Analyse des phospholipides oxydés par LC (ESI) -MSMS

Abstract

Présentation flash (F10) et Présentation de poster (P10) : Analyse des phospholipides oxydés par LC(ESI)-MSMS : une approche lipidomique Session Développements AnalytiquesLes phospholipides (PLs) sont des molécules biologiques complexes, de structures très variées et représentent une classe de métabolites d’intérêt pour l’étude des relations entre l’alimentation et le développement des maladies métaboliques. Cette classe de composés peut donner lieu à la formation d’un grand nombre de produits d’oxydation. Ainsi, les phospholipides oxydés (PLs-Ox) sont de plus en plus reconnus non seulement comme des marqueurs de stress oxydant, mais aussi des marqueurs de différentes pathologies associées à l’inflammation, telles que l’athérosclérose et le diabète. Cependant, très peu d’informations sont actuellement disponibles dans les bases de données pour identifier ces molécules, du fait de leur disponibilité commerciale limitée.L’objectif de ce travail était d’acquérir des nouvelles connaissances sur les PLs-Ox afin de proposer une stratégie analytique pour leur analyse. Notre approche lipidomique s’est basée sur une méthode de profilage par LC-MS/MS d’un extrait de lipides totaux plasmatiques, associée à un workflow d’aide à l’identification des PLs implémenté dans la plateforme web Galaxy W4M (http://workflow4metabolomics.org).Au cours de ce travail, une méthode de synthèse des PLs-Ox a tout d’abord été mise en place à partir des Phosphatidylcholines (PCs) ayant des longueurs de chaines différentes, des degrés et une position des insaturations différentes.Une méthode d’analyse par spectrométrie de masse (Qtrap 5500 Sciex) équipé avec une source d’ionisation electrospray a ensuite été développée pour caractériser des produits d’oxydation. Un couplage avec la chromatographie liquide par Injection en Flux Continu (FIA) a permis la mise au point de la méthode LC-MS pour pouvoir, par la suite, réaliser la séparation chromatographique des formes oxydés. La cinétique de formation des produits d’auto-oxydations a été étudiée.Les premiers résultats obtenus montrent une grande diversité des produits d’oxydation à chaînes longues et/ou à chaînes courtes raccourcies. Il a été observé que la formation des produits d’oxydation était dépendante de la structure des PLs, le rapport de formes oxydées variant au cours du temps.Ces résultats permettent d’envisager la mise en place d’une stratégie d’analyse lipidomique de ces composés, et l’enrichissement des bases de données existante