Ghrelin, Sleep Reduction and Evening Preference: Relationships to CLOCK 3111 T/C SNP and Weight Loss

Circadian Locomotor Output Cycles Kaput (CLOCK), an essential element of the positive regulatory arm in the human biological clock, is involved in metabolic regulation. The aim was to investigate the behavioral (sleep duration, eating patterns and chronobiological characteristics) and hormonal (plasma ghrelin and leptin concentrations) factors which could explain the previously reported association between the CLOCK 3111T/C SNP and weight loss.We recruited 1495 overweight/obese subjects (BMI: 25-40 kg/m(2)) of 20-65 y. who attended outpatient obesity clinics in Murcia, in southeastern Spain. We detected an association between the CLOCK 3111T/C SNP and weight loss, which was particularly evident after 12-14 weeks of treatment (P = 0.038). Specifically, carriers of the minor C allele were more resistant to weight loss than TT individuals (Mean±SEM) (8.71±0.59 kg vs 10.4±0.57 kg) C and TT respectively. In addition, our data show that minor C allele carriers had: 1. shorter sleep duration Mean ± SEM (7.0±0.05 vs 7.3±0.05) C and TT respectively (P = 0.039), 2. higher plasma ghrelin concentrations Mean ± SEM (pg/ml) (1108±49 vs 976±47)(P = 0.034); 3. delayed breakfast time; 4. evening preference and 5. less compliance with a Mediterranean Diet pattern, as compared with TT homozygotes.Sleep reduction, changes in ghrelin values, alterations of eating behaviors and evening preference that characterized CLOCK 3111C carriers could be affecting weight loss. Our results support the hypothesis that the influence of the CLOCK gene may extend to a broad range of variables linked with human behaviors

Desarrollo y validación "in vivo" de sistemas de expresión lentiviral regulados por inflamación

Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología MolecularLos procesos inflamatorios están presentes en diferentes patologías incluyendo enfermedades inflamatorias crónicas, neuroinflamación y cáncer. Nuestra hipótesis de partida consiste en que un vector lentiviral ideal para el tratamiento con terapia génica puede aprovecharse del nivel de inflamación, específico de cada patología y del curso de la enfermedad, para regular los niveles de expresión del transgén, de forma que se produzcan diferentes niveles de la molécula terapéutica en respuesta al estado inflamatorio local y, por lo tanto, se puedan evitar los efectos secundarios asociados. Nuestro abordaje ha consistido en el desarrollo de vectores virales que contienen promotores inducibles por inflamación para controlar la expresión del transgén. El laboratorio del Dr. Antonio Rodríguez ha desarrollado un nuevo sistema lentiviral inducible por inflamación basado en el promotor de la Selectina-E humana. Además hemos reproducido otros dos sistemas regulados por inflamación previamente descritos: el promotor híbrido formado por el promotor de la IL-6 humana unido a la región potenciadora del promotor humano de la IL-1 y el promotor quimera basado en seis sitios de unión para el factor de transcripción NF-κB en tándem. Hemos validado estos sistemas lentivirales inducibles por inflamación in vitro demostrando su inducibilidad en diferentes tipos celulares (células del sistema inmune, endoteliales, de la glía y tumorales) en respuesta a estímulos inflamatorios como TNF-α, IL-1 y LPS. Se han empleado vectores lentivirales ya que representan la mejor estrategia para obtener una expresión del transgén estable y duradera in vivo. Este estudio demuestra que la combinación de vectores lentivirales con promotores inducibles por inflamación permite la monitorización de procesos inflamatorios como los que tienen lugar en los modelos de inflamación aguda o durante el desarrollo de tumores sólidos. Además nuestros resultados indican que la expresión de citoquinas anti o pro-inflamatorias (IL-10 e IL-12 murinas) bajo el control de promotores regulados por inflamación empleando vectores lentivirales, constituye una estrategia eficiente para conseguir la expresión de la molécula regulada por la propia enfermedad, produciendo un efecto terapéutico en el modelo correspondiente y reduciendo los potenciales efectos secundarios. Estos promotores inducibles pueden representar excelentes sistemas para la expresión regulada por inflamación de diferentes agentes terapéuticos en futuras aplicaciones clínicas.Inflammatory processes are present in different pathologies including chronic inflammatory disorders, neuroinflammatory conditions and cancer. We hypothesized that an ideal lentiviral expression system for gene therapy treatments of such diseases could make use of the pathological inflammation grade, specific to each pathological condition and to the course of the disease, to regulate the transgene expression levels; ideally the expression levels of the therapeutic agent would parallel the local inflammatory status and therefore might avoid undesirable side effects associated with a constant transgene expression. These inflammation-regulated systems might also circumvent drug efficacy attenuation due to a continuous exposure to the therapeutic agent. Our approach has consisted on the generation of lentiviral vectors (LVs) that contain inflammation-regulated promoters to drive transgene expression. Antonio Rodríguez’s research group has developed a novel LV system based on the human E-selectin promoter. In addition we have also generated other two inflammation-regulated LVs based on previous reports: a hybrid promoter based on the human IL-6 promoter plus an enhancer region of the human IL-1 promoter and a chimeric promoter based on six NF-κB transcription factor binding sites in tandem. We have confirmed their in vitro inducibilities in different cell types (immune, endothelial, glia and tumor cells) in response to proinflammatory stimuli such as TNF-α, IL-1 or LPS. LVs represent the chosen gene therapy tool to obtain stable and long-lived transgene expression in vivo. This study shows that the combination of LVs with inflammation inducible promoters allows to monitor inflammatory processes such as those taking place in acute inflammation and solid tumor models. Moreover our results indicate that the expression of the proper cytokine (either murine IL-10 or IL-12) under these inflammation-regulated LV systems constitute an efficient strategy to provide diseaseregulated cytokine expression with therapeutic effects in the mouse model assayed. These systems also reduce side effects as cytokine expression is confined to inflammatory sites. These inducible promoters might represent excellent systems for the inflammation regulated expression of different agents for future clinical applications

Análisis del proceso de inyección de urea a partir de técnicas ópticas en condiciones de escape de un motor

[ES] A raíz de los problemas de contaminación que existen hoy en día, las normativas de emisión de contaminantes cada vez se hacen más restrictivas, lo que conlleva a que se desarrollen nuevos métodos para reducir esas emisiones como, por ejemplo, los sistemas de reducción catalítica selectiva (SCR). Este sistema se centra en reducir la emisión de NOx mediante reacciones químicas con una solución de urea y, junto a otros sistemas complementarios, permite eliminar la mayor parte de los contaminantes.Este trabajo se centra en el estudio mediante técnicas ópticas del proceso de inyección de urea a los gases de escape de un motor generados en una instalación que permite simular distintos puntos de funcionamiento.Garaulet Belda, J. (2019). Análisis del proceso de inyección de urea a partir de técnicas ópticas en condiciones de escape de un motor. Universitat Politècnica de València. http://hdl.handle.net/10251/125619TFG

Estudio de la regulación y función del gen homeótico Ultrabithorax de Drosophila melanogaster

Tesis doctoral inédita. Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 10-01-201

Estabelecimento do bivalve exótico Ruditapes philippinarum (Adams & Reeve, 1850) no estuário do Tejo: caracterização da população actual e análise comparativa com a congénere nativa Ruditapes decussatus (Linnaeus, 1758) e macrofauna bentónica acompanhante

Tese de mestrado. Biologia (Ecologia Marinha). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011A introdução de espécies exóticas é uma das maiores ameaças para oceanos de tudo o Mundo. A amêijoa-japonesa, Ruditapes philippinarum, proveniente do Pacífico oriental, tem exibido uma rápida dispersão espacial, estando actualmente presente na Europa. Embora se tenham constatado importantes alterações nas comunidades biológicas induzidas por este invasor nos ecossistemas onde se insere, não existem um conhecimento aprofundado para Portugal. O presente estudo teve como principais objectivos conhecer a distribuição e abundância de R. philippinarum no estuário do Tejo, estudar o seu crescimento e as características da população neste sistema e inferir os possíveis efeitos sobre as espécies de bivalves acompanhantes, especialmente a congénere nativa Ruditapes decussatus. Um estudo mais pormenorizado na Baía do Seixal possibilitou analisar potenciais efeitos desta espécie sobre a comunidade de macroinvertebrados bentónicos. Para cumprir os objectivos enunciados, fizeram-se arrastos na totalidade do estuário numa única época e dragagens sazonais na Baía do Seixal durante um ano completo. No estudo de toda a extensão do estuário do Tejo, a amêijoa-japonesa apresentou-se bem distribuída no estuário, ocupando o mesmo habitat que a amêijoa-boa, zonas vasosas e relativamente profundas, de salinidade intermédia e temperaturas relativamente altas. Na Baía do Seixal, as espécies macrobentónicas estruturaram-se sobre tudo em função do tipo de sedimento e da exposição à maré. R. philippinarum mostrou ser a espécie dominante no subtidal. A condição dos indivíduos de amêijoa-japonesa não diferiu entre as diferentes zonas do estuário. No que respeita ao crescimento, as amêijoas apresentaram parâmetros de acordo com os indicados na bibliografia, sendo a técnica da película de acetato o método mais adequado de estimação da idade. Das variações sazonais na sua população, intuem-se duas épocas de reprodução anuais. Recomenda-se continuar este tipo de investigação para controlar a expansão da espécie e predizer os seus impactes no sistema. Este foi o primeiro trabalho realizado sobre esta espécie em Portugal, a diferentes escalas espaciais.The introduction of exotic species is one of the major of the biggest threats to the world’s oceans and the second cause of global biodiversity loss after direct habitat destruction. The Manila clam, Ruditapes philippinarum, whose native range is in the eastern Pacific, has dispersed worldwide, including Europe. Although changes caused by this invader have been documented in several ecosystems in which it was introduced, there is no knowledge concerning the colonization of Portuguese systems. The present study had as main goals to understand the distribution and abundance of R. philippinarum in Tagus estuary, to assess its growth and population dynamics and to infer possible effects over the benthic invertebrate community, with emphasis on the native species Ruditapes decussatus. A more detailed study conducted on Bay of Seixal provided data to analyze potential effects of this species over the benthic invertebrate community. A commercial dredge was used to sample bivalve communities along the Tagus estuary during summer, while grab samples were collected seasonally in Bay of Seixal. The results obtained from samples collected along the Tagus estuary showed that the Manila clam is well distributed, occupying the same habitat types as the native species, R. decussatus, mainly deeper and muddy locations, with relatively high temperature and salinity. Specimens’ condition was not different in the studied areas. Growth parameters for the Tagus estuary population were similar to what was found in previous studies and the acetate peel technique was the most adequate method for age estimation. Sediment grain size and exposure to tidal effects were the most important factors influencing macrobenthic species distribution in Bay of Seixal and R. philippinarum was the dominant species in the subtidal area. Seasonal variations on abundance and size indicate two reproduction periods. This type of studies is very important to support population management and predict future impacts on the affected aquatic systems. This was the first study on this species in Portugal considering distinct spatial scales

Terapia de Comportamiento y Dieta Mediterránea en el Tratamiento de la Obesidad. El Método Garaulet.

La terapia conductual (TC) se basa en los principios clásicos de “condicionamiento”, que indican que el consumo se asocia frecuentemente con sucesos externos que están estrechamente vinculados a la ingestión. El uso de técnicas de comportamiento es la intención de ayudar al paciente a identificar las señales que desencadenan un comportamiento inapropiado, tanto en relación con la alimentación y ejercicio físico. Diferentes dietas de estilo mediterráneo, se ha demostrado como una estrategia segura para el tratamiento de la obesidad, el síndrome metabólico, y para ayudar a reducir el riesgo cardiovascular asociada. De hecho, una mayor adherencia a la dieta mediterránea se ha asociado con un menor prevalencia de obesidad abdominal, y recientemente se ha propuesto que la dieta mediterránea es particularmente eficaz para el control glucémico. La aplicación de “dieta mediterránea” las recomendaciones, un método de terapia del comportamiento y la educación nutricional (llamado el “Método Garaulet”) fue desarrollado en 1994, su eficacia se evaluó en primer lugar en 1999 en una muestra de 100 individuos, y de nuevo en 2009 en una proporción mucho mayor muestra de 1.400 sujetos. Los resultados muy similares de estos dos estudios, realizados con una diferencia de diez años, demuestran que la terapia de comportamiento asociados con una educación nutricional, la reducción de la ingesta calórica y una distribución equilibrada de nutrientes sobre la base de la “dieta mediterránea” es útil para la reducción de peso y de la mejora de una serie de alteraciones asociadas a la obesidad. Sin embargo, se necesitan más investigaciones para corroborar estas afirmaciones. En este sentido, durante los últimos dos años hemos iniciado un nuevo proyecto de investigación con el fin de aumentar la eficacia del tratamiento y en marcha y decidir si la incorporación de nuevos nutrigenética y / o herramientas de cronobiología puede ser útil para el cuidado de la salud y la nutrición personalizada basado en una combinación de genotipos y la caracterización psicológica-conductual. En un futuro próximo, nuestro principal objetivo es aplicar todo este nuevo conocimiento obtenido de la investigación en la práctica clínica. Sin embargo, debemos tener precaución al introducir todas estas herramientas de diagnóstico para no distorsionar el concepto del Método Garaulet. En este sentido, primero debemos diseñar un protocolo completo y útil capaz de ser aplicable en los centros de nutrición. Para ello, y antes de introducir todas estas ideas, necesitamos a) continuar en el estudio de factores nutrigenéticos para poder seleccionar de un gran rango de polimorfismos estudiados aquellos que pudieran ser útiles para predecir el éxito del tratamiento; b) diseñar nuevas herramientas en la caracterización psico-conductual de los pacientes; c) seleccionar las mejores herramientas para la caracterización cronobiológica de los sujetos en la práctica clínica. Todo ello con un propósito final de conseguir un tratamiento personalizado basado en la combinación del genotipo, cronotipo y la caracterización psico-conductual sin olvidar los principios de la Dieta Mediterránea. Una vez diseñado un protocolo final nuestra intención es expandir este programa actualizado a otras regiones de España y si es posible a otros países europeos

Age and growth of a highly successful invasive species: the Manila clam Ruditapes philippinarum (Adams & Reeve, 1850) in the Tagus Estuary (Portugal)

The Manila clam Ruditapes philippinarum (Adams & Reeve, 1850) was introduced in several regions worldwide where it is permanently established. In Portuguese waters, the colonisation of the Tagus Estuary by this invasive species coincided with a significant decrease in abundance of the native Ruditapes decussatus (Linnaeus, 1758). This study aimed to estimate the age and growth of the Manila clam, to compare the growth performance between R. philippinarum and R. decussatus in several locations worldwide, and to ascertain whether the Manila clam's growth patterns contributed to the extensive distribution of this invasive bivalve in the Tagus Estuary. The growth of R. philippinarum in the Tagus Estuary was described through the von Bertalanffy equation SLt=65.2[1-e(-0.34(t+0.93))],corresponding to a phi-prime index (phi') of 3.160 and an overall growth performance of 4.974. This growth performance is the second highest recorded for R. philippinarum worldwide and was much higher than that of R. decussatus from Portugal. This study confirmed that the Tagus Estuary presents near-ideal environmental conditions for growth of the Manila clam. R. philippinarum displayed clearly invasive behaviour, spreading widely and growing faster than the native R. decussatus, which certainly contributed to the decline of its populations in the Tagus Estuary.Fundacao para a Ciencia e Tecnologia (FCT Portugal) [SFRH/BPD/26348/2006]; project "Ameijoajaponesa - estado actual da populacao do estuario do Tejo, impactos e gestao da apanha"; Fisheries Operational Programme (PROMAR); European Fisheries Fund (EFF); strategic plan of MARE - Marine and Environmental Sciences Centre [UID/MAR/04292/2013]; FCT [UID/Multi/04326/2013

IL-10 released by a new inflammation-regulated lentiviral system efficiently attenuates zymosan-induced arthritis

We thank Dr Filip Lim for critical reading of the manuscript, and Dr S. Bartlett for English editing and helpful discussions. We also thank Drs. David Sancho and M. A. del Pozo for providing us with DCs and immortalized MEFs, respectively. AR is supported by Plan Nacional de Investigación Científica, Desarrollo e Innovación Tecnológica (I+D+I) and Instituto de Salud Carlos III (FIS; PI060122), the Spanish Ministry of Science and Innovation (MICINN;SAF2009-10691) and the Comunidad Autónoma de Madrid (S2006/BIO-0236 and S2010/BMD-2312). JMR is supported by MICINN (RECAVA RD06/0014/005) and by from Fundació La Marató de TV3 (Grant 080731