Caracterização da função do monóxido de azoto e glutationo hepáticos na sensabilidade periférica à insulina

xi RESUMO A acção da insulina no músculo esquelético depende de um reflexo parassimpático hepático que conduz à libertação de uma substância hepática sensibilizadora da insulina, designada por HISS, responsável por cerca de 55% do efeito hipoglicemiante da insulina. A acção da HISS é finamente regulada pelo monóxido de azoto (NO) hepático e pelo estado prandial, aumentando no período pós-prandial imediato e diminuindo progressivamente com as horas de jejum. A secreção da HISS pode ser inibida cirúrgica ou farmacologicamente, quer por desnervação selectiva do plexo anterior hepático, quer por administração de atropina, quer por inibição do sintase do NO (NOS) hepático. O objectivo geral do trabalho apresentado nesta dissertação foi a caracterização da via de transdução de sinal que conduz à libertação da HISS. O modelo utilizado neste estudo foi o rato Wistar. A sensibilidade à insulina foi avaliada através do teste rápido de sensibilidade à insulina (RIST). A primeira hipótese de trabalho testada foi que a sequência de eventos que conduzem à secreção da HISS inicia-se com a activação do sistema parassimpático hepático seguida de activação do NOS hepático com subsequente produção de NO e activação do guanilato ciclase (GC). Observou-se que a administração de um dador de NO reverteu a resistência à insulina induzida, quer por inibição do NOS hepático, quer por antagonismo dos receptores muscarínicos com atropina. Em contraste, a resistência à insulina produzida por inibição do NOS hepático não foi revertida por administração intraportal de acetilcolina (ACh). Constatou-se que a inibição do GC hepático diminuiu a sensibilidade à insulina. Estes resultados sugerem que: a ACh libertada no fígado induz a síntese de NO hepático que conduz à libertação da HISS, que por sua vez é modulada pelo GC hepático. A libertação da HISS em resposta à insulina é regulada pelo estado prandial. Uma vez que os níveis hepáticos de glutationo (GSH) se encontram, tal como a HISS, diminuídos no estado de jejum e aumentados após a ingestão de uma refeição, testou-se a hipótese de que o GSH hepático está envolvido na secreção da HISS. Observou-se que a depleção do GSH hepático induziu resistência à insulina, comparável à obtida após inibição do NOS hepático. Estes resultados suportam a hipótese de que o GSH hepático desempenha um papel crítico na acção periférica da insulina. Considerando que, no estado de jejum, tanto os níveis de GSH hepático como os níveis de NO hepático são baixos, testou-se a hipótese de que a co-administração intraportal de um dador de GSH e de um dador de NO promove um aumento da sensibilidade à insulina no estado de jejum, devido ao restabelecimento do mecanismo da HISS. Observou-se que a administração sequencial de dadores de GSH e de NO no fígado provocou um aumento na sensibilidade à insulina, dependente da dose de dador de GSH administrada. Concluiu-se portanto que ambos, GSH e NO, são essenciais para que o mecanismo da HISS esteja completamente funcional. O GSH e o NO reagem para formar um S-nitrosotiol, o S-nitrosoglutationo (GSNO). Os resultados supra-mencionados conduziram à formulação da hipótese de que a secreção/acção da HISS depende da formação de GSNO. Observou-se que a administração intravenosa de S-nitrosotióis (RSNOs) aumentou a sensibilidade à insulina, em animais submetidos a um período de jejum, ao contrário da administração intraportal destes fármacos, o que RSNOs têm uma acção periférica, mas não hepática, na sensibilidade à insulina. Os resultados obtidos conduziram à reformulação da hipótese da HISS, sugerindo que a ingestão de uma refeição activa os nervos parassimpáticos hepáticos levando à libertação de ACh no fígado que, por sua vez activa o NOS. Simultaneamente, ocorre um aumento dos níveis de GSH hepático que reage com o NO hepático para formar um composto nitrosado, o GSNO. Este composto mimetiza a acção hipoglicemiante da HISS no músculo esquelético. SUMMARY Insulin action at the skeletal muscle depends on a hepatic parasympathetic reflex that promotes the release of a hepatic insulin sensitizing substance (HISS) from the liver, which contributes 55% to total insulin action. HISS action is modulated by hepatic nitric oxide (NO) and also by the prandial status so as to, in the immediate ostprandial state, HISS action is maximal, decreasing with the duration of fasting. HISS secretion may be inhibited by interruption of the hepatic parasympathetic reflex, achieved either by surgical denervation of the liver or by cholinergic blockade with atropine, or by prevention of hepatic NO release, using NO synthase (NOS) antagonists. The main objective of this work was to characterize the signal transduction pathways that lead to HISS secretion by the liver. Wistar rats were used and insulin sensitivity was evaluated using the rapid insulin sensitivity test (RIST). The first hypothesis tested was that the sequence of events that lead to HISS secretion starts with an increase in the hepatic parasympathetic tone, followed by the activation of hepatic NOS and subsequent triggering of guanylate cyclase (GC). We observed that insulin resistance produced either by muscarinic receptor antagonism with atropine or by hepatic NOS inhibition was reversed by the intraportal administration of an NO donor. In contrast, intraportal acetylcholine (ACh) did not restore insulin sensitivity after NOS inhibition. We also observed that GC inhibition lead to a decrease in insulin sensitivity.These results suggest that the release of ACh in the liver activates hepatic NO synthesis in order to allow HISS secretion, through a signaling pathway modulated by GC. HISS release in response to insulin is controlled by the prandial status. The second hypothesis tested was that glutathione (GSH) is involved in HISS secretion since the hepatic levels of GSH are, like HISS action, decreased in the fasted state and increased after ingestion of a meal. We observed that hepatic GSH depletion led to insulin resistance of the same magnitude of that observed after inhibition of hepatic NOS. These results support the hypothesis that hepatic GSH is crucial in peripheral insulin action. Since, in the fasted state, both hepatic GSH and NO levels are low, we tested the hypothesis that intraportal o-administration of a GSH donor and an NO donor enhances insulin sensitivity in fasted Wistar rats, by restoring HISS secretion. We observed that GSH and NO increased insulin sensitivity in a GSH dose-dependent manner. We concluded that HISS secretion requires elevated levels of both GSH and NO in the liver. GSH and NO react to form a S-nitrosothiol, S-nitrosoglutathione (GSNO). The last hypothesis tested in this work was that HISS secretion/ action depends on the formation of GSNO. We observed that intravenous administration of -nitrosothiols (RSNOs) increased insulin sensitivity in animals fasted for 24 h, in contrast with the intraportal administration of the drug. This result suggests that RSNOs enhanced insulin sensitivity through a peripheral, and not hepatic, mechanism. The results obtained led to a restructuring of the HISS hypothesis, suggesting that the ingestion of a meal triggers the hepatic parasympathetic nerves, leading to the release of Ach in the liver, which in turn activates NOS. Simultaneously, hepatic GSH levels increase and react with NO to form a nitrosated compound, GSNO. S-nitrosoglutathione mimics HISS hypoglycaemic action at the skeletal muscle

36. Diagnóstico do cancro do pulmão: comparação da expectoração pósbroncoscopia, lavado, escovado e biópsia brônquicos

Lung cancer is one of the most important respiratory diseases. The flexible bronchoscopy (FBC) is an exam widely used in its diagnosis and staging and, in specific cases, its treatment. There are several diagnostic bronchoscopies techniques currently used. The most common are the bronchial washing (BW), brushing (BBR) and biopsy (BB).It was our aim to evaluate the diagnostic yield of these three techniques, as well as, the post-bronchoscopy sputum cytology (PBSC), at presence of a suspicious visible endoscopy lesion of lung cancer. From September of 2001 to February of 2003, 56 FBC were carried out on patients with clinical history and suggestive endoscopy injury of lung cancer (hyperaemia/infiltration/tumour). In all patients we performed BW, BBR and BB and, always if it was possible, PBSC. The patients were excluded when the 4 applied diagnostic techniques were negative for malignancy. The results had been classified as positive, negative or suspected.The diagnosis of lung cancer, through at least one of three bronchoscopies techniques or PBSC, was obtained in 44 patients (78,6%). In the total of these patients the diagnostic yield from BW was 56,8%, from BBR 79,5%, from BB 95,5%. The yield from PBSC was 28,6% (n=42). The three techniques were simultaneously positive for malignancy in 52,3% of the total, being concordant, in terms of specification of the histologic type, in 69,6%. The BBR and the BB were both positive in 22,8% (70% agreement) and BW and BB in 4,5% (100% agreement). The BBR was the only positive diagnostic technique in 4,5% of the cases and the BB in 15,9%. The BW and the PBSC were never the only positive result.Of the 7 cases where the BBR was positive for malignancy but did not allow the specification of the histology type, 5 (71, 4%) were clarified by the BB. In turn, of the 7 cases where the BB was not diagnostic of the specific type of cancer, 3 were defined by BBR (42,9%).The endoscopy aspect had been described as infiltration in 63.4% cases and the remaining as tumour. The BW was more frequently positive in presence of infiltration in comparison to tumour (64% versus 36%). It were not verified significant differences in relation to the BBR and BB.In literature there continues to exist some controversy about the diagnostic value of the BW, BBR, BB and PBSC in lung cancer. This work clearly shows that the BB is the most cost-effective technique, but the values obtained for BW and BBR were also relevant. However, it is to be stressed that neither the BW nor the PBSC constituted at any time the only positive diagnostic technique for malignancy, neither did they contributed for the clarification of the histologic type. The BBR only increased by 3,5% the total diagnostic yield

Mechanical ventilation for the treatment of severe excessive dynamic airway collapse

[Excerpt] We read with interest the case report by Ismael et al1 describing a patient with Sjo¨gren’s syndrome and cystic lung disease who could not be weaned from a ventilator due to severe central excessive dynamic airway collapse (EDAC) of the lower part of the trachea and proximal bronchi. EDAC corresponds to the expiratory bulging of the tracheobronchial wall without known airway structural abnormalities, leading to a decrease of at least 50% in internal diameter.2 It is a rare and underdiagnosed entity, commonly confused with other respiratory diseases such as asthma and COPD. Although noninvasive procedures such as cervicothoracic computed tomography scan on inspiration and expiration may suggest the disorder, the accepted standard method for diagnosis is bronchoscopy.3-7 (...).(undefined

Cartografia Geológica e Geotécnica dos solos da cidade de Leiria

Este trabalho pretende ser um contributo para a cartografia geotécnica da região de Leiria. A caracterização geotécnica dos solos em zonas urbanas é cada vez mais relevante para a tomada de decisões em relação ao planeamento e utilização dos espaços e para uma correta avaliação das soluções de fundações a adotar e para o seu dimensionamento. Com a entrada em vigor dos novos Eurocódigos estruturais, aumentou a exigência em relação ao dimensionamento estrutural. Neste contexto, o Eurocódigo 7 veio colmatar uma lacuna em relação ao projeto geotécnico e o Eurocódigo 8 é uma ferramenta fundamental em relação ao projeto em condições sísmicas. Este trabalho teve como objetivo a caraterização geológico geotécnica dos terrenos no Concelho de Leiria. Com base na consulta de 43 relatórios geológico geotécnicos, municipais, realizados no Concelho de Leiria, procedeu-se à recolha dos resultados das campanhas de prospeção, que contemplam ensaios de campo e laboratoriais, por forma a criar uma base de dados, e com esses resultados, implementá-los no Sistema de Informação Geográfica. A consulta destes dados, permite obter uma caraterização geológico-geotécnica dos terrenos existentes, distribuída espacialmente e em profundidade, para obtenção de mapas temáticos com informações relevantes para o apoio ao projeto estrutural e execução das estruturas. Verifica-se que o tipo de ensaios solicitados e a quantidade para a caracterização dos solos varia consoante o tipo e a dimensão da obra, e que em muitos relatórios a campanha de ensaios é limitada, com um reduzido número de ensaios e insuficientes para uma caracterização efetiva dos terrenos, face à área de implantação, situação esta, relacionada questões orçamentais e prazos de execução reduzidos. De realçar também que o ensaio mais executado para a caracterização dos terrenos é o ensaio SPT, ensaio fácil de executar e que permite direta ou indiretamente obter uma estimativa de parâmetros relevantes dos terrenos

Practice and knowledge about diagnosis and treatment of alpha-1 antitrypsin deficiency in Spain and Portugal

Background: determining physicians' awareness about alpha-1 antitrypsin (AAT) deficiency (AATD) may help to explain the discrepancy between the observed and expected number of patients diagnosed with this disease. This study was designed to assess the opinions on knowledge, practice pattern and attitude regarding AATD among physicians in Spain and Portugal. Methods: as online anonymous survey was performed on pulmonologists (n = 100), internal medicine specialists (IMS) (n = 100) and primary care physicians (PCP) (n = 176). Of the total number of physicians, 221 were from Spain, and 155 were from Portugal. Physicians answered 21 questions related to their personal and professional profile, knowledge regarding AATD and chronic obstructive pulmonary disease (COPD), performance and attitude about AATD, and use of augmentation therapy. Responses were ranked on a 4-point scale indicating the level of agreement. In addition, some of the responses were rated as either "low" or "high" indicating the level of knowledge the respondent felt he/she possessed. Results: only 14 % of physicians reported to "know very well" about AATD (3.3 [SD 0.6] for pulmonologists vs. 2.64 [SD 0.60] for IMS and 2.48 [SD 0.71] for PCP; p < 0.001). Only 45.2 % of physicians correctly answered "<50 mg/dL" as the threshold value of serum AAT to be considered severe AATD (55.0 % of pulmonologists vs. 47.0 % of IMS and 38.6 % of PCP; p = 0.001). Choice of the correct answer did not agree with those physicians self-declaring a high level of AATD knowledge (51.2 %). A total of 43.9 % of physicians correctly identified all diseases or conditions in a list associated or not with AATD. A similar trend was detected when identifying which conditions would be responsive to augmentation therapy (<50 %). Only 15.8 % of specialists performed AATD testing in all patients with COPD (27.0 % pulmonologists, 12.6 % PCP; p = 0.001). Conclusion: the results suggest that a knowledge gap may be contributing to the underdiagnosis of AATD. Physicians in Spain and Portugal showed a marked lack of awareness of their shortcomings in knowledge about AATD, and in general did not follow guidelines and recommendations for AATD testing

A internacionalização das empresas portuguesas do setor do calçado em contexto de crise económica, no período 2008-2015

Numa economia mundializada, em que se assiste a uma rápida evolução do contexto em que as empresas competem, a internacionalização deixou de ser mera estratégia de expansão do negócio, para passar a ser uma questão de sobrevivência. Nas últimas décadas, o setor português do calçado reinventou-se, assumiu o desafio da internacionalização e tornou-se extremamente competitivo. Na presente investigação procura-se avaliar a dinâmica de internacionalização e o desempenho das empresas portuguesas deste setor no período 2008-2015 e identificar as perspetivas futuras. Como forma de enquadramento da investigação, é apresentada uma revisão da literatura científica e analisada informação estatística para caracterização do setor do calçado. Através de uma metodologia qualitativa de estudo de caso, assente em entrevistas semiestruturadas a líderes de empresas portuguesas do setor, torna-se manifesto, apesar da crise económico-financeira internacional, o crescimento do setor, no período 2008-2015 e evidente a importância da internacionalização das empresas para este crescimento. A dinâmica de internacionalização das empresas do calçado caracteriza-se por uma forte vocação exportadora, essencialmente para países europeus, mas com uma clara tendência futura de diversificação dos mercados de destino. Os principais fatores de competitividade relativamente aos concorrentes nos mercados externos, simultaneamente identificados como os principais fatores que potenciaram o crescimento do setor no período em estudo, passam pela aposta contínua na diferenciação, através da qualidade e design inovador dos produtos e pela flexibilidade no desenvolvimento dos mesmos. Como pista de investigação futura, sugere-se a aplicação da metodologia proposta a uma amostra mais abrangente de empresas portuguesas do setor do calçado.In this worldwide economy, where the environment in which companies compete is changing every day, internationalization is no longer a matter of strategy or a way of expanding the business, instead it has become a matter of survival. The Portuguese footwear sector reinvented itself in the last decades, taking on the challenge of internationalization and becoming extremely competitive. The goals of this research are to evaluate the dynamics of internationalization and the performance of Portuguese companies in this sector from 2008 to 2015 and to identify future perspectives. The framework of this thesis is based on a scientific review of the literature and statistical analysis, allowing to get a picture of the footwear sector. Through a qualitative methodology of case study, based on semi-structured interviews with leaders of Portuguese companies, the growth of the sector in this period - to which internationalization had an important role - becomes evident, despite the international economic and financial crisis. The dynamics of the internationalization is characterized by high exports, mainly to European countries, but with a clear future ambition of attaining new markets. The constant bet on differentiation through the quality, innovative design of the products and the flexibility in the development were simultaneously identified as the most important factors of competitiveness rather than to external competitors and as the boosters of growth in the period under study. For future research, it is suggested to apply the same methodology to a larger sample of Portuguese companies in this sector

Paradigmas Avançados em Aproveitamentos Fotovoltaicos

Atualmente, as energias renováveis têm vindo a aumentar cada vez mais a sua participação na capacidade instalada de Portugal, sendo a energia solar uma das mais promissoras tecnologias. A aposta nesta tecnologia advém maioritariamente da redução nos seus custos que se tem vindo a observar e aos incentivos de utilização de energias verdes dados pelo Governo. Esta dissertação tem como objetivo analisar dois tipos de instalações fotovoltaicas que ainda não são muito utilizadas (não convencionais), sendo estas: as instalações fotovoltaicas flutuantes, também conhecidas por FPV e as instalações integradas em edifícios, conhecidas por BIPV. Na instalação flutuante, foi estudado a influência que as entradas de ar e a distância entre o painel e a superfície da água podem ter tanto na temperatura das células fotovoltaicas como na sua produção. Para isso foram instalados dois painéis fotovoltaicos em dois flutuadores a diferentes alturas e com diferentes entradas de ar. Um dos flutuantes instalados tinha uma entrada de ar enquanto outro tinha duas. Numa fase posterior uma das entradas de ar do painel com duas entradas foi fechada para os dois painéis terem o mesmo número de entradas de ar. Relativamente à instalação BIPV, foi avaliado o desempenho de um painel monocristalino de filme fino flexível em diferentes formatos (plano, côncavo e convexo). Esta instalação foi montada num simulador solar, que permitiu uma variação de radiação consoante o número de holofotes ligados.Currently, renewable energy has been increasing its contribution to the Portuguese installed capacity mix, with solar energy being one of the most promising technologies. The investment in this technology comes mainly from the reduction in its costs and the incentives for the use of green energy putted in place by the Government. This dissertation aims to analyse two types of photovoltaic installations that are still not widely used (unconventional), namely: floating photovoltaic installations, also known as FPV, and integrated installations in buildings, known as BIPV. For the floating installation, it was studied the influence of air intakes and how the distance between the panel and the water surface can have both on the temperature of the photovoltaic cells and on their production. Therefore, two photovoltaic panels were installed on two floats at different heights and with different air intakes. One of the installed floats had an air intake while the other one had two. At a later stage, the air inlets of the two inlets panel was closed so that the two panels had the same number of air inlets. Regarding the BIPV installation, it was assed how the performance of a flexible thin film monocrystalline panel is affected by different formats (flat, concave and convex). This installation was mounted on a solar simulator, which led to a variation of the radiation depending on the number of spotlights turned on

Ploidy mosaicism and allele-specific gene expression differences in the allopolyploid Squalius alburnoides

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p><it>Squalius alburnoides </it>is an Iberian cyprinid fish resulting from an interspecific hybridisation between <it>Squalius pyrenaicus </it>females (P genome) and males of an unknown <it>Anaecypris hispanica-</it>like species (A genome). <it>S. alburnoides </it>is an allopolyploid hybridogenetic complex, which makes it a likely candidate for ploidy mosaicism occurrence, and is also an interesting model to address questions about gene expression regulation and genomic interactions. Indeed, it was previously suggested that in <it>S. alburnoides </it>triploids (PAA composition) silencing of one of the three alleles (mainly of the P allele) occurs. However, not a whole haplome is inactivated but a more or less random inactivation of alleles varying between individuals and even between organs of the same fish was seen.</p> <p>In this work we intended to correlate expression differences between individuals and/or between organs to the occurrence of mosaicism, evaluating if mosaics could explain previous observations and its impact on the assessment of gene expression patterns.</p> <p>Results</p> <p>To achieve our goal, we developed flow cytometry and cell sorting protocols for this system generating more homogenous cellular and transcriptional samples. With this set-up we detected 10% ploidy mosaicism within the <it>S. alburnoides </it>complex, and determined the allelic expression profiles of ubiquitously expressed genes (<it>rpl8</it>; <it>gapdh </it>and <it>β-actin</it>) in cells from liver and kidney of mosaic and non-mosaic individuals coming from different rivers over a wide geographic range.</p> <p>Conclusions</p> <p>Ploidy mosaicism occurs sporadically within the <it>S. alburnoides </it>complex, but in a frequency significantly higher than reported for other organisms. Moreover, we could exclude the influence of this phenomenon on the detection of variable allelic expression profiles of ubiquitously expressed genes (<it>rpl8</it>; <it>gapdh </it>and <it>β-actin</it>) in cells from liver and kidney of triploid individuals. Finally, we determined that the expression patterns previously detected only in a narrow geographic range is not a local restricted phenomenon but is pervasive in rivers where <it>S. pyrenaicus </it>is sympatric with <it>S. alburnoides</it>.</p> <p>We discuss mechanisms that could lead to the formation of mosaic <it>S. alburnoides </it>and hypothesise about a relaxation of the mechanisms that impose a tight control over mitosis and ploidy control in mixoploids.</p

Constituição e funcionamento dos departamentos curriculares : lógicas de acção organizacional estudo de caso

Tese de mestrado em Educação (Administração e Organização Escolar), apresentada à Universidade de Lisboa através da Faculdade de Ciências, 2005Com a implementação do Decreto-Lei 115 A/98, a constituição dos departamentos curriculares implicou mudanças na estrutura organizacional do estabelecimento de ensino, gerou processos complexos através da negociação entre grupos disciplinares portadores e defensores de diferentes projectos curriculares para a escola. O presente trabalho, sob a forma de estudo de caso de uma escola secundária, centra-se na identificação das lógicas e dinâmicas de acção que emergiram no processo de constituição dos departamentos curriculares, das que se geram no quotidiano dos departamentos e na articulação destes com o conselho pedagógico. A investigação foi desenvolvida no sentido de dar resposta às seguintes questões: Que lógicas de acção se manifestaram durante o processo de constituição dos departamentos curriculares? Como funcionam os departamentos curriculares enquanto configurações multidisciplinares? Como se articula a acção do conselho pedagógico com os departamentos curriculares? Qual a influência dos departamentos curriculares na vida organizacional da escola? Procedeu-se à recolha de dados através de fontes diversas e complementares: documentos produzidos entre 1998 e 2002, entrevistas semi-estruturadas aos coordenadores de departamento curricular e um questionário aos professores da escola. Os resultados revelaram diversas lógicas de acção organizacional: prevaleceu a lógica da identidade disciplinar e lógicas de consenso em contraste com lógicas de resistência à mudança organizacional. Os departamentos curriculares enquanto configurações multidisciplinares parecem funcionar como sistemas "debilmente articulados", balcanizados, potenciando práticas de isolamento profissional. Estas características reflectem-se na representatividade dos coordenadores de departamento, bem como na análise e debate pouco aprofundados sobre as questões pedagógicas no conselho pedagógico. O estudo revelou também o poder de influência dos departamentos curriculares que estiveram na origem curricular de escola, nas dinâmicas de acção actuais. Com base nos resultados deste estudo, recomenda-se a realização de estudos sobre o papel do coordenador de departamento, enquanto configurações multidisciplinares, pela importância que a liderança transformacional pode ter na melhoria da qualidade do ensino