Escola e espaço local: representações e práticas dos professores do Barreiro

Dissertação de mestrado em Ciências da Educação: área de Educação e DesenvolvimentoNum momento em que os professores se constituem em actores fundamentais de uma reforma educativa, que atribui ao nível local competências e possibilidades de adaptação dos processos educativos aos contextos sociais e culturais dos alunos, propõe-se o conceito de representação do espaço como identificador de um processo de distanciamento dos professores face aos contextos locais onde exercem a sua actividade. As representações do espaço funcionam como formas de reconhecimento e de apreciação de contextos da acção profissional, e constituem-se como marcos referenciais das práticas profissionais dos professores. Pela sua definição recobrem simultaneamente a visibilidade das relações de significação, de valorização e de centração que se estabelecem com o espaço e com a sociedade que o ocupa

Genetic requirements for Piwi-induced stable transgenerational gene silencing in Caenorhabditis elegans

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012A descoberta, em 1998, da interferência por RNA (RNAi) revelou que pequenos RNAs não codificantes estão envolvidos no controlo da expressão genética. Atualmente, várias vias de RNAi são conhecidas em Eucariotas. Apesar de divergirem em muitos aspetos, todas possuem complexos regulatórios envolvendo uma proteína Argonauta e um pequeno RNA. O complexo Argonauta-pequeno RNA vai ligar-se a RNAs mensageiros (mRNAs) com sequência complementar. De seguida, a expressão do mRNA alvo será afetada, nomeadamente, o mRNA poderá ser degradado ou poderá ocorrer inibição da sua tradução. O silenciamento genético promovido pelas vias de RNAi pode também dar-se ao nível da cromatina. Nesse caso, há o recrutamento de complexos enzimáticos capazes de modificá-la. Assim, utilizando estas plataformas mecanísticas, as vias de RNAi regulam a expressão genética a vários níveis, tendo particular importância no controlo de elementos genéticos considerados egoístas ou parasíticos, como os elementos transponíveis (TEs). As proteínas Argonautas podem ser divididas em três subfamílias: a subfamília Ago, cujos membros são expressos ubiquamente e associam-se a RNAs em cadeia dupla; a subfamília Piwi, que são expressas na linha germinal dos metazoários e associam-se a um tipo específico de pequenos RNAs de cadeia simples, os piRNAs; e a subfamília Wago, cujos componentes estão apenas presentes em Nemátodes, tal como Caenorhabditis elegans. Em C. elegans, existem cinco classes de pequenos RNAs, divididas de acordo com a sua dimensão, alterações químicas e Argonautas às quais se associam: pequenos RNAs primários, 22G-RNAs, 21U-RNAs, 26G-RNAs e microRNAs. Os pequenos RNAs primários são RNAs de cadeia dupla que, uma vez dentro das células do nemátode, são clivados em pequenos RNAs. Posteriormente, estes irão associar-se a uma Argonauta que removerá uma das cadeias e o complexo pequeno RNA-Argonauta ligar-se-á a um mRNA alvo. Estes pequenos RNAs primários, não justificam, por si, o silenciamento genético robusto que é observado. Para um forte silenciamento, é necessário que haja amplificação do sinal. Para este efeito, são recrutadas para o mRNA alvo RNA Polimerases dependentes de RNA (RdRPs) que sintetizam pequenos RNAs secundários. Estes são denominados 22G-RNAs por exibirem um comprimento de 22 nucleótidos e uma forte tendência para guanosina na sua extremidade 5’. Por sua vez, os 22G-RNAs vão associar-se a Argonautas da classe Wago, exercendo silenciamento genético de formas que ainda não são completamente claras. Recentemente, foi descoberta em C. elegans uma Argonauta expressa nas células somáticas, denominada NRDE-3, que após a ligação a 22G-RNAs, migra para o núcleo e interage com pré-mRNAs com sequência complementar ao 22G-RNA que transportam. Após o reconhecimento de um pré-mRNA complementar, a NRDE-3 recruta os fatores nucleares NRDE-1, NRDE-2 e NRDE-4 que, por sua vez, irão inibir a progressão da Polimerase de RNA II e recrutar enzimas ou complexos enzimáticos modificadores de cromatina, como as metiltransferases de histonas. Estas depositarão marcas na cromatina dos genes alvo, provocando silenciamento genético. Um exemplo concreto é a trimetilação no nono resíduo de lisina da cauda da histona H3 (H3K9me3). Em Eucariotas, as proteínas Piwi, associadas a piRNAs, mantêm TEs silenciados, sendo fulcrais para a manutenção da linha germinal. Os 21U-RNAs de C. elegans, assim denominados por terem 21 nucleótidos de comprimento e uma forte propensão para uracilo na sua extremidade 5’, foram recentemente identificados como piRNAs, pois associam-se às proteínas Piwi, dependendo delas para a sua síntese na linha germinal. C. elegans tem duas proteínas Piwi, PRG-1 e PRG-2 que são expressas na linha germinal. É de notar que PRG-1 é preponderante para a atividade dos 21U-RNAs, enquanto PRG-2 não aparenta ser tão relevante. Os 21U-RNAs são transcritos principalmente de duas vastas regiões localizadas no cromossoma IV. Curiosamente, os 21U-RNAs diferem de piRNAs de outros sistemas por serem transcritos como unidades individuais, graças a um motivo conservado, localizado a montante do 21U-RNA, que é reconhecido por fatores de transcrição da família Forkhead. Após a transcrição de dado 21U-RNA, este é processado de uma forma que não é completamente clara, mas que inclui metilação a 3’. Seguidamente, os 21U-RNAs vão associar-se à PRG-1 e juntos vão ligar-se a mRNAs alvo que poderão ser transcritos de TEs ou de outros genes que codifiquem para proteínas expressas na linha germinal. Esta ligação não exige perfeita complementaridade de bases, tolerando algumas bases desemparelhadas. O complexo PRG-1- 21U-RNA conduz ao recrutamento de RdRPs o que, pela produção de 22G-RNAs e a sua associação a WAGOs, irá reforçar o silenciamento genético. Esta via silencia, de forma robusta, TEs na linha germinal. Presumivelmente, outros genes importantes para a gametogénese também poderão ser regulados pelos 21U-RNAs. Em C. elegans, o silenciamento genético induzido por RNAi pode ser herdado. No entanto, o silenciamento acaba por diluir-se após um número muito curto de gerações. A base mecanística e os fatores envolvidos eram, até há pouco tempo, desconhecidos. Estudos recentes identificaram os 22G-RNAs e a marca de cromatina H3K9me3 na base de silenciamento genético hereditário. Tanto as proteínas NRDE como as WAGO foram diretamente implicadas. No entanto, a indução de silenciamento genético transgeneracional nunca foi atribuída a piRNAs. A caracterização de um novo tipo de silenciamento genético induzido por pequenos RNAs, em particular por piRNAs, que tenha capacidade de ser mantido por um número indefinido de gerações, foi o foco do trabalho experimental apresentado nesta dissertação. Este silenciamento foi originalmente encontrado em estirpes portadoras de transgenes em cópia única no genoma, com expressão específica na linha germinal. Estes transgenes foram silenciados espontaneamente e o silenciamento foi transmitido de forma estável e totalmente penetrante à sua descendência. Pelo papel dos 21U-RNAs no seu estabelecimento, este silenciamento genético foi denominado de silenciamento epigenético induzido por RNAi (RNAe). Uma vez estabelecido, o RNAe torna-se independente de PRG-1 e perpetua-se indefinidamente sem sinais de reversão. Os objetivos desta dissertação almejavam a identificação de genes envolvidos na manutenção deste novo paradigma de silenciamento genético, que ocorre na linha germinal de C. elegans. Para tal, recorri a cruzamentos genéticos, cruzando estirpes portadoras do transgene silenciado por RNAe com estirpes mutantes para um gene candidato. Através deste sistema experimental, a reativação do transgene indica que o gene candidato está envolvido na manutenção do RNAe. Os meus resultados apoiam o envolvimento de 22G-RNAs na manutenção do RNAe, uma vez que uma mutação no gene mut-7, codificante para uma exonuclease putativa e que foi previamente implicado na biogénese de 22G-RNAs, anula o RNAe. As WAGOs foram também implicadas, uma vez que wago-9 mutado reativa o transgene. Recentemente, outros demonstraram que WAGO-9 está presente no núcleo e poderá atuar na linha germinal de forma análoga a NRDE-3. A via NRDE de RNAi nuclear foi também implicada, uma vez que mutantes de nrde-1 e nrde-2 não apresentam RNAe. Um efeito materno foi igualmente notado, dado que a reativação do transgene foi consistentemente observada na segunda geração de homozigotia para o gene candidato. Além disso, um mutante defetivo para RNAe foi recuperado após triagens de mutantes. Este mutante apresentou sensibilidade a RNAs em cadeia dupla exógenos, indicando que o mutante não faz parte da classe RNAi defetivo (Rde). Tomados em conjunto, estes resultados apoiam um modelo em que, após o estabelecimento do RNAe, há produção de 22G-RNAs que se poderão ligar a WAGO-9 e juntos migrarão para o núcleo. No núcleo, o complexo 22G-RNA - WAGO-9 irá recrutar as proteínas NRDE1, NRDE-2 e NRDE-4, que por sua vez poderão recrutar complexos enzimáticos modificadores de cromatina, depositando H3K9me3. Para o restabelecimento de RNAe a cada geração, provavelmente ocorrerá deposição materna de 22G-RNAs nos embriões. Por sua vez, estes pequenos RNAs herdados irão provavelmente restabelecer as marcas na cromatina. Mais, os 22G-RNAs presumivelmente serão sintetizados de novo a cada geração. Os resultados aqui apresentados elucidam quais as vias e genes necessários para o RNAe, um novo fenómeno de regulação estável e duradoura da expressão genética. Estes estudos contribuem para a compreensão da regulação da expressão genética por pequenos RNAs. A um nível mais amplo, o RNAe poderá ter implicações na compreensão de fenómenos evolutivos e do desenvolvimento.In metazoans RNAi regulates gene expression and has great importance in the most diverse biological processes. The spreading of RNAi-induced gene silencing through multiple generations has been described. However such gene silencing events are transient, eventually disappearing. The existence of RNAi-induced epigenetic silencing (RNAe), capable of stable transmission through numerous generations, is a long-standing question in the field. In animals, Piwi proteins and piRNAs control transposons and maintain the integrity and functionality of the germline. The C. elegans Piwi protein, PRG-1 and its piRNAs have been recently implicated in the induction of RNAe in germline expressed single-copy transgenes. Those strains showed stable silencing with no reversion over time. The work reported here used those RNAe strains to identify genes involved in the maintenance of RNAe. Genetic crosses of RNAe strains with mutant candidate genes revealed that MUT-7, a putative exonuclease involved in 22G-RNA biogenesis, is required for RNAe. Moreover, WAGO-9, a germline nuclear Argonaute, and proteins belonging to the nuclear RNAi pathway, NRDE-1 and NRDE-2, are also required. In those crosses, RNAe was only depleted in the second homozygous generation for the candidate gene introduced, revealing a striking maternal effect. In parallel, forward genetic screens identified one hit. The hit was RNAi-sensitive, indicating that the hit does not belong to the RNAi-deficient (Rde) class. Altogether, those results support a model where 22G-RNAs, WAGOs and the NRDE pathway act together to maintain RNAe indefinitely. Reestablishment of RNAe in every generation may be explained by maternal deposition of 22G-RNAs into embryos, followed by reinforcement of chromatin marks. Furthermore, to assure perpetuation of RNAe, 22G-RNAs may be synthesized de novo in every generation. The results reported here shed light on the requirements of RNAe in the germline of C. elegans. This new paradigm may be of great importance to understand the regulation of gene expression, with implications in evolution and development

Acute leukemia as the initial presentation of blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm

Copyright © 2020 the International Society of DermatologyA 90-year-old man presented with a 1-month history of fatigue and rapidly progressive, widespread skin lesions. Physical examination exhibited numerous erythematous to violaceous tumors and bruise-like patches scattered through his trunk and limbs (Fig. 1a,b). Enlarged bilateral axillary lymph nodes were noted.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Insights into the in vitro antitumor mechanism of action of a new pyranoxanthone

Naturally occurring xanthones have been docu mented as having antitumor properties, with some of them presently undergoing clinical trials. In an attempt to improve the biological activities of dihydroxyxanthones, prenylation and other mole cular modifications were performed. All the com pounds reduced viable cell number in a leukemia cell line K-562, with the fused xanthone 3, 4-dihydro-12-hydroxy-2,2-dimethyl-2H,6H-pyrano[3, 2-b]xanthen-6-one (5) being the most potent. The pyranoxanthone 5 was particularly effective in additional leukemia cell lines (HL-60 and BV-173). Furthermore, the pyranoxanthone 5 decreased cel lular proliferation and induced an S-phase cell cycle arrest. In vitro, the pyranoxanthone 5 increased the percentage of apoptotic cells which was confirmed by an appropriate response at the protein level (e.g., PARP cleavage). Using a com puter screening strategy based on the structure of several anti- and pro-apoptotic proteins, it was verified that the pyranoxanthone 5 may block the binding of anti-apoptotic Bcl-xL to pro-apoptotic Bad and Bim. The structure-based screening revealed the pyranoxanthone 5 as a new scaffold that may guide the design of small molecules with better affinity profile for Bcl-xL.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

ELASTÓLISE DA DERME PAPILAR SEMELHANTE A PSEUDOXANTOMA ELÁSTICO - UMA ENTIDADE SUBDIAGNOSTICADA

Pseudoxanthoma elasticum-like papillary dermal elastolysis (PXE-PDE) is an acquired clinical entity, of unknown etiology, characterized by partial or total absence of elastic fibers in the papillary dermis. We describe the case of a 62-year-old Caucasian woman, Fitzpatrick III skin phototype, with a dermatosis characterized by multiple, asymptomatic, yellowish, monomorphic, rounded papules, with 2-3mm in diameter, located on the posterior and lateral sides of the neck with 2 years of evolution. Histopathological examination revealed a marked reduction of elastic fibres in the papillary dermis confirming PXE-PDE diagnosis. We consider that this entity, exclusively cutaneous, is under-diagnosed because it is an asymptomatic disease, in which histopathological diagnosis is difficult, if it is not clinically considered.A elastólise da derme papilar semelhante a pseudoxantoma elástico (EDP-PXE) é uma entidade clinico- -patológica adquirida, de etiologia desconhecida, caracterizada por ausência parcial ou total de fibras elásticas na derme superficial. Reportamos o caso clínico de uma doente caucasiana de 62 anos, fototipo III, com uma dermatose localizada nas regiões posterior e laterais do pescoço caracterizada por múltiplas pápulas amareladas, monomórficas, arredondadas, com 2-3mm de diâmetro, assintomáticas, presentes desde há cerca de 2 anos. O exame histopatológico, com a coloração de orceína, revelou ausência quase total de fibras elásticas na derme superficial, compatível com o diagnóstico de EDP-PXE. Consideramos que esta entidade, exclusivamente cutânea, está sub-diagnosticada por se tratar de uma patologia assintomática, cujo diagnóstico histopatológico está dificultado, na ausência de corretas hipóteses de diagnóstico

Residential water demand analysis

This paper presents an estimate of the water demand in Distrito Federal, a Federative Unit of Brazil where the capital of Brazil is located. We develop a water demand model based on the tariff structure to capture the essential aspects of water use by companies and by consumers. For water companies, knowledge of the demand curve provides necessary information needed to set rates that promote an increase in their revenues. For consumers, knowledge of the evolution of water prices is important for the formulating of policies to rationalize consumption. We analyze the residential water demand behavior in two categories of consumers: normal and popular. The demand for water in the study was inelastic in relation to price and income for both the normal and popular customer categories

Alterations in the immunoexpression of claudin-1 between different grades of oral epithelial dysplasias

Claudins are transmembrane proteins that play a role in cell proliferation and adhesion and tumourigenesis. This study evaluated the immunoexpression of claudin-1 in the oral epithelial dysplasia (OED) (19 mild, 26 moderate, 3 severe). Diffuse staining predominated in mild (89.4%) and moderate (80.8%) OEDs. Immunoexpression in the middle and upper third was observed in all mild cases, whereas in moderate/severe dysplasias staining was observed in the upper third in 41.4% of cases, in the upper and middle third in 41.4%, and in the upper, middle and lower third in 17.2% (P0.05). The differences in the immunoexpression of claudin-1 between different grades of OEDs suggest the involvement of this protein in the progression of dysplasias

THORACOSCOPIC SYMPATHECTOMY IN PATIENTS WITH PALMAR HYPERHIDROSIS: EVALUATION OF QUALITY OF LIFE AFTER SURGERY

When approaching patients with primary palmar hyperhidrosis (PH), refractory to conservative treatment, endoscopic thoracic sympathectomy (ETS) is a safe and effective alternative. Methods and materials: Retrospective study in order to assess the quality of life of patients with PH undergoing ETS, from 1 of January 2009 to 31 of December 2014. The data was collected from the medical registries of each patient and from a clinical interview with the application of the quality of life SF-36 questionnaire. The statistical analysis was preformed using SPSS. Results: In this period, 21 patients were operated, 14 of which answered the questionnaire. It was found that ETS is an effective procedure in 100% of patients, who have a reasonable quality of life as assessed by the SF-36 questionnaire. Most patients have a perception of improved quality of life after ETS. In this study, 85.7% of patients developed compensatory hyperhidrosis (CH). Discussion: In this study we confirmed the benefit associated to ETS, in line with previous studies. However, this study as some limitations such as the subjectivity of the symptoms, the small sample size, the recall bias and the complexity of the SF-36 questionnaire. When referring a patient to ETS, the possibility of CH should be addressed in patient’s decision-making process given its high incidence. Conclusion: The ETS is a safe and effective procedure and is associated with an improved quality of life of individuals with PH

ULK overexpression mitigates motor deficits and neuropathology in mouse models of Machado-Joseph disease

Machado-Joseph disease (MJD) is a fatal neurodegenerative disorder clinically characterized by prominent ataxia. It is caused by an expansion of a CAG trinucleotide in ATXN3, translating into an expanded polyglutamine (polyQ) tract in the ATXN3 protein, that becomes prone to misfolding and aggregation. The pathogenesis of the disease has been associated with the dysfunction of several cellular mechanisms, including autophagy and transcription regulation. In this study, we investigated the transcriptional modifications of the autophagy pathway in models of MJD and assessed whether modulating the levels of the affected autophagy-associated transcripts (AATs) would alleviate MJD-associated pathology. Our results show that autophagy is impaired at the transcriptional level in MJD, affecting multiple AATs, including Unc-51 like autophagy activating kinase 1 and 2 (ULK1 and ULK2), two homologs involved in autophagy induction. Reinstating ULK1/2 levels by adeno-associated virus (AAV)-mediated gene transfer significantly improved motor performance while preventing neuropathology in two in vivo models of MJD. Moreover, in vitro studies showed that the observed positive effects may be mainly attributed to ULK1 activity. This study provides strong evidence of the beneficial effect of overexpression of ULK homologs, suggesting these as promising instruments for the treatment of MJD and other neurodegenerative disorders

PLANO ESTRATÉGICO DO ASPIRING GEOPARQUE OESTE (AGO)

A publicação “Plano Estratégico do aspiring Geoparque Oeste” é um instrumento de gestão essencial para o desenvolvimento do projeto de candidatura a Geoparque Mundial da UNESCO, mas sobretudo para a implementação de medidas de âmbito territorial relacionadas com a geoconservação, geoeducação e geoturismo. A sua conceção é da autoria de uma equipa de investigadores do Centro de Investigação, Desenvolvimento e Inovação em Turismo (CITUR-Leiria) e do CARME - Centro de Investigação Aplicada em Gestão e Economia em estreita colaboração com a equipa executiva da AGEO - Associação Geoparque Oeste e a comunidade local, demonstrando a articulação natural entre a academia, as forças vivas do território e a unidade de gestão desta candidatura, em prol do desenvolvimento sustentável de uma região. O “Plano Estratégico do aspiring Geoparque Oeste” é acima de tudo um documento que demonstra a necessidade de uma gestão integrada de recursos, tais como económicos, humanos, sociais, turísticos e patrimoniais, como o caminho de sucesso a seguir por este território em prol do desenvolvimento sustentável no seu todo. Considerando a dimensão do território, mas também a diversidade, relevância científica do seu património natural e cultural, reconhece-se neste instrumento de gestão estratégica que o sucesso desta candidatura passa essencialmente pela articulação entre as autarquias e entidades de gestão territorial envolvidas, pela dinamização de ações concretas de promoção e divulgação integradas dos patrimónios geológico, paleontológico, ecológico e cultural, pelo desenvolvimento de projetos colaborativos com as empresas, associações, instituições, estabelecimentos de ensino, e pelo envolvimento das comunidades locais. Deste modo, o Plano Estratégico agora apresentado é um dos principais roteiros do território, para o cumprimento dos Objetivos para o Desenvolvimento Sustentável e da Agenda 2030, e consequentemente para o sucesso da candidatura do território a Geoparque Mundial da UNESCO.info:eu-repo/semantics/publishedVersio