A New Stratagy for Reliably Isolating Heritable Mutations Generated by CRISPR/Cas9-mediated Genome Editing

基因编辑作为研究基因功能的重要研究手段在近年来得到突飞猛进的发展。从二十世纪50年代开始，科学家便不断探索基因编辑的新方法。直到2013年，基因编辑的方法取得了突破，CRISPR/Cas9系统因操作简单、效率高而被迅速应用到各种生物的基因编辑当中。将细菌免疫系统中的CRISPR/Cas9系统应用到植物体当中，需要面临很多应用上的问题。其中最关键的两个问题是CRISPR/Cas9系统在植物体中的表达以及产生突变后如何尽快筛选到可遗传的突变体。目前在拟南芥中，研究者通过改变CRISPR/Cas9系统中的相关启动子，在获得突变体的效率上取得了一定的进展，但由于获得拟南芥转基因植株采用的是花序侵染法，...Gene-editing,an important technique in studies of gene functions, has developed rapidly in recent years. Scientists had been exploring new ways to edit genes since 1950s.In 2013,CRISPR/Cas9, with its high efficiency and simplified operation,was applied into gene-editing. It is a breakthrough in gene-editing. But in practice, scientists have encountered new problems using CRISPR/Cas9, a part of bac...学位：理学博士院系专业：生命科学学院_细胞生物学学号：2162013015410

带有事件风险的永久美式期权的定价

主要研究带有事件风险的永久美式期权的定价及其最优停时问题.当事件发生时,期权就停止,期权的卖方就要付给期权执有者一定的打折后的支付.因此,事件风险的存在会影响期权执有者的执行策略.本文在一个合适的等价鞅测度下,给出了带有事件风险的永久美式期权的定价及其最优停时.进一步地推导了带有事件风险的永久美式期权的上界和下界

春、秋季台湾海峡海-气CO2通量及其影响因素

于2014年的5月（春季）和9月（秋季）在台湾海峡及其邻近南海和东海海域,采用水气平衡法进行了2个航次的海表和大气pCO2连续走航观测,同时获取了海表温度、海表盐度、风速及气压等数据,并采用海-气CO2分压差减法估算了海-气CO2通量.结果显示,春、秋2个航次平均海表pCO2分别为387±16μatm和408±18μatm.温度是影响台湾海峡及其邻近海域海表pCO2的主控因子,水团混合和其他因素等也对海表pCO2有一定影响.2014年春、秋季节,对研究区域的海-气CO2释放通量的估算结果分别为0.11±1.60 mmol/（m2·d）和2.51±1.10 mmol/（m2·d）.台湾海峡海表pCO2既存在显著的季节变化,又存在较大的空间差异.国家海洋局第三海洋研究所基本科研业务费资助项目(海三科2011015);;厦门南方海洋研究中心资助项目(14GHS016NF16,14PST63NF27

草鱼碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质研究

用Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-纤维素和葡聚糖凝胶层析,从草鱼肠中提取出碱性磷酸酶(ALP).提取倍数为6.74,比活为684 U/mg蛋白.酶液经PAGE呈现单一带,该酶催化对硝基苯磷酸二钠(pNPP)水解反应的最适pH值为10.41,最适温度为27℃,Km值为1.01 mmol/L,酶的热稳定性与pH稳定性研究表明:该酶在pH 6.6~11.5区间和在温度低于45℃下稳定.研究金属离子对酶活力影响的结果表明:一价金属离子Li+、Na+和K+对酶活力没有影响;二价金属离子Mg2+、Mn2+和Co2+对酶有不同程度的激活作用;Zn2+对酶有抑制作用

Expression Analysis of a Stress Repressed Gene OsDSR4 from DUF966 Family and Generation of OsDSR4- overexpressing Transgenic Rice(Oryza sativa L. ssp. japonica)

OSdSr4基因是duf966基因家族中的一个未知功能基因,目前其生物学功能尚不清楚。本研究生物信息学分析显示,OSdSr4基因CdnA全长2 167 bP,包含一个1 149 bP的开放阅读框(Orf),编码382个氨基酸,推测的蛋白中包含一个高度保守的duf966结构域;表达模式分析表明,OSdSr4主要在水稻(OryzA SATIVA l.SSP.JAPOnICA)的茎节间和叶片中表达,干旱、高盐和低温等非生物胁迫明显抑制了OSd Sr4的表达,而脱落酸(AbSCISIC ACId,AbA)则显著诱导了它的表达;利用重叠延伸PCr方法成功克隆了OSdSr4,并将其转化进水稻中,获得了32株超表达转基因植株。分子鉴定结果表明,该基因已被整合进水稻基因组中,并在部分转基因植株中实现了超量表达。本实验为进一步开展OSdSr4基因的生物学功能研究提供了基础资料。OsDSR4 is a gene of unkown function in DUF966 gene family,and the function of DUF966 family genes have not been reported until now.In this study,the bioinformatic analysis showed that the cDNA of OsDSR4 had 2 167 bp containing an open reading frame(ORF) of 1 149 bp,and it encoded a putative protein of 372 amino acids with a highly conserved DUF966 domain.The gene expression profile analysis indicated that OsDSR4 was expressed mainly in internode and leaf blade of rice(Oryza sativa L.),and it was repressed markedly by drought,salt and cold stresses,and induced significantly by abscisic acid(ABA).OsDSR4 was cloned using overlap extension PCR,and the fusion construct containing OsDSR4 was introduced into rice(Oryza sativa L.ssp.japonica) by Agrobacterium- mediated transformation method.Thirty- two OsDSR4- overexpressing transgenic plants were obtained and identified by PCR and qRT-PCR,which was demonstated that OsDSR4 had been integrated into rice genome and was overexpressed in some positive transgenic plants.These results establish the foundation for further study of the precise function of OsDSR4.国家重点基础研究发展计划(973)前期研究专项(No.2012CB126312

金属离子对锯缘青蟹NAGase活力的影响

本文研究了几种金属离子对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.其结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有明显影响,Mg2+、Ca2+和Ba2+对该酶均有激活作用,激活程度依次为Ca2+>Ba2+>Mg2+.A l3+、Fe3+、Cd2+、Pb2+和Hg2+对该酶具有一定的抑制作用,2.0μmol/dm3的Hg2+可以使酶活力完全丧失.Co2+对酶的效应是先激活后抑制,Mn2+对酶仅有轻微的激活作用.Cd2+和Fe3+对锯缘青蟹NAGase的抑制作用都呈竞争性-反竞争性混合Ⅱ型效应,Cd2+的抑制常数KI和KIS分别为23.9、5.0 mmol/dm3,Fe3+的抑制常数KI和KIS分别为395.5、135.6μmol/dm3.KI>KIS,说明酶-底物络合物(ES)与抑制剂的亲和力比游离酶(E)与抑制剂的亲和力大

锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在甲醛溶液中的失活动力学研究

研究甲醛对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAGase EC 3.2.1.52)活力的影响,结果表明:随着甲醛浓度的增大,酶活力呈指数下降,导致酶活力下降50%的甲醛浓度(失活半衰期,IC50)为0.60 mol/L.酶在低浓度甲醛溶液中的失活过程显示为可逆失活.用底物反应动力学方法考察酶在甲醛溶液中的失活动力学,测定游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)在甲醛溶液中失活的微观速度常数,并比较游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)的正向反应的微观失活速度常数k+0>k′+0,表明底物对酶被甲醛的失活作用有一定的保护作用.正向的失活速度常数k+0和k′+0随着甲醛浓度的增大而增大,而逆向的速度常数k-0随着甲醛浓度的增大而减小,表明随着甲醛浓度的增大,酶变性越来越快,而活力恢复越来越难

丙酮对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响

以丙酮为效应物,研究其对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰--βD-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响,结果表明:该酶的剩余活力随着丙酮浓度增大而呈指数下降,当丙酮浓度达25%,酶的剩余活力仅为20%,说明丙酮对青蟹NA-Gase有明显的失活作用.导致酶活力丧失50%的丙酮浓度为7.5%.在较低丙酮浓度(<10%)的失活是可逆的反应过程.动力学研究表明,该酶的失活过程属于混合型,并进一步测定游离酶(E)和酶底物络合物(ES)与丙酮的结合常数(KI和KIS),分别为4.06%和10.49%,KI<KIS,说明底物存在对酶被丙酮的失活作用有一定的保护作用.应用荧光发射光谱研究青蟹NAGase经丙酮微扰后的分子构象变化情况,结果表明:丙酮对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随丙酮浓度增大而降低,说明酶分子中的生色基团Trp和Tyr残基的微环境发生了变化

InFluence of Laser Irradiation on Serum Albumen of Castor Silkworm

我们采用不同波长的激光照射蓖麻蚕蚕卵，使它产生半致死效应，经孵化后的幼虫在五龄期取血分析它的血清蛋白谱，证实了激光照射对蓖麻蚕的遗传性状具有诱变作用，其机理涉及到激光照射与基因表达及调控的关系。Eggs of castor silkworm are irradiated with diFFerent wavelengths of laser and they are made to produce the semilethal eFFect.AFter incubation, taking some blood From larva at the age of Five, the spectra of its serum albumen is analysed.It has been conFirmed that laser irradiation has a mutagenesis on heredity of castor silkworm.the mechanism involved with the relation of laser irradiation with gene expression, as adjuustion and control.福建省自然科学基