Investigación de la Leucemia Mieloide Aguda mediante el desarrollo de modelos in vitro e in vivo

[ES] La leucemia mieloide aguda (LMA) se trata de un grupo heterogéneo de desórdenes hematológicos producidos por alteraciones genéticas en las células precursoras mieloides. Las mutaciones en la enzima Isocitrato deshidrogenasa 2 (IDH2) son unas de estas alteraciones. Las mutaciones más frecuentes en esta proteína afectan a las posiciones R140 y R172, provocando una ganancia de función con la producción del oncometabolito D-2-hidroxiglutarato (2-HG). A pesar de que ambas inducen la producción de 2-HG, la mutación R172 produce mayor cantidad de oncometabolito, presenta menos concurrencias con otras alteraciones genéticas y se asocia a una peor respuesta a la quimioterapia y un mayor riesgo de recaída. Los modelos de investigación han permitido conocer el papel de las mutaciones genéticas en el desarrollo de la enfermedad. A pesar de ello, es necesario desarrollar nuevos modelos que expresen de forma endógena estas mutaciones para estudiar en profundidad las vías moleculares afectadas. Por todo ello, en esta Tesis se han desarrollado nuevas estrategias de edición génica mediante el sistema CRISPR/Cas9 con el objetivo de desarrollar nuevos modelos in vitro e in vivo de mutaciones implicadas en LMA. Debido a la baja eficiencia de transfección de los plásmidos CRISPR en las líneas celulares leucémicas, el método más empleado para introducir los elementos CRISPR han sido principalmente vectores lentivirales. Para evitar los inconvenientes de este tipo de vectores, en esta Tesis se ha desarrollado una estrategia alternativa para la introducción de la nucleasa Cas9 y los guías CRISPR. El gen codificante de la Cas9 se introdujo en el genoma de células NB4 mediante transducción con lentivirus, generando una línea celular con expresión constitutiva de la nucleasa. Por otro lado, se desarrolló un sistema sencillo de producción de los guías CRISPR mediante PCR con los elementos esenciales para su expresión y la expresión del reportero GFP de forma opcional. Con el objetivo de optimizar la técnica y probar su eficiencia en distintas dianas se modificaron dos genes implicados en LMA. Estos fueron el gen IDH2, en el cuál se buscó introducir la mutación R172, y el gen MYBL2. Finalmente, las eficiencias de edición obtenidas se compararon con el uso de complejos de ribonucleoproteínas CRISPR, muy utilizados por su alta eficiencia. Mientras que los complejos de ribonucleoproteínas presentaron una mayor eficiencia de corte, la eficiencia de edición de la mutación R172 fue similar en ambas estrategias. Mediante secuenciación masiva se confirmó y caracterizó esta edición y se comprobó que la maquinaria de edición no había producido cortes inespecíficos en regiones similares del genoma. Por tanto, la nueva metodología desarrollada permitió editar de forma precisa líneas celulares leucémicas con eficiencias similares a otras técnicas CRISPR más extendidas y sin producir efectos inespecíficos no deseados. Por otro lado, gracias a la gran conservación evolutiva del gen IDH2, los residuos R140 y R172 se encuentran conservados en la proteína idh-2 de Caenorhabditis elegans. Se empleó la estrategia co-CRISPR para desarrollar y seleccionar cepas mutantes con las mutaciones ortólogas a R140 y R172, y una cepa con ambas mutaciones. A pesar de la conservación, no se observó el aumento del oncometabolito 2-HG esperado en las cepas mutantes en comparación con la cepa salvaje control N2. Un estudio exhaustivo de las vías implicadas nos serviría para desarrollar modelos de investigación con las alteraciones moleculares observadas en los pacientes. Para concluir, la estrategia desarrollada de introducción de elementos CRISPR en líneas celulares, junto a los modelos producidos en C. elegans, permitirán en futuros estudios investigar en detalle los efectos moleculares de mutaciones detectadas en pacientes de LMA, su implicación en el desarrollo y pronóstico de la LMA y comprender su papel en la estratificación de los pacientes.[CA] La leucèmia mieloide aguda (LMA) es tracta d'un grup heterogeni de desordres hematològics produïts per alteracions genètiques en les cèl·lules precursores mieloides. Les mutacions en l'enzim Isocitrato deshidrogenasa 2 (IDH2) son d'aquestes alteracions. Les mutacions més freqüents en aquesta proteïna afecten a les posicions R1240 i R172, produint un guany de funció amb la producció de l'oncometabolit D-2-hidroxiglutarat (2-HG). A pesar que ambdues indueixen la producció de 2-HG, la mutació R172 produeix mes quantitat de oncometabolit, presenta menys co ocurrències con altres alteracions genètiques i s'associa a una pitjor resposta a la quimioteràpia i un major risc de recaiguda. Els models d'investigació han permés conéixer el paper de les mutacions genètiques en el desenvolupament de la malaltia. Malgrat això, és necessari desenvolupar nous models que expressen de manera endògena aquestes mutacions per a estudiar en profunditat les vies moleculars afectades. Per tot això, en aquesta Tesis s'han desenvolupat noves estratègies d'edició gènica mitjançant el sistema CRISPR/Cas9 amb l'objectiu de desenvolupar nous models in vitro i in vivo de les mutacions implicades en la LMA. Degut a la baixa eficiència de transfecció dels plasmids CRISPR en les línies cel·lulars leucèmiques, el mètode més emprat per a introduir els elements CRISPR han sigut principalment vectors lentivirals. Per a evitar els inconvenients d'aquesta mena de vectors, en aquesta Tesis s'ha desenvolupat una estratègia alternativa per a la introducció de la nucleasa Cas9 i els guies CRISPR. El gen codificant de la Cas9 es va introduir al genoma de cèl·lules NB4 mitjançant transducció amb lentivirus, generant una línia cel·lular amb expressió constitutiva de la nucleasa. D'altra banda, es va desenvolupar un sistema fàcil de producció dels guies CRISPR mitjançant PCR amb els elements essencials d'expressió i amb l'expressió del reporter GFP de manera opcional. Amb l'objectiu d'optimitzar la tècnica i provar la seua eficiència en diferents dianes es van modificar dos gens implicats en LMA. Aquests van ser el gen IDH2, en el qual es va buscar introduir la mutació R172, i el gen MYBL2. Finalment, les eficiències d'edició obtingudes amb la nova estratègia es van comparar amb l'ús de complexos ribonucleotproteïnes CRISPR, molt utilitzats per la seua alta eficiència. Mentre que els complexos de ribonucleoproteïnes van presentar una major eficiència de tall, l'eficiència d'edició de la mutació R172 va ser similar en les dues estratègies. Mitjançant seqüenciació massiva es va confirmar i caracteritzar aquesta edició i es va comprovar que la maquinària d'edició no havia produït talls inespecífics en regions similars del genoma. D'aquesta manera, la nova metodologia desenvolupada permet editar de manera precisa línies cel·lulars leucèmiques amb eficiències similars a altres tècniques CRISPR més esteses i sense produir efectes inespecífics no desitjats. D'altra banda, gràcies a la gran conservació evolutiva del gen IDH2, els residus R140 i R172 es troben conservats en la proteïna idh-2 de Caenorhabditis elegans. Es va utilitzar l'estratègia co-CRISPR per a desenvolupar i seleccionar ceps mutants amb les mutacions ortòlogues a R140 i R172, i un cep amb dues mutacions. Malgrat l'alta conservació, no es va observar l'augment del oncometabolit 2-HG esperat en els ceps mutants en comparació amb el cep salvatge control N2. Un estudi exhaustiu de les vies implicades ens serviria per a desenvolupar models d'investigació amb les alteracions moleculars observades en els pacients. Per a concloure, l'estratègia desenvolupada d'introducció d'elements CRISPR en línies cel·lulars, al costat dels models produïts en C. elegans permetran en estudis futurs investigar detalladament els efectes moleculars de mutacions detectades en pacients, la seua implicació en el desenvolupament i prognosi de la LMA i comprendre el seu paper en l'estratificació dels pacients.[EN] Acute Myeloid Leukaemia (AML) is a heterogeneous group of haematological disorders caused by genetic alterations in myeloid precursors. Mutations in the Isocitrate dehydrogenase enzyme are among these alterations. The most frequent mutations in this protein affect R140 and R172 positions, leading to a gain of function with the production of the oncometabolite D-2-hydroxyglutarate (2-HG). Although both induce the 2-HG production, the R172 mutation generates greater amount of oncometabolite, has fewer co-occurrences with other genetic alterations and is associated with worse chemotherapy response and higher relapse risk. Research models have made possible to study the role of genetic mutations in disease development. Despite this progress, new models with endogenous expression of these mutations are needed to study in depth the molecular pathways involved. Therefore, in this Thesis we have developed new gene editing strategies using the CRISPR/Cas9 system with the aim of developing new in vitro and in vivo models of mutations involved in AML. Regarding in vitro model, due to the low transfection efficiency of CRISPR plasmids in leukemic cell lines, the most commonly method used for introducing CRISPR elements have been mainly lentiviral vectors. To avoid the disadvantages of this type of vectors, in this Thesis we have developed an alternative strategy for introducing Cas9 nuclease and CRISPR guides. The gene encoding the Cas9 was introduced into NB4 genome by lentiviral transduction producing a stable cell line that constitutively express the nuclease. On the other hand, a simple system for the production of CRISPR guides by PCR with essential elements of expression was developed and with GFP reporter expression optionally. In order to optimise the technique and test its efficiency in different targets, two genes involved in AML were modified. These were IDH2 gene, in which R172 mutation was introduced, and MYBL2 gene. Finally, editing efficiencies obtained with the new strategy were compared with CRISPR ribonucleoproteins methodology, widely used for its high efficiency. Whereas ribonucleoprotein complexes showed higher cut efficiencies, the efficiency of edition of R172 mutation efficiency was similar in both strategies. These results were validated and characterized by means of next generation sequencing, and no off-target effects were found. Therefore, the new developed methodology allows precise gene editing in leukemic cell lines with similar efficiencies with other popular CRISPR techniques and without off-target effects. On the other hand, thanks to the high evolutive conservation of IDH2 gene R140 and R172 residues are conserved in Caenorhabditis elegans idh-2 protein. The co-CRISPR strategy was used to produce and select mutant strains with ortholog mutations to R140, R172 and one strain with both mutations. Despite the high conservation, the expected increase in oncometabolite 2-HG concentration was not detected in mutant strains compared to the N2 wild type strain. A comprehensive study of the pathways involved would help us to develop a research model with molecular alterations noticed in patients. In conclusion, the new developed strategy for CRISPR elements introduction in cell lines, together with C. elegans models, will allow an in-depth research of molecular effect of mutations detected in patients, its implication in AML progression and prognosis and understand their role in patient stratification.González Romero, E. (2022). Investigación de la Leucemia Mieloide Aguda mediante el desarrollo de modelos in vitro e in vivo [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/181891TESI

Cyclic voltammetry studies of biotoxins on nanostrutured screen printed electrodes

The methods of analysis recognized for the detection of biotoxins marine in bivalve live molluscs have been modified by the European Commission 15/2011 in January 10 (2011) substituting the Regulation (CE) n º 2074/2005. Concurrently, bioassay's method in mice will not be able to continue used after December 31, 2014, for what it will be necessary that the different laboratories that nowadays carry out these biotoxin analyses, should equip adequately to be able to realize the pertinent controls. In this context, it will be necessary to develop sensitive/selective/cheap methods of analysis with robust instruments to obtain the indispensable requirements to be able to carry out the determination of the marine biotoxins with lower limits of detection (LOD) and to validate them with the standard AOAC method based on high performance liquid chromatography (HPLC)[1]. With this aim, we present the preliminary results of our work on the development of an electrochemical sensor based on the direct interaction between domoic acid (DA) and a “Screen Printed” Carbon Electrode (SPCE) modified with multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) with acidic (-COOH) functionalities (Figure 1). In these experiments, the voltammetric response of DA is controlled by its adsorption to the nanostructured electrode surface. The concentrations range tested were in the range of ng/l. The influence of several experimental parameters is studied to optimize the uptake processes. Figure 1. “Screen Printed” Carbon Electrode (SPCE) modified with multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) with acidic (-COOH) functionalities used for the electrochemical studies of Domoic Acid (DA) The methodology employed in this study will be extending to other ones biotoxins and to different types of nanostructured electrode surface upon incorporation of other nanomaterials and nanostructures such as nanoparticles (NPs). Acknowledgements Financial support from AECID-PCI Mediterráneo (A/031592/10). The authors thank to Ana Gago Team (UVigo) for their kind help and DA gift References [1] Gago-Martinez A. et al.,Chromatographia, 53 (2001) S231-S235.Financial support from AECID-PCI Mediterráneo (A/031592/10)

Aprovechamiento del subproducto de la cola de camarón para reducir su desperdicio e incorporarlo en la dieta de los pollos de engorde en mini agencia González, Ahuachapán

Aprovechamiento del subproducto de la cola de camarón para reducir su desperdicio e incorporarlo en la dieta de pollos de engorde en mini agencia González, Ahuachapán” su objetivo principal fue evaluar el aprovechamiento del subproducto de la cola camarón, para reducir su desperdicio e incorporarlo en la dieta de los pollos de engorde. Se realizó un proceso de lavado, secado y molido del exoesqueleto para la elaboración de una harina, con la cual se alimentó a dos grupos de aves en diferentes proporciones cada uno (5% y 10%) de la raza Hubbard, el tercer grupo de aves fue alimentado con concentrado comercial sin adición de harina. La alimentación controlada de las aves comenzó a partir de los 15 días de nacidos y termino a los 42 días, se registraron pesos promedios de 2.3 kg a 2.5 kg utilizando harina y 1.7 kg en tratamiento control. La harina se sometido a análisis microbiológico y bromatológico en los cuales los resultados fueron favorables, pues no se encontraron microorganismos patógenos y se determinó un alto valor nutricional de la harina como en el caso de proteína con un valor de 38.09 g/100g además de otros nutrientes como el calcio con 16.70 g/100g de muestra. Para evaluar la carne de las aves se realizó a un análisis sensorial, prueba de comparación pareada, para determinar si existía diferencia o no en el sabor de los pollos, el cual únicamente resulto diferente cuando se utilizaba el 10% de harina, pero no se identificó ningún sabor a camarónMonografía presentada para optar al título de Ingeniera en Alimento

Methodology for decentralized analysis: detection, quantification and in situ monitoring of pharmaceutical formulations removal by electro-Fenton

Water quality is essential to both human and ecosystem health, and a fast detection of emerging pollutants is claimed, along with effective wastewater treatment plants to eliminate these types of substances. The goal of this study was the development of a sensitive and selective methodology to customize a handle device that meets this demand. Clozapine and its pharmacological formulation, Leponex®, were used as a model. The results obtained from the studies by differential pulse voltammetry (DPV) demonstrated that this methodology allows a simpler and cheaper decentralized analysis without losing sensitivity, performing electrochemical measurements in situ, in real-time and directly without sample treatment, with a good precision (RSD 3.7 %) and excellent accuracy (recoveries between 97.6 and 99.9 %). Moreover, the methodology was successfully used for direct follow-up the medicine removal in real samples by electro-Fenton (EF) treatment. The results gathered showed a relative error of less than 2 % concerning the measurements made with the conventional potentiostat. Bearing this in mind, the effectiveness of these electrochemical techniques used in tandem with the comfort and high specificity offered by the portable device, a more exhaustive control of water quality can be achieved, thus improving the quality of life in the planet.Agencia Estatal de Investigación | Ref. PID2020-113667GB-I00Agencia Estatal de Investigación | Ref. PDC2021-121394-I00Agencia Estatal de Investigación | Ref. CTM2017-87326-RXunta de Galicia | Ref. ED431C 2017/47Xunta de Galicia | Ref. ED431D 2017/0

Is there a role in acute kidney injury for FGF23 and Klotho?

ABSTRACT Cardio-renal syndrome is a clinical condition that has recently been well defined. In acute kidney disease, this interaction might trigger chronic processes determining the onset of cardiovascular events and the progression of chronic kidney disease. Moreover, the high mortality rate of acute kidney injury (AKI) is also linked to the fact that this condition is often complicated by dysfunctions of other organs such as lungs or heart, or is associated with septic episodes. In this context the role and the potential link between bone, heart and kidney is becoming an important topic of research. The aim of this review is to describe the cardiac alterations in the presence of AKI (cardiorenal syndrome type 3) and explore how bone can interact with heart and kidney in determining and influencing the trend of AKI in the short and long term. The main anomalies of mineral metabolism in patients with AKI will be reported, with specific reference to the alterations of fibroblast growth factor 23 and Klotho as a link between the bone–kidney–heart axis

IGF-II treatment prevents the oxidative damage derived by MPP+/MPTP administration in a cellular and animal model of Parkinson’s disease.

El factor de crecimiento de la insulina-II (IGF-II) ha mostrado efectos antioxidantes y neuroprotectores en algunos trastornos neurodegenerativos, como es la Enfermedad de Parkinson (EP). Analizamos el efecto de IGF-II y la implicación de la esfingosina kinasa (SPHK), en la citoarquitectura/función mitocondrial tras provocar daño oxidativo con la administración de la neurotoxina MPTP y su metabolito activo. La línea celular SN4741 se trató con MPP+ solo/en presencia de IGF-II (2 h). Los tratamientos fueron reemplazados por medio/IGF-II (2h), respectivamente. Se estudió: morfología (microscopía electrónica, EM), tasa de consumo de oxígeno (OCR) y muerte celular (LDH). MPTP/probenecid(p) por vía parenteral (35d) indujo un daño progresivo en la vía nigroestriatal dopaminérgica (DA-NSP) de los animales. En los días 36-44, se inyectó vehículo. El grupo control recibió vehículo siguiendo el mismo régimen de administración (1-44d). Otro grupo se trató con IGF-II una vez inducido el daño por MPTP (22-44 días). Para investigar el papel de IGF-II en la alteración conductual inducida por MPTP/p, se evaluó el rendimiento motor. Se realizó inmunotinción para marcadores dopaminérgicos y astrogliosis. Las células tratadas con MPP+ mostraron menos mitocondrias (EM) y con pérdida parcial/total de crestas, alteraciones de membrana y forma hinchada. IGF-II mantuvo el número de mitocondrias con morfología similar al control. La disminución de OCR tras la administración de MPP+ (30%) se recuperó con IGF-II. SPHK está implicada en este mecanismo, como indica su inhibición (MPP++IGF-II+MPA-08 6 veces > LDH vs MPP++IGF-II). En animales, IGF-II recuperó el efecto de MPTP sobre los marcadores DA-NSP y sobre el rendimiento motor. IGF-II contrarresta el aumento del estrés oxidativo y la disfunción mitocondrial inducida por la neurotoxina, el deterioro conductual y la degeneración de DA-NSP. SPHK estaría involucrada en este mecanismo.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Identification and microbiological characterization of Streptococcus mutans in mother-child saliva, Riobamba, Ecuador

Introducción.  La caries dental es una de las enfermedades infecciosas más frecuentes, Streptocococcus mutans, es el principal agente etiológico asociado con el inicio de esta enfermedad. Objetivo.  Identificar y caracterizar microbiológicamente la presencia de S. mutans en muestras de saliva de madres e hijos de Centros de Desarrollo Infantil del Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal, Riobamba, Ecuador. Metodología.  Estudio de campo, con diseño no experimental, de corte transversal y enfoque cuantitativo. La muestra estuvo compuesta por 111 niños, en edades entre 1 y 4 años, seleccionados de 5 centros de desarrollo infantil del Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal de Riobamba y, 27 madres de esos niños. Se recolectaron muestras de saliva no estimulada, que fueron analizadas en el laboratorio de Microbiología de la Universidad Nacional de Chimborazo. Se realizaron cultivos en agar mitis salivarius para realizar el recuento de las colonias con características típicas de S. mutans, seguido de su identificación mediante pruebas bioquímicas convencionales. Los resultados obtenidos fueron analizados estadísticamente utilizando frecuencias absolutas y relativas. Resultados. De los 111 niños estudiados, se detectó S. mutans en la saliva de 55 (49,5%) de ellos y de éstos, 39 (79%) mostraron un riesgo cariogénico de nivel medio. Con respecto a las madres, solo 27 accedieron a colaborar. De ellas, 9 (33,3%) presentaron el microorganismo. En relación con el riesgo cariogénico se observó que en 7 (25,9%) tenía un riesgo medio, con valores entre 8 y 70 UFC. Conclusión. Los resultados obtenidos indican un incremento en el riesgo de caries dental entre la población infantil objeto de estudio, revelando que el 49,5% de los casos examinados presentaban S. mutans. Estos hallazgos pueden desempeñar un papel crucial como indicadores para orientar la implementación de estrategias en programas de prevención de salud bucal. Área de estudio general: Salud. Área de estudio específica: Microbiología. Tipo de estudio:  Artículo original.Introduction. Dental caries is one of the most frequent infectious diseases. Streptocococcus mutans is the main etiological agent associated with the onset of this disease. Objective. To identify and microbiologically characterize the presence of S. mutans in saliva samples from mothers and children of Centros de Desarrollo Infantil del Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal, Riobamba, Ecuador. Methodology. Field study, with a non-experimental design, cross-sectional and quantitative approach. The sample consisted of 111 children, aged between 1 and 4 years, selected from 5 child development centers belonging to Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal, Riobamba, Ecuador. In addition, 27 mothers of these children participated in the study. Unstimulated saliva samples were collected and processed at the laboratory of Universidad Nacional de Chimborazo. Cultures were performed on agar mitis salivarius to count the colonies that presented the typical characteristics of S. mutans, followed by their identification with conventional biochemical tests. The results obtained were statistically analyzed using absolute and relative frequencies. Results. Out of a total of 111 children screened, S. mutans was detected in 55 (49.5%) of them. Among them, 39 (79%) showed a medium cariogenic risk. Only 27 of the 55 mothers agreed to collaborate in the isolation of the bacteria, 9 (33.3%) presented the microorganism. In relation to their cariogenic risk, it was observed that 7 (25.9%) had a medium risk, with values between 8 and 70 CFU. Conclusion. The results obtained indicate an increased risk of dental caries among the child population under study, revealing that 49.5% of the cases examined presented the presence of S. mutans. These findings can play a crucial role as indicators to guide the implementation of strategies in oral health prevention programs

Identification and microbiological characterization of Streptococcus mutans in mother-child saliva, Riobamba, Ecuador

Introducción.  La caries dental es una de las enfermedades infecciosas más frecuentes, Streptocococcus mutans, es el principal agente etiológico asociado con el inicio de esta enfermedad. Objetivo.  Identificar y caracterizar microbiológicamente la presencia de S. mutans en muestras de saliva de madres e hijos de Centros de Desarrollo Infantil del Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal, Riobamba, Ecuador. Metodología.  Estudio de campo, con diseño no experimental, de corte transversal y enfoque cuantitativo. La muestra estuvo compuesta por 111 niños, en edades entre 1 y 4 años, seleccionados de 5 centros de desarrollo infantil del Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal de Riobamba y, 27 madres de esos niños. Se recolectaron muestras de saliva no estimulada, que fueron analizadas en el laboratorio de Microbiología de la Universidad Nacional de Chimborazo. Se realizaron cultivos en agar mitis salivarius para realizar el recuento de las colonias con características típicas de S. mutans, seguido de su identificación mediante pruebas bioquímicas convencionales. Los resultados obtenidos fueron analizados estadísticamente utilizando frecuencias absolutas y relativas. Resultados. De los 111 niños estudiados, se detectó S. mutans en la saliva de 55 (49,5%) de ellos y de éstos, 39 (79%) mostraron un riesgo cariogénico de nivel medio. Con respecto a las madres, solo 27 accedieron a colaborar. De ellas, 9 (33,3%) presentaron el microorganismo. En relación con el riesgo cariogénico se observó que en 7 (25,9%) tenía un riesgo medio, con valores entre 8 y 70 UFC. Conclusión. Los resultados obtenidos indican un incremento en el riesgo de caries dental entre la población infantil objeto de estudio, revelando que el 49,5% de los casos examinados presentaban S. mutans. Estos hallazgos pueden desempeñar un papel crucial como indicadores para orientar la implementación de estrategias en programas de prevención de salud bucal. Área de estudio general: Salud. Área de estudio específica: Microbiología. Tipo de estudio:  Artículo original.Introduction. Dental caries is one of the most frequent infectious diseases. Streptocococcus mutans is the main etiological agent associated with the onset of this disease. Objective. To identify and microbiologically characterize the presence of S. mutans in saliva samples from mothers and children of Centros de Desarrollo Infantil del Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal, Riobamba, Ecuador. Methodology. Field study, with a non-experimental design, cross-sectional and quantitative approach. The sample consisted of 111 children, aged between 1 and 4 years, selected from 5 child development centers belonging to Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal, Riobamba, Ecuador. In addition, 27 mothers of these children participated in the study. Unstimulated saliva samples were collected and processed at the laboratory of Universidad Nacional de Chimborazo. Cultures were performed on agar mitis salivarius to count the colonies that presented the typical characteristics of S. mutans, followed by their identification with conventional biochemical tests. The results obtained were statistically analyzed using absolute and relative frequencies. Results. Out of a total of 111 children screened, S. mutans was detected in 55 (49.5%) of them. Among them, 39 (79%) showed a medium cariogenic risk. Only 27 of the 55 mothers agreed to collaborate in the isolation of the bacteria, 9 (33.3%) presented the microorganism. In relation to their cariogenic risk, it was observed that 7 (25.9%) had a medium risk, with values between 8 and 70 CFU. Conclusion. The results obtained indicate an increased risk of dental caries among the child population under study, revealing that 49.5% of the cases examined presented the presence of S. mutans. These findings can play a crucial role as indicators to guide the implementation of strategies in oral health prevention programs

Microorganismos más frecuentes en infecciones cutáneas en el Hospital Provincial General Ambato

Skin infections caused by microorganisms affect the skin and tissues directly, where they proliferate and cause serious alterations. These infections constitute a public health problem, since many microorganisms show resistance to common and uncommon antimicrobials, which directly affects the application of the appropriate treatment to the patient. This study aimed to identify the most frequent microorganisms in skin infections, their sensitivity and resistance to antibiotics in patients with infection who attended the General Provincial Hospital "Ambato" in the period from May 2017 to June 2018. The methodology used in this research is based on a descriptive, cross-sectional study with a qualitative-quantitative approach, using the documentary technique and the reporting of results as an instrument. The information was tabulated and analyzed using the Microsoft Office 2010. It was found that in 29% of the processed samples Staphylococcus aureus was isolated as the most frequent in this type of infections, with greater sensitivity to Clindamycin, Doxacillin and Linezolid (100%) and resistance to Penicillins and Oxacillin (47.82%). It is important to mention that 47.83% of the isolated S. aureus strains phenotypically expressed the mecA gene. The most frequent clinical entity associated with this type of infection was ecthyma with 55%. In conclusion, the resistance of strains to various antibiotics was verified, presenting the most relevant as resistant methicillin, resistant vancomycin and Klebsiella pneumoniae carbapenemases.Las infecciones cutáneas producidas por microorganismos afectan directamente a la piel, partes blandas y tejidos, donde proliferan y ocasionan graves alteraciones. Estas infecciones constituyen un problema de salud pública, ya que muchos microorganismos muestran resistencia a antimicrobianos comunes y no comunes, lo cual incide directamente en la aplicación del tratamiento adecuado al paciente. El objetivo de este estudio fue identificar los microorganismos más frecuentes en infecciones cutáneas, su sensibilidad y resistencia a los antibióticos en los pacientes con infección que acudieron al Hospital Provincial General “Ambato” en el período mayo 2017 – junio 2018. La metodología empleada en esta investigación se basa en un estudio descriptivo, de corte transversal y enfoque cuali-cuantitativo, empleando la técnica documental y el reporte de resultados como instrumento. La información se tabuló y analizó mediante el paquete operativo Microsoft 2010. Se encontró que en el 29% de las muestras procesadas se aisló Staphylococcus aureus como el más frecuente en este tipo de infecciones, con mayor sensibilidad a Clindamicina, Doxacilina y Linezolid (100%) y resistencia a Penicilinas y Oxacilina (47,82%). Es importante destacar que el 47,83 % de las cepas de S. aureus aisladas expresaron fenotípicamente el gen mecA. La entidad clínica más frecuente asociada a este tipo de infección fue el ectima con un 55%. En conclusión, se comprobó la resistencia de cepas a diversos antibióticos presentando las más relevantes como meticilino resistentes, vancomicina resistentes y Klebsiella pneumoniae carbapenemasas