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Efecto inmunomodulador del galactomanano obtenido de caesalpinia spinosa y de la fracción acuosa y orgánica de petiveria alliacea sobre células dendríticas humanas derivadas de monocitos
Los polisacáridos obtenidos de plantas tienen un potencial interesante como inmunomoduladores ya que pueden inducir respuesta antitumoral, debido principalmente a su complejidad molecular y a su baja toxicidad. La activación de células dendríticas (CDs) puede mejorar la respuesta antitumoral que usualmente se encuentra disminuida en los pacientes con cáncer, y en este sentido los adyuvantes constituyen una posibilidad en la inducción de esta activación. En este trabajo nosotros investigamos la actividad inmunomoduladora del Galactomanano (GLM), sobre CDs derivadas de monocitos humanos (CDDM). Las CDDM fueron estimuladas con el GLM obtenido de Caesalpinia. spinosa y los cambios fenotípicos así como la actividad funcional de estas células fue evaluada por citometria de flujo y PCR en tiempo real. Adicionalmente, la actividad fagocitica, así como la inducción de aloestimulacion de linfocitos T de las MDDC fue determinada utilizando partículas de E-coli pHrodo y tinción con carboxyfluorescein succtnimidyl ester (CFSE), respectivamente. El GLM induce la maduración fenotipica de las CDDM incrementando la expresión de CD83, CD86, CD206, y HLA-DR. Los experimentos funcionales tambiélfc mostraron que estas células pierden su capacidad fagocitica pero adicionalmente aumentan su capacidad de presentar aloantigenos. Finalmente, los resultados obtenidos muestran como el GLM también tiene la capacidad de incrementar a nivel de genes y proteínas citosinas proinflamatorias como IL-ip, IL-6, IL-8, IL- 12p70, y TNF-a. Estos datos demuestran que el Galactomanano obtenido de Caesalpinia spinosa favorece la activación efectiva de las CDDM. Por lo tanto, la actividad adyuvante de este polisacárido podría tener aplicaciones terapéuticas a nivel clínico donde se necesite inducir una respuesta robusta del sistema inmune.Polysaccharides derived from plants have potential as immunomodulatory interesting because they can induce antitumor response, mainly due to their molecular complexity and low toxicity. The activation of dendritic cells (DCs) can enhance the antitumor response is usually decreased in patients with cancer, and in this sense are a potential adjuvant in the induction of this activation. In this paper we investigate the immunomodulatory activity of galactomannan (GLM), on human monocyte-derived CDs (MDAC). The CDDM were stimulated with the GLM Caesalpinia obtained. spinosa and phenotypic changes as well as the functional activity of these cells was evaluated by flow cytometry and real time PCR. Additionally, the phagocytic activity and the induction of T cell allostimulation the MDDC was determined using E-coli particles and staining pHrodo succtnimidyl carboxyfluorescein ester (CFSE) respectively. The GLM induce phenotypic maturation CDDM increasing expression of CD83, CD86, CD206 and HLA-DR. Experiments showed that functional tambiélfc these cells lose their phagocytic capacity but further increase its capacity to present alloantigens. Finally, the results show how the GLM also has the ability to increase gene and protein level of proinflammatory cytokines such as IL-ip, IL-6, IL-8, IL-12p70 and TNF-a. These data demonstrate that the galactomannan obtained Caesalpinia spinosa effectively promotes activation of CDDM. Therefore, the adjuvant activity of the polysaccharide may have therapeutic applications in clinical where required to induce a strong immune response.Doctor en Ciencias BiológicasDoctorad
Evaluation of the Anti-Tumoural and Immune Modulatory Activity of Natural Products by Flow Cytometry
Expresión de marcadores en células dendríticas de pacientes chagásicos crónicos estimuladas con la proteína KMP-11 y el péptido K1 de Trypanosoma cruzi
Introduction. The kinetoplastid membrane protein 11, KMP-11, from Trypanosoma cruzi elicits humoral and cellular immunity in mice that protects them from infection against further parasite challenge.Objective. To characterize the expression of surface markers on dendritic cells from chronic chagasic patients and healthy individuals, in response to the KMP-11 protein from Trypanosoma cruzi and its N-terminal peptide K1.Materials and methods. Monocyte-derived dendritic cells from seven chronic chagasic patients and seven healthy individuals were stimulated with the KMP-11 protein and the K1 peptide. Seven days after culturing, the CD83, CD86, and HLA-DR membrane expression as well as the production of cytokines were evaluated by flow cytometry.Results. Neither KMP-11 protein nor K1 peptide elicited the expression of the maturation marker CD83 on dendritic cells of patients or healthy control individuals. Dendritic cells from chronic chagasic patients exposed to K1 and LPS at the same time presented a significant reduction in CD86 and CD83 membrane expression in contrast to the cells exposed to LPS alone, whereas dendritic cells from healthy individuals did not show this behavior. The secretion of interleukin-12 was decreased in the cultures of dendritic cells from chronic chagasic patients but not from healthy controls.Conclusions. KMP-11 protein does not affect the maturation of dendritic cells, but in the presence of LPS the K1 peptide leads to a decreased expression of CD86 and CD83 as well as interleukin-12 production, This phenomenon may be associated with an impaired T cell stimulation.Introducción. La proteína de membrana 11 de kinetoplástidos, KMP-11, de Trypanosoma cruzi induce inmunidad humoral y celular en ratones capaz de conferir protección frente al reto con el parásito.Objetivo. Determinar la expresión de marcadores de maduración en las células dendríticas de pacientes chagásicos crónicos e individuos sanos, estimuladas con la proteína KMP-11 y su péptido amino terminal K1.Materiales y métodos. Monocitos de siete pacientes chagásicos y siete individuos sanos fueron diferenciados a células dendríticas y estimulados con la proteína KMP-11 y el péptido K1, determinándose por citometría de flujo y tras 7 días de cultivo, la expresión de los marcadores de superficie CD83, CD86 y HLA-DR y la producción de citocinas.Resultados. La proteína KMP-11 y el péptido K1 no indujeron la expresión del marcador de maduración CD83 en las células dendríticas de pacientes y controles. La exposición de células dendríticas de pacientes chagásicos de forma simultánea al péptido K1 y LPS mostró una disminución de la expresión de CD86 y CD83 con relación a la estimulación con LPS sólo, a diferencia de las células de controles sanos. También se evidenció una disminución en la producción de interleucina-12 en las células dendríticas de pacientes en relación a las de los controles.Conclusiones. La proteína KMP-11 no tiene un efecto significativo sobre la maduración de las células dendríticas, pero su péptido K1 en presencia de LPS induce una disminución en la expresión de CD86 y CD83 y en la producción de la interleucina-12 que podría modular la respuesta inmune in vivo y en particular la estimulación de los linfocitos T
Evaluación de extractos vegetales para manejo de quemaduras cáusticas: irritación/corrosión dérmica aguda. Bogotá/2018
Introducción: Aunque las quemaduras cáusticas representan un bajo porcentaje de las quemaduras, dadas las complicaciones que asocian, son un problema de salud pública que exige nuevas opciones terapéuticas como son el uso de productos derivados de plantas, entre ellos, Caléndula offinalis, Aloe vera y Cannabis sativa, cuyo uso está condicionado, inicialmente a pruebas como la evaluación de su efecto irritativo/corrosivo agudo en piel. Materiales y métodos: Estudio experimental en animales, aleatorizado. El material vegetal se obtuvo del Jardín Medicinal Jorge Piñeros Corpas; los aceites y extractos de las plantas se obtuvieron por métodos clásicos de extracción; la base de excipientes fue provista por el Laboratorio de Farmacología Vegetal (LABFARVE). Se emplearon 8 Ratas wistar macho alojadas bajo condiciones controladas y parámetros de ética y bienestar animal. La prueba de irritación/corrosión dérmica aguda se hizo siguiendo la norma OECD 404, tras previa anestesia de los animales y siguiendo los criterios de dolor y punto final. Resultados: De Caléndula officinalis se obtuvieron dos aceites esenciales y tres extractos; el gel de Aloe vera y un extracto de Cannabis sativa. Ninguno de los extractos generó escara, eritema o edema en los animales, siendo negativa la prueba de irritación/corrosión aguda en piel. Discusión: Los resultados obtenidos desde esta investigación básica en medicina traslacional, brindan evidencia que complementa la información reportada en la literatura acerca del uso tradicional y los estudios in vitro e in vivo de estas plantas para el manejo de diversas enfermedades. La ausencia de efecto irritativo o corrosivo en piel es coherente con el conocimiento del tipo de metabolitos secundarios activos que se han identificado en ellas con actividad antiinflamatoria, antioxidante, antimicrobiana y cicatrizante. Los resultados aseguran su inocuidad química al contemplarlas para investigar su potencial uso terapéutico en lesiones dérmicas, tipo quemaduras cáusticas, garantizando su seguridad
El flavonoide cb2 obtenido de chromolaena bullata induce activación de células dendríticas humanas
CB2, al igual que los otros flavonoides obtenidos de Chromolaena bullata, fue evaluado sobre células dendríticas y células tumorales humanas, para determinar su actividad antitumoral o inmunorreguladora. Sobre las células tumorales (A375 melanoma humano) induce una depolarización temprana de la membrana mitocondrial, la cual es reversible y no conduce a la muerte. En contraste, el tratamiento de células dendríticas humanas obtenidas a partir de monocitos de sangre periférica cultivados en presencia de factor de crecimiento de granulocitos y monocitos (GM -CSF), e interleucina 4 (IL-4) durante 5 dias; induce activación de estas células. Con el fin de descartar la presencia de Lipopolisacárido (LPS) en la preparación del flavonoide, el cual puede ser el causante de la activación, evaluamos la presencia de este LPS con el test del Lisado de amebocitos de Limulus (LAL) y solo se utilizaron las muestras con menos de menor 1.0 unidad de endotoxina por 20 ug de proteina. Con estas precauciones, observamos claramente que el CB2 aumenta la expresión de moléculas coestimulatorias como CD83 y CD86 necesarias en la presentación antigénica. La incubación de las células con el CB2 y Polimixina B, la cual captura el LPS no disminuye la expresión de estos marcadores, corroborando el papel activador de este flavonoide sobre las células dendríticas humanas
El flavonoide cb2 obtenido de chromolaena bullata induce activación de células dendríticas humanas
CB2, al igual que los otros flavonoides obtenidos de Chromolaena bullata, fue evaluado sobre células dendríticas y células tumorales humanas, para determinar su actividad antitumoral o inmunorreguladora. Sobre las células tumorales (A375 melanoma humano) induce una depolarización temprana de la membrana mitocondrial, la cual es reversible y no conduce a la muerte. En contraste, el tratamiento de células dendríticas humanas obtenidas a partir de monocitos de sangre periférica cultivados en presencia de factor de crecimiento de granulocitos y monocitos (GM -CSF), e interleucina 4 (IL-4) durante 5 dias; induce activación de estas células. Con el fin de descartar la presencia de Lipopolisacárido (LPS) en la preparación del flavonoide, el cual puede ser el causante de la activación, evaluamos la presencia de este LPS con el test del Lisado de amebocitos de Limulus (LAL) y solo se utilizaron las muestras con menos de menor 1.0 unidad de endotoxina por 20 ug de proteina. Con estas precauciones, observamos claramente que el CB2 aumenta la expresión de moléculas coestimulatorias como CD83 y CD86 necesarias en la presentación antigénica. La incubación de las células con el CB2 y Polimixina B, la cual captura el LPS no disminuye la expresión de estos marcadores, corroborando el papel activador de este flavonoide sobre las células dendríticas humanas
Características operativas de dos pruebas ELISAs para la detección de anticuerpos de VHE en donantes del banco de sangre de referencia de Bogotá – Colombia
Introducción: El virus de la Hepatitis E (VHE), generalmente es transmitido por vía fecal-oral y por zoonosis, sin embargo, se ha identificado una nueva vía de es la transfusión de productos sanguíneos contaminados siendo un riesgo potencial para la seguridad de la sangre. En Colombia, no existen estudios que validen el uso de las diferentes herramientas diagnosticas utilizadas en el tamizaje de VHE y que así mismo documenten la seroprevalencia en donantes de sangre. Objetivo: Comparar el desempeño de dos pruebas de tamizaje comerciales Dia.pro y Mikrogen frente a un Gold Estándar para la detección de anticuerpos IgG e IgM del Virus de Hepatitis E en donantes de Sangre de un banco de referencia para Bogotá. Metodología: Se obtuvieron 766 muestras de suero de donantes de sangre entre el año 2015-2017. Se realizaron pruebas serológicas para la detección de anticuerpos anti-VHE de tipo IgG e IgM a partir de dos ensayos comerciales. Además, se aplicó westerblot que es una prueba más sensible considerada de referencia para anticuerpos anti VHE. Resultados: Se analizó un total de 766 sueros de donantes de sangre de las cuales 16 fueron positivas (Prevalencia del 2.09%; IC95%: 1.2% to 3.4%) para el anticuerpo IgM y 47 fueron positivas (Prevalencia = 6.14%; IC95%: 4.54% to 8.08%) para el anticuerpo IgG. Al comparar las AUC de Dia.pro y Mikrogen se ha considerado que ambas curvas de las características de funcionamiento están correlacionadas. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas Conclusiones: Este trabajo es el primer análisis comparativo de la eficiencia de dos pruebas comerciales para detección de anticuerpos IgM e IgG contra el virus de la hepatitis E en población donante de sangre, sugiriendo la mejor herramienta de tamizaje diagnóstico para estimar la seroprevalencia del VHE. En cuanto a la comparación entre pruebas se confirma que la seroprevalencia del virus, es altamente influenciado por las características analíticas de las pruebas serológicas y que la circulación del virus de la hepatitis E en donantes de sangre esta latente en Bogotá y, por ello, es necesario tomar medidas de contingencia.Magíster en EpidemiologíaMaestrí
ERRATUM: "Immunomodulatory Effects of Aqueous and Organic Fractions from Petiveria alliacea
TRP Channels as Molecular Targets to Relieve Cancer Pain
Transient receptor potential (TRP) channels are critical receptors in the transduction of nociceptive stimuli. The microenvironment of diverse types of cancer releases substances, including growth factors, neurotransmitters, and inflammatory mediators, which modulate the activity of TRPs through the regulation of intracellular signaling pathways. The modulation of TRP channels is associated with the peripheral sensitization observed in patients with cancer, which results in mild noxious sensory stimuli being perceived as hyperalgesia and allodynia. Secondary metabolites derived from plant extracts can induce the activation, blocking, and desensitization of TRP channels. Thus, these compounds could act as potential therapeutic agents, as their antinociceptive properties could be beneficial in relieving cancer-derived pain. In this review, we will summarize the role of TRPV1 and TRPA1 in pain associated with cancer and discuss molecules that have been reported to modulate these channels, focusing particularly on the mechanisms of channel activation associated with molecules released in the tumor microenvironment
Diferencias que existen entre los predictores de destete en pediatría reportados en la literatura y los usados en las unidades de cuidado intensivo pediátrico de Bogotá
La ventilación mecánica es un método de respiración artificial utilizado en pacientes que son incapaces de realizar esta acción por sí mismos y que requieren un soporte mecánico para realizar el intercambio de oxígeno y dióxido de carbono. Así mismo, el principal objetivo que se busca al instaurar la ventilación mecánica es el destete o weaning y la posterior desconexión del soporte ventilatorio, evitando posibles efectos adversos que se generan durante la utilización prolongada de la ventilación mecánica. Diversos autores han reportado predictores de destete utilizados en población pediátrica dentro de los cuales se destaca la valoración de la fracción inspirada de oxigeno (FiO2), la presión positiva al final de la espiración (PEEP), Índice TOBIN, análisis de paraclínicos y evaluación clínica entre otros. El presente artículo es el resultado del proyecto de investigación, cuyo objetivo fue comparar lo reportado en la literatura con lo realizado por profesionales encargados de la ventilación mecánica en las unidades de cuidado intensivo pediátricas (UCIP) de Bogotá. Para este fin, se aplicaron 21 encuestas a igual número de profesionales buscando conocer el manejo dado en cada institución. Luego se procedió a realizar el análisis de los resultados recopilados en las mismas mediante el programa Excell, que permitió ordenar y agrupar los datos, realizando la comparación entre la información contenida en la matriz de información y los datos obtenidos en la encuesta, a partir de los cuales se realizó el análisis correspondiente