Are Distal and Proximal Visual Cues Equally Important during Spatial Learning in Mice? A Pilot Study of Overshadowing in the Spatial Domain

Animals use distal and proximal visual cues to accurately navigate in their environment, with the possibility of the occurrence of associative mechanisms such as cue competition as previously reported in honey-bees, rats, birds and humans. In this pilot study, we investigated one of the most common forms of cue competition, namely the overshadowing effect, between visual landmarks during spatial learning in mice. To this end, C57BL/6J × Sv129 mice were given a two-trial place recognition task in a T-maze, based on a novelty free-choice exploration paradigm previously developed to study spatial memory in rodents. As this procedure implies the use of different aspects of the environment to navigate (i.e., mice can perceive from each arm of the maze), we manipulated the distal and proximal visual landmarks during both the acquisition and retrieval phases. Our prospective findings provide a first set of clues in favor of the occurrence of an overshadowing between visual cues during a spatial learning task in mice when both types of cues are of the same modality but at varying distances from the goal. In addition, the observed overshadowing seems to be non-reciprocal, as distal visual cues tend to overshadow the proximal ones when competition occurs, but not vice versa. The results of the present study offer a first insight about the occurrence of associative mechanisms during spatial learning in mice, and may open the way to promising new investigations in this area of research. Furthermore, the methodology used in this study brings a new, useful and easy-to-use tool for the investigation of perceptive, cognitive and/or attentional deficits in rodents

Analyse des réponses lymphocytaires B et T spécifiques de l'antigène des patients atteints de pemphigus et traités par rituximab.

The first-line treatment for moderate to severe forms of pemphigus vulgaris (PV) is RTX, a chimeric anti-CD20 monoclonal Ac, combined with short-term oral corticosteroid therapy. Despite the formidable efficacy of this combination, a significant relapse rate persists, mainly in the first year.First, we determined prognostic factors for relapse in patients treated with RTX. The presence of at least one of the following criteria: PDAI ≥ 45 at diagnosis and/or the presence of anti-DSG1 Ac ≥ 20IU/mL and/or anti-DSG3 Ac ≥ 130IU/mL between months 3 and 6 predicted short-term relapse with a PPV of 50% and an NPV of 94%.Next, longitudinal transcriptomic analysis of 33 genes of interest showed that autoreactive B cells initially exhibited a proinflammatory profile compared with nonautoreactive B cells, marked by overexpression of 3 genes encoding the cytokines IL-1β, IL-12p35, and IL-23p19 as well as the gene for IRF5. Surprisingly, rituximab induced few change in gene expression, with the exception of IL-1β and CD27 both "down-regulated." The decreased expression of the memory marker CD27 was confirmed by cytometry, and correlated with clinical improvement.Subsequently, we studied the cytokine BAFF and its receptor BAFF-R. We showed that basal serum BAFF levels were higher in pemphigus patients than in healthy donors and especially in relapsing patients. RTX resulted in increased BAFF levels associated with decreased transcriptomic and cytometric expression of BAFF-R in both non-autoreactive and autoreactive B cells. CS allowed a transient decrease in BAFF followed by a re-ascension upon decay below a threshold of 20mg/d, with no change in BAFF-R expression. Thus, the activation of autoreactive B cells at the onset of pemphigus could be related to the presence of high serum BAFF levels and the decrease in BAFF-R expression would delay the return of memory B cells. Conversely, incomplete B-cell depletion and persistent BAFF-R expression associated with BAFF re-ascension could explain relapses in patients treated with CS.In another work, we studied the distribution and evolution of anti-DSG3 IgG subclasses in patients with PV and correlated their distribution and pathogenicity in vitro with the clinical course of the patients, before and after CS alone or associated with RTX. We confirmed the majority presence of anti-DSG3 IgG4 in patients, with an association with another subclass in 1/4 of the cases. RTX reduced the diversity of subclasses. The presence of ≥2 anti-DSG3 IgG subclasses at diagnosis was associated with an increased risk of relapse. Our pathogenicity tests emphasized the importance of anti-DSG3 IgG4 concentration, mainly when it was the only isotype found. On the contrary, in patients with both IgG3 and IgG4 at diagnosis and only IgG4 in remission, purified IgG3 was able to induce acantholysis while purified IgG3 residues were not.Finally, we studied the impact of RTX on the frequency, polarization and activation of DSG3-specific follicular helper (Tfh) and regulatory (Tfr) T cells. At diagnosis, we showed that the phenotypes of the patients' autoreactive and non-autoreactive Tfh were different with a predominance of Tfh1* and Tfh17 phenotypes in the autoreactive Tfh and, on the contrary, an underrepresented Tfh2 phenotype. RTX had no effect on Tfh polarization. We then demonstrated the emergence of an Ag-specific Tfr population after RTX use. Furthermore, these Tfr significantly overexpressed the surface activation markers PD1, ICOS and CD25.Le traitement de 1ère intention des formes modérée à sévère de pemphigus vulgaire (PV) est le RTX, un Ac monoclonal chimérique anti-CD20, associé à une corticothérapie orale de courte durée. Malgré l’efficacité redoutable de cette association, un taux de rechutes important persiste, principalement la 1ère année.D’abord, nous avons déterminé des facteurs pronostiques de rechute chez les patients traités par RTX. La présence d’au moins un des critères suivants : PDAI ≥ 45 au diagnostic et/ou la présence d’Ac anti-DSG1 ≥ 20UI/mL et/ou anti-DSG3 ≥ 130UI/mL entre le 3ème et le 6ème mois permettait de prédire une rechute à court terme avec une VPP de 50% et une VPN de 94%.Ensuite, une analyse transcriptomique longitudinale sur 33 gènes d’intérêt a montré que les LB autoréactifs présentaient initialement un profil pro-inflammatoire par rapport aux LB non auto-réactifs, marquée par la surexpression de 3 gènes codant pour les cytokines IL-1β, IL-12p35 et IL-23p19 ainsi que pour le gène de l’IRF5. Étonnamment, le rituximab n’induisait que peu de changement d’expression génique, à l'exception de l’IL-1β et du CD27 tous deux « down-régulés ». La diminution d’expression du marqueur mémoire CD27 était confirmée en cytométrie, et corrélée à l’amélioration clinique.Par la suite, nous avons étudié la cytokine BAFF et son récepteur BAFF-R. Nous avons montré que les taux sériques basaux de BAFF étaient plus élevés chez les patients atteints de pemphigus que chez les donneurs sains et plus particulièrement chez les rechuteurs. Le rituximab entraînait une augmentation des taux de BAFF associée à une diminution d’expression transcriptomique et cytométrique de BAFF-R à la fois sur les LB non-autoréactifs et autoréactifs. La CS permettait une diminution transitoire de BAFF suivie d’une ré-ascension lors de la décroissance sous un seuil de 20mg/j, sans modification de l’expression de BAFF-R. Ainsi, l'activation des LB autoréactifs au début du pemphigus pourrait être liée à la présence de taux sériques élevés de BAFF et la diminution de l'expression du BAFF-R retarderait le retour de cellules B mémoires. Inversement, la déplétion incomplète des cellules B et l'expression persistante de BAFF-R associées à une ré ascension de BAFF pourraient expliquer les rechutes chez les patients traités par CS.Dans un autre travail, nous avons étudié la distribution et l'évolution des sous-classes d'IgG anti-DSG3 chez les patients atteints de PV et corrélé leur distribution et leur pathogénicité in vitro avec l'évolution clinique des patients, avant et après CS seule ou associée au RTX. Nous avons confirmé la présence majoritaire d’IgG4 anti-DSG3 chez les patients, avec une association à une autre sous-classe dans 1/4 des cas. Le RTX permettait de réduire la diversité des sous-classes. La présence de ≥2 sous-classes d'IgG anti-DSG3 au diagnostic était liée à un risque accru de rechute. Nos tests de pathogénicité ont souligné l’importance de la concentration en IgG4 anti-DSG3, principalement lorsqu’il s’agit du seul isotype retrouvé. Au contraire, dans le cas de patients présentant à la fois des IgG3 et des IgG4 au diagnostic et uniquement des IgG4 en rémission, les IgG3 purifiées ont été capables d'induire une acantholyse alors que les résidus purifiés d'IgG3 ne l'étaient pas. nfin, nous avons étudié l’impact du RTX sur la fréquence, la polarisation et l’activation des LT folliculaires helper (Tfh) et régulateurs (Tfr) spécifiques de la DSG3. Au diagnostic, nous avons montré que les phénotypes des Tfh autoréactifs et non autoréactifs des patients étaient différents avec une prédominance des phénotypes Tfh1* et Tfh17 dans les Tfh autoréactifs et, au contraire, un phénotype Tfh2 sous-représenté. Le RTX n'avait aucun effet sur la polarisation des Tfh. Nous avons ensuite démontré l'émergence d'une population Tfr spécifique de l'Ag après l'utilisation de RTX. De plus, ces Tfr surexprimaient significativement les marqueurs d'activation de surface PD1, ICOS et CD25

Analyse des réponses lymphocytaires B et T spécifiques de l'antigène des patients atteints de pemphigus et traités par rituximab.

The first-line treatment for moderate to severe forms of pemphigus vulgaris (PV) is RTX, a chimeric anti-CD20 monoclonal Ac, combined with short-term oral corticosteroid therapy. Despite the formidable efficacy of this combination, a significant relapse rate persists, mainly in the first year.First, we determined prognostic factors for relapse in patients treated with RTX. The presence of at least one of the following criteria: PDAI ≥ 45 at diagnosis and/or the presence of anti-DSG1 Ac ≥ 20IU/mL and/or anti-DSG3 Ac ≥ 130IU/mL between months 3 and 6 predicted short-term relapse with a PPV of 50% and an NPV of 94%.Next, longitudinal transcriptomic analysis of 33 genes of interest showed that autoreactive B cells initially exhibited a proinflammatory profile compared with nonautoreactive B cells, marked by overexpression of 3 genes encoding the cytokines IL-1β, IL-12p35, and IL-23p19 as well as the gene for IRF5. Surprisingly, rituximab induced few change in gene expression, with the exception of IL-1β and CD27 both "down-regulated." The decreased expression of the memory marker CD27 was confirmed by cytometry, and correlated with clinical improvement.Subsequently, we studied the cytokine BAFF and its receptor BAFF-R. We showed that basal serum BAFF levels were higher in pemphigus patients than in healthy donors and especially in relapsing patients. RTX resulted in increased BAFF levels associated with decreased transcriptomic and cytometric expression of BAFF-R in both non-autoreactive and autoreactive B cells. CS allowed a transient decrease in BAFF followed by a re-ascension upon decay below a threshold of 20mg/d, with no change in BAFF-R expression. Thus, the activation of autoreactive B cells at the onset of pemphigus could be related to the presence of high serum BAFF levels and the decrease in BAFF-R expression would delay the return of memory B cells. Conversely, incomplete B-cell depletion and persistent BAFF-R expression associated with BAFF re-ascension could explain relapses in patients treated with CS.In another work, we studied the distribution and evolution of anti-DSG3 IgG subclasses in patients with PV and correlated their distribution and pathogenicity in vitro with the clinical course of the patients, before and after CS alone or associated with RTX. We confirmed the majority presence of anti-DSG3 IgG4 in patients, with an association with another subclass in 1/4 of the cases. RTX reduced the diversity of subclasses. The presence of ≥2 anti-DSG3 IgG subclasses at diagnosis was associated with an increased risk of relapse. Our pathogenicity tests emphasized the importance of anti-DSG3 IgG4 concentration, mainly when it was the only isotype found. On the contrary, in patients with both IgG3 and IgG4 at diagnosis and only IgG4 in remission, purified IgG3 was able to induce acantholysis while purified IgG3 residues were not.Finally, we studied the impact of RTX on the frequency, polarization and activation of DSG3-specific follicular helper (Tfh) and regulatory (Tfr) T cells. At diagnosis, we showed that the phenotypes of the patients' autoreactive and non-autoreactive Tfh were different with a predominance of Tfh1* and Tfh17 phenotypes in the autoreactive Tfh and, on the contrary, an underrepresented Tfh2 phenotype. RTX had no effect on Tfh polarization. We then demonstrated the emergence of an Ag-specific Tfr population after RTX use. Furthermore, these Tfr significantly overexpressed the surface activation markers PD1, ICOS and CD25.Le traitement de 1ère intention des formes modérée à sévère de pemphigus vulgaire (PV) est le RTX, un Ac monoclonal chimérique anti-CD20, associé à une corticothérapie orale de courte durée. Malgré l’efficacité redoutable de cette association, un taux de rechutes important persiste, principalement la 1ère année.D’abord, nous avons déterminé des facteurs pronostiques de rechute chez les patients traités par RTX. La présence d’au moins un des critères suivants : PDAI ≥ 45 au diagnostic et/ou la présence d’Ac anti-DSG1 ≥ 20UI/mL et/ou anti-DSG3 ≥ 130UI/mL entre le 3ème et le 6ème mois permettait de prédire une rechute à court terme avec une VPP de 50% et une VPN de 94%.Ensuite, une analyse transcriptomique longitudinale sur 33 gènes d’intérêt a montré que les LB autoréactifs présentaient initialement un profil pro-inflammatoire par rapport aux LB non auto-réactifs, marquée par la surexpression de 3 gènes codant pour les cytokines IL-1β, IL-12p35 et IL-23p19 ainsi que pour le gène de l’IRF5. Étonnamment, le rituximab n’induisait que peu de changement d’expression génique, à l'exception de l’IL-1β et du CD27 tous deux « down-régulés ». La diminution d’expression du marqueur mémoire CD27 était confirmée en cytométrie, et corrélée à l’amélioration clinique.Par la suite, nous avons étudié la cytokine BAFF et son récepteur BAFF-R. Nous avons montré que les taux sériques basaux de BAFF étaient plus élevés chez les patients atteints de pemphigus que chez les donneurs sains et plus particulièrement chez les rechuteurs. Le rituximab entraînait une augmentation des taux de BAFF associée à une diminution d’expression transcriptomique et cytométrique de BAFF-R à la fois sur les LB non-autoréactifs et autoréactifs. La CS permettait une diminution transitoire de BAFF suivie d’une ré-ascension lors de la décroissance sous un seuil de 20mg/j, sans modification de l’expression de BAFF-R. Ainsi, l'activation des LB autoréactifs au début du pemphigus pourrait être liée à la présence de taux sériques élevés de BAFF et la diminution de l'expression du BAFF-R retarderait le retour de cellules B mémoires. Inversement, la déplétion incomplète des cellules B et l'expression persistante de BAFF-R associées à une ré ascension de BAFF pourraient expliquer les rechutes chez les patients traités par CS.Dans un autre travail, nous avons étudié la distribution et l'évolution des sous-classes d'IgG anti-DSG3 chez les patients atteints de PV et corrélé leur distribution et leur pathogénicité in vitro avec l'évolution clinique des patients, avant et après CS seule ou associée au RTX. Nous avons confirmé la présence majoritaire d’IgG4 anti-DSG3 chez les patients, avec une association à une autre sous-classe dans 1/4 des cas. Le RTX permettait de réduire la diversité des sous-classes. La présence de ≥2 sous-classes d'IgG anti-DSG3 au diagnostic était liée à un risque accru de rechute. Nos tests de pathogénicité ont souligné l’importance de la concentration en IgG4 anti-DSG3, principalement lorsqu’il s’agit du seul isotype retrouvé. Au contraire, dans le cas de patients présentant à la fois des IgG3 et des IgG4 au diagnostic et uniquement des IgG4 en rémission, les IgG3 purifiées ont été capables d'induire une acantholyse alors que les résidus purifiés d'IgG3 ne l'étaient pas. nfin, nous avons étudié l’impact du RTX sur la fréquence, la polarisation et l’activation des LT folliculaires helper (Tfh) et régulateurs (Tfr) spécifiques de la DSG3. Au diagnostic, nous avons montré que les phénotypes des Tfh autoréactifs et non autoréactifs des patients étaient différents avec une prédominance des phénotypes Tfh1* et Tfh17 dans les Tfh autoréactifs et, au contraire, un phénotype Tfh2 sous-représenté. Le RTX n'avait aucun effet sur la polarisation des Tfh. Nous avons ensuite démontré l'émergence d'une population Tfr spécifique de l'Ag après l'utilisation de RTX. De plus, ces Tfr surexprimaient significativement les marqueurs d'activation de surface PD1, ICOS et CD25

Αnalysis of antigen-specific Β and T lymphοcytes response in pemphigus patients treated with rituximab

Le traitement de 1ère intention des formes modérée à sévère de pemphigus vulgaire (PV) est le RTX, un Ac monoclonal chimérique anti-CD20, associé à une corticothérapie orale de courte durée. Malgré l’efficacité redoutable de cette association, un taux de rechutes important persiste, principalement la 1ère année.D’abord, nous avons déterminé des facteurs pronostiques de rechute chez les patients traités par RTX. La présence d’au moins un des critères suivants : PDAI ≥ 45 au diagnostic et/ou la présence d’Ac anti-DSG1 ≥ 20UI/mL et/ou anti-DSG3 ≥ 130UI/mL entre le 3ème et le 6ème mois permettait de prédire une rechute à court terme avec une VPP de 50% et une VPN de 94%.Ensuite, une analyse transcriptomique longitudinale sur 33 gènes d’intérêt a montré que les LB autoréactifs présentaient initialement un profil pro-inflammatoire par rapport aux LB non auto-réactifs, marquée par la surexpression de 3 gènes codant pour les cytokines IL-1β, IL-12p35 et IL-23p19 ainsi que pour le gène de l’IRF5. Étonnamment, le rituximab n’induisait que peu de changement d’expression génique, à l'exception de l’IL-1β et du CD27 tous deux « down-régulés ». La diminution d’expression du marqueur mémoire CD27 était confirmée en cytométrie, et corrélée à l’amélioration clinique.Par la suite, nous avons étudié la cytokine BAFF et son récepteur BAFF-R. Nous avons montré que les taux sériques basaux de BAFF étaient plus élevés chez les patients atteints de pemphigus que chez les donneurs sains et plus particulièrement chez les rechuteurs. Le rituximab entraînait une augmentation des taux de BAFF associée à une diminution d’expression transcriptomique et cytométrique de BAFF-R à la fois sur les LB non-autoréactifs et autoréactifs. La CS permettait une diminution transitoire de BAFF suivie d’une ré-ascension lors de la décroissance sous un seuil de 20mg/j, sans modification de l’expression de BAFF-R. Ainsi, l'activation des LB autoréactifs au début du pemphigus pourrait être liée à la présence de taux sériques élevés de BAFF et la diminution de l'expression du BAFF-R retarderait le retour de cellules B mémoires. Inversement, la déplétion incomplète des cellules B et l'expression persistante de BAFF-R associées à une ré ascension de BAFF pourraient expliquer les rechutes chez les patients traités par CS.Dans un autre travail, nous avons étudié la distribution et l'évolution des sous-classes d'IgG anti-DSG3 chez les patients atteints de PV et corrélé leur distribution et leur pathogénicité in vitro avec l'évolution clinique des patients, avant et après CS seule ou associée au RTX. Nous avons confirmé la présence majoritaire d’IgG4 anti-DSG3 chez les patients, avec une association à une autre sous-classe dans 1/4 des cas. Le RTX permettait de réduire la diversité des sous-classes. La présence de ≥2 sous-classes d'IgG anti-DSG3 au diagnostic était liée à un risque accru de rechute. Nos tests de pathogénicité ont souligné l’importance de la concentration en IgG4 anti-DSG3, principalement lorsqu’il s’agit du seul isotype retrouvé. Au contraire, dans le cas de patients présentant à la fois des IgG3 et des IgG4 au diagnostic et uniquement des IgG4 en rémission, les IgG3 purifiées ont été capables d'induire une acantholyse alors que les résidus purifiés d'IgG3 ne l'étaient pas. nfin, nous avons étudié l’impact du RTX sur la fréquence, la polarisation et l’activation des LT folliculaires helper (Tfh) et régulateurs (Tfr) spécifiques de la DSG3. Au diagnostic, nous avons montré que les phénotypes des Tfh autoréactifs et non autoréactifs des patients étaient différents avec une prédominance des phénotypes Tfh1* et Tfh17 dans les Tfh autoréactifs et, au contraire, un phénotype Tfh2 sous-représenté. Le RTX n'avait aucun effet sur la polarisation des Tfh. Nous avons ensuite démontré l'émergence d'une population Tfr spécifique de l'Ag après l'utilisation de RTX. De plus, ces Tfr surexprimaient significativement les marqueurs d'activation de surface PD1, ICOS et CD25.The first-line treatment for moderate to severe forms of pemphigus vulgaris (PV) is RTX, a chimeric anti-CD20 monoclonal Ac, combined with short-term oral corticosteroid therapy. Despite the formidable efficacy of this combination, a significant relapse rate persists, mainly in the first year.First, we determined prognostic factors for relapse in patients treated with RTX. The presence of at least one of the following criteria: PDAI ≥ 45 at diagnosis and/or the presence of anti-DSG1 Ac ≥ 20IU/mL and/or anti-DSG3 Ac ≥ 130IU/mL between months 3 and 6 predicted short-term relapse with a PPV of 50% and an NPV of 94%.Next, longitudinal transcriptomic analysis of 33 genes of interest showed that autoreactive B cells initially exhibited a proinflammatory profile compared with nonautoreactive B cells, marked by overexpression of 3 genes encoding the cytokines IL-1β, IL-12p35, and IL-23p19 as well as the gene for IRF5. Surprisingly, rituximab induced few change in gene expression, with the exception of IL-1β and CD27 both "down-regulated." The decreased expression of the memory marker CD27 was confirmed by cytometry, and correlated with clinical improvement.Subsequently, we studied the cytokine BAFF and its receptor BAFF-R. We showed that basal serum BAFF levels were higher in pemphigus patients than in healthy donors and especially in relapsing patients. RTX resulted in increased BAFF levels associated with decreased transcriptomic and cytometric expression of BAFF-R in both non-autoreactive and autoreactive B cells. CS allowed a transient decrease in BAFF followed by a re-ascension upon decay below a threshold of 20mg/d, with no change in BAFF-R expression. Thus, the activation of autoreactive B cells at the onset of pemphigus could be related to the presence of high serum BAFF levels and the decrease in BAFF-R expression would delay the return of memory B cells. Conversely, incomplete B-cell depletion and persistent BAFF-R expression associated with BAFF re-ascension could explain relapses in patients treated with CS.In another work, we studied the distribution and evolution of anti-DSG3 IgG subclasses in patients with PV and correlated their distribution and pathogenicity in vitro with the clinical course of the patients, before and after CS alone or associated with RTX. We confirmed the majority presence of anti-DSG3 IgG4 in patients, with an association with another subclass in 1/4 of the cases. RTX reduced the diversity of subclasses. The presence of ≥2 anti-DSG3 IgG subclasses at diagnosis was associated with an increased risk of relapse. Our pathogenicity tests emphasized the importance of anti-DSG3 IgG4 concentration, mainly when it was the only isotype found. On the contrary, in patients with both IgG3 and IgG4 at diagnosis and only IgG4 in remission, purified IgG3 was able to induce acantholysis while purified IgG3 residues were not.Finally, we studied the impact of RTX on the frequency, polarization and activation of DSG3-specific follicular helper (Tfh) and regulatory (Tfr) T cells. At diagnosis, we showed that the phenotypes of the patients' autoreactive and non-autoreactive Tfh were different with a predominance of Tfh1* and Tfh17 phenotypes in the autoreactive Tfh and, on the contrary, an underrepresented Tfh2 phenotype. RTX had no effect on Tfh polarization. We then demonstrated the emergence of an Ag-specific Tfr population after RTX use. Furthermore, these Tfr significantly overexpressed the surface activation markers PD1, ICOS and CD25

Analyse des réponses lymphocytaires B et T spécifiques de l'antigène des patients atteints de pemphigus et traités par rituximab.

The first-line treatment for moderate to severe forms of pemphigus vulgaris (PV) is RTX, a chimeric anti-CD20 monoclonal Ac, combined with short-term oral corticosteroid therapy. Despite the formidable efficacy of this combination, a significant relapse rate persists, mainly in the first year.First, we determined prognostic factors for relapse in patients treated with RTX. The presence of at least one of the following criteria: PDAI ≥ 45 at diagnosis and/or the presence of anti-DSG1 Ac ≥ 20IU/mL and/or anti-DSG3 Ac ≥ 130IU/mL between months 3 and 6 predicted short-term relapse with a PPV of 50% and an NPV of 94%.Next, longitudinal transcriptomic analysis of 33 genes of interest showed that autoreactive B cells initially exhibited a proinflammatory profile compared with nonautoreactive B cells, marked by overexpression of 3 genes encoding the cytokines IL-1β, IL-12p35, and IL-23p19 as well as the gene for IRF5. Surprisingly, rituximab induced few change in gene expression, with the exception of IL-1β and CD27 both "down-regulated." The decreased expression of the memory marker CD27 was confirmed by cytometry, and correlated with clinical improvement.Subsequently, we studied the cytokine BAFF and its receptor BAFF-R. We showed that basal serum BAFF levels were higher in pemphigus patients than in healthy donors and especially in relapsing patients. RTX resulted in increased BAFF levels associated with decreased transcriptomic and cytometric expression of BAFF-R in both non-autoreactive and autoreactive B cells. CS allowed a transient decrease in BAFF followed by a re-ascension upon decay below a threshold of 20mg/d, with no change in BAFF-R expression. Thus, the activation of autoreactive B cells at the onset of pemphigus could be related to the presence of high serum BAFF levels and the decrease in BAFF-R expression would delay the return of memory B cells. Conversely, incomplete B-cell depletion and persistent BAFF-R expression associated with BAFF re-ascension could explain relapses in patients treated with CS.In another work, we studied the distribution and evolution of anti-DSG3 IgG subclasses in patients with PV and correlated their distribution and pathogenicity in vitro with the clinical course of the patients, before and after CS alone or associated with RTX. We confirmed the majority presence of anti-DSG3 IgG4 in patients, with an association with another subclass in 1/4 of the cases. RTX reduced the diversity of subclasses. The presence of ≥2 anti-DSG3 IgG subclasses at diagnosis was associated with an increased risk of relapse. Our pathogenicity tests emphasized the importance of anti-DSG3 IgG4 concentration, mainly when it was the only isotype found. On the contrary, in patients with both IgG3 and IgG4 at diagnosis and only IgG4 in remission, purified IgG3 was able to induce acantholysis while purified IgG3 residues were not.Finally, we studied the impact of RTX on the frequency, polarization and activation of DSG3-specific follicular helper (Tfh) and regulatory (Tfr) T cells. At diagnosis, we showed that the phenotypes of the patients' autoreactive and non-autoreactive Tfh were different with a predominance of Tfh1* and Tfh17 phenotypes in the autoreactive Tfh and, on the contrary, an underrepresented Tfh2 phenotype. RTX had no effect on Tfh polarization. We then demonstrated the emergence of an Ag-specific Tfr population after RTX use. Furthermore, these Tfr significantly overexpressed the surface activation markers PD1, ICOS and CD25.Le traitement de 1ère intention des formes modérée à sévère de pemphigus vulgaire (PV) est le RTX, un Ac monoclonal chimérique anti-CD20, associé à une corticothérapie orale de courte durée. Malgré l’efficacité redoutable de cette association, un taux de rechutes important persiste, principalement la 1ère année.D’abord, nous avons déterminé des facteurs pronostiques de rechute chez les patients traités par RTX. La présence d’au moins un des critères suivants : PDAI ≥ 45 au diagnostic et/ou la présence d’Ac anti-DSG1 ≥ 20UI/mL et/ou anti-DSG3 ≥ 130UI/mL entre le 3ème et le 6ème mois permettait de prédire une rechute à court terme avec une VPP de 50% et une VPN de 94%.Ensuite, une analyse transcriptomique longitudinale sur 33 gènes d’intérêt a montré que les LB autoréactifs présentaient initialement un profil pro-inflammatoire par rapport aux LB non auto-réactifs, marquée par la surexpression de 3 gènes codant pour les cytokines IL-1β, IL-12p35 et IL-23p19 ainsi que pour le gène de l’IRF5. Étonnamment, le rituximab n’induisait que peu de changement d’expression génique, à l'exception de l’IL-1β et du CD27 tous deux « down-régulés ». La diminution d’expression du marqueur mémoire CD27 était confirmée en cytométrie, et corrélée à l’amélioration clinique.Par la suite, nous avons étudié la cytokine BAFF et son récepteur BAFF-R. Nous avons montré que les taux sériques basaux de BAFF étaient plus élevés chez les patients atteints de pemphigus que chez les donneurs sains et plus particulièrement chez les rechuteurs. Le rituximab entraînait une augmentation des taux de BAFF associée à une diminution d’expression transcriptomique et cytométrique de BAFF-R à la fois sur les LB non-autoréactifs et autoréactifs. La CS permettait une diminution transitoire de BAFF suivie d’une ré-ascension lors de la décroissance sous un seuil de 20mg/j, sans modification de l’expression de BAFF-R. Ainsi, l'activation des LB autoréactifs au début du pemphigus pourrait être liée à la présence de taux sériques élevés de BAFF et la diminution de l'expression du BAFF-R retarderait le retour de cellules B mémoires. Inversement, la déplétion incomplète des cellules B et l'expression persistante de BAFF-R associées à une ré ascension de BAFF pourraient expliquer les rechutes chez les patients traités par CS.Dans un autre travail, nous avons étudié la distribution et l'évolution des sous-classes d'IgG anti-DSG3 chez les patients atteints de PV et corrélé leur distribution et leur pathogénicité in vitro avec l'évolution clinique des patients, avant et après CS seule ou associée au RTX. Nous avons confirmé la présence majoritaire d’IgG4 anti-DSG3 chez les patients, avec une association à une autre sous-classe dans 1/4 des cas. Le RTX permettait de réduire la diversité des sous-classes. La présence de ≥2 sous-classes d'IgG anti-DSG3 au diagnostic était liée à un risque accru de rechute. Nos tests de pathogénicité ont souligné l’importance de la concentration en IgG4 anti-DSG3, principalement lorsqu’il s’agit du seul isotype retrouvé. Au contraire, dans le cas de patients présentant à la fois des IgG3 et des IgG4 au diagnostic et uniquement des IgG4 en rémission, les IgG3 purifiées ont été capables d'induire une acantholyse alors que les résidus purifiés d'IgG3 ne l'étaient pas. nfin, nous avons étudié l’impact du RTX sur la fréquence, la polarisation et l’activation des LT folliculaires helper (Tfh) et régulateurs (Tfr) spécifiques de la DSG3. Au diagnostic, nous avons montré que les phénotypes des Tfh autoréactifs et non autoréactifs des patients étaient différents avec une prédominance des phénotypes Tfh1* et Tfh17 dans les Tfh autoréactifs et, au contraire, un phénotype Tfh2 sous-représenté. Le RTX n'avait aucun effet sur la polarisation des Tfh. Nous avons ensuite démontré l'émergence d'une population Tfr spécifique de l'Ag après l'utilisation de RTX. De plus, ces Tfr surexprimaient significativement les marqueurs d'activation de surface PD1, ICOS et CD25

Mixed muco-cutaneous pemphigoid: Clinical and immunological features of 15 cases

IntroductionWe describe a series of patients whose auto-immune bullous skin disease (AIBD) of the dermal-epidermal junction (DEJ) was characterized by clinical, immunological and ultrastructural features intermediate between bullous pemphigoid (BP) and mucous membrane pemphigoid (MMP), and a recalcitrant course.Patients and MethodsFrom the database of the French reference centre for AIBD, we screened all the patients who were referred for an AIBD of the DEJ with a mucosal involvement, who neither met the diagnostic criteria for the diagnosis of BP, nor were typical of MMP. Sera were analysed by NC16A-ELISA and immunobloting against the C-terminal and LAD-1 parts of BP180. Skin biopsies were studied by direct immunoelectron microscopy (IEM).ResultsFifteen patients (4 males, 11 females) of mean age 70.8 ± 11.8 years were included. The mucosal involvement was localized in oral cavity in all cases and in pharyngeal/laryngeal or genital area in 8 (53%), and 6 patients (40%), respectively. No patient had ocular involvement, nor atrophic or fibrosing scars. All patients had extensive skin lesions (mean BPDAI score =65.9 ± 24.4), which predominated on the upper body part. Direct IEM performed on 8 patients showed IgG deposits on the lamina lucida in all cases, and the lamina densa in 5 cases. All sera recognized NC16A, while none recognized BP-230 in ELISA. 10 out of the 13 tested sera (76.9%) contained IgG which recognized the C-terminal domain of BP180 and 10 sera (76.9%) the LAD-1 domain of BP180. Patients poorly responded to super potent topical corticosteroids and were treated with oral corticosteroids ± immunosuppressant in 13 cases (86.6%).ConclusionThis mixed muco-cutaneous pemphigoid differs from BP by the younger age of patients, multiple mucosae involvement, circulating antibodies against both the C- and N-terminal part of BP180, and very poor response to topical CS. It differs from MMP by extensive inflammatory skin lesions, absence of ocular involvement and atrophic/fibrosing scars

The characterisation of an exhumed high-temperature paleo-geothermal system on Terre-de-Haut Island (the Les Saintes archipelago, Guadeloupe) in terms of clay minerals and petrophysics

Abstract The volcanic island of Terre-de-Haut (in the Les Saintes archipelago, Lesser Antilles arc) is described in the literature as an exhumed paleo-geothermal system. Outcropping conditions provide a good, nearly horizontal 2D view of the system. This present study focuses on clay minerals, as they are known to be good markers of hydrothermal alterations worldwide, and on flow pathways. At Terre-de-Haut, the distribution of the clay minerals has a ‘concentric’ zonation with smectite, illite and chlorite comprising the outer part to the inner part of the altered zone, respectively. In the active Bouillante geothermal system, located on Basse-Terre island, 35 km NNW of Terre-de-Haut, drillings have revealed a vertical succession of the same clay minerals: from bottom to top, chlorite above 240 °C, illite above 180 °C and smectite at lower temperatures. Both sites have the same clay minerals and can, therefore, be compared. Within those geothermal systems, pathways for the fluids are encountered at all scales, from the micrometre-scale (µm-scale; through microcracks within phenocrysts and at grain joints) to the metre- and kilometre-scale (m- and km-scale) due to fractures and faults. Petrophysical measurements indicate that fresh rock samples are porous and permeable, allowing hydrothermal alteration on a km-scale. The combination of 1D vertical data at Bouillante and this new 2D horizontal distribution of clay minerals and fractures on Terre-de-Haut allows for a 3D schematic representation of the geothermal systems of the Guadeloupe archipelago and suggests that they are of hectometre-size (hm-size)

Development of innovative electrodes for the application of ERT methods to the benefit of immovable Cultural Heritage Conservation

International audienceIn the field of science in conservation, it is well known that most of the damages are induced by moisture changes.Indeed, water content distribution in masonry is a determining factor in the frame of the weathering and alterationprocesses. The evaluation and monitoring of water content in immovable cultural heritage with Non DestructiveTechnics (NDT) remain a scientific challenge. Electrical Resistivity Tomography (ERT) is a NDT that enables toimage the in-depth spatial and/or temporal variations of the electrical resistivity related to the water saturation.Thus, this study investigates adaptation of ERT to Cultural Heritage issues.The application of the ERT method is based on the injection and reception of an electrical signal through thesurface of the auscultated object. Due to the preciosity of the masonry, adapted electrodes are developed. Sensordevelopment takes into account of electrode/material surface interfacial quality to prevent any damage to the structureand optimum electrical coupling.The aim of this study concerns the development of a new type of electrodes specially adapted to the ERT monitoringon heritage buildings. Thus, the coupling interface (electrode/material) and the electrical properties of theelectrodes are tested in the laboratory as well as in the field conditions.In the laboratory conditions two tests are performed: first, the electrical properties of the electrodes like the capacityof the electrodes to be polarized, the internal resistance, the relation between surface of electrode and theinjected to received signal ratio magnitudes and others are tested. Second, the performance of electrodes is testedon a limestone block from a Gallo-Roman temple. The contact resistance of the electrodes as well as the responseof the material to the injected electrical signal at different degrees of saturation are tested.The practical implementation of the new electrodes in the field conditions is the last step. The electrodes are used inreal conditions by applying the ERT method on the Gallo-Roman Temple of the archaeological site of Genainville(France). This allows to validate the design of the electrodes in a complete acquisition system for in situ long termmonitoring of water distribution in masonry submitted to water table rising periods