showed that GDF15 and HSP47 are secreted only by the tumor cell lines. However, when we analyzed de PDIA6 protein, we are not able to confirm the differential secretion by the tumor cell lines. With these results, we decided to analyze the HSP47 protein as a possible therapeutic target, through the effect of its silencing on gastric cancer lines by the CRISPR technique. These analyses showed that HSP47 silencing decreases the migration, invasion, and sphere forming capacity in gastric tumor cells. In summary, the results demonstrated that the HSP47 protein may be a possible therapeutic target in the treatment of gastric cancer and that HSP47 and GDF15 proteins have potential to be used as biomarkers, due to their differential secretion by tumor cells

Koolijuhtimise täiustamine

1. OSA: POLIITIKA JA PRAKTIKAKogumiku ""Koolijuhtimise täiustamine"" 1. osas ""Poliitika ja praktika"" selgitatakse, miks koolijuhtimisest on saanud võtmetähtsusega hariduspoliitiline küsimus ning esitatakse neli poliitilist hooba, mis üheskoos võivad kaasa aidata koolijuhtimisele ja koolide tulemuste parandamisele