Cholesterol synthesis defects: sterol analysis in the diagnosis of 25 Portuguese patients

Os esteróis desempenham um papel fundamental nos processos fisiológicos de praticamente todos os organismos vivos. O esterol mais abundante nos seres humanos é o colesterol, o qual desempenha uma multiplicidade de funções desde a estrutural à sinalização. A extração e análise de esteróis no plasma é complexa devido à sua insolubilidade, sequestração dentro das lipoproteínas e à grande diferença entre cada tipo de esterol. Os autores apresentam a casuística referentes à análise de 13 esteróis e fitosteróis em plasma e líquido amniótico.Sterols play essential roles in the physiological processes of virtually all living organisms. In Man, the most abundant sterol is cholesterol, which has a myriad of functions in biology, ranging from structural to signaling. The extraction and analysis of sterols in human plasma present a unique challenge due to their virtual insolubility, sequestration within lipoproteins, and dramatic differences in the levels of individual sterols. We present our positive results of the analysis of 13 sterols and phytosterols from human plasma and amniotic fluid in a single GC-MS run

Condrodisplasia punctata - doença de Conradi-Hünermann: relato de dois casos.

Trabalho de Conclusão de Curso - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Departamento de Clínica Médica, Curso de Medicina, Florianópolis, 198

Ictioses : o estado da questão

As ictioses são um grupo, clinica e etiologicamente heterogéneo, de dermatoses, classificado como desordens de queratinização ou cornificação. São consequência de defeitos metabólicos que resultam numa anormal diferenciação da epiderme, conferindo à superfície cutânea um aspeto descamativo peculiar, evocativo de escamas de peixe, de onde deriva a designação da doença (do grego ichthys i.e. peixe). O objetivo desta dissertação é fazer um ponto da situação sobre os conhecimentos e avanços atuais associados às ictioses, incidindo numa perspetiva histórica até à atualidade e abordando, sucessivamente: Classificação, Etiopatogenia, Apresentação Clínica, Diagnóstico, Estratégias Terapêuticas e Perspetivas Futuras. As ictioses têm vindo a ser classificadas de diferentes formas, ao longo do tempo, com base nos conhecimentos alcançados acerca da sua etiopatogenia, manifestações clínicas, dados genéticos e moleculares e novas caracterizações histopatológicas. Atualmente, um dos princípios utilizados para classificar as ictioses é baseado no facto da doença ser resultante de determinação genética, de caráter hereditário – Ictioses Hereditárias – ou ser consequência de patologias sistémicas, de índole adquirida – Ictioses Adquiridas. Relativamente às ictioses hereditárias, estas subdividem-se em dois grandes grupos, as Ictioses Não Sindromáticas (a alteração genética evidencia-se em exclusivo na pele), e as Ictioses Sindromáticas, (a dermatose ocorre em associação com anomalias noutros sistemas orgânicos). As ictioses não sindromáticas, por sua vez, dividem-se noutros três grandes grupos principais, as Ictioses Comuns, as Ictioses Congénitas Autossómicas Recessivas e as Ictioses Queratinopáticas. No que diz respeito à etiopatogenia, durante as duas últimas décadas, têm vindo a ser descobertas as causas genéticas de grande parte dos 36 tipos de ictioses hereditárias. Quanto às respetivas bases moleculares, apenas algumas se encontram por identificar. As alterações cutâneas associadas a este tipo de dermatoses caracterizam-se, clinicamente, por hiperqueratose, descamação cutânea difusa ou ambas. A apresentação clínica é variável, não só na gravidade (desde xerodermia até formas com elevado risco de morte neonatal), mas também na idade de manifestação e nos sintomas associados. O estabelecimento de um diagnóstico específico pode afigurar-se difícil, dada a complexa heterogeneidade clinicopatológica das ictioses e a diversidade dos mecanismos causais. O clínico deve basear-se nos seguintes fatores: história médica e familiar detalhadas; características da apresentação clínica; biópsias de pele, com análises histológicas e ultraestruturais; e, em alguns casos, se disponíveis, análises bioquímicas. A confirmação do diagnóstico deve ser efetuada por um estudo de genética molecular (nem sempre acessível), com análise de mutações, que serve de suporte para aconselhamento genético do doente e da sua família e possibilita a realização de um diagnóstico pré-natal (em famílias de risco). O tratamento é sintomático uma vez que a doença subsiste, até ao momento, sem cura. Consiste na aplicação contínua de emolientes tópicos, uso de óleos de lavagem para o banho, aplicação de cremes ou pomadas com agentes queratolíticos, remoção mecânica das escamas e utilização de terapia retinóide, um importante avanço na terapêutica destas doenças. Relativamente a perspetivas futuras, considera-se que um melhor entendimento acerca da patofisiologia das diferentes ictioses contribuirá para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas específicas e inovadoras, já que não se afiguram, ainda, perspetivas de descoberta de uma cura.Ichthyoses are a clinically and etiologically heterogeneous group of skin conditions, classified as disorders of keratinization or cornification. They are the consequence of metabolic defects that result in an abnormal epidermal differentiation, giving the skin a peculiar scaly aspect, reminiscent of fish scales, from which derives the name of the disease (from the Greek ichthys i.e. fish). The purpose of this dissertation is to make a progress report on current knowledge and advances associated with ichthyoses, focusing on a historical perspective to the present day and addressing successively: Classification, Etiology and Pathogenesis, Clinical Presentation, Diagnosis, Therapeutic Strategies and Future Prospects. Ichthyoses have been classified in diverse ways, over time, based on the current knowledge about its etiologic, pathogenic, clinical, histologic, genetic and molecular features. Currently, classification of ichthyoses is based on whether they are the result of a hereditary genetic defect - Hereditary Ichthyoses – or they are the consequence of systemic diseases - Acquired Ichthyoses. Hereditary ichthyoses are subdivided into two major groups, Nonsyndromic Forms (the phenotypic expression of the disorder is only seen in the skin) and Syndromic Forms (a skin condition occurs in association with anomalies in other organs). Nonsyndromic Forms are divided into three major groups: Common Ichthyoses, Autosomal Recessive Congenital Ichthyoses and Keratinopathic Ichthyoses. The genetic causes for most of the 36 types of inherited ichthyoses have been discovered over the last two decades. As for their molecular bases, only a few remain to be identified. Cutaneous alterations associated with ichthyoses are clinically characterized as hyperkeratosis and/or diffuse scaling. Clinical presentation varies not only in severity (ranges from xerosis to life-threatening forms) but also in the age of onset and associated symptoms. Reaching a specific diagnosis may prove difficult given the complex heterogeneity of ichthyoses. The diagnosis should be based on the following data: family and medical history, clinical presentation features, skin biopsies with histological, ultrastructural, and in some cases, biochemical analyses (if available). It should be confirmed by mutation analysis (not always available) to allow for genetic counseling of the patients and their families. It also permits DNA-based prenatal diagnosis in families at risk. Treatment is essencially symptomatic for a cure has not yet been found. It consists on the mechanical removal of the scales, continuous application of topical emollients, bath oils and creams or ointments with keratolytic agents, and retinoid therapy, a significant improvement as the therapeutic field of ichthyoses is concerned. For future perspectives, it is considered that a better understanding of the pathophysiology of the different ichthyoses will contribute to the development of innovative and specific therapeutic strategies, as there are still no perspectives of finding a cure

Estudio molecular de la ictiosis en pacientes de difícil diagnóstico

[ES]Los recientes avances en el conocimiento de la ictiosis ponen de manifiesto la importancia de un diálogo estrecho entre la genética molecular y la práctica clínica para el diagnóstico preciso, consejo genético y tratamiento de las ictiosis hereditarias. Las últimas décadas han visto grandes avances en nuestra comprensión de la patofisiología y las manifestaciones clínicas de las ictiosis, con potenciales implicaciones para el desarrollo de enfoques innovadores para el tratamiento de estas enfermedades. Sin embargo, a pesar de los grandes avances en la comprensión de la etiología molecular de las ictiosis, las causas genéticas de la enfermedad siguen resultando desconocidas en algunos pacientes. Por ello, la hipótesis de este trabajo es que la secuenciación de exoma completo, mediante una técnica de ultrasecuenciación que permite analizar todas las regiones de DNA que codifican proteínas, podría encontrar las causas genéticas de la enfermedad en pacientes que no se han podido diagnosticar mediante métodos moleculares convencionales. Las nuevas alteraciones descubiertas serán analizadas mediante estudios in silico y ensayos funcionales

Conradi-Hünermann-Happle syndrome

El síndrome de Conradi-Hünermann-Happle es una variante de condrodisplasia punctata de herencia dominante ligada a X. Se considera una genodermatosis poco frecuente, con manifestaciones cutáneas y extracutáneas que se observan desde el nacimiento. Se presentan cuatro casos con diagnóstico de síndrome de Conradi-HünermannHapple en diferentes etapas de la vida.The Conradi-Hünermann-Happle syndrome is an inherited X-linked dominant variant of chondrodysplasia punctata. It is considered a rare genodermatoses with cutaneous and extracutaneous involvement that occur since birth. Four cases diagnosed with Conradi-Hünermann-Happle syndrome in different stages of life are presented

Aproximación genética al estudio de las ictiosis

Autosomal recessive congenital ichthyosis (ICAR ) are rare disorders of keratinization that are included in non- syndromic forms of ichthyosis . Currently included in this group harlequin ichthyosis, lamellar ichthyosis , congenital ichthyosiform erythroderma , baby autorresolutivo collodion ichthyosis in swimsuit . From the genetic point of view , the ICAR are very heterogeneous . So far have been described pathogenic mutations in 6 different genes in 78% of the population affected: TGM1 ( 32%), NIPAL4 ( 16%), ALOX12B ( 12%), CYP4F22 ( 8%), ALOXE3 (5% ) and ABCA12 (5%) . In our study 29 patients from various areas of the Spanish geography, but one of the families that came from Ukraine were included . 76 % had some nucleotide variation in genes analyzed: 38% of them in the TGM1 gene , 21% in ALOX12B ; 3.5% in ALOXE3 ; 3.5% in NIPAL4 , and 10 % in CYP4F22 . In 24% of patients remaining mutations were detected, similar to those described previously in the literature frequencies. The discovery of pathogenic mutations confirms new genetic variability of disease and facilitates diagnosis and carrier detection . The observation of up to 24% of cases in ICAR phenotypically compatible with the mutations not found indicating that the study of other genes that may be involved in the development of the disease is required. The genetic studies in large cohorts of patients with ICAR and comprehensive collection of phenotypic data is of great importance to conduct a clinical- biological correlation to improve the classification of these diseases. Autosomal recessive congenital ichthyosis (ICAR ) are rare disorders of keratinization that are included in non- syndromic forms of ichthyosis . Currently included in this group harlequin ichthyosis, lamellar ichthyosis , congenital ichthyosiform erythroderma , baby autorresolutivo collodion ichthyosis in swimsuit .[ES] Las ictiosis congénitas autosómicas recesivas (ICAR) son trastornos infrecuentes de la queratinización que se engloban en las formas no sindrómicas de ictiosis. Actualmente se incluyen en este grupo la ictiosis arlequín, la ictiosis laminar, la eritrodermia ictiosiforme congénita, el bebé colodión autorresolutivo y la ictiosis en traje de baño. Desde el punto de vista genético, las ICAR son muy heterogéneas. Hasta el momento se han descrito mutaciones patogénicas en 6 genes diferentes en el 78% de la población afecta: TGM1 (32%), NIPAL4 (16%), ALOX12B (12%), CYP4F22 (8%), ALOXE3 (5%) y ABCA12 (5%). En nuestro estudio se incluyeron 29 pacientes procedentes de diversas áreas de la geografía española, excepto una de las familias que provenía de Ucrania. El 76% presentó alguna variante nucleotídica en los genes analizados: el 38% de ellos en el gen TGM1; el 21% en ALOX12B; el 3.5% en ALOXE3; el 3.5% en NIPAL4; y el 10% en CYP4F22. En el 24% de los pacientes restantes no se detectaron mutaciones; frecuencias similares a las descritas anteriormente en la literatura. El hallazgo de nuevas mutaciones patogénicas confirma la variabilidad genética de la enfermedad y facilita el diagnóstico y la detección de portadores. La observación de hasta un 24% de casos fenotípicamente compatibles con ICAR en los que no se encuentran mutaciones indica que es necesario el estudio de otros genes que puedan estar implicados en el desarrollo de la enfermedad. La realización de estudios genéticos en grandes cohortes de pacientes con ICAR y la recopilación exhaustiva de datos fenotípicos es de gran importancia para poder llevar a cabo una correlación clínico-biológica que permita mejorar la clasificación de estas enfermedades. Las ictiosis congénitas autosómicas recesivas (ICAR) son trastornos infrecuentes de la queratinización que se engloban en las formas no sindrómicas de ictiosis. Actualmente se incluyen en este grupo la ictiosis arlequín, la ictiosis laminar, la eritrodermia ictiosiforme congénita, el bebé colodión autorresolutivo y la ictiosis en traje de baño

Prenatal Diagnosis

This book provides detailed and comprehensive coverage on various aspects of prenatal diagnosis-with particular emphasis on sonographic and molecular diagnostic issues. It features sections dedicated to fundamentals of clinical, ultrasound and genetics diagnosis of human diseases, as well as current and future health strategies related to prenatal diagnosis. This book highlights the importance of utilizing fetal ultrasound/clinical/genetics knowledge to promote and achieve optimal health in fetal medicine. It will be a very useful resource to practitioners and scientists in fetal medicine

Estudio de los mecanismos del estrés replicativo inducido por la inhibición de la mavalonato difosfato descarboxilasa

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 13-07-2012El requerimiento de colesterol para la proliferación de las células de mamíferos está bien establecido. En nuestro laboratorio se había demostrado que el colesterol era nec esario para la correcta transición de la fase G2 a M en el ciclo celular y para la citocinesis. Cuando se tratan con altas dosis de estatinas, inhibidores competitivos de la enzima HMG‐CoA reductasa, las células se detienen en la fase G1 por deficiencia de isoprenoides no esteroles. Por tanto, no solo el producto final de la ruta – colesterol ‐ es fundamental para la célula sino que a lo largo del proceso se sintetizan otros compuestos imprescindibles para el correcto desarrollo del ciclo celular. En relación con esto, en el presente trabajo nos propusimos estudiar los efectos sobre la proliferación celular de la inhibición de la enzima mevalonato difosfato descarboxilasa, que cataliza la síntesis de isopentenil difosfato. En células HL‐60, hemos demostrado que el tratamiento con un inhibidor específico de la enzima, el 6‐fluoromevalonato, produce una inhibición de la proliferación, debida a un retraso del avance a través de la fase S del ciclo celular con inhibición de la síntesis de ADN. Dicha inhibición es el resultado de la acumulación de mevalonato difosfato que actúa como sumidero de fosfato y da lugar a un estrés replicativo provocado en la célula por una deficiencia de ATP que, a su vez, produce un desequilibrio en los niveles de desoxirribonucleótidos disponibles para la célula. Dicho estrés replicativo genera dobles roturas en el ADN y activa la vía de señalización mediada por ATR‐Chk1 responsable del bloqueo del ciclo celular. Describimos por primera vez una conexión entre la vía de síntesis de colesterol y la replicación del ADN, pero podría extrapolarse a otras alteraciones metabólicas donde se acumulen metabolitos fosforilados.The cholesterol requirement for cell proliferation is well established. In our laboratory it was demonstrated that cholesterol deficiency results in the cell cycle arrest at G2/M and cytokinesis is also impeded. When hiahg doses of statins were used to block HMG‐CoA reductase activity, cell cycle was halted at G1 phase due to the deficiency of non‐sterols isoprenoids. Therefore, not only the end product of the pathway – cholesterol ‐ is crucial for cells, but other compounds synthesized in the cholesterol pathway also are essential for the correct development of the cell cycle. In line with this, in the present work we studied the effects of mevalonate diphosphate decarboxylase inhibition, the enzyme that catalyzes the synthesis of isopentenyl diphosphate. We have found that treatment with an specific inhibitor of this enzyme activity, 6‐fluoromevalonate, leads to the inhibition of cell proliferation due to a delay in the S phase of the cell cycle and inhibition of DNA replication. This effect is the results of mevalonate diphosphate accumulation, which acts as a phosphate sink, that is followed by ATP deficiency and subsequent imbalance in the deoxyribonucleotides pool. As a consequence, a replicative stress is induced as indicated by DNA double strand break formation and the activation of the ATR‐Chk1 pathway, which is responsible of cell cycle delay. This is the first description of the link between the cholesterol biosynthesis pathway and DNA replication, but it could be extrapolated to other metabolic disorders where phosphorylated metabolites accumulat

Estrategia terapéutica en el tratamiento tópico de la ictiosis: propuesta de nuevas formulaciones magistrales, su aplicación clínica y repercusión en las actividades de la vida diaria

Programa Oficial de Doutoramento en Saúde e Motricidade Humana. 5002V01[Resumo]: As ictiosis, un conxunto diverso de trastornos cutáneos considerados enfermidades raras, presentan desafíos significativos en canto ao enfoque médico, debido á falta de tratamentos específicos. Neste contexto, o enfoque terapéutico dirixiuse cara ao con-trol sintomático. Sen embargo, esta condición non só afecta á pel, senón que tamén ten un impacto considerable na calidade de vida dos doentes, influíndo na súa saúde xeral, actividades diarias e relacións interpersoais.Esta tese céntrase en levar a cabo e avaliar fórmulas maxistrais individualizadas co fin de mellorar os síntomas das ictiosis minimizando os efectos secundarios do tratamen-to. Ademais, analizamos o impacto, tanto da enfermidade como do tratamento, na calidade de vida dos doentes.Desarrollamos seis formulas maxistrais que cumpriron cos requisitos establecidos pola lexislación vixente e levouse a cabo un estudio observacional descritivo dos seis doen-tes tratados con estas formulacións. Os resultados revelaron unha melloría obxectiva das lesións, así como boa tolerancia e adherencia ao tratamento. Ademais, observa-mos unha mellora significativa na calidade de vida dos doentes incluídos neste estudio.En conclusión, as fórmulas maxistrais realizadas demostraron eficacia no tratamento sintomático das ictiosis, e xeneran un impacto positivo na calidade de vida dos doentes.[Resumen]: Las ictiosis, un conjunto diverso de trastornos cutáneos considerados enfermedades raras, presentan desafíos significativos en cuanto al abordaje médico, debido a la falta de tratamientos específicos. En este contexto, el enfoque terapéutico se ha dirigido hacia el control sintomático. Sin embargo, esta condición no solo afecta a la piel, sino que también tiene un impacto considerable en la calidad de vida de los pacientes, influyendo en su salud general, actividades diarias y relaciones interpersonales.Esta tesis se centra en desarrollar y evaluar fórmulas magistrales individualizadas con el fin de mejorar los síntomas de las ictiosis minimizando los efectos adversos del tratamiento. Además, analizamos el impacto, tanto de la enfermedad como del tratamiento, en la calidad de vida de los pacientes.Desarrollamos seis fórmulas magistrales que cumplieron con los requisitos establecidos por la legislación vigente. Realizamos un estudio observacional descriptivo de los seis pacientes tratados con estas fórmulas. Los resultados revelaron una mejoría objetiva de las lesiones, así como buena tolerancia y adherencia al tratamiento. Además, observamos una mejora significativa en la calidad de vida de los pacientes incluidos en este estudio.En conclusión, las fórmulas magistrales desarrolladas demostraron eficacia en el tratamiento sintomático de las ictiosis, y generan un impacto positivo en la calidad de vida de los pacientes.[Resumen]: Ichthyosis, a diverse set of skin disorders considered rare diseases, result in significant challenges in terms of the medical approach, due to the lack of specific treatments. In this context, the therapeutic approach has been directed towards symptomatic man-agement. Nonetheless, this condition not only affects the skin, but also has a consider-able impact on the quality of life of patients, influencing their general health, daily ac-tivities and interpersonal relationships.The main focus of this thesis is to develop and evaluate individualised compoundings for the purpose of improving the symptoms of ichthyosis while minimising side effects. In addition, we analyse the impact of both the pathology and the treatment on the quality of life of patients.Six compoundings that complied with the requirements established by current legisla-tion were developed and a descriptive observational study of the six patients treated with these compoundings was carried out. The results revealed an objective improve-ment of the lesions, as well as good tolerance and adherence to treatment. Further-more, a significant improvement in the quality of life of the patients included in this study was observed.In conclusion, the developed compoundings have been shown to be effective in the symptomatic treatment of ichthyosis, generating a positive impact on the quality of life of patients