Produção de clones secretores de anticorpos (IgG) contra o vírus da doença infecciosa bursal

A Digital Object Identifier (DOI) não foi disponibilizada pela revistaTrês clones secretores de anticorpos IgG contra o vírus da doença infecciosa bursal (IBDV) foram desenvolvidos no presente trabalho, para utilização em testes de imunodiagnóstico do tipo imunofluorescência, imunohistoquímica ou ELISA de captura. Para a produção dos anticorpos (Ac) utilizou-se de um vírus inteiro proveniente de uma vacina comercial, estirpe intermediaria (Bur-706), que foi multiplicado em células VERO e purificado por ultracentrifugação em gradiente de sacarose, sendo utilizado para a imunização dos camundongos BALB/c. O adjuvante escolhido foi a saponina, que permitiu a obtenção de anticorpos policlonais capazes de revelar a enzima por ELISA. A fusão das células esplênicas dos camundongos imunizados e o mieloma SP2/0 resultou na obtenção de 2 famílias de hibridomas (2H11 e 5C7) secretores de anticorpos. Após clonagem por diluição limitante, foram obtidos 3 clones secretores de Ac da classe IgG. Os três Ac obtidos foram capazes de revelar as proteínas virais VPX e VP2 por ”western blotting”, reconhecendo a proteína de 47 kDa e 41 kDa e outra proteína não identificada com peso molecular de 66 kDa. As definições dos isótipos reconhecidos pelos Ac obtidos devem ser objeto de investigações, de modo a permitir a utilização dos anticorpos em ensaios imunoenzimáticos para estudos epidemiológicos da doença ou para diferenciar vírus vacinal e de campo.Three clones secreting of antibodies (Abs) IgG against infection bursal disease virus IBDV was development. The IBDV was strain S706 (the intermediate vaccine) was replicated in VERO cell and purified by sucrose gradient, for ELISA and mice inoculation. For the immunization of the mice BALB/c using as a saponin adjuvant, that allowed an inflammation reaction which enhan- ced the antibody response, detectable by ELISA. The fusion of splenic cells of the immunized mice and the mieloma SP2/0 resulted in 2 hybridoma families (2H11 and 5C7). After cloning by limiting dilution, 3 clones secretors of Abs from IgG class were obtained. The 3 obtained Abs were capable to reveal the proteins turn VPX and VP2 by “western blotting”, respectively of 47 kDa and 41 kDa. The definition of the isotypes recognized by obtained Abs must be object of characterization to allow the use of the antibodies in immunodiagnostic tests such as immunofluorescence, immunocitochemistry or capture ELISA, for epidemiologic of the disease researches or to differentiate vaccine’s virus of the field virus

Autoenxerto de crista ilíaca de coelhos na união vertebral dorsolateral lombar

The effectiveness of the iliac crest autograft in dorsolateral spinal fusion promotion of the lumbar vertebral body L5-L6 was evaluated in 33 New Zealand White rabbits, distributed in two groups, with nine animals in group 1 (G1), submitted the bilateral transverse processes decortification; and twenty-four in group 2 (G2), which received 2g of iliac crest autograft on decortificed bilateral transverse processes. Three rabbits of G1 and eight of G2 were killed at 5, 7 and 9 weeks after surgery and submitted to palpation, X-ray and light microscopic evaluations. The fusion site of animals of G2 was submitted to biomechanic tests accomplished for evaluation of force and rigidity. All animals of G1 presented normal mobility of the segment operated in all moments of evaluation and they didn't present fusion evidence in X-ray analysis. In the light microscopic evaluations periosteal discreet reaction was observed, without evidence of bony bridge formation. In G2, evaluation for palpation and x-rays evidenced bone fusion to the 5 weeks, intensifying along the weeks. At 5 weeks, in the light microscopic analysis, reabsorption of bone fragments was observed, presence of trabecular bone and chondroides hearts, besides the abundant irrigation to the 7 weeks and osteointegration in every grafted bed to the 9 weeks, with bone endochondral formation prevailing. Force and rigidity increase of the fusion bone mass along the time of evaluation was observed in the biomechanic test.. When a comparison of the treated vertebrae and no treated was accomplished, the union indexes were larger in all of the moments, in the treated group. A high percentage of vertebral fusion was gotten when iliac crest autograft was used in rabbits.Foi realizada artrodese dorsolateral das vértebras lombares L5-L6 de coelhos, avaliando-se a eficácia do autoenxerto da crista ilíaca na promoção de união vertebral. Foram utilizados 33 coelhos da raça Nova Zelândia Branco, distribuídos em dois grupos, com nove indivíduos no grupo 1 (G1), submetidos a descorticação bilateral dos processos transversos; e vinte e quatro indivíduos no grupo 2 (G2), que receberam 2g de autoenxerto da crista ilíaca sobre a área de descorticação. Três coelhos do G1 e oito do G2 foram submetidos à eutanásia as cinco, sete e nove semanas após o ato operatório e à avaliações por palpação, radiográfica e histológica no local do procedimento. Testes biomecânicos para avaliação de força e rigidez da união foram realizados somente nos animais do G2 e as vértebras adjacentes não operadas, serviram de controle. Os animais do G1 apresentaram mobilidade normal à palpação do segmento operado em todos os momentos de avaliação e não apresentaram evidência radiográfica de união. Na avaliação histológica foi observada discreta reação periosteal, sem evidências de formação de ponte óssea. No G2, as avaliações por palpação e radiográficas evidenciaram indícios de união óssea as cinco semanas, intensificando-se ao longo das semanas de avaliação. Na análise histológica foi observada reabsorção de fragmentos ósseos as cinco semanas, predominância de trabéculas ósseas e corações condróides, além de suprimento sanguíneo abundante as sete semanas e osteointegração em todo leito de enxertia as nove semanas, com predomínio de formação óssea endocondral. Os testes biomecânicos evidenciaram aumento da força e rigidez da massa óssea ao longo do tempo de avaliação. Quando foi realizada comparação das vértebras tratadas e não tratadas, os índices de união foram maiores em todos os momentos, no grupo tratado. Com os resultados foi possível concluir que alta percentagem de união vertebral foi conseguida quando o osso autógeno da crista ilíaca foi utilizado como material de enxertia em coelhos

Healing Effects of Formulations with Extract of Sonchus oleraceus

Introduction: Scar is defined as a process of tissue regeneration characterized by fibroblasts and a disorganized extracellular matrix, formed mainly by collagen. Thus it is understood that regeneration capacity is a phenomenon that occurs in order to repair an injured tissue. However, science has been looking for alternatives to assist in the repair process, and thus phytotherapy has been used as a therapeutic resource in medicine, and scientifically proven its efficiency. The plant Sonchus oleraceus is known, among other names, as “serralha” or sowthistle. It is a cosmopolitan species, found in several agricultural regions infesting crops. In Brazil, it is more frequent to grow in the winter and its seeds can be kept viable for eight years in the soil. This plant can be used as a popular drug for diuretic proposals, in cases of anemia, liver diseases and in cases of treatment of vitiligo in the eastern region of the state of Minas Gerais, Brazil. The objective of this research was to evaluate two different products (ointment and balsam) composed by S. oleraceus in the healing of surgical wounds in rats (Rattus novergicus).Materials, Methods & Results: Sonchus oleraceus specimens were obtained at the beginning of May, during the autumnwinter season, in which there is already a flowering of this plant. The leaves and stem of S. oleraceus were selected, cleaned and dried under study at 40°C of circulating air for four days for complete dehydration, and then ground in a knife mill. The constituents were prepared in 80% alcohol (v / v) and subjected to ultrasonic extraction for 60 min. The hydroalcoholic extract of S. oleraceus was concentrated on a rotary evaporator until all alcohol evaporated and the aqueous extract was obtained. The extracts were produced at concentrations of 5%, 10% and 15% and sent for manipulation of the pharmaceutical formulations of ointment and salve. Forty Wistar rats were divided into eight groups for evaluation of different products (salve and ointment). The wounds were created on the back of the animals and the products were applied daily; for analysis, clinical evaluations and wound measurement were performed daily. After 15 days, a biopsy was performed for histopathological analysis and quantification of type I and III collagen fibers. Measurement of the wound in rats treated with ointment containing 15% of extract presented better tissue retraction, with complete retraction observed after 10 days of treatment. Type I collagen was predominant in all samples; however, the healing properties of the balsam containing 5% extract and ointment containing 5% and 15% extract were significantly different.Discussion: As a conclusion, Sonchus oleraceus influenced the healing process of the skin. This pharmacological action is probably directly related to the amount of flavonoids present in its composition, that is, the higher the extract concentration, the better its efficacy. However, a better efficacy in the ointment is emphasized by better adhesion to the skin. Studies have shown that the flavonoids present in most plants have relevant healing activity, stimulating the proliferation of fibroblasts and the production of collagen, acting on the inhibition of metalloproteinase, thus increasing the rate of synthesized collagen. Other researchers reported a high concentration of flavonoids (anthocyanins and tannins) that act as mediators of inflammation, stimulating the production of inflammatory cytokines and tumor necrosis factor, observed in this species

Alterações fetais induzidas pelo uso de antiinflamatórios durante a gestação

Em geral, todos os efeitos dos antiinflamatórios estão relacionados com a inibição da ciclo-oxigenase (COX) do ácido araquidônico e, portanto, inibição da produção de prostaglandinas e tromboxanos. Existem dois tipos de COX, quais sejam COX-1 e COX-2. A COX-1 é uma enzima constitucional expressa em muitos tecidos, incluindo plaquetas sangüíneas, e está envolvida na homeostase tecidual. Por outro lado, a COX-2 é induzida em células inflamatórias quando elas são ativadas, sendo considerada a enzima que produz os mediadores da inflamação da classe dos prostanóides. A ação dos antiinflamatórios está relacionada à inibição da COX-2 e é provável que seus efeitos indesejados se devam principalmente à inibição da COX-1. Tratamentos maternos com antiinflamatórios não esteroidais (AINEs) têm sido associados, com freqüência, à vasoconstrição do ducto arterioso fetal, hipertensão arterial pulmonar e inibição da agregação plaquetária. Alterações na hemostasia são alguns dos efeitos colaterais produzidos pelo uso incontrolado dos AINEs, os quais induzem a um desequilíbrio na liberação de prostaglandinas e tromboxanos, que se reflete na adesividade e agregação plaquetária. As alterações hemostáticas observadas em neonatos, decorrentes do uso de salicilatos pela mãe, ocorrem devido à inibição da agregação plaquetária e à diminuição da atividade do fator XII relacionado à coagulação sangüínea. Estudos em camundongos revelaram que o uso de corticóides durante a gestação pode levar a anormalidades no desenvolvimento fetal, por alterações na diferenciação celular

Eletroterapia no processo de reparação da superfície articular de coelhos

Os efeitos da eletroestimulação pós-operatória no processo de reparação de falhas osteocondrais induzidas no sulco troclear de 36 coelhos adultos foram avaliados histologicamente. O grupo controle apresentou tecido de granulação típico, com duas semanas de pós-operatório (PO); cartilagem hialina foi observada após quatro e sete semanas de PO e a reconstituição do osso subcondral excisado limitou-se ao fundo da falha, até sete semanas de PO. No grupo I (eletroestimulado diariamente), o tecido de granulação apresentou vascularização exuberante após duas semanas de PO; após sete semanas de PO, o tecido de reparação permaneceu indiferenciado superficialmente, com formação de novo osso subcondral até o nível da junção osteocondral preexistente. No grupo II (eletroestimulado em dias alternados), os animais responderam de duas maneiras: através da reparação com cartilagem hialina e osteogênese reduzida, semelhante ao grupo controle; ou pela formação de tecido indiferenciado e osteogênese intensa, como no grupo I. Concluiu-se que a eletroestimulação pós-operatória realizada impediu a diferenciação tecidual em cartilagem hialina em coelhos. Por outro lado, a ossificação endocondral foi acelerada, observando-se reconstituição do osso subcondral até o nível da junção osteocondral preexistente nos animais tratados com este método. Em face da importância do osso subcondral na manutenção da integridade do tecido de reparação, a eletroestimulação é benéfica na fase inicial (quatro semanas) da reparação de falhas osteocondrais.The effects of postooperative electrotherapy in the repair of full-thickness osteochondral defects in the troclear groove of 36 adult rabbits were evaluated histologically. In the control group, granulation tissue was present two weeks post-operatively (PO); hyaline cartilage was observed at four and at seven weeks PO; subchondral bone regeneration was limited to the deeper portions of the defects at seven weeks PO. In group I (stimulated daily), granulation tissue presented abundant vascularization at two weeks PO and the repair tissue remained undifferentiated superficially, with formation of new subchondral bone up to the level of the original osteochondral junction, at seven weeks PO. The animals in group II (stimulated every other day), responded in two ways: through repair with hyaline cartilage, with reduced osteogenesis, similar to control group; or undifferentiated tissue, with an intense osteogenesis, as in group I. The postoperative electrical stimulation inhibited the tissue differentiation into hialine cartilage. On the other hand, endochondral ossification was accelerated, with complete regeneration of subchondral bone, in treated animals. In view of the importance of the subchondral bone for the integrity of the repair tissue, electrical stimulation is benefic in the initial fase (four weeks) of osteochondral defects repair

Clinical and Histopathological Evaluation of Cutaneous Pythiosis in Donkeys (Equusasinus)

The purpose of this study was to evaluate and characterize the clinical and histopathological aspects of cutaneous pythiosis in donkeys (Equus asinus) in the Department of Cordoba, Colombia. A descriptive, non-probability study was conducted on domesticated animals. Nine donkeys clinically and histopathologically diagnosed with cutaneous pythiosis were analyzed. After describing the cases, a serious, crater-shaped granulomatous ulcer was observed, with necrotic tissue, a tumor appearance, abundant fibrinous-bloody exudation and yellowish-white caseous material known as kunkers. The lesions were found in the members, ventral abdomen and chest of the animals. Histopathologically, with the hematoxylin-eosin staining, severe pyogranulomatous dermatitis was observed, with abundant eosinophilic and neutrophilic inflammatory infiltrate; with the Grocott staining, hyphae with septa were found, partially branching into a right angle and brown in color. The definitive diagnosis of the disease was based on the clinical features, the differential diagnosis and the histopathological findings. The diagnosis of cutaneous pythiosis was conclusive. This study becomes the first report of this disease in donkeys (Equus asinus) in the department of Córdoba and in Colombia

Avaliação histológica do processo de reparação da superfície articular de coelhos

O processo de reparação da superfície articular foi avaliado microscopicamente em uma falha osteocondral produzi- da no sulco troclear esquerdo de 12 coelhos adultos. Observou-se preenchimento inicial com tecido de granulação, com diferenciação tecidual em cartilagem hialina e reposição parcial do osso subcondral excisado sete semanas após a cirurgia. Houve formação de fendas entre o tecido de reparação e o tecido ósseo adjacente, sempre em áreas onde não ocorreu remodelação óssea. Nos animais em que o fundo e as laterais da falha osteocondral eram constituídos por osso subcondral compacto, contendo poucos vasos sangüíneos, não foi observada remodelação óssea e o tecido de reparação que preenchia a falha não foi integrado ao tecido ósseo adjacente. Os resultados evidenciam a importância da remoção completa do osso subcondral compacto nos procedimentos cirúrgicos em superfícies articulares, possibilitando melhor afluxo sangüíneo a partir do osso esponjoso subjacente e, conseqüentemente, melhor remodelação óssea e integração do tecido de reparação ao fundo da falha.The repairing process in the articular surface was evaluated microscopically in an osteochondral gap produced in the left troclear groove of 12 adult rabbits. It was observed that the granulation tissue wich initially filled this gap had diferentiated into hyaline cartilage by 4 weeks after surgery, presenting parcial reconstitution of subchondral bone excised at seven weeks following surgery. In some animals, cleft formation was observed between the repair tissue and adjacent bone, always where bone remodeling did not occured. In animals wich the bottom and lateral edges of the defect were formed by lamelar subchondral bone with few blood vessels, bone remodeling was not observed, having no attachment of the repair tissue to the adjacent bone. The results show the importance of complete removal of the lamelar subcondral bone during the surgical procedures in the articular surface, in order to allow better blood supply from the subjacent cancellous bone, better bone remodeling, and attachment of the repair tissue to the bottom of the defect

Evaluación clínica e histopatológica de la pitiosis cutánea en burros (Equus asinus)

El objetivo de este estudio fue evaluar y caracterizar los aspectos clínicos e histopatológicos de la pitiosis cutánea en burros (Equus asinus) en el departamento de Córdoba, Colombia. Se realizó un estudio de tipo descriptivo, no probabilístico en animales de conveniencia. Fueron analizados nueve burros con pitiosis cutánea diagnosticados clínica e histopatológicamente. Al describir los casos se observó una grave ulceración granulomatosa en forma de cráter, con tejido necrótico, apariencia tumoral, abundante exudación filante fibrino-sanguinolenta y salida de material caseificado de color blanco amarillento denominado kunkers. Las lesiones se ubicaron en miembros, abdomen ventral y pecho de los animales. Histopatológicamente, con la coloración de hematoxilina-eosina, se observó dermatitis piogranulomatosa severa, con abundante infiltrado inflamatorio de tipo eosinofílico y neutrofílico; con la coloración de Grocott se evidenciaron hifas con tabiques y parcialmente ramificadas en ángulo recto, de color café. El diagnóstico definitivo de la enfermedad se fundamentó en las características clínicas, el diagnóstico diferencial y en los hallazgos histopatológicos. Fue concluyente el diagnóstico de la pitiosis cutánea. El presente estudio se convierte en el primer reporte de esta enfermedad en burros (Equus asinus) en el departamento de Córdoba y en Colombia