Antibiotic-Induced Thrombocytopenia in the ICU: Case Report of a Diagnostic Challenge

Thrombocytopenia is the most common coagulation problem in ICU patients and is an independent predictor of death among critically ill patients. The differential diagnosis of acute thrombocytopenia in an ICU patient is extensive. After eliminating the more common etiologies, drug-induced thrombocytopenia (DITP) should be considered as an often overlooked yet easily reversible cause of thrombocytopenia. Due to a lack of distinguishing clinical features and numerous other possible etiologies, diagnosis is often complex, requiring a multi-step approach. We discuss the extensive workup of DITP in the context of this unusual case presentation

TUNEL – an efficient prognosis predictor of salivary malignancies

Biological markers are necessary for predicting prognosis of salivary malignancies and better understanding the pathogenesis of salivary cancer. We analysed terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated biotinylated deoxyuridine-triphosphate (dUTP)-biotin nick-end labelling (TUNEL), p53 and Ki67 expression in 66 patients with malignant salivary tumours by immonohistochemistry, and correlated the data with survival, disease-free survival, tumour grade, stage, and local and distant metastasis. TUNEL efficiently predicted poor prognosis in salivary malignancies. The 5-year (5Y) survival probability dropped significantly with the level of TUNEL staining (from 83% in negatively stained tumours to 57 and 24% in TUNEL positively stained levels 1 and 2, respectively), (P=0.042). Extensive Ki67 staining (in addition to TUNEL) reduced the 5Y-survival rate even further and addition of positively stained p53 dropped the 5Y-survival rate to 0. The correlation rates between TUNEL and Ki67 was 58% (P=0.0001), and between TUNEL and p53 it was 50% (P=0.035). Concurrently, TUNEL correlated with metastasis, extracapsular spread, grade and stage. The correlation between TUNEL, p53 and Ki67 staining and survival probabilities, and the pathological grade, stage and metastasis spread of salivary malignancies makes this a highly effective tool in patient follow-up and prognosis

Aspects théoriques et pratiques de la quantification des classes lipidiques par usage des détecteurs universels et de la spectrométrie de masse

The lipidome means the lipid subfraction of a metabolome, of a cell, a tissue or an organism. Lipidomics represents a particular field of investigation because of the functional and metabolic specificities of lipids as well as their physico-chemical properties. Lipidomics analysis represents a major change of scale with respect to lipid analysis as practiced conventionally. The aim of this work is to reach across the lipid molecular species in terms of identification and quantification in order to describe all the perturbations of a metabolic network related to a physiological or pathological state. The identification of the classes and the specie is based mainly on the use of liquid chromatography coupled to mass spectrometry. Quantification may use mass spectrometry when the specificity and low detection limits are required or the use of "universal" detectors that are nebulized detectors:evaporative detector light scattering (ELSD) or charged aerosol detector (CAD-Corona®) when the aim is to quantify the total lipid classes.Le lipidome désigne la sous-fraction lipidique du métabolome d’une cellule, d’un tissu ou d’un organisme. Cependant, bien qu’appartenant au cadre général de la métabolomique, la lipidomique représente un champ d’investigation particulier en raison des spécificités fonctionnelles et métaboliques des lipides de même que de leurs propriétés physico-chimiques. L’analyse lipidomique représente un changement majeur d’échelle par rapport à l’analyse des lipides telle que pratiquée classiquement. L’objectif est ici d’atteindre l’échelle de l’espèce moléculaire lipidique en termes d’identification et de quantification afin de décrire l’ensemble des perturbations d’un réseau métabolique liées à un état physiologique ou pathologique. L’identification des classes et espèces repose sur principalement sur l’utilisation du couplage de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. La quantification peut faire appel à la spectrométrie de masse quand la spécificité et des faibles limites de détection sont requises ou à l’utilisation de détecteurs « universels » ou détecteurs par nébulisation que sont le détecteur évaporatif à diffusion de la lumière (DEDL) ou le détecteur d’aérosol chargé (Corona®-CAD) quand l’objectif est de quantifier l’ensemble de la classe lipidique

Theoretical and practical aspects of the quantification of lipid classes by use of universal detectors and mass spectrometry

Le lipidome désigne la sous-fraction lipidique du métabolome d’une cellule, d’un tissu ou d’un organisme. Cependant, bien qu’appartenant au cadre général de la métabolomique, la lipidomique représente un champ d’investigation particulier en raison des spécificités fonctionnelles et métaboliques des lipides de même que de leurs propriétés physico-chimiques. L’analyse lipidomique représente un changement majeur d’échelle par rapport à l’analyse des lipides telle que pratiquée classiquement. L’objectif est ici d’atteindre l’échelle de l’espèce moléculaire lipidique en termes d’identification et de quantification afin de décrire l’ensemble des perturbations d’un réseau métabolique liées à un état physiologique ou pathologique. L’identification des classes et espèces repose sur principalement sur l’utilisation du couplage de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. La quantification peut faire appel à la spectrométrie de masse quand la spécificité et des faibles limites de détection sont requises ou à l’utilisation de détecteurs « universels » ou détecteurs par nébulisation que sont le détecteur évaporatif à diffusion de la lumière (DEDL) ou le détecteur d’aérosol chargé (Corona®-CAD) quand l’objectif est de quantifier l’ensemble de la classe lipidique.The lipidome means the lipid subfraction of a metabolome, of a cell, a tissue or an organism. Lipidomics represents a particular field of investigation because of the functional and metabolic specificities of lipids as well as their physico-chemical properties. Lipidomics analysis represents a major change of scale with respect to lipid analysis as practiced conventionally. The aim of this work is to reach across the lipid molecular species in terms of identification and quantification in order to describe all the perturbations of a metabolic network related to a physiological or pathological state. The identification of the classes and the specie is based mainly on the use of liquid chromatography coupled to mass spectrometry. Quantification may use mass spectrometry when the specificity and low detection limits are required or the use of "universal" detectors that are nebulized detectors:evaporative detector light scattering (ELSD) or charged aerosol detector (CAD-Corona®) when the aim is to quantify the total lipid classes

Evaluation of oxidized phospholipids analysis by LC-MS/MS

Phospholipids (PLs) represent a class of metabolites of interest for evaluating the relationship between diet and the development of several metabolic diseases. Given that PLs are rich in unsaturated fatty acids, they can be oxidized. Because of their structure and reactivity, oxidized phospholipids (PLs-Ox) are increasingly recognized as markers of oxidative stress and of various diseases associated with inflammation. Therefore, there is a growing interest in studying PLs-Ox in lipidomics. Because of their limited commercial availability, very little information is currently available in databases to identify these molecules. The aim of this study is to acquire new knowledge about PLs-Ox in order to propose an analytical strategy for their analyses. For this purpose, a synthesis method of PLs-Ox, in auto-oxidation, has been developed and applied on phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine molecular species with various chain lengths, degree, and position of unsaturations. An analysis method based on mass (MS) and tandem mass spectrometry coupled to electrospray ionization was then developed and enabled the identification of a great diversity of long- and short-chain oxidation products. Formation kinetics of oxidation products was evaluated. Results showed that the formation of oxidized compounds was largely influenced by the degree of unsaturation on fatty acid chains. Oxidation time promotes the formation of some biologically important oxidation products. Coupling the MS method with liquid chromatography in flow injection analysis mode enabled the development of a full analytical strategy. Structural analysis of PLs-Ox allowed the enrichment of databases with important information to identify these molecules in biological matrices

A monophasic extraction for simultaneous analysis of polar and non-polar lipids in brain sample by liquid chromatography – mass spectrometry

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Analyse des phospholipides oxydés par LC (ESI) -MSMS

Présentation flash (F10) et Présentation de poster (P10) : Analyse des phospholipides oxydés par LC(ESI)-MSMS : une approche lipidomique Session Développements AnalytiquesLes phospholipides (PLs) sont des molécules biologiques complexes, de structures très variées et représentent une classe de métabolites d’intérêt pour l’étude des relations entre l’alimentation et le développement des maladies métaboliques. Cette classe de composés peut donner lieu à la formation d’un grand nombre de produits d’oxydation. Ainsi, les phospholipides oxydés (PLs-Ox) sont de plus en plus reconnus non seulement comme des marqueurs de stress oxydant, mais aussi des marqueurs de différentes pathologies associées à l’inflammation, telles que l’athérosclérose et le diabète. Cependant, très peu d’informations sont actuellement disponibles dans les bases de données pour identifier ces molécules, du fait de leur disponibilité commerciale limitée.L’objectif de ce travail était d’acquérir des nouvelles connaissances sur les PLs-Ox afin de proposer une stratégie analytique pour leur analyse. Notre approche lipidomique s’est basée sur une méthode de profilage par LC-MS/MS d’un extrait de lipides totaux plasmatiques, associée à un workflow d’aide à l’identification des PLs implémenté dans la plateforme web Galaxy W4M (http://workflow4metabolomics.org).Au cours de ce travail, une méthode de synthèse des PLs-Ox a tout d’abord été mise en place à partir des Phosphatidylcholines (PCs) ayant des longueurs de chaines différentes, des degrés et une position des insaturations différentes.Une méthode d’analyse par spectrométrie de masse (Qtrap 5500 Sciex) équipé avec une source d’ionisation electrospray a ensuite été développée pour caractériser des produits d’oxydation. Un couplage avec la chromatographie liquide par Injection en Flux Continu (FIA) a permis la mise au point de la méthode LC-MS pour pouvoir, par la suite, réaliser la séparation chromatographique des formes oxydés. La cinétique de formation des produits d’auto-oxydations a été étudiée.Les premiers résultats obtenus montrent une grande diversité des produits d’oxydation à chaînes longues et/ou à chaînes courtes raccourcies. Il a été observé que la formation des produits d’oxydation était dépendante de la structure des PLs, le rapport de formes oxydées variant au cours du temps.Ces résultats permettent d’envisager la mise en place d’une stratégie d’analyse lipidomique de ces composés, et l’enrichissement des bases de données existante

Analysis of gangliosides in biological samples by hydrophilic interaction liquid chromatography with electrospray ionization tandem mass spectrometry

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Rapid sample preparation for ganglioside analysis by liquid chromatography mass spectrometry

Indexation en cours.International audienceGangliosides (GG) are glycosphingolipids, composed of a ceramide moiety (fatty acid and long chain base) linked to an oligosaccharide chain containing one (or more) molecule of sialic acid. After lipid extraction from biological matrices, quantification of GG by liquid chromatography coupled to electrospray ionization mass spectrometry (LC-ESI/MS) can be impacted by ion suppression effects due to co-elution with more abundant lipids in the matrix. In this study, a simple, rapid and efficient method to purify GG from biological samples by Phree columns is proposed. This approach proved to be useful in eliminating phospholipids (PL) from the matrix and thus increasing the signal of GG classes and molecular species in rat brain samples during LC-ESI/MS analysis

Quantification of Lipids: Model, Reality, and Compromise.

Revue non répertoriée dans le JCR.International audienceLipids are key molecules in various biological processes, thus their quantification is a crucial point in a lot of studies and should be taken into account in lipidomics development. This family is complex and presents a very large diversity of structures, so analyzing and quantifying all this diversity is a real challenge. In this review, the different techniques to analyze lipids will be presented: from nuclear magnetic resonance (NMR) to mass spectrometry (with and without chromatography) including universal detectors. First of all, the state of the art of quantification, with the definitions of terms and protocol standardization, will be presented with quantitative lipidomics in mind, and then technical considerations and limitations of analytical chemistry's tools, such as NMR, mass spectrometry and universal detectors, will be discussed, particularly in terms of absolute quantification