Estudo do papel desempenhado pelas quimiocinas na leucemia linfoblástica aguda das células T

Dissertação mest., Ciências Biomédicas, Universidade do Algarve, 2009A leucemia linfoblástica aguda das células T é uma neoplasia que afecta um terço das crianças diagnosticadas com cancro e até hoje não existem certezas da sua origem. As quimiocinas são moléculas com capacidade quimioatractiva e estão associadas a processos biológicos tais como migração, desenvolvimento e transmigração

Histopathology and immunopathology in minor salivary glands of patients with Sjögren's syndrome (SSj)

Sjögren's syndrome (SSj) is a chronic autoimmune disorder characterized by lymphocytic infiltration of the exocrine glands with concomitant destruction of the glandular tissue, affecting predominantly salivary and lacrimal glands. The inflammatory infiltrate begins around ductal epithelial cells, extending and replacing the functional tissue. It consists predominantly of CD4+ T cells, with fewer CD8+ T cells, B cells, and plasma cells. The plasmacellular infiltrate consists of large amounts of IgG and IgM containing plasma cells. Some studies have revealed a predominant Th1 pattern of cytokines and chemokine expression in minor salivary glands of SSj patients. An increased expression of vascular endothelial and lymphocyte adhesion molecules was found on the minor salivary glands of patients with SSj. It was documented that glandular epithelial cells of SSj patients express HLA-DR antigens, and that structures resembling ectopic germinal centers were found in minor salivary glands of SSj patients. The mechanisms that initiate the inflammatory process in minor salivary glands of SSj patients remain unknown, but recent studies have shown that the glandular epithelial cells of SSj patients have a role in the pathogenesis of the disease.A síndrome de Sjögren (SSj) é uma doença auto-imune caracterizada por infiltração linfocitária em glândulas exócrinas e destruição do tecido glandular, com franca preferência por glândulas salivares e lacrimais. O infiltrado inflamatório inicia-se ao redor das células epiteliais ductais, espalhando-se e substituindo o tecido funcional. Consiste predominantemente de células T CD4+ e, em menores quantidades, células T CD8+, células B e plasmócitos. O infiltrado plasmocitário consiste de grandes quantidades de plasmócitos contendo IgG e IgM. Alguns estudos revelaram um padrão predominante de citocinas Th1 e expressão de quimiocinas nas glândulas salivares menores de pacientes com SSj. Foi observado, também, um aumento na expressão de moléculas de adesão endotelial e linfocitária nessas glândulas salivares. Foi documentada a expressão do antígeno HLA-DR pelas células epiteliais glandulares de pacientes com SSj e a presença de estruturas semelhantes a centros germinativos em glândulas salivares menores de alguns pacientes. Os mecanismos que desencadeiam o processo inflamatório em glândulas salivares menores de pacientes com SSj ainda não são conhecidos, mas recentes estudos demonstraram que as células epiteliais glandulares desses pacientes estão implicadas na patogênese da doença.UNIFESP-EPMUNIFESP, EPMSciEL

O efeito das quimiocinas nas cinases e fosfatases envolvidas na patologia da doença de Alzheimer

Alzheimer’s disease (AD) is a devastating worldwide disease and the main cause of dementia. In its pathology, are include two main hallmarks: the extracellular deposition of Aβ peptides, formed in amyloidogenic processing of APP, that aggregate into senile plaques (SP) and the intracellular formation of neurofibrillary tangles (NFT), aggregates of hyperphosphorylated tau protein. Tau hyperphosphorylation occurs due to increased kinase activity (including GSK3β and CDK5) and impaired protein phosphatase activity (PP2A, PP1 and PP2B). Neuroinflammation is a crucial event in AD pathogenesis, during which microglia and astrocytes are constitutively activated, leading to massive production of cytokines. These molecules may alter APP amyloidogenic processing, Aβ aggregation or tau phosphorylation. Among cytokines, chemokines seem to have an important role in AD progression. In the present work, chemokines interleukin 8 (IL-8) and monocyte chemoattractant protein 1 (MCP-1) impact on tau phosphorylation was addressed. Additionally, the effect of these chemokines on kinases (GSK3β and CDK5) and phosphatase (PP1 and PP2A), important in this process, was evaluated. For both chemokines, a significant increase in ptau S396 levels was observed at longer incubation periods and higher chemokines concentration. Further, results regarding GSK3β support that this is not the main involved kinase in this process. However, preliminary results suggest that CDK5, PP1 and PP2A can have a role in tau increased phosphorylation, promoted by chemokines. This work supports the involvement of chemokines on tau hyperphosphorylation and potentially in NFT formation, that consequently result in AD neurodegeneration. At a disease view, this thesis allowed a better understanding of molecular mechanisms that underling the disease pathology, highlighting the role of inflammation in this process.A doença de Alzheimer (DA) é uma doença devastadora e a principal causa de demência a nível mundial. Na sua patologia estão incluídas duas principais características: a deposição extracelular de péptidos Aβ, formados durante o processamento amiloidogénico da APP, que agregam em placas senis (SP) e a formação de traças neurofibrilares (NFT), agregados de proteína tau hiperfosforilada. A hiperfosforilação da tau ocorre devido ao aumento da atividade de proteínas cinases (incluindo a GSK3β e a CDK5) e à diminuição da atividade de proteínas fosfatases (PP2A, PP1 e PP2B). A neuroinflamação é um evento crucial na patogénese da DA, durante o qual, a microglia e os astrócitos são constitutivamente ativados, o que leva a uma produção massiva de citocinas. Estas moléculas podem alterar o processamento amiloidogénico da APP, a agregação do Aβ ou a fosforilação da tau. Entre as citocinas, as quimiocinas parecem ter um papel importante na progressão da DA. No presente trabalho foi avaliado o impacto das quimiocinas, interleucina 8 (IL-8) e proteína quimiotática de monócitos 1 (MCP-1), na fosforilação da tau. Para além disso, o efeito destas quimiocinas na atividade de cinases (GSK3β e CDK5) e nas fosfatases (PP1 e PP2A) importantes neste processo também foi avaliado. Para as duas quimiocinas, foi observado um aumento significativo nos níveis de pTau S396 para os períodos de incubação mais longos e nas concentrações de quimiocinas mais elevadas. Além disso, os resultados em relação à GSK3β indicam que esta não é a cinase maioritariamente envolvida neste processo. No entanto, resultados preliminares sugerem que a CDK5, a PP1 e a PP2A podem desempenhar um papel no aumento da fosforilação da tau, promovido pelas quimiocinas. Este trabalho suporta o envolvimento das quimiocinas no estado de hiperfosforilação da tau e potencialmente na formação de NFT que, consequentemente resultam em neurodegeneração na DA. Do ponto de vista da doença, esta tese permite uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares que estão na base da patologia, evidenciando o papel da inflamação neste processo.Mestrado em Biomedicina Molecula

Novos mediadores locais da inflamação : proctetinas e resolvinas

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas MonizDiariamente o nosso corpo está sujeito a danos físicos ou infeções por microrganismos exógenos, este responde desencadeando uma resposta inflamatória, que consiste numa reação local e sistémica onde ocorreu a alteração estrutural do tecido, sendo o principal objetivo detetar e eliminar os fatores que interferem com a homeostase do organismo. No início da resposta inflamatória, as células inflamatórias invasivas produzem vários mediadores pró-inflamatórios aumentando o grau da inflamação e basicamente dois mecanismos de defesa: uma resposta inata e uma resposta imune adquirida. Dependendo do momento da resposta inflamatória, os mediadores lipídicos são formados não só com o objetivo de inibir a inflamação, mas também para acelerar a resolução da inflamação. Os mediadores lipídicos de pro-resolução como as lipoxinas, resolvinas, maresinas e proctetinas, são sintetizados a partir do ácido araquidónico e de ácidos gordos essenciais, como o ácido docosahexaenóico e o ácido eicosapentaenóico, durante a fase de resolução da inflamação aguda. Funcionalmente, estes mediadores lipídicos estimulam e aceleram a resolução através de mecanismos multifatoriais ao nível dos tecidos. Estes mediadores lipídicos pró-resolução têm sido considerados como um novo meio para o tratamento de diferentes tipos de doenças inflamatórias

CCR5 e variante CCR5Δ32 : funções, aplicações e impactos clínicos em condições inflamatórias, doenças infecciosas e câncer

O CCR5 é um importante receptor celular do sistema imune, atuando principalmente no controle da migração de monócitos/macrófagos e linfócitos T. Além disso, possui um papel bem definido na infecção pelo HIV-1, sendo o principal correceptor utilizado pelo vírus para realizar sua penetração na célula hospedeira. A variante CCR5Δ32 (rs333) é um polimorfismo do gene CCR5 que consiste em uma deleção de 32 pb no éxon 3, acarretando a expressão de uma proteína truncada não-funcional. O alelo Δ32 originou-se no continente Europeu e atualmente possui uma distribuição bastante heterogênea. No Brasil, verifica-se uma maior frequência da variante na região sul em razão da configuração predominantemente de origem Europeia da população. Diversos trabalhos avaliaram o papel da variante CCR5Δ32 em condições inflamatórias, doenças infecciosas e câncer, apresentando resultados controversos para vários dos desfechos investigados. Na presente dissertação, os estudos avaliando a frequência deste alelo de maneira ampla no Brasil são revisados (artigo apresentado no Capítulo 1). Quando tratamos especificamente de câncer, verificamos que o alelo Δ32 atua de maneira diferente em tipos distintos de neoplasias. Além dos trabalhos brasileiros, percebe-se que a expressão de CCR5 pode estar associada com malignidades, como o surgimento de metástase e controle inflamatório do microambiente tumoral. Neste contexto, hipotetizamos sobre o papel da interação entre a molécula CD34, marcadora de célulastronco hematopoiéticas, com o CCR5 no desenvolvimento de câncer (artigo apresentado no Capítulo 2). Em seguida, discutimos o papel da variante CCR5Δ32 na infecção pelo HIV, trazendo a estratégia de remissão sustentada realizada pela primeira vez há doze anos e, mais recentemente, pela segunda vez, há dois anos, com base no transplante de células tronco com genótipo Δ32/Δ32. Aqui, apresentamos um artigo original (Capítulo 3) avaliando a frequência do CCR5Δ32 em doadores voluntários de medula óssea do Rio Grande do Sul cadastrados no Registro Nacional de Doadores de Medula Óssea (REDOME), além de investigar uma possível associação da presença de alelos específicos de HLA com tal polimorfismo. Encontramos uma frequência alélica de 7,1%, e uma frequência do genótipo Δ32/Δ32 de 0,76%. Esses números provavelmente são superestimados em relação à população brasileira como um todo, visto que apenas indivíduos da região sul foram incluídos no estudo. No entanto, o estudo revela um número substancial de doadores disponíveis em um contexto nacional que podem fornecer células com o genótipo Δ32/Δ32 para novas tentativas de remissão sustentada da infecção pelo HIV. Por fim, não encontramos associações dos alelos de HLA com a variante, mas o locus HLA-B se mostrou um interessante objeto de estudo futuro.CCR5 is an important immune system cell receptor, acting mainly on the migration control of monocytes/macrophages and T lymphocytes. Also, it has a well-defined role in HIV-1 infection, being the main coreceptor used by the virus to penetrate the host cell. The variant CCR5Δ32 (rs333) is a polymorphism of the CCR5 gene, which consists of a 32-bp deletion in exon 3, leading to the expression of a non-functional truncated protein. The Δ32 allele originated in the European continent and currently has a very heterogeneous distribution. In Brazil, there is a high frequency of the variant in the southern region, due to the predominantly European origin of the population. Several studies evaluated the role of the Δ32 variant in inflammatory conditions, infectious diseases and cancer, with controversial results for several of the investigated outcomes. In the present work, studies evaluating the frequency of this allele in different outcomes in Brazil are reviewed (article included in Chapter 1). When we specifically focus on cancer, we find that the Δ32 allele acts differently in different types of neoplasms. In addition, the expression of CCR5 may be associated with malignancies, such as the appearance of metastasis and in the inflammatory control of the tumor microenvironment. In this context, we hypothesized about the interaction between the CD34 molecule, a hematopoietic stem cell marker, with CCR5 in cancer development (article included in Chapter 2). Next, we discussed the role of the CCR5Δ32 variant in HIV-1 infection, bringing the strategy of sustained remission carried out for the first time twelve years ago and, more recently for the second time, two years ago, based on stem cell transplantation with Δ32/Δ32 genotype. Here, we present an original study (Chapter 3) evaluating the CCR5Δ32 frequency in voluntary bone marrow donors from Rio Grande do Sul registered in Registro Nacional de Doadores de Medula Óssea (REDOME), in addition to investigating a possible association of the presence of specific HLA alleles with such polymorphism. We found an allele frequency of 7.1%, and a frequency of the Δ32/Δ32 genotype of 0.76%. These numbers are probably overestimated in relation to the Brazilian population as a whole, as only the southern region was included in the study. However, it suggests a substantial number of available donors in a national context that can supply cells with the Δ32/Δ32 genotype for further attempts of sustained remission of HIV infection. Finally, we did not find associations between the HLA alleles with a variant, but the HLA-B locus is an interesting object for future studies

Efecto del condroitín sulfato en la sinovitis de pacientes con artrosis de rodilla

Objetivo: Evaluar mediante ecografía el efecto del condroitín sulfato (CS) en la sinovitis de pacientes conartrosis (OA) de rodilla, y colaborar en el conocimiento de los mecanismos bioquímicos involucrados enla inflamación sinovial.Métodos: Estudio controlado, aleatorizado, ciego simple de 70 pacientes con OA de rodilla tratadosdurante 6 meses con CS o paracetamol (PCT). Los pacientes fueron visitados a tiempo basal, a las 6semanas, y a los 3 y 6 meses para valorar el estado de su OA según los siguientes parámetros: sinovi-tis evaluada mediante ecografía (según definición de expertos OMERACT); dolor y función, mediante laescala visual analógica y el índice de Lequesne; y concentración de mediadores inflamatorios en suero ylíquido sinovial, mediante ELISA.Resultados: El tratamiento con CS redujo en un 50% el número de individuos que presentaban sinovitis;sin embargo, se observó un incremento de un 123% en el grupo tratado con PCT. En los pacientes sinsinovitis inicial, se observó el establecimiento de esta en un 85,71 y 25% de los casos tratados con PCT yCS, respectivamente. Ambas terapias mejoraron la función articular, pero únicamente el tratamiento conCS produjo una mejora significativa del dolor al final del tratamiento. Se observó una asociación entre eltratamiento con CS y los cambios en la concentración de RANTES y UCN en el líquido sinovial.Conclusiones: El tratamiento con CS tiene un efecto mantenido beneficioso, previniendo la aparición desinovitis o disminuyendo su presencia, así como reduciendo los síntomas de la artrosis. El PCT tambiénmejora los síntomas clínicos, pero no tiene ningún efecto sobre la inflamación. Las variaciones observadasen la concentración de RANTES y UCN podrían estar relacionadas con el efecto antiinflamatorio asociadoal tratamiento con CS

Biomarcadores en fluídos biológicos y su potencial uso como indicadores de nefritis lúpica en individuos con lupus eritematoso sistémico

Lupus nephritis is one of the most severe manifestations of systemic lupus erythematous. Renal involvement in patients with systemic lupus erythematous is an important cause of morbidity and mortality. The pathogenesis of lupus nephritis involve multiple factors, wich include genetic predisposition, epigenetic regulation and environmental interaction. Conventional clinical parameters such as creatinine clearance, proteinuria, urinary sediments, antibodies anti-double- strand DNA and complement proteins they are not enough sensitive or specific to detect disease activity. In the last decades, “Omics” technologies (Proteomic, genomic, transcriptomic, metobolomic) have been used in an extensive way looking for biomarkers, which allowed to discovery variants associated with systemic lupus erythematous and lupus nephritis. Such findings have expanded our knowledge about molecular basis of disease and they have been very important to identification of potential therapeutic targets to prediction of disease and early treatment. In this review, we resume some of recent studies focused in identification of biomarkers associated with lupus nephritis in diverse biological fluids.La nefritis lúpica es una de las manifestaciones más severas del lupus eritematoso sistémico. El compromiso renal en pacientes con lupus eritematoso sistémico es un causal importante de morbilidad y mortalidad. La patogénesis de la nefritis lúpica involucra múltiples factores, entre los que se incluyen predisposición genética, regulación epigenética e interacción ambiental. Los parámetros clínicos convencionales tales como eliminación de creatinina, proteinuria, sedimentos urinarios, anticuerpos anti-ADN de doble cadena y niveles del complemento no son lo suficientemente sensibles o específicos para detectar actividad de la enfermedad.En las últimas décadas, las técnicas basadas en “Ómicas” (proteómica, genómica, transcriptómica, metabolómica) han sido utilizadas de manera extensa para la búsqueda de biomarcadores, las cuales han permitido descubrir una amplia variedad de variantes que son asociadas con lupus eritematoso sistémico y nefritis lúpica.Esos descubrimientos han expandido nuestro entendimiento de las bases moleculares de la enfermedad y han sido muy importantes para la identificación de potenciales blancos terapéuticos para predicción de la enfermedad y tratamiento temprano. En esta revisión, resumimos algunos de los estudios recientes enfocados en la identificación de biomarcadores asociados a nefritis lúpica en diversos fluidos biológicos

Genes e vias metabólicas envolvidos nos mecanismos de resistência e susceptibilidade de bovinos infestados com carrapato Rhipicephalus microplus.

Entre os principais problemas da pecuária brasileira está o parasitismo pelo carrapato bovino, Rhipicephalus microplus, acarretando prejuízos de mais de dois bilhões de dólares por ano. A compreensão dos mecanismos envolvidos na resistência genética aos carrapatos é importante porque pode auxiliar a identificação de genes ou marcadores para essa característica. O objetivo deste trabalho foi identificar genes e vias regulatórias envolvidos na discriminação de grupos de bovinos resistentes e sensíveis submetidos à infestação artificial com o carrapato Rhipicephalus microplus