Estudio experimental de las conexiones neuronales del sistema sensorial del trigémino en el pez zebra (Danio Rerio)

[Resumen] El sistema sensorial del trigémino transmite información somatosensorial principalmente recogida por receptores presentes en la cabeza. Los receptores somatosensoriales reconocen una amplia gama de estímulos, tales como productos químicos nocivos, presión y temperatura. El objetivo del presente estudio es conocer las conexiones primarias y secundarias del sistema sensorial del trigémino en un teleósteo, el pez zebra (Danio rerio). Para ello se emplearon carbocianinas (DiI, DiO) como trazadores que revelan las conexiones neuronales por difusión tanto anterógrada como retrógada a lo largo de la célula. En el pez zebra el nervio trigémino se relaciona con estructuras encefálicas como el núcleo sensitivo del trigémino (STN) y la raíz descendente del trigémino, que constituyen las conexiones primarias del sistema sensorial del trigémino, el núcleo mesencefálico y el núcleo motor del trigémino. A su vez el STN proyecta bilateralmente al lóbulo caudal del cerebelo (Lca), área octavolateral, con los que está recíprocamente conectado, cresta cerebelosa (CC) y al núcleo motor del trigémino (MTN) e ipsilateralmente a la raíz descendente. Estas conexiones son similares a las documentadas en otros ciprínidos así como en otros vertebrados, por lo tanto el sistema de integración rombencefálica de la información somatosensorial está conservado en vertebrados.[Abstract] The trigeminal sensory system transmits information primarily gathered by head’s somatosensory receptors. The somatosensory receptors recognize a wide range of stimuli, such as nocious chemicals, pressure and temperature. The aim of this study is to determine the primary and secondary connections of the trigeminal sensory system in a teleost, the zebrafish (Danio rerio). Carbocyanines (DiI, DiO) used as tracers reveal neural connections by diffusion along the cell both anterograde and retrogade. The zebrafish’s trigeminal nerve is related to brain structures such as the sensory trigeminal nucleus (STN) and the descending trigeminal root constituting primary connections of the sensory system, and the mesencephalic trigeminal and trigeminal motor nuclei. The STN projects bilaterally to the caudal lobe of the cerebellum (LCa), the octavolateral area, with which is reciprocally connected, the crista cerebellaris (CC) and the trigeminal motor nucleus (MTN), and ipsilaterally to the descending trigeminal root. These connections are similar to those documented in other cyprinids and vertebrates, therefore the rombencephalic integration system of the somatosensory system is conserved in vertebrates.Traballo fin de grao (UDC.CIE). Bioloxía. Curso 2013/201

Estudio detallado del análisis multimérico del factor von Willebrand en pacientes con enfermedad de von Willebrand: PCM-EVW-ES

[Resumen] Introducción: La EVW es un desorden de la coagulación causada por defectos en la concentración, estructura o función del FVW, siendo el trastorno hemorrágico hereditario autosómico más frecuente. Para su diagnóstico es necesario aplicar un amplio panel de pruebas diagnósticas entre las que se encuentra el análisis de la estructura multimérica del FVW. Material y métodos: Se llevó a cabo un western blot para el estudio de la estructura multimérica del FVW en los 556 pacientes reclutados en el proyecto español PCM-EVW-ES y en 39 sujetos utilizados como controles normales. Se estudió la sensibilidad, especificidad y los valores predictivos de esta prueba diagnóstica. Además mediante análisis estadístico se estudió la relación entre el análisis multimérico y la puntuación hemorrágica y las razones FVW:RCo/FVW:Ag y FVW:CB/FVW:Ag. Resultados: Trescientos veintisiete sujetos presentaron una estructura multimérica del FVW normal, que se distribuyen del siguiente modo: 76 no cumplían criterios, 149 tipo 1, 5 tipo 2B, 38 tipo 2M, 9 tipo 2N, 30 portadores tipo 3, 11 portadores tipo 2N y 9 sin clasificar. Los 229 sujetos restantes presentaron alguna alteración en su estructura multimérica clasificados en los siguientes subtipos: 6 tipo 1 smeary, 110 tipo 2A, 30 tipo 2B, 34 tipo 2A/2M, 42 tipo 3 y 7 sin clasificar. Su sensibilidad y especificidad fueron del 97,81% y 97,62%, respectivamente. Se observó una relación directa entre la puntuación hemorrágica y las razones FVW:RCo/FVW:Ag y FVW:CB/FVW:Ag con la estructura multimérica del FVW. Conclusiones: El análisis multimérico del FVW es un método que cumple con las características adecuadas para el diagnóstico de la EVW, por lo que es necesario implementar esta metodología para su estudio y mejorar su diagnóstico específico.[Resumo] Introdución: A EVW é unha desorde da coagulación causada por defectos na concentración, estrutura ou función do FVW, sendo o trastorno hemorráxico hereditario autosómico máis común. Para o seu diagnóstico é necesario aplicar un amplo panel de probas diagnósticas entre as que se atopa a análise da estrutura multimérica do FVW. Material e métodos: Levouse a cabo un western blot para o estudo da estrutura multimérica do FVW nos 556 doentes recrutados no proxecto español PCM-EVW-ES e en 39 suxeitos empregados como controis normais. Foi estudada a sensibilidade, especificidade e os valores predictivos desta proba diagnóstica. Ademais mediante análise estatístico estudouse a relación entre a análise multimérica e a puntuación hemorráxica e as razóns FVW:RCo/FVW:Ag e FVW:CB/FVW:Ag. Resultados: Trescentos vinte e sete suxeitos presentaron unha estrutura multimérica do FVW normal distribuíndose do seguinte xeito: 76 non cumpren criterios, 149 tipo 1, 5 tipo 2B, 38 tipo 2M, 9 tipo 2N, 30 portadores tipo 3, 11 portadores tipo 2N e 9 sen clasificar. Os 229 suxeitos restantes presentaron algunha alteración na súa estrutura multimérica clasificados nos seguintes subtipos: 6 tipo 1 smeary, 110 tipo 2A, 30 tipo 2B, 34 tipo 2A/2M, 42 tipo 3 e 7 sen clasificar. A súa sensibilidade e especificidade foron do 97,81% e 97,62%, respectivamente. Observouse unha relación directa entre a puntuación hemorráxica e as razóns FVW:RCo/FVW:Ag e FVW:CB/FVW:Ag coa estrutura multimérica do FVW. Conclusións: A análise dos multímeros do FVW é un método que cumpre coas características axeitadas para o diagnóstico da EVW, polo que é necesario aplicar esta metodoloxía para o seu estudo e mellorar o diagnóstico específico.[Abstract] Introduction: VWD is a bleeding disorder caused by defects in concentration, structure or function of VWF, being the most frequent autosomal hereditary bleeding disorder. For its diagnosis it is necessary to apply a broad panel of diagnostic tests including the analysis of the VWF multimer structure. Material and methods: We carried out a western blot to study the VWF multimeric structure in the 556 patients recruited in the Spanish project PCM-EVW-ES and 39 subjects used as normal controls. Sensitivity, specificity and predictive values of this diagnostic test were studied. Addition by statistical analysis was studied the relationship between the multimeric analysis and the bleeding score and VWF:RCo/VWF:Ag and VWF:CB/VWF:Ag ratios. Results: Three hundred twenty-seven subjects had a normal multimeric structure of VWF which are distributed as follows: 76 no criteria, 149 type 1, 5 type 2B, 38 type 2M, 9 type 2N, 30 carriers 3, 11 carriers 2N and 9 unclassified. The remaining 229 subjects had some alteration in their multimeric structure classified into the following subtypes: 6 type 1 smeary, 110 type 2A, 30 type 2B, 34 type 2A/2M, 42 type 3 and 7 unclassified. Its sensitivity and specificity were 97.81% and 97.62%, respectively. A direct relationship was observed between the bleeding score and VWF:RCo/VWF:Ag and VWF:CB/VWF:Ag ratios with the VWF multimer structure. Conclusions: The multimeric analysis is a method appropriate for the diagnosis of VWD characteristics, so it is necessary implement this methodology to its study and improves their specific diagnosis.Traballo fin de mestrado (UDC.FCS). Asistencia e investigación sanitaria. Especialidade en investigación clínica.. Curso 2015/2016

Estudio del papel de la vía no canónica de WNT5A en el fenotipo agresivo de los sinoviocitos reumatoides y de su potencialidad como diana terapéutica para la artritis reumatoide

La artritis reumatoide (AR) se caracteriza por la inflamación crónica sinovial que, sin el tratamiento adecuado, puede llevar a la destrucción progresiva del cartílago y hueso. Numerosos trabajos han mostrado la importancia del fenotipo agresivo de los sinoviocitos en la patogenia de la AR, aunque todavía no se han desarrollado terapias frente a estas células. Distintas evidencias indican que WNT5A puede contribuir a la patogenia de la AR. En este trabajo de tesis se demuestra la implicación de WNT5A en el fenotipo agresivo de los sinoviocitos reumatoides a través de las vías de señalización WNT/Ca2+ y RYK/Rho/ROCK. Además, la inhibición de ROCK en el modelo murino de artritis inducida por transferencia de suero K/BxN mejoró la severidad de la enfermedad con disminución de inflamación sinovial, daño del cartílago y erosión ósea. Además, la inhibición de ROCK redujo la diferenciación y función de los osteoclastos derivados de PBMCs de pacientes con AR. Así, la inhibición de la vía de señalización WNT5A/RYK/ROCK puede ser una prometedora estrategia terapéutica

All-trans retinoic acid inhibits migration and invasiveness of rheumatoid fibroblast-like synoviocytes

[Abstract] Fibroblast-like synoviocytes (FLSs) are pivotal in inflammation and joint damage of rheumatoid arthritis (RA). They acquire an active and aggressive phenotype, displaying increased migration and invasiveness and contributing to perpetuate synovial inflammation and destruction of cartilage and bone. The main current therapies of RA are focused against inflammatory factors and immune cells; however, a significant percentage of patients do not successfully respond. Combined treatments with drugs that control inflammation and that reverse the pathogenic phenotype of FLS could improve the prognosis of these patients. An unexplored area includes the retinoic acid, the main biologic retinoid, which is a candidate drug for many diseases but has reached clinical use only for a few. Here, we explored the effect of all-trans retinoic acid (ATRA) on the aggressive phenotype of FLS from patients with RA. RA FLSs were treated with ATRA, tumor necrosis factor (TNF), or TNF+ATRA, and cell migration and invasion were analyzed. In addition, a microarray analysis of expression, followed by gene-set analysis and quantitative polymerase chain reaction validation, was performed. We showed that ATRA induced a notable decrease in FLS migration and invasion that was accompanied by complex changes in gene expression. At supraphysiological doses, many of these effects were overridden or reverted by the concomitant presence of TNF. In conclusion, these results have demonstrated the therapeutic potential of retinoic acid on RA FLS provided TNF could be counterbalanced, either with high ATRA doses or with TNF inhibitors. SIGNIFICANCE STATEMENT All-trans retinoic acid (ATRA) reduced the rheumatoid arthritis (RA) fibroblast-like synoviocyte migration and invasiveness and down-regulated gene expression of cell motility and migration genes. At supraphysiological doses, some of these effects were reverted by tumor necrosis factor. Therefore, ATRA could be an RA drug candidate that would require high doses or combined treatment with anti-inflammatory drugs.Instituto de Salud Carlos III; PI1701660Instituto de Salud Carlos III; PI1401153Instituto de Salud Carlos III (RETICS); RD16/0012/001

New strategies for writing Degree Dissertations in English: pair-tutoring and teaching mini-videos

La redacción de textos académicos en inglés está íntimamente relacionada con la competencia lingüística que el alumnado universitario ha de desarrollar (B1 como requisito lingüístico mínimo previo a su graduación) y que, de manera lógica, está encadenada a la mejora de su empleabilidad (tanto a niveles nacionales como internacionales), de sus competencias comunicativas en segunda lengua y, por supuesto, la posibilidad de que los resultados de su trabajo académico trasciendan fronteras. El proyecto que aquí se presenta surge como evolución de un proyecto de innovación docente anterior, aprobado e implementado en la UCO (“La tutoría piramidal como estrategia para el diseño y desarrollo del trabajo final de grado en educación”, 2015-2-6011), y cuyo resultado ha permitido identificar la necesidad que con esta propuesta pretendemos cubrir. El objetivo final de este proyecto es enseñar al alumnado universitario a redactar sus TFG en inglés, al tiempo que el profesorado también participa en los seminarios, en los que se abordan también técnicas que faciliten la corrección de estos trabajos que se redactan en una lengua no materna o principal. La metodología se basa en seminarios participativos, así como en la elaboración de recursos, en los que alumnado (tutores y tutorizados) y profesorado (tutores y tutorizados) colaborarán para la consecución final del objetivo: la redacción y corrección de TFG, principalmente en lengua inglesa. Entre estos recursos, destacamos el diseño y la elaboración de minivídeos docentes modulares con la participación del profesorado implicado en el proyecto, así como del alumnado mentor, para explicar los aspectos clave de la elaboración de un TFG.Writing academic texts in English is closely related to the linguistic competence that university students need to develop (B1 level as a minimum linguistic requirement prior to their graduation). This competence entails an improvement of their future employability (both at the national and international levels), their communicative competences in a second language (L2), and obviously also the possibility that the results derived from their academic projects spill across national boundaries. This innovation project arises as the evolution of a previous innovation strategy, approved and implemented at the University of Córdoba (“La tutoría piramidal como estrategia para el diseño y desarrollo del trabajo final de grado en educación”, 2015-2-6011), whose results allowed the identification of the weaknesses that we aim to focus on during the development of this project. The final objective is to teach university students how to write their end-of-degree dissertations in English. At the same time teachers of the UCO also participate in a series of seminars to know different techniques about how to review these projects that are written in a language different from their mother tongue or main language. The methodology of this project is based on participative seminars, as well as on the development of resources, where students (mentors and mentees) and teachers (mentors and mentees) collaborate towards a common objective: writing and reviewing end-of-degree dissertations, mainly written in English. Among these resources, it can be highlighted the design and elaboration of teaching mini-videos, with the participation of the teachers involved in the project, as well as the mentor students, in order to explain the key aspects to be considered when writing an end-of-degree dissertation

Unraveling the effect of silent, intronic and missense mutations on VWF splicing : contribution of next generation sequencing in the study of mRNA

Large studies in von Willebrand disease patients, including Spanish and Portuguese registries, led to the identification of >250 different mutations. It is a challenge to determine the pathogenic effect of potential splice site mutations on VWF mRNA. This study aimed to elucidate the true effects of 18 mutations on VWF mRNA processing, investigate the contribution of next-generation sequencing to in vivo mRNA study in von Willebrand disease, and compare the findings with in silico prediction. RNA extracted from patient platelets and leukocytes was amplified by RT-PCR and sequenced using Sanger and next generation sequencing techniques. Eight mutations affected VWF splicing: c.1533+1G>A, c.5664+2T>C and c.546G>A (p.=) prompted exon skipping; c.3223-7_3236dup and c.7082-2A>G resulted in activation of cryptic sites; c.3379+1G>A and c.7437G>A) demonstrated both molecular pathogenic mechanisms simultaneously; and the p.Cys370Tyr missense mutation generated two aberrant transcripts. Of note, the complete effect of three mutations was provided by next generation sequencing alone because of low expression of the aberrant transcripts. In the remaining 10 mutations, no effect was elucidated in the experiments. However, the differential findings obtained in platelets and leukocytes provided substantial evidence that four of these would have an effect on VWF levels. In this first report using next generation sequencing technology to unravel the effects of VWF mutations on splicing, the technique yielded valuable information. Our data bring to light the importance of studying the effect of synonymous and missense mutations on VWF splicing to improve the current knowledge of the molecular mechanisms behind von Willebrand disease. identifier:02869074

Molecular and clinical profile of von Willebrand disease in Spain (PCM-EVW-ES) : comprehensive genetic analysis by next-generation sequencing of 480 patients

Molecular diagnosis of patients with von Willebrand disease is pending in most populations due to the complexity and high cost of conventional molecular analyses. The need for molecular and clinical characterization of von Willebrand disease in Spain prompted the creation of a multicenter project (PCM-EVW-ES) that resulted in the largest prospective cohort study of patients with all types of von Willebrand disease. Molecular analysis of relevant regions of the VWF, including intronic and promoter regions, was achieved in the 556 individuals recruited via the development of a simple, innovative, relatively low-cost protocol based on microfluidic technology and next-generation sequencing. A total of 704 variants (237 different) were identified along VWF, 155 of which had not been previously recorded in the international mutation database. The potential pathogenic effect of these variants was assessed by in silico analysis. Furthermore, four short tandem repeats were analyzed in order to evaluate the ancestral origin of recurrent mutations. The outcome of genetic analysis allowed for the reclassification of 110 patients, identification of 37 asymptomatic carriers (important for genetic counseling) and re-inclusion of 43 patients previously excluded by phenotyping results. In total, 480 patients were definitively diagnosed. Candidate mutations were identified in all patients except 13 type 1 von Willebrand disease, yielding a high genotype-phenotype correlation. Our data reinforce the capital importance and usefulness of genetics in von Willebrand disease diagnostics. The progressive implementation of molecular study as the first-line test for routine diagnosis of this condition will lead to increasingly more personalized and effective care for this patient population

¿Qué queda de mí?

Este libro es una reclamación a quienes hemos sido, somos o seremos docentes. A quienes no hemos respetado a las personas que se han puesto junto a nosotros y nosotras, confiando su bien más preciado: la libertad. Estas páginas denuncian cada vez que convertimos una visión en la visión, una emoción en la emoción, un saber en el saber, un comportamiento en el comportamiento. Es un grito contra la imposición, la normalización, la neutralización y la universalización de una perspectiva particular. Una pugna contra cada proceso que no se ha conectado con las vidas de los aprendices. Un texto colaborativo realizado por alumnado de Educación y Cambio Social en el Grado en Educación Infantil de la Universidad de Málaga y coordinado por Ignacio Calderón Almendros

NUEVAS ESTRATEGIAS PARA LA ELABORACIÓN DE TFG EN INGLÉS: TUTORÍAS ENTRE IGUALES Y MINI-VÍDEOS DOCENTES

Writing academic texts in English is closely related to the linguistic competence that university students need to develop (B1 level as a minimum linguistic requirement prior to their graduation). This competence entails an improvement of their future employability (both at the national and international levels), their communicative competences in a second language (L2), and obviously also the possibility that the results derived from their academic projects spill across national boundaries. This innovation project arises as the evolution of a previous innovation strategy, approved and implemented at the University of Córdoba (“La tutoría piramidal como estrategia para el diseño y desarrollo del trabajo final de grado en educación”, 2015-2-6011), whose results allowed the identification of the weaknesses that we aim to focus on during the development of this project. The final objective is to teach university students how to write their end-of-degree dissertations in English. At the same time teachers of the UCO also participate in a series of seminars to know different techniques about how to review these projects that are written in a language different from their mother tongue or main language. The methodology of this project is based on participative seminars, as well as on the development of resources, where students (mentors and mentees) and teachers (mentors and mentees) collaborate towards a common objective: writing and reviewing end-of-degree dissertations, mainly written in English. Among these resources, it can be highlighted the design and elaboration of teaching mini-videos, with the participation of the teachers involved in the project, as well as the mentor students, in order to explain the key aspects to be considered when writing an end-of-degree dissertation.La redacción de textos académicos en inglés está íntimamente relacionada con la competencia lingüística que el alumnado universitario ha de desarrollar (B1 como requisito lingüístico mínimo previo a su graduación) y que, de manera lógica, está encadenada a la mejora de su empleabilidad (tanto a niveles nacionales como internacionales), de sus competencias comunicativas en segunda lengua y, por supuesto, la posibilidad de que los resultados de su trabajo académico trasciendan fronteras. El proyecto que aquí se presenta surge como evolución de un proyecto de innovación docente anterior, aprobado e implementado en la UCO (“La tutoría piramidal como estrategia para el diseño y desarrollo del trabajo final de grado en educación”, 2015-2-6011), y cuyo resultado ha permitido identificar la necesidad que con esta propuesta pretendemos cubrir. El objetivo final de este proyecto es enseñar al alumnado universitario a redactar sus TFG en inglés, al tiempo que el profesorado también participa en los seminarios, en los que se abordan también técnicas que faciliten la corrección de estos trabajos que se redactan en una lengua no materna o principal. La metodología se basa en seminarios participativos, así como en la elaboración de recursos, en los que alumnado (tutores y tutorizados) y profesorado (tutores y tutorizados) colaborarán para la consecución final del objetivo: la redacción y corrección de TFG, principalmente en lengua inglesa. Entre estos recursos, destacamos el diseño y la elaboración de minivídeos docentes modulares con la participación del profesorado implicado en el proyecto, así como del alumnado mentor, para explicar los aspectos clave de la elaboración de un TFG

Role of multimeric analysis of von Willebrand factor (VWF) in von Willebrand disease (VWD) diagnosis: Lessons from the PCM-EVW-ES Spanish project - Fig 2

<p><b>Comparison between the diagnostic definition contribution of VWF:CB (in step “screening tests” [a]) and the multimeric analysis (MA) instead of VWF:CB first step, (step “screening tests” [b]).</b> A greater degree of efficiency was observed for MA (50.4% <i>versus</i> 33.1% for VWF:CB).</p