Embryo culture in presence of oviductal fluid induces DNA methylation changes in bovine blastocysts

During the transit through the oviduct, the early embryo initiates an extensive DNA methylation reprogramming of its genome. Given that these epigenetic modifications are susceptible to environmental factors, components present in the oviductal milieu could affect the DNA methylation marks of the developing embryo. The aim of this study was to examine if culture of bovine embryos with oviductal fluid (OF) can induce DNA methylation changes at specific genomic regions in the resulting blastocysts. In vitro produced zygotes were cultured in medium with 3 mg/mL bovine serum albumin (BSA) or 1.25% OF added at the one- to 16-cell stage (OF1-16), one- to 8-cell stage (OF1-8) or 8- to 16-cell stage (OF8-16), and then were cultured until Day 8 in medium with 3 mg/mL BSA. Genomic regions in four developmentally important genes (MTERF2, ABCA7, OLFM1, GMDS) and within LINE-1 retrotransposons were selected for methylation analysis by bisulfite sequencing on Day 7-8 blastocysts. Blastocysts derived from OF1-16 group showed lower CpG methylation levels in MTERF2 and ABCA7 compared with the BSA group. However, CpG sites within MTERF2, ABCA7 and OLFM1 showed higher methylation levels in groups OF1-8 and OF8-16 than in OF1-16. For LINE-1 elements, higher CpG methylation levels were observed in blastocysts from the OF1-16 group than in the other experimental groups. In correlation with the methylation changes observed, mRNA expression level of MTERF2 was increased, while LINE-1 showed a decreased expression in blastocysts from OF1-16 group. Our results suggest that embryos show transient sensitivity to OF at early stages, which is reflected by specific methylation changes at the blastocyst stage.Fil: Barrera, Antonio Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Garcia, Elina Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Hamdi, Meriem. Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Departamento de Reproducción Animal; EspañaFil: Sánchez Calabuig, María Jesús. Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Departamento de Reproducción Animal; EspañaFil: López Cardona, Ángela Patricia. Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Departamento de Reproducción Animal; EspañaFil: Fonseca Balvís, Noelia. Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Departamento de Reproducción Animal; EspañaFil: Rizos, Dimitrios. Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Departamento de Reproducción Animal; EspañaFil: Gutiérrez Adan, Alfonso. Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Departamento de Reproducción Animal; Españ

Transfer of cooled llama embryos obtained from synchronized females

This study evaluated the efficiency of a synchronization protocol based on GnRH and PGF2α on embryo donor llamas for fixed timed mating and assessed the viability of embryos maintained at 5 ◦C and 15 ◦C for 24 h, using the Equitainer® and the Botu-BOX® as cooling devices respectively. Llamas were divided into four follicular wave groups: growth, dominance, static and regression; they received a GnRH analogue on day 0 followed by a second dose plus cloprostenol on day 8 and 15 and mating was indicated in females with a follicle ≥ 6 mm. Embryos were recovered 8 days post mating. Synchronization rate was 80% for the treated embryo donors, with no significant differences among groups. Uterine flushing was performed in 70% of the treated females (87.5% of mated llamas) and an embryo was recovered in 50%. Fourteen embryos were assigned randomly to 5 ◦C (Equitainer® group) and 15 ◦C (Botu-BOX® group) preservation for 24 h to be transferred later. In the Equitainer® group, we obtained 14% pregnancies and a female offspring was born. In the Botu-BOX® group, 28% resulted pregnant but subsequently pregnancies were lost. This protocol was effective for synchronizing follicles in growth phase in 80% of embryo donor llamas. In addition, cooling llama embryos using the Equitainer® and the Botu-BOX® as cooling devices to 5 ◦C and 15 ◦C respectively, preserves its morphology and viability for 24 h.Fil: Zampini, Enzo German. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Fernanda Veiga, María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Gallelli, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Moncalvo, Carla Evangelina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gambarotta, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Neild, Deborah Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Trasorras, Virginia Luz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentin

Modulation of glycolisis and the pentose phosphate pathway influences porcine oocyte in vitro maturation

Glycolytic and pentose phosphate pathway (PPP) activities were modulated in porcine cumulus-oocyte complexes (COCs) during in vitro maturation (IVM) by the addition of inhibitors or stimulators of key enzymes of the pathways to elucidate their relative participation in oocyte maturation. The activities of glycolysis and PPP were evaluated by lactate production per COC and by the brilliant cresyl blue test, respectively. Glucose uptake per COC and the oocyte maturation rate were also evaluated. Lactate production, glucose uptake and the percentage of oocytes reaching metaphase II decreased in a dose-dependent manner in the presence of the pharmacological (NaF) or the physiological (ATP) inhibitors of glycolysis (p < 0.05). The addition of the physiological stimulator of glycolysis (AMP) caused no effect on lactate production, glucose uptake or the meiotic maturation rate. The pharmacological (6-AN) and the physiological (NADPH) inhibitors of PPP induced a dose-dependent decrease in the percentage of oocytes with high PPP activity and in the nuclear maturation rate (p < 0.05). The physiological stimulator of PPP (NADP) caused no effect on the percentage of oocytes with high PPP activity. The glycolytic and PPP activities of porcine COCs and maturational competence of oocytes seem to be closely related events. This study shows for the first time the regulatory effect of ATP and NADPH as physiological inhibitors of glycolysis and PPP in porcine COCs, respectively. Besides, these pathways seem to reach their maximum activities in porcine COCs during IVM because no further increases were achieved by the presence of AMP or NADP.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Ferretti, E. L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Dalvit, Gabriel Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Desarrollo de un programa multimedia de aprendizaje en Reproducción Animal

The complexity of the veterinary curriculum is a challenge to prepare educational material in an interdisciplinary manner. Multimedia programs develop on the new computer-assisted learning systems are an appropiate medium for making such educational material available, in a efficient way, easy to update, and the expenses are moderate. Students can handle this program without difficulty, and visual components (graphics, images, movies) can promote the subject-student interaction. A multimedia program dealing with the Animal Reproduction has been developed by Reproduction and Obstetric Unit at the Faculty of Veterinary of Cordoba to support the student's educational formation. Male and female reproductive selection and examination in different animal species is approach in this multimedia application.La complejidad del currículum de veterinaria es un desafío para la preparación de material educacional de manera interdisplinar. Los actuales sistemas de enseñanza asistida por ordenador permiten que tutoriales o programas multimedia de aprendizaje en soportes informáticos se hayan convertido en un medio adecuado para conseguir que este material educativo se encuentre disponible de una manera eficaz, fácil de actualizar y con unos costes moderados. Los estudiantes pueden manejar dichos programas sin mucha complicación, siendo atractivos -entre otras razones- por la facilidad para incorporar en ellos componentes visuales (gráficos, imágenes, vídeos), lo que promueve la interacción entre asignaturas y alumno. En este sentido, la Unidad de Reproducción y Obstreticia de la Facultad de Veterinaria de Córdoba ha desarrollado un programa multimedia de aprendizaje en Reproducción Animal, que ofrece al estudiante un apoyo para su formación. Aborda temas relacionados con la selección y valoración de hembras y machos como reproductores, en las distintas especies animales

Biotecnologías de reproducción animal con posibilidad de aplicación para optimizar el potencial reproductivo y productivo de los animales. Una revisión

Animal reproductive biotechnology, represents an opportunity to optimize the potential reproductive and productive animals. The aim of this paper is a brief review of biotechnology in animal reproduction with future possibility of application to optimize thepotential reproductive and productive animals, such as in vitro fertilization, cloning and transgenesis.Las biotecnologías de reproducción animal, representan una oportunidad para optimizar el potencial reproductivo y productivo de los animales. El objetivo de este trabajo es presentar una breve revisión de las biotecnologías de reproducción animal con posibilidad futura de aplicación para optimizar el potencial reproductivo y productivo de los animales, tales como: fecundación in vitro, clonación y transgénesis

Uterine and corpus luteum blood flow evaluation prior to uterine flushing in llama embryo donors

The aim of this study was to assess the uterine blood flow (UBF) and corpus luteum blood flow (CLBF) in llamas 8 days post-mating, using color-Doppler ultrasonography (CDU), to determine the possible relationship between vascularization and the presence of an embryo. Adult females (n = 25) were used to monitor ovarian dynamics by palpation and transrectal ultrasonography until detection of a ≥6 mm growing follicle. Females were randomly assigned to one of two groups: Group I (n = 19), were mated and ovulation was induced by a single dose of buserelin (GnRH analog) that same day (Day 0); and Group II (n = 6), only ovulation was induced (control). On Day 8, UBF and CLBF were evaluated transrectally in both groups. The color-flow images obtained were analyzed with Image J1.52a software to determine the vascularization area and the percentage of corpus luteum with blood flow emission (CLBF%) together with the percentage for each uterine horn (UBF%). Statistical analysis was performed using an ANOVA test. In Group I, uterine flushing was performed to obtain the embryos, thus dividing the females into Group I+ (n = 10), when an embryo was recovered and Group I- (n = 9), when no embryo was recovered. Embryo recovery rate was 52.63% (10/19). In Group I+, UBF% was significantly higher compared to Group I- and Group II (P 0.05). In conclusion, it is possible to detect a local increase of UBF in the presence of an embryo on day 8 post-mating in llamas. This could be useful to achieve an early pregnancy diagnosis or to decide whether to carry out the uterine flushing in a llama embryo transfer program.Fil: Zampini, Enzo German. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Gallelli, Maria Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Chaves, María Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Neild, Deborah M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gambarotta, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo H.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Trasorras, Virginia Luz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentin

Analysis of DNA Extraction Protocols for Transgenic Events Determination in Alfalfa

Poster y resumenAlfalfa (Medicago sativa) is one of the main forage crops in Argentina. The unclear introduction of GE glyphosate-resistant alfalfa seeds, caused contamination in different production areas, affecting the purity of the local non-GE alfalfa seeds. Also, that contamination could affect the international trade of forage to countries where such transgenic events are prohibited. The evaluation of these events could be performed by DNA evaluation. In this sense, it is essential to have methodologies that allow us to obtain a good DNA concentration and quality.EEA Santiago del EsteroFil: Paz, Florencia. Universidad Nacional de Santiago del Estero. Facultad de Agronomía y Agroindustria; ArgentinaFil: Parellada, Eduardo Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Bionanotecnología del NOA. Laboratorio de Producción y Reproducción Animal; ArgentinaFil: Coria, María Sumampa. Universidad Nacional de Santiago del Estero. Facultad de Agronomía y Agroindustria; Argentina.Fil: Coria, María Sumampa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Bionanotecnología del NOA. Laboratorio de Producción y Reproducción Animal; ArgentinaFil: Mondino, Mario Hugo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Santiago del Estero; ArgentinaFil: Mondino, Mario Hugo. Universidad Nacional de Santiago del Estero. Facultad de Agronomía y Agroindustria; ArgentinaFil: Palma, Gustavo Adolfo. Universidad Nacional de Santiago del Estero. Facultad de Agronomía y Agroindustria; Argentina.Fil: Palma, Gustavo Adolfo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Bionanotecnología del NOA. Laboratorio de Producción y Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cornacchione, Monica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Santiago del Estero; Argentin

Neurological disorder in a male llama originated by an abscedative myositis

Background: Early diagnosis of neurological conditions in South American Camelids is crucial for treatments, prognosis and clinical patient development. Infectious agents, parasite, nutritional conditions or trauma, can cause neurological symptoms in camelids. Behavioral particularities can produce late infections and should be considered in differential diagnosis in clinical neurological cases. Case description: A 4-year-old male llama was attended for consultation for a limp in his left hind leg. On clinical examination no general nor hind leg problems were found. After a week of the first consultation he presented an acute disorder to move. A complete neurological exam detected paraplegia with decreased deep sensation and hyporeflexia in the hind limbs were found. Complete blood work analysis and radiographs were performed, a moderate anemia and leucocytosis was detected and, radiographs suggested osteomyelitis on the spinal process in the third lumbar vertebra. Anti-inflammatory and antibiotic treatment with florfenicol was chosen and used at a dose of 20 mg/kg intramuscularly. The male llama died two weeks after the first sign appeared. At postmortem examination the most relevant lesion was a severe inflammatory infiltration delimited with connective tissue in the lumbar muscles, compatible with an abscedative myositis, Enterococcus spp. was isolated in the culture from the lesion. Conclusion: To the authors knowledge this is the first report of a secondary and late infection produced as a consequence of aggressive behavior between males and should be consider as a differential diagnose in neurological disorders in these species.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Chaves, M. G.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Veiga, M. F.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Schapira, Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Suranitti, A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentin