O controle da qualidade na realização da auditoria interna da qualidade por uma empresa prestadora de serviços contábeis

TCC (Graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro Socioeconômico. Curso de Ciências ContábeisNos dias atuais, com a concorrência cada vez maior, algumas empresas prestadoras de serviços contábeis buscam realizar seus serviços com qualidade, principalmente quando se trata dos clientes externos. Esta pesquisa tem como objetivo geral descrever o processo de controle da qualidade da auditoria interna da qualidade realizada por uma empresa prestadora de serviços contábeis. A empresa em que foi realizada a pesquisa, um escritório de contabilidade, tem como sua principal atividade prestar serviços de contabilidade, envolvendo todos os processos e trabalhos que dizem respeito ao escritório da qualidade. Inicialmente, apresentou-se a contextualização do tema e problema, utilizando-se de uma pesquisa exploratória e qualitativa. Posteriormente, levantou-se as abordagens sobre auditoria contábil, auditor interno e externo contábil, normas do auditor independente, definições de controle interno da qualidade, conceito de qualidade, auditoria da qualidade, auditor interno e externo da qualidade e normas do controle da qualidade. Em seguida, partiu-se para o estudo de caso na Empresa Beta, iniciando pelas informações da empresa, descrição e análise dos dados. Conclui-se que a empresa não está integralmente de acordo com as normas de auditoria que devem ser seguidas para que o trabalho do auditor seja realizado com qualidade

is the European Union doing its best to prevent them?

Diversos instrumentos de direito internacional do mar impõe aos Estados Membros da União Europeia a obrigação de assegurar serviços de busca e salvamento eficientes. Por é m, desde 2013, 19 956 pessoas morreram ou desapareceram ao tentar atravessar o Mar Mediterrâneo. Isto é o resultado de uma infeliz combinação de políticas de combate ao tráfico de migrantes, que poderão estar inadvertidamente a tornar a travessia do Mediterrâneo ainda mais perigosa; de práticas que privilegiam o controlo fronteiriço em detrimento de operações de busca e salvamento; e de leis que permitem que os Estados punam organizaçõ es n ão governamentais que, de forma voluntária, tentam preencher a existen t e lacuna operaci onal de salvamento Devido à insufici ência de vias que permitam aos migrantes chegar à Europa de modo regular, estes vão continuar a tentar fazê lo irregularmente e continuarão a perder se vidas. Por isso, é urgente e necess ário fazer mais para o s resgata r. Atendendo ao regime jurídico internacional de busca e salvamento marítimo e ao princípio da solidariedade e da partilha equitativa de responsabilidades, a União Europeia deve promover um acordo regional atrav é s do qual a responsabilidade pelas operações de busca e salvamento no Mediterrâneo possa ser redistribuída entre os Estados Membros Estas deverão distinguir se das competências de controlo fronteiriço e das de combate ao tráfico de migrantes, tanto na lei, como na prática, atendendo à natureza dive rsa dos objetivos em causa Mormente, o envolvimento de organizaçõ es n ão governamentais nestas operações deve ser valorizado e não criminalizado, pelo que as leis europeias em mat éria de aux í lio à entrada e ao trânsito irregulares devem ser revistas. Final mente, devem ser imediatamente abandonadas quaisquer políticas que visem impedir entradas irregulares e que sejam incompatíveis com o direito internacional dos direitos humanos.Several international law of the sea instruments impose on the European Union and on its Member State s the obligation to ensure efficient maritime search and rescue services. In spite of this, since 2013, a total of 19 956 people attempting to cross the Mediterranean Sea have either died or gone missing. This is the result of an unfortunate combination of European laws, policies and practices. Policies aimed at combating migrant smuggling which may inadvertently be making the Mediterranean Sea even deadlier. Practices which prioritise border control operations over maritime search and rescue. And laws that allow for States to prosecute non governmental organisations which volunteer to fill in the resultant operational gap. Due to insufficient legal pathways for migration, migrants will keep on trying to reach Europe irregularly and thus lives will continue to be lost at sea. For this reason, it remains urgent and necessary to do more to rescue them. In line with the international legal framework of maritime search and rescue and with the principle of solidarity and fair sharing of responsibilities, the Europ ean Union must promote the development of a regional agreement through which responsibility for search and rescue in the Mediterranean can be shared. These services need to be separate from border control and from anti migrant ’s smuggling operations, both in law and in practice, due to the conflicting nature of their respective goals. Additionally, the involvement of non governmental organisations in these operations must be valued, not criminalised. As such, the European Union's laws on facilitation of una uthorised entry, transit and residence must be revised. Finally, policies aimed at directly or indirectly preventing irregular arrivals which do not comply with international human rights law must be immediately abandoned

Optimization of in vivo electroporation and comparison to microinjection as delivery methods for transgenesis in zebrafish (Danio rerio). Generation of a new neuronal zebrafish line

Transgenic zebrafish are important models for biomedical research. There are several technologies available for the generation of transgenics and for genome editing. However, methods for the delivery of exogenous components remain limited. In Zebrafish, the most used method is microinjection, which requires sophisticated technical skills and presents a low integration rate of large constructs. Alternatively, a few studies reported the use of electroporation as a delivery method for the generation of transgenic zebrafish; however, these protocols contain some limitations that reduce their widespread applicability. To overcome this, we based on the most recent published work reporting electroporation in zebrafish embryos, to implement optimizations in order to increase the number of embryos electroporated, the efficiency of plasmid DNA delivery and its integration in the germline. Electroporation rounds of 30 one-cell stage zebrafish embryos with 300 ng/uL of plasmid DNA in PBS using 35 V poring pulse and 5 V transfer pulse yielded the highest survival and efficiency. Compared to microinjection, the optimized electroporation protocol achieved similar fluorescence intensity and expression pattern, opening the way to becoming a practical and efficient alternative to microinjection. In parallel, a new calcium indicator pan-neuronal transgenic zebrafish line, elalv3:GCaMP6fEF05 was generated, through microinjection into one-cell stage zebrafish embryos, followed by 3 rounds of fish crosses, screens, selection and raising. The improvement of delivery methods, such as electroporation, will expand the generation of new zebrafish lines for the study of developmental and molecular biology that ultimately allows the exploration of new human therapeutic avenues.Os peixes-zebra transgénicos são modelos importantes para a pesquisa biomédica. Existem várias tecnologias disponíveis para a geração de transgénicos e edição do genoma. No entanto, os métodos para a entrega de componentes exógenos permanecem limitados. No peixe-zebra, o método mais utilizado é a microinjeção, que requer habilidades técnicas sofisticadas e apresenta taxa de integração de grandes construções reduzida. Alternativamente, alguns estudos relataram o uso de eletroporação como um método de entrega para a geração de peixes-zebra transgénicos; no entanto, esses protocolos contêm algumas limitações que reduzem sua aplicabilidade generalizada. Como tal, tendo por base um trabalho publicado recentemente relatando a eletroporação de embriões de peixe-zebra, implementaram-se otimizações a fim de aumentar o número de embriões eletroporados, a eficiência da entrega de DNA plasmídico e a sua integração na linha germinativa. Ciclos de eletroporação de 30 embriões de peixe-zebra no estado de uma célula com 300 ng / uL de DNA plasmídico em PBS usando um pulso de formação de poros de 35 V e pulso de transferência de 5 V obtiveram a maior taxa de sobrevivência e eficiência. Comparado à microinjeção, o protocolo de eletroporação otimizado alcançou uma intensidade de fluorescência e padrão de expressão semelhantes, abrindo caminho para se tornar uma alternativa prática e eficiente à microinjeção. Em paralelo, uma nova linha de peixe-zebra transgénica pan-neuronal, elalv3: GCaMP6fEF05 foi gerada, através da microinjeção em embriões no estado de uma célula, seguida por 3 rondas de cruzamentos de peixes, screens, seleção e criação. A otimização dos métodos de entrega, como a eletroporação, permite expandir a geração de novas linhas de peixe-zebra para o estudo da biologia molecular e do desenvolvimento que, em última análise, permite a exploração de novos caminhos terapêuticos para humanos

Mechanical synchronization of Xenopus tail regeneration

Tese de Mestrado, Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento, 2021, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasEpimorphic regeneration is a complex and synchronous process that involves three major phenotypical phases: wound healing, regeneration bud formation and a consequent regenerative outgrowth. While regeneration occurs within a multifactorial microenvironment, where biochemical and mechanical cues are in place, most studies focus in the biochemical signalling underlying the transition across these phases. Thus, despite the wide biological functions that mechanical signals, their role in regeneration remains largely unclear. Therefore, to assess the role of relevant mechanical signals in regeneration, we use the tadpole tail of Xenopus laevis as a regeneration model. Using a specific toxin, we demonstrate that mechanosensitive stretch-activated channels are required for proper tail regeneration. In particular, we identify that these channels are essential for the wound healing and bud formation phases. Moreover, the expression of key molecular regulators of regeneration was downregulated by the same treatment. Interestingly, this downregulated expression profile is comparable to the observed in the non-regenerative refractory period. Collectively, our data unveils the role of mechanically activated channels in regeneration and opens the discussion on the potential mechanism by which mechano-signalling may mediate transcriptional responses that favour regeneration.A regeneração pode ser definida como a capacidade de recrescimento de um órgão ou membro após uma lesão ou amputação; este recrescimento devolve a forma, padrão e função da parte do corpo perdida. Esta área de estudo para além de poder ser investigada a diversos níveis de organização biológica varia também a nível taxonómico, suscitando ao longo de décadas o interesse de diversos investigadores. Nos vertebrados, podemos encontrar a regeneração epimórfica, um processo complexo e síncrono desencadeado por um dano de grande escala. Pode dizer-se que se desenvolve em três fases fenotípicas principais e distintas: a cicatrização do local da ferida, a formação do botão de regeneração, também designado por blastema, e o consequente crescimento regenerativo do membro perdido. As alterações morfológicas observadas no decorrer das três fases são o resultado de consecutivos rearranjos celulares tanto em posição, como em número e forma, entre outros. O comportamento das células é consequência dos sinais que esta recebe do seu microambiente, nomeadamente das interações com outras células circundantes e/ou com o ambiente onde se encontra. Ao longo de décadas, diversos estudos têm vindo a ser realizados com o objetivo de caracterizar os intervenientes moleculares nos mecanismos de comunicação e sinalização celular no desenrolar do processo regenerativo e particularmente nas transições morfologicas a ele inerentes. Destes estudos surgiram fatores como o Transforming growth factor beta (TGF-β), Sonic hedghog (Shh), Bone morphogenetic proteins (BMP), Fibroblast growth factor (FGF), entre outros, que se creem ser potenciais intervenientes no processo. Contudo, a verdade é que, a regeneração ocorre dentro de um microambiente multifatorial, isto é, sinais bioquímicos e mecânicos estão presentes, porém a investigação científica concentra-se maioritariamente no estudo da sinalização bioquímica subjacente às transições entre as fases do processo regenerativo. Apesar de amplas funções biológicas serem atribuídas aos sinais mecânicos, o seu papel na regeneração permanece ainda pouco evidente. Tendo isto em conta, o nosso estudo visa revelar um pouco do seu papel neste processo. Um excelente modelo animal para avaliar o papel da sinalização mecânica na regeneração é a cauda do girino de Xenopus laevis. De facto, neste modelo animal a regeneração total da cauda é observável num curto período de tempo - apenas sete dias após a amputação - e implica algum nível de complexidade biológica visto que tem de ocorrer a regeneração de todos os tecidos axiais do membro - como o tecido muscular, nervoso e da epiderme. Para além disso, o girino de Xenopus laevis é dotado de um período no seu desenvolvimento designado de refratário, durante o qual ocorre a cicatrização do local da lesão, mas não a regeneração do membro perdido. O processo regenerativo pode ser avaliado usando dois métodos: o índice de regeneração, que avalia a morfologia da cauda regenerada; e, como medida complementar, a área da cauda pós amputação. Com o presente estudo, corroborámos que a capacidade regenerativa depende do estádio de desenvolvimento do girino. Através da comparação entre o estádio 41 - regenerativo - e o estádio 47 - não regenerativo - contatámos que efetivamente, existe uma diminuição da capacidade regenerativa no período refratário. A necessidade temporal dos sinais mecânicos foi avaliada através da incubação dos girinos, nos períodos de tempo desejados - definidos pelos eventos morfológicos da regeneração - num meio com uma toxina específica - GsMTx4 - conhecida por causar a inibição dos canais sensíveis a sinais mecânicos, ativados pela extensão elástica da membrana celular - Stretch activated channels. Conseguimos demonstrar que estes são necessários para uma regeneração eficiente e bem-sucedida da cauda. Os alvos atualmente conhecidos deste péptido são os canais: Piezo1 e Transient receptor potential channel 1 e Transient receptor potential channel 6. Neste ensaio identificamos ainda que esses canais são fundamentais nas primeiras vinte e quatro horas da regeneração, mais precisamente, as fases de cicatrização da ferida e formação do blastema, conhecidas por serem cruciais para alcançar um processo bem-sucedido em forma e função. Um dos alvos de GsMTx4 reportado é o canal Piezo1. Para testar o seu eventual envolvimento no decorrer do processo de regeneração, diminuímos a sua expressão e avaliámos o fenótipo observado. Com a utilização de um morpholino específico para o canal em estudo verificamos que existe uma tendência em que os girinos submetidos ao tratamento apresentam um fenótipo caracterizado como “defeituoso”, ou seja, é prevalente o fenótipo de ausência de regeneração ou regeneração muito defeituosa. Levando em consideração estes resultados podemos especular que o canal Piezo1 é um potencial candidato a gene regulador da capacidade regenerativa. De modo a compreender melhor como o bloqueio por inibição dos canais mecânicos afeta o comportamento celular ao nível da expressão génica avaliámos por Polymerase chain reaction (PCR) a expressão dos principais contribuintes moleculares da regeneração. Com base em literatura da área foram selecionados marcadores para cada fase da regeneração - cicatrização do local da ferida, formação do botão de regeneração e crescimento do membro - respetivamente, TGF-β, Msh Homeobox 1 (Msx1) e Shh. Com a nossa análise da expressão temporal entre controlo e tratamento fomos capazes de corroborar a expressão destes marcadores como específicos para cada fase, e, para além disso, constatar que os seus níveis de transcrição foram reduzidos pelo tratamento com GsMTx4. Curiosamente, este perfil de expressão é comparável ao observado no período refratário, isto é, não regenerativo. Tendo em conta o conjunto dos dados adquirimos, podemos inferir que os marcadores avaliados neste estudo atuam a jusante dos canais mecânicos na sua cascata de sinalização. Assim sendo, no contexto do processo regenerativo, a mecanotransdução celular através destes canais, encontra-se a interferir em vias de sinalização bem estabelecidas e conhecidas nesta área de estudo. É ainda importante salientar que a análise de expressão génica serviu como pré-teste para futuramente conduzir as amostras para sequenciação do ácido ribonucleico (RNA-seq). Com certeza os resultados desta análise irão abrir o leque de potenciais intervenientes alvo no processo de regeneração. De uma maneira global, a verdade é que o impacto dos sinais mecânicos na regeneração é ainda escassamente estudado apesar de existirem evidências literárias de uma diversidade de funções biológicas desencadeadas pelos mesmos. Neste sentido, a nossa investigação tem como objetivo elucidar o seu papel e averiguar a sua necessidade ao longo do tempo. Posto isto, no presente estudo, fomos capazes, por meio da inibição dos canais previamente mencionados, de manipular como as células detetam e consequentemente respondem aos sinais mecânicos. Demonstrámos, de facto, a importância da mecanotransdução na área da regeneração e a sua necessidade ao longo do tempo. Mais concretamente, a ativação dos canais sensíveis a estímulos mecânicos ativados pela extensão elástica da membrana celular é essencial para a fase inicial do processo de regeneração, que engloba as fases de cicatrização de ferida e a formação do blastema. Em suma, a regeneração e o desenvolvimento embrionário, partilham as principais vias de sinalização celular e os principais mecanismos comuns, deste modo, os canais sensíveis a sinais mecânicos podem estar envolvidos em diferentes circunstâncias para além da regeneração de tal modo que as evidências demonstradas neste estudo podem ser transversais. Com a nossa investigação abrimos a discussão sobre o potencial mecanismo pelo qual a sinalização através de sinais mecânicos pode mediar as respostas transcricionais que favorecem a regeneração, e ainda despoleta a curiosidade e novas investigações na ampla área que é a biologia do desenvolvimento

Is it possible to detect Betanodavirus with non-lethal sampling methods in experimentally infected Dicentrarchus labrax (Linnaeus, 1758)?

Atualmente, uma das principais preocupações com a indústria aquícola está relacionada com os surtos de Encefalopatia e Retinopatia Viral (ERV), uma vez que esta doença está associada a níveis elevados de mortalidade (até 90-100% de mortalidade), especialmente em peixes juvenis. Mais de 120 espécies cultivadas e selvagens são suscetíveis a esta patologia. O agente etiológico desta patologia é designado por Betanodavirus, um vírus constituído por duas cadeias simples de RNA sem envelope (ssRNA). Recentemente, a técnica de RT-PCR em tempo real tem vindo a adquirir mais importância, como método confiável para deteção de Betanodavirus. O órgão preferencial para detetar Betanodavirus é o cérebro, porém, para analisar reprodutores, este método de amostragem letal não é adequado. Os métodos de amostragem não-letal, como utilização de barbatanas, brânquias ou serologia, têm sido investigados numa sociedade cada vez mais preocupada com o bem-estar animal. O objetivo deste estudo consistiu em avaliar a viabilidade destes tecidos para a deteção de uma infeção de Betanodavirus em robalo legítimo (Dicentrarchus labrax). Foram analisados quatro tecidos distintos, o cérebro (órgão preferencial para deteção de Betanodavirus), brânquias, barbatana caudal e sangue como tecidos provenientes de amostragem não-letal para avaliar a sua adequabilidade ao método de deteção RT-PCR em tempo real. Juvenis de robalo foram infetados com o vírus por injeção intramuscular ou imersão, e amostras de tecido, sangue e serum foram recolhidas nos dias 7, 15 e 30 após infeção experimental. O método ELISA permitiu a deteção de anticorpos específicos para Betanodavirus aos 7 dias após a infeção experimental. Concentrações mais elevadas de anticorpos foram detetadas nos dias 15 e 30 após infeção experimental, para ambos os métodos de infeção. A presença de anticorpos indica que este é um método adequado para avaliar o estado serológico dos peixes em estágios de infeção precoces até pelo menos um mês após infeção. Foi possível detetar o RNA viral em todos os tecidos analisados com RT-PCR em tempo real. A carga viral presente nos tecidos provenientes de amostragem não letal foi sempre mais reduzida do que a apresentada pelo cérebro em todos os dias de amostragem. Vírus foi detetado nos tecidos de amostragem não letal a partir do dia 7 após infeção experimental. A carga viral na barbatana caudal apresentou diferenças estatisticamente significativas entre dias de amostragem, enquanto que as brânquias apresentaram diferenças entre tratamentos e dias de amostragem. Como esperado, o cérebro foi o único tecido que registou a presença do vírus independentemente do método de infeção ou do dia de amostragem. A presença de vírus ao longo do período de amostragem não foi constante nos tecidos de amostragem não letal (brânquias, barbatana caudal e sangue) e a carga viral foi sempre mais reduzida dos que a registada para o cérebro. Cargas virais elevadas foram detetadas no sangue de peixes infetados por injeção intramuscular desde dia 15 até ao final do ensaio. A presença do vírus detetada em todos os dias de amostragem e em quantidade mais elevada, e o reconhecido tropismo deste vírus para tecidos do sistema nervoso, permitem aconselhar que o cérebro permaneça como órgão preferencial para o diagnóstico e triagem de peixes infetados com Betanodavirus. Porém, os resultados apontam para o facto de que são necessários mais estudos sobre o uso destes tecidos de amostragem não letal de forma aceitar ou rejeitar, sem dúvidas, a possibilidade de utilizar estes tecidos no diagnóstico de uma infeção em peixes por Betanodavirus

Facebike: Agregação de informação de utilização de velocípedes via rede social de ciclistas

Tese de mestrado integrado. Engenharia Informática e Computação. Universidade do Porto. Faculdade de Engenharia. 201

Auto-retrato a chiaroscuro em fundo de crise

Livro de homenagem à professora Maria Laura Bettencourt Pire