Proteomic and metabolomic analysis of the carotenogenic yeast Xanthophyllomyces dendrorhous using different carbon sources

Martinez-Moya P, Niehaus K, Alcaino J, Baeza M, Cifuentes V. Proteomic and metabolomic analysis of the carotenogenic yeast Xanthophyllomyces dendrorhous using different carbon sources. BMC Genomics. 2015;16(1): 289.Background: Astaxanthin is a potent antioxidant with increasing biotechnological interest. In Xanthophyllomyces dendrorhous, a natural source of this pigment, carotenogenesis is a complex process regulated through several mechanisms, including the carbon source. X. dendrorhous produces more astaxanthin when grown on a non-fermentable carbon source, while decreased astaxanthin production is observed in the presence of high glucose concentrations. In the present study, we used a comparative proteomic and metabolomic analysis to characterize the yeast response when cultured in minimal medium supplemented with glucose (fermentable) or succinate (non-fermentable). Results: A total of 329 proteins were identified from the proteomic profiles, and most of these proteins were associated with carotenogenesis, lipid and carbohydrate metabolism, and redox and stress responses. The metabolite profiles revealed 92 metabolites primarily associated with glycolysis, the tricarboxylic acid cycle, amino acids, organic acids, sugars and phosphates. We determined the abundance of proteins and metabolites of the central pathways of yeast metabolism and examined the influence of these molecules on carotenogenesis. Similar to previous proteomic-stress response studies, we observed modulation of abundance from several redox, stress response, carbohydrate and lipid enzymes. Additionally, the accumulation of trehalose, absence of key ROS response enzymes, an increased abundance of the metabolites of the pentose phosphate pathway and tricarboxylic acid cycle suggested an association between the accumulation of astaxanthin and oxidative stress in the yeast. Moreover, we observed the increased abundance of late carotenogenesis enzymes during astaxanthin accumulation under succinate growth conditions. Conclusions: The use of succinate as a carbon source in X. dendrorhous cultures increases the availability of acetyl-CoA for the astaxanthin production compared with glucose, likely reflecting the positive regulation of metabolic enzymes of the tricarboxylic acid and glyoxylate cycles. The high metabolite level generated in this pathway could increase the cellular respiration rate, producing reactive oxygen species, which induces carotenogenesis

ANALISIS DE LA SECCION 8 DEL CROMOSOMA X DE Drosophila melanogaster MEDIANTE EL USO DE CLONES YAC DE Saccharomyces cerevisiae*

En Drosophila melanogaster, los genes estructurales que codifican para hexoquinasas A y B, se ubican estrechamente ligados en el cromosoma I (X). Estos loci corresponden a la región citológica 8D4-E1 en el mapa citogenético de dicho cromosoma.Con el objetivo de determinar la ubicación exacta de los loci para hexoquinasas A y B se realizó un análisis molecular, mediante el uso de cromosomas artificiales de levadura, que contienen DNA de la sección 8 del cromosoma X.  Para tal efecto, se aisló DNA cromosómico intacto de siete clones YAC de S. cerevisiae que cubren  dicha región. El DNA fue resuelto mediante electroforesis de campo pulsado y analizado por hibridación con DNA del plásmido pBR322 y con un fragmento de DNA de 0,67 Kb de D. melanogaster, amplificado por PCR con partidores heterólogos específicos para hexoquinasas.Los resultados de estos experimentos permitieron concluir que, la sonda  homóloga es capaz de hibridar con el YAC II, lo cual coincide con la cobertura de este clon en la región citológica esperada

Efecto de ketoconazol, clotrimazol, nistatina y cicloheximida sobre el crecimiento de Phaffia rhodozyma

Debido a la importancia biotecnológica en la producción de pigmentos, se determinaron los niveles de sensibilidad a antifúngicos de 3 cepas de Phaffia rhodozyma , con la finalidad de obtener mutantes resistentes, característica usada como marcador en el análisis genético de diferentes microorganismos. El desarrollo de las tres cepas, fue inhibido por ketoconazol, clotrimazol, nistatina y cicloheximida respectivamente.La cepa UCD 67-210 resultó ser la más sensible al ketoconazol, siendo inhibida por concentraciones de 5 ug/ml de dicho compuesto. Para las cepas UCD 67-383 y UCD 67-385 se requieren concentraciones de 20 ug/ml. El clotrimazol, inhibió el crecimiento de las cepas UCD 67-210 y  UCD 67-385, a una concentración de 10 ug/ml y a la cepa UCD 67-383 a 20 ug/ml. La nistatina inhibe el crecimiento de las cepas UCD 67-383 y UCD 67-385 a una concenlración de 3 ug/ml. y a la cepa UCD 67-210 a 5 ug/ml. La cicloheximida impide el desarrollo de las cepas UCD 67-210 y UCD 67-385 a una concentración de 2 ug/ml. La cepa UCD 67-383 resultó ser la más resistente, requiriéndose concentraciónes sobre 6 ug/ml para inhibir su crecimiento

Formación y regeneración de protoplastos de Phaffia rhodozyma

En este trabajo se describe la preparación y regeneración de protoplastos a partir de cultivos frescos de la levadura carotenogénica Phaffia rhodozyma, en forma eficiente y con un alto grado de rendimiento en la sobrevida de las células tratadas. Para ello se han realizado una serie deexperimentos para formar protoplastos de P.rhodozyma, utilizando tres cepas silvestres y cinco cepas afectadas en carotenogénesis. Se probó las enzimas bioglucanasa, biocelulasa, bioxilanasa, glucuronidasa, zimoliasa 100T, lisozima y novozima 234, encontrándose que novozima 234, es la que tiene mayor eficiencia. En las cepas silvestres UCD 67-210 y UCD 67-385 y las cinco cepas de color, se logra un 100% de  protoplastos entre 60 a 90 minutos de tratamiento con novozima a 37ºC. Sin embargo, no fueposible formar protoplastos en ninguna de las condiciones estudiadas con la cepas silvestre UCD 67-383. Tales resultados pueden ser debidos a diferencias en la pared celular entre dichas cepas. Además, se ha observado que la incubación a 37ºC reduce notablemente la sobrevida de las células tratadas. Para la formación y regeneración de protoplastos se utilizó una serie de condiciones, encontrando que en sorbitol 0.2 M la destrucción de las células es menor que a concentraciones de sorbitol 0.8 y 1 M. Sin embargo, el medio más adecuado para la formación y regeneración de los protoplastos debe contener KCl 0.8 M como agente osmolar, manteniendo la isotonÍa del medio y logrando que la destrucción celular sea menor

Análisis de los procesos financieros y las fuentes de financiamiento de las Pymes en Colombia

Esta investigación pretende determinar la relación entre la gestión que realizan las Pymes y las consecuencias de estas acciones sobre la posibilidad de acceder a fuentes de financiamiento que contribuyan a mejorar los procesos de las empresas gracias a la implementación de recursos en sus procesos productivos y de comercialización. Para esto se propone revisar la forma como las Pymes de la ciudad de Pereira gestionan sus procesos para crecer y ocupar mayores cuotas de mercado y derivado de ese contraste poder proponer algunas alternativas que les permitan acceder con mayor facilidad a los mercados financieros públicos y privados para captar recursos que mejoren su capital de trabajo. La investigación se fundamenta en una metodología cualitativa de carácter descriptiva no experimental de tipo deductivo que gracias al uso de encuestas analizó a 25 Pymes de la ciudad de Pereira bajo un muestreo no probabilístico. Los resultados indican la alta correlación entre las variables estudiadas y la necesidad de mejorar los procesos logísticos, financieros, administrativos y tributarios para lograr acceder a fuentes de financiamiento.This research aims to determine the relationship between the management carried out by SMEs and the consequences of these actions on the possibility of accessing sources of financing that contribute to improving the processes of companies thanks to the implementation of resources in their production and marketing processes. . For this, it is proposed to review the way in which SMEs in the city of Pereira manage their processes to grow and occupy greater market shares and, derived from this contrast, be able to propose some alternatives that allow them to more easily access public and private financial markets to capture resources that improve their working capital. The research is based on a qualitative methodology of a descriptive non-experimental nature of a deductive type that, thanks to the use of surveys, analyzed 25 SMEs in the city of Pereira under a non-probabilistic sampling. The results indicate the high correlation between the variables studied and the need to improve logistical, financial, administrative and tax processes in order to gain access to financing sources.PregradoIngeniero(a) IndustrialTABLA DE CONTENIDO Lista de Figuras................................................................................................................6 Lista de Tablas .................................................................................................................8 RESUMEN .......................................................................................................................9 ABSTRACT ....................................................................................................................10 INTRODUCCIÓN ...........................................................................................................11 1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA......................................................................13 1.1 PREGUNTAS PROBLEMA...............................................................................17 2 OBJETIVOS.............................................................................................................18 2.1 OBJETIVO GENERAL ......................................................................................18 2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS.............................................................................18 3 JUSTIFICACIÓN......................................................................................................19 4. MARCO DE REFERENCIA .....................................................................................22 4.1 ANTECEDENTES.................................................................................................22 4.1.1 Nacionales..................................................................................................22 4.1.2 Internacionales ...........................................................................................24 4.2 REFERENTES TEÓRICOS ..............................................................................25 4.2.1 Teoría del Racionamiento del Crédito ........................................................25 Procesos financieros y fuentes de financiamiento de las Pymes 4 4.2.2 Teoría del Mejoramiento de los procesos logísticos ...................................26 4.2.3 Teoría de la Jerarquía de las Preferencias.................................................27 4.3 MARCO CONCEPTUAL ...................................................................................29 4.3.1 Gestión Financiera......................................................................................29 4.3.2 Planificación Financiera..............................................................................30 4.3.3 Fuentes de Financiamiento ........................................................................31 4.3.4 Las Pymes en Colombia.............................................................................32 4.4 MARCO LEGAL ................................................................................................33 4.5 FORMULACIÓN DE HIPÓTESIS......................................................................35 5. ASPECTOS METODOLÓGICOS ............................................................................36 5.1 ENFOQUE DE LA INVESTIGACIÓN ................................................................36 5.2 DISEÑO METODOLÓGICO..............................................................................37 5.3 MÉTODO DE INVESTIGACIÓN .......................................................................37 5.4 FUENTES Y TÉCNICAS DE RECOLECCIÓN DE INFORMACIÓN..................38 5.4.1 Técnicas de recolección de información.....................................................39 5.5 DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN ....................................................................41 5.6 POBLACIÓN Y MUESTRA ...............................................................................41 5.6.1 Plan de Análisis ..........................................................................................43 5.6.2 Aspectos Éticos ..........................................................................................44 Procesos financieros y fuentes de financiamiento de las Pymes 5 6. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS .........................................................................46 7. CONCLUSIONES....................................................................................................72 8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................76 9. ANEXOS..................................................................................................................8

Quality of nursing care questionnaire (CUCACE): validity and reliability in Colombia

Objetive To determine the validity and reliability of the CUCACE (Quality of Nursing Care Questionnaire) in Colombia. Every day there is a growing interest in measuring the quality of care received from nursing personnel as a tangible element of care; however, not having reliable and valid instruments is an obstacle, especially in Colombia. Method A psychometric and evaluative instrumental study was conducted. Data of interest from CUCACE filled out in Spanish were extracted together with demographic information of the participants. Results Confirmed the validity of the content and construct validity of the scales of care, attention to nursing care and the perception of care in a Colombian hospital. Cronbach’s alpha was higher than 0.7, and its reliability is accepted in the context. Conclusion The CUCACE is adequate to measure the satisfaction and experience of patients with nursing care in the Colombian context. The questionnaire with its two scales is useful, clear, precise, valid and reliable to evaluate the quality of nursing car

Aislamiento de secuencias de replicación autónoma de Xanthophyllomyces dendrorhous en Saccharomyces cereviciae

Xanthophyllomyces dendrorhous (=Phaffia rhodozyma ), es una levadura basidiomicética carotenogénica, en la cual aspectos importantes de su biologia, como la organización general su genoma, número de cromosomas y nivel de ploidía, aún no son completamente entendidos. En atención a esto, se han orientado esfuerzos hacia la obtención de marcadores genéticos de auxotrofia, pigmentación y resistencia a antibióticos. Además. se ha progresado lentamente en estudios moleculares con el objetivo de aumentar el conocimiento de su genética,mediante el desarrollo de procedimientos de transformación genética, los cuales tienen una eficiencia baja.Con el objeto de construir un vector de clonado de X. dendrorhous, se describen los experimentos para lograr el clonamiento de Secuencias de Replicación Autónoma (ARS) de este basidiomicete en la levaduraSaccharomyces cerevisiae. Para ello se procedió a transformar la cepa FBL1 -8B de S. cerevisiae con clones recombinantes de la genoteca de X. dendrorhous construida en el vector de integración YIp5. Como resultado se lograron 4 transformantes URA3+ de S.cerevisiae, denominados 6(1), 37(1), 38(1) Y 38(4). Adicionalmente se realizaron experimentos de rescate de plásmidos mediante transformación de E. coli DH5a con DNA total de los transformantes de levadura, rescatándose 6 clones recombinantes. El análisis de restricción de los plásmidos, indicó que 5 son idénticos, estando formados por el vector YIp5 (5.4 kb) Y 3 fragmentos BamHI de 7.7, 2.4 Y J.5 kb. El otro carece del inserto de 2.4 kb. La retransformación de S. cerevciae con estos plásmidos se presentó en alta frecuencia y sugiere la presencia de un ARS. El subclonado de los insertos indica que la función ARS radica en el mayor y corresponde a un rearreglo del vector e inserto

Presencia de plasmidos de DNA de doble hebra en Phaffia rhodozyma

El análisis mediante electroforesis en gel de agarosa, de los ácidos nucleicos de tres cepas silvestres de Phaffia rhodozyma, permitió determinar la presencia de elementos genéticos extracromosómicos de DNA de doble hebra en una de ellas, la cepa UCD 67-210. Esta cepa es portadora de al menos 6 bandas de DNA que migran más rápido que el DNA cromosómico y cuyos tamaños moleculares corresponden a 6.5, 5.9, 5.0, 4.4, 3.2 y 2.5 kb. Con el objetivo de determinar el tipo deácido nucleico que contituye estos elementos, se estudió su comportamiento frente a diferentes nucleasas. El tratamiento con ribonucleasa A, ya sea en alta o baja fuerza iónica, no tiene efecto sobre las bandas electroforéticas, así como el tratamiento con nuecleasaS1 . Por el contrario, el tratamiento con desoxiribonucleasa pancreática conduce a una degradación completa de las bandas y del DNA  cromosómico. Estos resultados sugieren que la naturaleza química de losplásmidos corresponde a DNA de doble hebra.Por otra parte, la visualización de los plásmidos en gel de agarosa,  depende de la utilización de proteinasa K y SDS en el procedimiento de purificación de los plásmidos y en las condiciones de corrida electroforética, sugiriendo la presencia de un complejo DNA plasmidial- proteína en cada uno de estos elementos.Finalmente, el análisis mediante enzimas de restricción de dos de estos plásmidos, sugiere que estos elementos no están relacionados

Should an Effective Language Learning Be through the Development of Just One Language Skill?

This paper is intended to identify how teachers’ emphasis on writing influence the learning process in an English class, taking into account that the development of the four language skills is essential for learning a second language to gain an effective communication. this study adopts some main concepts related to English teaching and learning, which are: language skills, writing and learning process. Then, in order to recognize this educational case, this study follows a qualitative approach, a hermeneutic paradigm and a case study, using a non-participant observation, a participant observation, a semi-structured interview and some task-based learning (TBL) sessions which were observed critically by the researchers; all these data collection tools were useful to achieve the aim of this research. The aim of this study is to exhibit how the teachers’ emphasis on writing over the other language skills affects the English learning process in third grade students, at the “Institución Educativa San Cristóbal.” Among the remarkable results, it is visible that the teacher made the students develop aspects on the writing skill, but these were focused on transcription and repetition rather than comprehensible written productions

Groundwater management in an agro-industrial school in Argentina

Introducción: la gestión del agua es de gran importancia en las actividades productivas, debido a su impacto directo sobre la calidad y la disponibilidad de un recurso tan valioso. Sin embargo, el agua es en muchos casos utilizada sin un enfoque de gestión integrada, generando riesgo de contaminación, así como escasez de agua en los sistemas agroindustriales. Objetivo: analizar la calidad del agua para consumo humano, características hidrogeológicas, demanda de agua y descarga de efluentes líquidos en el suelo y aguas superficiales. Métodos: desarrollamos el diagnóstico de la gestión del agua subterránea en una escuela agroindustrial ubicada en la provincia de Buenos Aires, Argentina. El sistema productivo de esta escuela incluye un tambo bovino, cría de cerdos, terneros y conejos, avicultura y apicultura, fábricas de quesos y chacinados, área de forraje, sector de cultivos y huerta. Para realizar el análisis, calculamos los consumos de agua en seis sectores productivos y evaluamos las características hidrogeológicas del área de estudio mediante mediciones del nivel freático considerando el sentido de flujo subterráneo. Analizamos la calidad del agua subterránea estacionalmente durante un año a través de cinco muestras. Consideramos parámetros microbiológicos y fisicoquímicos y los comparamos con lo recomendado en la legislación, y desarrollamos el monitoreo del cloro residual durante una semana. Además, evaluamos la generación y disposición de efluentes. Resultados: el agua resultó apta para consumo humano, aunque se encontraron variaciones en parámetros indicadores. Determinamos que los principales aspectos que dificultan la gestión integrada del agua fueron la diversidad de producciones desarrolladas con altas demandas de agua y el deterioro de la calidad del recurso que ocasionan, y las condiciones hidrogeológicas del área. Además, la gran demanda de agua entra en conflicto con la escasa disponibilidad del recurso subterráneo y la complejidad del medio geológico para la extracción del agua. Conclusión: este trabajo demostró la utilidad de aplicar estrategias efectivas para actuar en aspectos ambientales prioritarios y desarrollar buenas prácticas para el manejo del agua con un enfoque integrado.Introduction: water management is of paramount importance in productive activities, such as agriculture, livestock and industry, due to its direct impact on both the quality and the availability of this valuable resource. However, groundwater management is usually addressed under a non-integrated approach which originates a high risk of pollution as well as water shortage for food and animal production in the agro-industrial systems. Objective: to analyze water quality for human consumption, hydrogeological features, water demand, and discharge of liquid effluents on soil and surface water. Methods: we carried out a diagnostics of water management in an agro-industrial school located in Buenos Aires province, Argentina. The production system includes a bovine dairy farm; calf, pork and rabbit breeding; beekeeping; poultry farming; dairy and cheese factory; agriculture and fodder area; processing of meat, and orchard. To perform the analysis, we calculated water requirements for six productive activities and evaluated the hydrological features of the area through water table measurements considering the groundwater flow sense. We analyzed the groundwater quality seasonally during a period of a year through five water samples. We considered microbiological and physicochemical parameters and they were compared with recommended level by law, and we carried out the monitoring of residual chlorine during a week. Also, we evaluated the generation and disposal of effluents. Results: water was suitable for human consumption, although we detected variations in its quality indicators. We determined that the main issues hindering an integrated water management were the diversified production developed with high volumes of water demanded, the water quality deterioration by the agro-industrial productions carried out, and the hydrogeological features of the area. In addition, we measured a high water demand which is in conflict with groundwater shortage and the complex hydrological conditions of extraction in the studied area. Conclusion: this study demonstrated the usefulness of applying effective strategies to act on environmental-priority subjects and to develop good practices regarding water management from an integrated approach.Fil: Vuksinic, Evelyn. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro Regional Catamarca-la Rioja. Estacion Experimental Agropecuaria Chilecito.; ArgentinaFil: Rodriguez, Corina Iris. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Humanas. Departamento de Ciencias Ambientales. Centro de Investigación y Estudios Ambientales; ArgentinaFil: Tabera, Anahi. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Tecnologia y Calidad de los Alimentos; ArgentinaFil: Cifuentes, Marisol Roxana. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Humanas. Departamento de Ciencias Ambientales. Centro de Investigación y Estudios Ambientales; ArgentinaFil: Díaz, Adriana Alejandra. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Humanas. Departamento de Ciencias Ambientales. Centro de Investigación y Estudios Ambientales; ArgentinaFil: Cisneros Basualdo, Nicolás Eloy. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Humanas. Departamento de Ciencias Ambientales. Centro de Investigación y Estudios Ambientales; ArgentinaFil: Ruiz de Galarreta, Victor Alejandro. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Humanas. Departamento de Ciencias Ambientales. Centro de Investigación y Estudios Ambientales; Argentin