Exportação de mRNAs do núcleo para o Citoplasma : análise do papel da proteína sub2 em Trypanosoma cruzi e Toxoplasma gondii

Orientadora : Profa. Dra. Andréa Rodrigues ÁvilaCo-orientador : Prof. Dr.Stenio Perdigão FragosoTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 30/04/2014Inclui referênciasÁrea de concentração : Biologia celular e molecularResumo: A doença de Chagas e toxoplasmose são problemas de saúde pública no Brasil e entender com detalhes a biologia dos agentes causais, T. cruzi e T. gondii respectivamente, pode ser um ponto crucial para gerar informações relevantes voltadas para o desenvolvimento de tratamento efetivo no combate a estas doenças. No entanto, a busca de novos alvos para quimioterapia de algumas doenças parasitárias esbarra, por exemplo, na ausência de ferramentas que possibilitem o estudo da função de genes essenciais para a sobrevivência do organismo. Dentro desta problemática, o objetivo central deste estudo é a identificação de proteínas envolvidas no transporte nucleocitoplasmático de RNAs, mais especificamente a exportação de mRNAs, com a utilização de ferramentas de genética reversa para análise de proteínas essenciais envolvidas nestas vias em T. cruzi e T. gondii. Além disso, T. gondii tem sido o modelo de estudo escolhido por diversos grupos, uma vez que dispõe de várias ferramentas de genética reversa consideradas inviáveis ou laboriosas em outros parasitas (como Plasmodium ou Trypanosoma). A escolha do tema foi baseada em dois fatos principais: a) dentro do contexto de eventos moleculares essenciais, o transporte de RNA mensageiro (mRNA) ao local de tradução é uma etapa essencial e crucial na seleção de genes a serem expressos em uma célula eucariótica; b) escassez de publicações envolvendo diversos grupos de parasitas, demonstrando ser um tema da pesquisa básica em parasitologia que necessita ser explorado. Os dados gerados neste estudo permitiram identificar que a maioria das proteínas relacionadas com a exportação de mRNAs não são tão conservadas ao longo da filogenia de eucariotos, principalmente em relação aos protozoários que divergiram na base da árvore filogenética. A exceção encontrada foi Sub2/UAP56, uma proteína relacionada com exportação de mRNAs em fungos e humanos, respectivamente, que se encontra altamente conservada ao longo da filogenia de eucariotos. Em T. cruzi foi observado que TcSub2 é uma proteína nuclear, relacionada com alguns sítios de transcrição por RNA Polimerase II e essencial, não sendo possível obter o nocaute duplo do respectivo gene. Em T. brucei e T. gondii foi observado que a diminuição gradual das proteínas em questão, TbSub2 e TgUAP56 respectivamente, resulta em acúmulo de mRNAs poliadenilados nos núcleos afetando a exportação dos mRNAs e resultando em morte celular. A partir da observação da participação de proteínas ortólogas de Sub2 na exportação de mRNAs em parasitas, a outra parte deste estudo foi identificar proteínas associadas a TcSub2 para iniciar o entendimento sobre esta via bem como verificar a presença de proteínas específicas e provavelmente essenciais de parasitas para futuros estudos funcionais.Abstract: Chagas disease and toxoplasmosis are public health issues in Brazil and understanding in detail the biology of its causative agents, T. cruzi and T. gondii respectively, could generate relevant information to develop effective treatment(s) against these diseases. The search for new chemotherapy targets against parasitic disease faces a number of challenges as the lack of tools that enable the study of essential gene function in parasites. Taking this into consideration, the aim of this study was to develop reverse genetic tools to identify and analyse essential proteins in T. cruzi and T. gondii, in particular those involved in nucleocytoplasmic transport of RNAs, specifically in mRNA export. T. gondii has served as model organism because it has an ample wide repertoire of reverse genetic tools. However, transferring these tools to other parasites, i.e. Plasmodium or Trypanosoma, has not been a straightforward task. The hypothesis of this study was based on two main facts: a) the transport of mRNA to the site of translation, within the context of key molecular events, is an essential step in the selection of genes to be expressed in an eukaryotic cell and b) the lack of publications in this topic in parasites proving to be a subject of basic research in parasitology that needs to be explored. The data obtained in this study showed that most proteins related to the export of mRNAs are not well conserved throughout eukaryotic phylogeny, especially eukaryotes that diverged at the base of the phylogenetic tree, the parasites. An exception to this observation was Sub2/UAP56, a protein directly related to export of mRNAs in yeast and human respectively, which is highly conserved throughout eukaryotic phylogeny. In T. cruzi, TcSub2 is an essential nuclear protein, associated with a number of sites of RNA polymerase II transcription and, a double knockout of the gene is lethal. It has been observed in T. brucei and T. gondii that the knockdown of TbSub2 and TgUAP56 respectively, results in nuclear accumulation of polyadenylated mRNAs, effectively reducing mRNA export and leading to cell death. Extending these observations that highlight the important role of Sub2 orthologues in mRNA export, we aim to identify proteins partners of TcSub2 to better understand this pathway in T. cruzi and verify the presence of specific and likely essential proteins for future studies in this parasite

Intensificação do Trabalho e Qualidade de Vida no Trabalho: uma conciliação possível?

Este ensaio tem como objetivo contribuir para o debate sobre a possibilidade de concretização do conceito de qualidade de vida no trabalho (QVT) diante do processo de intensificação laboral que se verifica na contemporaneidade. Por meio de consulta a resultados de pesquisas que tratam dos efeitos do processo de intensificação laboral sobre os trabalhadores, este artigo revela que, embora as empresas busquem promover QVT por meio de políticas e práticas que visam melhorar a satisfação do trabalhador, os mecanismos de intensificação do trabalho que são adotados com vistas a aumentar a produtividade geram resultados na direção oposta àqueles desejados pelas políticas de QVT. Desta forma, conclui-se que se torna inviável garantir a qualidade vida no trabalho genuína diante do processo de intensificação labora ABSTRACT This essay aims to contribute to the debate about the possibility of achieving the concept of quality of work life (QWL) in face of the labor intensification process that is taking place in contemporary times. Through literature review of researches that deal with the effects of labor intensification on workers, this article reveals that, although companies seek to promote QWL through policies and practices aimed to improve worker satisfaction, the mechanisms of work intensification adopted to increase productivity generate results in the opposite direction to those desired by QWL policies. Thus, it is concluded that becomes unfeasible to guarantee genuine quality of work life in face of the labor intensification process.   Keywords: Work Intensification, Quality of Work Life, Work-family Conflict

Identificação de proteínas envolvidas na exportação de RNA mensageiro do núcleo para o citoplasma em trypanosoma cruzi : caracterização funcional de TcSub2

Orientador : Andréa Rodrigues ÁvilaCo-orientador : Federico Guillermo HoffmanDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 30/03/2010Inclui bibliografiaÁrea de concentração : Biologia celular e molecularResumo: Diferentes espécies de RNAs são exportadas do núcleo por vias especializadas em eucariotos. Nos eucariotos superiores a exportação nuclear da maioria das espécies de RNAs, como microRNAs (miRNAs), rRNAs, pequenos RNAs nucleares RNAs (snRNAs) e RNA transportadores (tRNAs), seguem o modelo de transporte via exportinas e RanGTP, onde exportinas específicas estão envolvidas com diferentes vias de exportação. No entanto, a exportação nuclear da maioria dos RNAs mensageiros (mRNAs) não segue a via dependente de RanGTP. A maquinaria de exportação de mRNAs está altamente integrada com o processamento de mRNA e inclui um conjunto específico de adaptadores de transporte, proteínas ligadoras de RNAs (RBPs), RNA helicases e proteínas associadas ao complexo de poro nuclear (NPC). Ainda não se sabe se as vias de exportação de RNAs estão conservadas em eucariotos pertencentes às linhagens basais e a pergunta de como o complexo de exportação de RNAs era no eucarioto ancestral (LECA) ainda permanece em aberto. Um dos nossos objetivos foi reconstruir a história evolutiva de diferentes vias de exportação de RNAs em eucariotos. Para isso, nós investigamos o genoma de eucariotos para a busca de proteínas homólogas envolvidas na exportação de RNAs em metazoários e fungos, utilizando como sementes de busca as proteínas de humanos e fungos funcionalmente aracterizadas. Os resultados da genômica comparativa indicaram que muitas das proteínas-chave envolvidas em diferentes vias de exportação de RNAs dependente de RanGTP estão conservadas em eucariotos basais e então nós inferimos que ortólogos destas proteínas já estavam presentes em LECA. A exportação de mRNA é a mais complexa eu eucariotos e a menos conservada entre essas linhagens basais examinadas neste estudo. Isto sugere que a via de exportação de mRNA em eucariotos basais é diferente do que é observado em eucariotos superiores. Para entender melhor a exportação de mRNAs em linhagens basais de eucariotos, decidimos investigar a função de algumas proteínas altamente conservadas em tripanossomatídeos, agentes causais de doenças humanas fatais. A proteína mais conservada ao longo da filogenia de eucariotos, determinada pela nossa análise, foi Sub2/UAP56, um componente do complexo multiprotéico que conecta transcrição com exportação de mRNA; TREX (Transcription/Export). Ela é uma proteína nuclear em Trypanosoma brucei e Trypanosoma cruzi. Análises de imunocitoquímica ultraestrutural mostraram que a proteína Sub2 de T. cruzi (TcSub2) está localizada em sítios dispersos no núcleo, com ausência de marcação no nucléolo, e na interface entre as áreas de cromatina densa e frouxa, indicando a associação com sítios de transcrição. Este resultado foi analisado por ensaios de ncorporação de BrUTP. Observamos que esta proteína colocaliza com sítios de transcrição por RNA Polimerase II, corroborando com os resultados de microscopia eletrônica. Essas evidências sugerem ortemente que TcSub2 participa do metabolismo nuclear de mRNA. Nós estamos atualmente investigando o papel de Sub2 de T. cruzi e T. brucei para elucidar se está de fato relacionada com a exportação de mRNAs em tripanossomatídeos. Além disso, o nocaute duplo do gene de TcSub2 é letal em T. cruzi e ensaios de interferência de RNA (RNAi) do gene TbSub2 altera o crescimento celular de T. brucei, indicando que é uma proteína essencial em ripanossomatídeos, similar em outros eucariotos.Abstract: Different RNA species are exported from the nucleus by specialized pathways in eukaryotes. In "higher" eukaryotes, the nuclear export of most RNA species, such as microRNAs (miRNAs), rRNAs, small uclear RNAs (snRNAs), and transfer RNAs (tRNAs), has been shown to follow the RanGTP-exportin model of transport, and specific exportins are involved with the different export pathways. However, nuclear export of most mRNAs does not follow the RanGTP-exportin pathway. The mRNA export machinery is highly integrated with mRNA processing, and it includes a different set of nuclear transport adaptors plus other mRNA binding proteins, RNA helicases, and nuclear pore complex (NPC) associated proteins. It is not known whether the RNA export pathways are conserved in deeply diverging members of the eukaryotic lineage, and the question of how complex the nucleocytoplasmic export of RNA was in the last eukaryotic common ancestor (LECA) remains open. One of our objectives was to reconstruct the evolutionary history of the different RNA export pathways across eukaryotes. To do so, we screened an array of eukaryotic genomes for the presence of homologs of the proteins involved in RNA export in metazoa and fungi, using human and yeast proteins as queries. Results from our genomic comparisons indicate that several of the key proteins involved in the different Randependent RNA export pathways are conserved across most eukaryotic lineages, and thus we infer that orthologs of them were highly likely to have been already present in LECA. The mRNA export pathway is the most complex and the least conserved among those xamined in this study, suggesting that mRNA export among deeply diverging eukaryotic lineages is different from what is observed in extant "higher" eukaryotes. To better understand mRNA export in deeply iverging eukaryote lineages, we decided to investigate the function of some well conserved proteins in trypanosomatid protozoa, causative agents of deadly human diseases. The most conserved protein across all eukaryotes as determined by our analysis was Sub2/UAP56, a component of the multiprotein complex that connects transcription with mRNA export, TREX (Transcription/Export). It is a nuclear protein in Trypanosoma brucei and Trypanosoma cruzi. Ultrastructural immunocytochemistry an lysis showed that T. cruzi Sub2 is localized in dispersed foci all over the nuclei, excluding nucleolus, and at the interface between dense and non-dense chromatin areas indicating its association to transcription sites. This result was further analyzed by BrUTP incorporation assays. We observed that this protein is co-localized with RNA pol II transcription sites corroborating our results. Taken together, these evidences strongly suggest that TcSub2 participates in nuclear mRNA metabolism. We are currently investigating the role of T. cruzi and T. brucei Sub2 to elucidate if they are in fact components of mRNA export in trypanosomatids. Besides, the double knockout of the TcSub2 gene is lethal in T. cruzi and RNA interference assays (RNAi) of TbSub2 causes a growth defect in T. brucei, indicating that it is an essential protein for trypanosomes, similar to other eukaryotes

Escala de Insatisfação e Checagem Corporal nos Esportes: Uma Nova Medida para Atletas

After performing searches in the main scientific articles database, no specific psychometric scale was found that analyzes body dissatisfaction and body checking to athletes. The aim of the study was to analyze the psychometric properties of the Dissatisfaction and Body Checking in Sports Scale (DBCS) - male and female versions - in Brazilian athletes. The researchers built the DBCS. Participants were 1,197 athletes. The exploratory factor analysis showed a factor structure that explained more than 40% of the variance in both versions of the DBCS. The results showed a statistically significant relationship between the DBCS - male and female versions - and questionnaires used for concurrent validity (p ; .05). The findings indicated difference in DBCS scores according to body fat (p = .01). The results showed a positive relationship between DBCS and Eating Attitudes Test scores (p = .001). It was concluded that the DBCS - male and female versions - demonstrated satisfactory concurrent, discriminant, predictive validity and reproducibility.Tras búsquedas en las principales bases de datos de artículos científicos, no fue encontrada escala psicométrica para evaluar la insatisfacción corporal y el chequeo corporal en los atletas. El objetivo fue analizar las propiedades psicométricas de la Escala de Insatisfacción y Chequeo Corporal en los Deportes (EICCE) en atletas brasileños. La EICCE fue construido por los investigadores. Participaron 1.197 atletas de ambos sexos. Los resultados demostraron que la estructura factorial explica más del 40% de la varianza de ambas versiones de la EICCE. Los resultados indicaron una relación estadísticamente significativa entre la EICCE y cuestionarios utilizados para la validez concurrente (p ; 0,05). Los hallazgos demostraron diferencia en las puntuaciones del EICCE en función de la adiposidad corporal (p = 0,01). Los resultados mostraron una relación positiva entre EICCE y las puntuaciones del Eating Attitudes Test (p = 0,001). Se concluyó que ambas versiones de la EICCE demostraron validez concurrente, discriminante, predictivo y reproducibilidad satisfactorias.Após realizar buscas nas principais bases de dados de artigos científicos, não foi encontrada escala psicométrica específica que avalie insatisfação e checagem corporal em atletas. O objetivo foi analisar as propriedades psicométricas das versões feminina e masculina da Escala de Insatisfação e Checagem Corporal nos Esportes (EICCE) em atletas brasileiros. A EICCE foi construída pelos próprios pesquisadores. Participaram 1.197 atletas de ambos os sexos. Os resultados demonstraram estrutura fatorial que explicou mais de 40% da variância de ambas as versões da EICCE. Os achados indicaram relação estatisticamente significativa entre as versões da EICCE e os questionários utilizados para a validade concorrente (p ; 0,05). Os achados demonstraram diferença dos escores da EICCE em função da adiposidade corporal (p = 0,01). Os resultados apontaram relação positiva entre a EICCE e os escores do Eating Attitudes Test (p = 0,001). Concluiu-se que as versões feminina e masculina da EICCE demonstraram validade concorrente, discriminante, preditiva e reprodutibilidade satisfatórias

Do plural ao singular: condições de gênero e carreira científica na área de engenharias da região Norte

O presente artigo tem como objetivo analisar a presença de mulheres no topo da carreira científica. Reflete-se sobre a participação das mulheres nas diversas etapas da construção de uma carreira científica, especialmente na área de Engenharias das Universidades Federais da Região Norte, entre os anos de 2008 e 2012. Realizou-se a coleta de dados quantitativos via internet, principalmente por meio do e-SIC – Sistema Eletrônico do Serviço de Informação ao Cidadão. Os dados foram analisados e interpretados sob a perspectiva de gênero e mostram que o número de mulheres cai ao longo da trajetória científica, resultando em uma pequena representação feminina entre os bolsistas de produtividade, principalmente nas áreas consideradas masculinas. Os dados possibilitaram verificar que há disparidades regionais quanto a investimentos no sistema de pós-graduação e que isso pode ocasionar disparidades também em relação à participação das mulheres na ciência

Efeitos de uma sessão de treinamento resistido sobre os comportamentos de checagem corporal em adultos do sexo masculino

O objetivo foi analisar os efeitos de uma sessão de treinamento com pesos sobre a checagem corporal de adultos do sexo masculino. Participaram 50 voluntários com idade entre 18 e 30 anos. Foi realizada uma única sessão de treinamento com pesos e utilizou-se o método de treino denominado “Hipertrofia”. Os comportamentos de checagem corporal foram avaliados pelo Male Body Checking Questionnaire (MBCQ). Os sujeitos responderam o MBCQ antes (T1), logo após (T2), 24h (T3), 48h (T4) e 72h (T5) após o término da sessão de treinamento com pesos. Os achados não demonstraram diferença na subescala “comparação com outras pessoas” (p=0,32). Todavia, foram evidenciadas diferenças estatisticamente significativas para as subescalas “uso de superfície reflexiva (p=0,03), “checagem por meio de pinçamento” (p=0,04) e “avaliação por outras pessoas” (p=0,02). Concluiu-se que uma única sessão de treinamento com pesos foi capaz de alterar positivamente alguns comportamentos de checagem corporal de adultos do sexo masculino.The objective of this study is to analyse the effects of a session of resistance training on body checking in male adults. Participants included 50 volunteers aged between 18 and 30 years. A single session of resistance training was performed, and we used hypertrophy as our training method. Body checking behaviors were assessed using the Male Body Checking Questionnaire (MBCQ). Participants answered the MBCQ before (T1), immediately after (T2), and 24 h (T3), 48 h (T4) and 72 h (T5) after the resistance training session. The findings showed no difference in the subscale "compared to other people" (p=0.32). However, statistically significant differences were found for the subscales “use of reflective surface” (p=0.03), "check by clamping" (p=0.04) and "evaluation by others" (p=0.02). We concluded that a single session of resistance training was able to positively change some body checking behaviors of male adults

Nutritional Status Of Schoolchildren Aged 7-10 Years Enrolled In Public And Private Schools Of Cascavel, Paraná, Brazil

Analisar a prevalência de desnutrição, sobrepeso e obesidade em escolares de sete a 10 anos em estudantes de escolas públicas e privadas de Cascavel, Paraná, Brasil. Informações demográficas (sexo, idade e rede de ensino) e medidas antropométricas (massa corporal e estatura) foram obtidas de 2.180 escolares (1.693 de escolas públicas e 487 de privadas). Os valores do Escore-Z do índice de massa corporal foram adotados para a determinação do estado nutricional. As taxas de prevalência de desnutrição, sobrepeso e obesidade foram na ordem de 6,1%, 9,8% e 11,1%, respectivamente. As meninas apresentaram mais chances (15,9 vezes) para o desenvolvimento de desnutrição do que os meninos. Por outro lado, crianças de 10 anos apresentaram mais chances (1,53 vezes) para desenvolverem sobrepeso em relação aos seus pares de sete anos. Adicionalmente, crianças de escolas privadas apresentaram mais chances para o desenvolvimento de sobrepeso (1,63 vezes) ou obesidade (2,88 vezes), em relação aos seus respectivos pares de escolas públicas. As taxas de prevalência de desnutrição e excesso de peso reveladas neste estudo foram elevadas, com as meninas apresentando mais chances para tornarem-se desnutridas do que os meninos. Em contrapartida, tanto o sobrepeso quanto a obesidade foram fenômenos mais frequentemente observados aos 10 anos, em escolares de ambos os sexos e naqueles matriculados na rede privada de ensino.29569970

Efeitos do polimento na potência aeróbia máxima em atletas de indoor soccer

The aim of this study was to analyze the effect of tapering on maximum aerobic power (VO2max) in young male indoor soccer athletes. Participants were 78 athletes aged 12-17 years randomly divided into experimental (EG) and control group (CG). Both groups did the same training planning until the last three weeks (tapering phase). Only EG performed tapering. Tapering lasted three weeks adopting the linear tapering method. VO2max was estimated by Yo-Yo intermittent Recovery Level 1 early in the season and in the last week of each. Univariate analysis of covariance (ANCOVA) was conducted for repeated measures to compare VO2max among groups according to mesocycle. The results presented effect of time (F (4.74)= 42.02, p = 0.01) and group (F (2.76) = 35.87, p = 0.01). Overall, the findings of this study suggest that the implementation of the tapering strategy in the last weeks of training is more efficient to improve VO2max than the constant maintenance of loads.O objetivo foi analisar o efeito do polimento na potência aeróbia máxima (VO2max) em jovens atletas de futsal do sexo masculino. Participaram 78 atletas com idade entre 12 e 17 anos, divididos aleatoriamente em grupo experimental (GE) e controle (GC). Ambos os grupos fizeram a mesma planificação de treinamento até as três últimas semanas (fase do polimento). Somente o GE realizou o polimento. O polimento teve duração de 3 semanas, adotando-se o método de polimento linear. O VO2max foi estimado pelo Yo-Yo Intermitent Recovery Level 1 no início da temporada e na última semana da cada. Conduziu-se a análise univariada de covariância (ANCOVA) de medidas repetidas para comparar o VO2máx entre os grupos em função do mesociclo. Os resultados apresentaram efeitos de tempo (F(4, 74) = 42,02, p = 0,01) e grupo (F(2, 76) = 35,87, p = 0,01). De maneira geral, os achados do presente estudo sugerem que a implantação da estratégia de polimento nas últimas semanas de treino é mais eficiente para a mellhora do VO2max do que a manutenção constante das cargas