Engineered CHO-K1 by Gene Edition and Its Application to Recombinant Antibody Expression

抗体药物是近年来发展最快的一类生物技术药物，因其极强的靶向特异性，已成功运用于多种疾病的治疗；而目前大部分抗体药物均由中国仓鼠卵巢癌（Chinesehamsterovary，CHO）细胞进行生产。CHO有多个衍生品系，其中CHO-K1在工业中运用较广；CHO-K1主 要有两个品系CHO-K1-CCL-61和CHO-K1-CRL-9618，初始均以血清依赖的贴壁培养方式进行培养，工业生产中通常需要对其进行无血清悬浮适应，甚至对其基因组进行适当的改造；目前CHO-K1-CCL-61的运用和研究较为广泛；而关于CHO-K1-CRL-9618的运用和基础研究均较少。本研究以CHO-K1-CRL-961...Antibody drugs have been one of the most fast-growing biotech drugs in recent years. Because of its high specificity, it has been successfully used in the treatment of many diseases. At present, most of the antibody drugs are produced by the Chinese hamster ovary cancer (CHO) cells. There are a number of CHO derivative lines in which CHO-K1 is widely used in industry. CHO-K1-CCL-61 and CHO-K1-CRL-...学位：理学博士院系专业：生命科学学院_生物化学与分子生物学学号：2162010015390

Study on the Issues of Urbanization about Xiamen Rural Area

城市化、工业化是农村经济社会发展的趋势。本文从就地城市化这一角度出发，深入研究了厦门农村就地城市化战略，试图推进厦门城乡统筹发展，经济社会协调发展，全面建设小康社会，并为中国其它地区社会主义新农村建设提供有益的经验。 本文收集和借鉴了国内外城市化理论和史实，结合厦门实际进行剖析。在研究方法上，坚持理论联系实际。在研究结构上，首先概述了农村就地城市化的内涵及相关理论，其次研究了厦门农村就地城市化的进程及存在问题，最后探讨了推进厦门农村就地城市化的一般原则与对策建议。 本文认为厦门农村就地城市化是指结合城区、成片工业区、开发区建设，用城市现代文明改造农村，在避免大拆大建的前提下使城乡产业结构得...Urbanization and industrialization is a trend of the rural economic and social development . This article,from the point of in-place urbanization,studies the Xiamen-situ urbanization in rural areas,trying to push forward the coordinated development of urban and rural,economic and social in Xiamen,and to provide useful experience for other parts of China. This paper collects and learns the theory ...学位：经济学硕士院系专业：经济学院经济系_政治经济学学号：1532006115077

基因编辑技术

基因编辑是指通过核酸酶对靶基因进行定点改造,实现特定DNA的定点敲除、敲入以及突变等,最终下调或上调基因的表达,以使细胞获得新表型的一种新型技术。基因编辑技术已被广泛运用于基因结构与功能的研究和多种细胞的基因工程改造,为疾病模型的建立、动植物新品种的培育及基因治疗等的研究提供新的手段。基因编辑技术主要包括锌指核酸酶技术(ZFN)、转录激活子样效应因子技术(TALEN)和成簇的规律间隔的短回文重复序列/CRISPR相关蛋白(CRISPR/Cas)系统等。本文将对3种基因编辑技术的原理、运用及其最新进展进行综述,以期为相关技术及其运用的研究提供参考。国家自然科学基金项目(No.30471975,No.31600748);;福建省自然科学基金(No.2017J01066)资助~

CHO细胞工程化改造的研究进展

该文综述了CHO细胞工程化改造相关研究的最新进展,对CHO细胞在调节代谢、抗凋亡和糖基化等方面的工程改造及应用进行了归纳和总结,提出了CHO表达系统应用中可能出现的问题,并对CHO细胞表达系统应用前景进行了展望,以期为后续相关研究提供思路

中国金融市场化与开放进程对银行效率的影响研究——基于DEA的Malmquist指数方法

本文一方面结合我国金融市场化与开放进程的沿革路径,构建中国金融自由化指数;另一方面采用非参数的数据包络分析方法计算Malmquist指数,以此来衡量银行效率。在此基础上,我们对中国金融自由化进程与银行效率的内在关联展开计量分析。研究发现,伴随着中国金融市场化与开放政策的渐近推进和逐步深化,中国银行业的整体效率有了明显的改善。这其中受益良多的是股份制商业银行,而国有商业银行的效率虽有所改善,但成效并不明显

五轴石材切板机圆孔切割误差补偿与分析

针对五轴石材切板机加工圆孔时的误差影响问题,对五轴石材切板机轴头的各偏置参数进行了研究,对圆孔加工的理论误差进行了分析,并与实际加工误差限制相结合,提出其在工业加工的可行性,在一定范围内控制理论误差以满足工业需求。2014年福建省发改委产业技术联合创新专项(闽发改高技[514]号

Establishment of MDCK cell lines which stably express visualable human neonatal Fc receptor

[目的]建立稳定表达融合EGFP的人新生儿Fc受体（h FcRn）的MDCK细胞株。[方法]构建重组慢病毒质粒p EGFP-h FcRn,采用四质粒包装系统共转染HEK 293T细胞生产重组慢病毒,感染MDCK细胞后对EGFP阳性细胞进行流式单细胞分选;通过Western Blot及EGFP-β2m荧光共定位验证h FcRn的完整性,并用流式细胞仪检测h FcRn与人Ig G的结合活性。[结果]测序结果表明成功构建p EGFP-FcRn慢病毒表达载体;感染后EGFP阳性MDCK细胞比例约为26.5%,流式单细胞分选后得到纯阳性细胞;荧光共定位及Western Blot均检测到h FcRn的完整表达;流式分析表明细胞株上的h FcRn与Ig G存在p H依赖性结合。[结论]成功获得稳定表达具有生物活性的可视化h FcRn的MDCK细胞株。[ Objective] To establish MDCK cell line stably expressing EGFP- human neonatal Fc receptor（hFcRn） fusion protein. [ Methods ] The lentiviral expression vector for EGFP - hFcRn fusion protein was constructed. Generating by co - transfection of four -plasmids into HEK 293T cells ,the lentivirus particles were used to infect MDCK cell line. EGFP positive single cell was obtained by FACS, and then FcRn expression was identified by fluorescence co -location with EGFP - β2m and confirmed by Western Blot. Flow cytometry was used to detect binding activity of hFcRn and human IgG. [ Results ] DNA se- quencing demonstrated that the lentivirus vector pEGFP - FcRn was constructed successfully. The percentage of EGFP - posi- tive ceils was about 26.5% after infection. Expression of the complete protein was detected through fluorescence co - location and Western Blot, respectively. Flow cytometry analysis showed that the cell lines could pH - dependently capture human IgG. [ Conclusion] MDCK cell line stably expressing functional visualable hFcRn was established.基金项目：国家自然科学基金项目（“结构生物学指导的HBV治疗性抗体人源化及其关键技术研究”,No.31600748;“抗呼吸道合胞病毒高中和活性抗体的保护机制研究”,No.81401668;“基于广谱中和单抗的通用型流感疫苗设计及其结构基础研究”,No.31670934

去岩藻糖GPC3抗体增强NK92细胞对肝癌细胞的杀伤效果

目的去岩藻糖基化改造抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3,GPC3)抗体GC33,并研究该抗体依赖的NK92细胞对肝癌细胞的杀伤效果。方法以岩藻糖基转移酶8(fucosyltransferase 8,Fut8)缺陷的中国仓鼠卵巢癌细胞(Chinese hamster ovary,CHO)表达去岩藻糖基化的GC33抗体,以野生型CHO细胞表达的GC33作为对照,通过梯度酶联免疫反应检测其与GPC3及FC gama receptorⅢa(FCGRⅢa)的结合活性;以NK92细胞作为效应细胞,检测去岩藻糖基化GC33抗体依赖的NK92细胞对GPC3阳性的肝癌细胞Hep G2和Huh 7细胞毒作用。结果去岩藻糖基化改造的GC33抗体保留了与野生型GC33抗体对GPC3相当的结合活性,其与FCGRⅢa的结合能力增强了7倍,增强天然杀伤细胞(natural killer cells,NK)对Hep G2和Huh 7细胞的细胞毒作用(antibody dependent cellular cytotoxicity,ADCC)。结论去岩藻糖基化增强了GC33抗体依赖的NK92细胞对肝癌细胞杀伤效果

锯片切割圆弧的刀具补偿算法

在石材加工中,锯片是最常用的切割工具。由于锯片切削点(刀位轨迹)相对于数控系统的控制点(数控轨迹)存在偏置,为了实现机床的正确加工,必须通过补偿将指定的刀位轨迹转换为相应的数控轨迹,进而完成数控加工编程。针对加工图元为直线和圆弧时的多种工况进行详尽研究,总结出相应的偏置补偿算法,并实际加工验证。加工结果表明,采用该算法编程加工的工件满足预期的精度要求

The Diagnosis of the Ancient Trees of Ficus microcarpa

通过对鼓浪屿古榕树的普查,选择其健康诊断的生长指标和生理指标,包括当年生枝叶、果实生长状况、叶绿素荧光等,对不同生长势的古榕树进行分析,旨在探讨基于生长指标与生理指标相结合的古榕树的健康诊断方法,为古榕树的养护与复壮提供依据。结果表明,生长指标与生理指标能较一致地指示古榕树的健康状况。因此,可通过生长指标与生理指标相结合的方法诊断古榕树的健康状况。Based on the general investigation and analysis of the ancient trees of Ficus microcarpa at Gulangyu by use of the growth indices and the physiological indices,such as the growth status of annual branches,leaves and fruits and the chlorophyll fluorescence,the diagnosis of the ancient trees of Ficus microcarpa with different growth vigor was discussed to provide evidence for their maintenance and rejuvenation.The results indicated that the growth indices and the physiological indices could consistently instruct the health status of the ancient trees of Ficus microcarpa.Thus the diagnosis by the combination of the growth indices and the physiological indices could be applied to the ancient trees of Ficus microcarpa.鼓浪屿万石山国家级风景名胜区科技项目资助(GW2008