Antiviral activity of European sea bass ISG15 against betanodavirus infections

To study the role of the sea bass ISG15 protein against betanodavirus infections, an in vivo transcription analysis has been performed after RGNNV infection and poly I:C inoculation, and the sea bass ISG15 activity has also been evaluated using an in vitro approach.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Papel del inmunogen isg15 de lubina (Dicentrarchus labrax) en las infecciones por betanodavirus

En peces, al igual que en vertebrados superiores, la respuesta antiviral innata está mediada por el sistema interferón tipo I (IFN I), que actúa mediante la activación de genes denominados isg (interferon-stimulated genes), entre los que se incluye el gen isg15. La proteína codificada por este gen, denominada ISG15, presenta actividad antiviral actuando como citoquina, o mediante un mecanismo denominado ISGilación, que consiste en su unión covalente a proteínas víricas o celulares. Entre las enfermedades de etiología viral que afectan a la lubina (Dicentrarchus labrax), destaca la necrosis nerviosa viral, causada por el virus de la necrosis nerviosa (NNV, género Betanodavirus), que presenta dos segmentos de ARN monocatenario de polaridad positiva: ARN1 (polimerasa viral) y ARN2 (proteína de la cápside). Las diferencias en la secuencia de la región variable T4 del segmento ARN2 permiten su clasificación en 4 genotipos, siendo el genotipo RGNNV el único asociado a episodios de elevada mortalidad en lubina. El presente estudio contribuye a ampliar el conocimiento del papel del sistema IFN I en lubina frente a infecciones por betanodavirus, describiéndose la estructura del gen isg15, analizando su transcripción en respuesta a poli I:C y RGNNV; y evaluando su actividad in vitro. La lubina presenta un gen isg15, compuesto por dos exones y un intrón localizado en la región 5’-UTR. El ORF, de 474 pb, codifica una proteína de 157 aminoácidos constituida por dos dominios tipo ubiquitina y un motivo RLRGG en el extremo carboxilo terminal. La clonación del ORF en el plásmido pcDNA His/Max, y su posterior transfección en la línea celular E-11, ha permitido obtener una línea celular estable (DLISG15-E11), en la que se ha demostrado, mediante inmunofluorescencia indirecta, la localización citoplasmática de esta proteína. El análisis de transcripción muestra una respuesta más temprana e intensa tras la inducción por poli I:C que por RGNNV. Poli I:C estimula la expresión génica desde las 4 hasta las 24 h post-inyección (p.i.) en ambos órganos, y con una cinética similar. Sin embargo, ambos órganos difieren en el nivel de transcripción del gen tras la infección por RGNNV, produciéndose una estimulación temprana, desde las 12 h p.i., y de mayor nivel en el cerebro que en el riñón cefálico, órgano en el que la expresión comienza a las 72 h p.i. La actividad antiviral se ha evaluado mediante el análisis comparativo de la replicación de RGNNV, determinada mediante PCR cuantitativa, en células DLISG15-E11 y células control no transfectadas, no observándose diferencias significativas. Sin embargo, ISG15 podría actuar a otro nivel del ciclo de multiplicación viral, por lo que se están realizando ensayos de rendimiento vírico extracelular mediante titulación, y de ISGilación mediante Western-blot. El hecho de que el cerebro sea el principal órgano diana para la multiplicación de betanodavirus, y el papel antiviral atribuido a la ISG15, junto con los resultados obtenidos, contribuyen a dilucidar la importancia de este gen frente a las infecciones por RGNNV en lubina, incrementándose el conocimiento del papel del sistema del IFN I en la defensa frente a las infecciones vírcas y la relación patógeno-hospedador.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Transcriptional profile and serological studies of the European sea bass immune response against betanodavirus infections

European sea bass is highly affected by outbreaks of viral nervous necrosis disease, provoked by the nervous necrosis virus (NNV). This virus displays a positive-sense RNA genome composed of two segments, RNA1, encoding the viral polymerase; and RNA2, encoding the capsid protein. Two genotypes of NNV have been detected in sea bass, although showing different virulence: RGNNV is highly virulent, whereas SJNNV replicates in sea bass brain without causing clinical signs. In the present work, the comparative analysis of the European sea bass immune response against both genotypes has been performed. The immune response has been evaluated in brain and head kidney of infected sea bass by relative real-time PCR of genes involved in the type I interferon system, and genes related to inflammatory and adaptive responses. In addition, a serological study, consisting of the ELISA quantification of IgM in sera, was also performed. The transcription analyses point out the importance of IFN system to control betanodavirus infections. The results obtained showed a strong induction of ifn-I, mxA, isg15 and isg12 in both organs analysed, especially in response to RGNNV. However, the response was quicker in head kidney of SJNNV inoculated sea bass, suggesting that this genotype induces a more rapid systemic response. Regarding the inflammatory response, RGNNV triggered a strong transcription of proinflammatory genes in brain, which provides evidences about the importance of the inflammatory process in NNV infection. Thus, the massive inflammatory process may be responsible for the eventual damage in nervous tissues, which would lead to fish dead. Finally, the high values of tr-g and mhc-b mRNA recorded in brain and the high IgM titer in sera, which was higher in SJNNV-inoculated fish, suggest that the adaptive response constitutes another important factor in the sea bass immune response against betanodaviruses, both at systemic and at local level.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech. This study has been supported by the project AGL2017-84644-R (MINECO/ AEI/FEDER, UE). P. Moreno was supported by a fellowship from Ministerio de Educacio n, Cultura y Deporte (FPU12/00265, Spanish Government)

Selectively Targeting Breast Cancer Stem Cells by 8-Quinolinol and Niclosamide

Cancer stem cells; Combination therapy; NiclosamideCélulas madre cancerosas; Terapia combinada; NiclosamidaCèl·lules mare cancerígenes; Teràpia combinada; NiclosamidaCancer maintenance, metastatic dissemination and drug resistance are sustained by cancer stem cells (CSCs). Triple negative breast cancer (TNBC) is the breast cancer subtype with the highest number of CSCs and the poorest prognosis. Here, we aimed to identify potential drugs targeting CSCs to be further employed in combination with standard chemotherapy in TNBC treatment. The anti-CSC efficacy of up to 17 small drugs was tested in TNBC cell lines using cell viability assays on differentiated cancer cells and CSCs. Then, the effect of 2 selected drugs (8-quinolinol -8Q- and niclosamide -NCS-) in the cancer stemness features were evaluated using mammosphere growth, cell invasion, migration and anchorage-independent growth assays. Changes in the expression of stemness genes after 8Q or NCS treatment were also evaluated. Moreover, the potential synergism of 8Q and NCS with PTX on CSC proliferation and stemness-related signaling pathways was evaluated using TNBC cell lines, CSC-reporter sublines, and CSC-enriched mammospheres. Finally, the efficacy of NCS in combination with PTX was analyzed in vivo using an orthotopic mouse model of MDA-MB-231 cells. Among all tested drug candidates, 8Q and NCS showed remarkable specific anti-CSC activity in terms of CSC viability, migration, invasion and anchorage independent growth reduction in vitro. Moreover, specific 8Q/PTX and NCS/PTX ratios at which both drugs displayed a synergistic effect in different TNBC cell lines were identified. The sole use of PTX increased the relative presence of CSCs in TNBC cells, whereas the combination of 8Q and NCS counteracted this pro-CSC activity of PTX while significantly reducing cell viability. In vivo, the combination of NCS with PTX reduced tumor growth and limited the dissemination of the disease by reducing circulating tumor cells and the incidence of lung metastasis. The combination of 8Q and NCS with PTX at established ratios inhibits both the proliferation of differentiated cancer cells and the viability of CSCs, paving the way for more efficacious TNBC treatments.This work was supported by the Instituto de Salud Carlos III (ISCiii), through Networking Research Center on Bioengineering, Biomaterials, and Nanomedicine (CIBER-BBN), an initiative that also counts with the assistance from the European Regional Development Fund (ERDF), specifically in the PENTRI-2 Project and by the “Fundació Marató TV3” (337/C/2013) to I.A., M.R. and E.V. Our laboratories were also supported by the Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS, grants PI20/1474 to S.S.J. and PI18/00871 and PI21/00936), co-financed by the ERDF and the 2017-SGR-638 of the Catalan Government to S.S.J. and EvoNano Project (GA800983), funded by European Union’s Horizon 2020 FET Open Programme. N.G.-A. was supported by grants from Pla Estratègic de Recerca i Innovació en Salut (PERIS) of Catalonia (SLT006/17/00270 270)

The Telomerase Reverse Transcriptase Subunit from the Dimorphic Fungus Ustilago maydis

In this study, we investigated the reverse transcriptase subunit of telomerase in the dimorphic fungus Ustilago maydis. This protein (Trt1) contains 1371 amino acids and all of the characteristic TERT motifs. Mutants created by disrupting trt1 had senescent traits, such as delayed growth, low replicative potential, and reduced survival, that were reminiscent of the traits observed in est2 budding yeast mutants. Telomerase activity was observed in wild-type fungus sporidia but not those of the disruption mutant. The introduction of a self-replicating plasmid expressing Trt1 into the mutant strain restored growth proficiency and replicative potential. Analyses of trt1 crosses in planta suggested that Trt1 is necessary for teliospore formation in homozygous disrupted diploids and that telomerase is haploinsufficient in heterozygous diploids. Additionally, terminal restriction fragment analysis in the progeny hinted at alternative survival mechanisms similar to those of budding yeast

Prevalencia de anormalidades de células epiteliales y factores asociados en mujeres de un municipio rural colombiano

Introduction. In spite of implementation of cytology-based cervical cancer screening in Colombia, mortality rates remain stable. The description of factors associated to cervical pre-neoplasic lesions is needed to establish strategies for mortality prevention.Objective. The prevalence of epithelial squamous cell abnormalities was determined to explore the association of cytology abnormalities with described risk factors. Materials and methods. This population-based, cross-sectional study included 739 women randomly selected by age. A validated face-to-face questionnaire and conventional cervical cytology were used to collect the information. To establish the association between cervical abnormalities and some qualitative variables, the independent chi squared test was used. We also calculated prevalence ratio with their 95% confidence intervals. A logistic regression model was used to explore variables that potentially explain cytology abnormalities.Results. The prevalence of squamous cell abnormality was 15.8%. Among women with abnormal cytology, 10% presented atypical squamous cells of undetermined significance, 3.9% low grade squamous intra-epithelial lesion and 1.9% high grade squamous intra-epithelial lesion. The adjusted logistical regression analysis showed that history of sexual transmitted disease, two or more sexual partners during entire life and previous abnormal cytology were associated with cytology abnormalities.Conclusion. The relation of epithelial squamous cell abnormalities with sexual behavior history reflexes the link between human papiloma virus infection and cervical cancer pre-neoplasic lesions. The frequency of use and knowledge about the purpose of cytology were factors that suggested other diagnostic limitations such as quality of cervical cytology or barriers to access health care. These latter factors may be the underlying basis for the high cervical cancer mortality rates.Introducción. A pesar de la existencia de los programas de tamización basados en la citología, las tasas de cáncer de cuello uterino permanecen estables en Colombia. La descripción de los factores asociados a las lesiones precursoras de cáncer de cuello uterino es necesaria para establecer estrategias para su prevención.Objetivo. Determinar la prevalencia de las anormalidades de células epiteliales escamosasy su asociación con los factores de riesgo descritos.Materiales y métodos. Estudio transversal de población en 739 mujeres, seleccionadas en forma aleatoria. La información se recolectó mediante la citología y un cuestionario previamente validado. La medida de asociación fue la razón de prevalencia con su respectivo intervalo de confianza del 95%. Las variables de confusión fueron controladas en un modelo de regresión logística multivariado.Resultados.La prevalencia del evento fue de 15,8%. Entre las mujeres con citología anormal, 10% presentó células escamosas atípicas de significado indeterminado; 3,9%, lesión escamosa intraepitelial de bajo grado, y 1,9%, lesión escamosa intraepitelial de alto grado.La regresión logística ajustada sugiere que los antecedentes de enfermedades de transmisión sexual, una citología anormal y tener dos o más parejas regulares/ocasionales durante la vida se asocian con la presencia del evento.Conclusiones. La relación de anormalidades de células escamosas con conducta sexual refleja la asociación entre el virus del papiloma humano y lesiones preneoplásicas de cáncer de cuello uterino. El uso frecuente y el adecuado conocimiento sobre la citología, sugiere que aspectos tales como las dificultades con la calidad de la citología o el acceso al diagnóstico y tratamiento, pudieran explicar las altas tasas de cáncer de cuello uterino

Perception of a love brand. Case of the National University of Colombia

El posicionamiento de una marca es uno de los principales elementos que distingue a una organización de otra y es por ello que el presente documento analiza la valoración de una love mark® o marca amor, definido como el vínculo emocional del consumidor con su marca, en especial, en el caso de una institución muy reconocida en el ámbito de los colombianos como es la Universidad Nacional (Colombia), con más de 150 años de tradición. El método utilizado fue la aplicación del índice desarrollado por Eunjoo Cho en 2011, quien desarrolla una metodología para la evaluación de marcas amor adaptada al contexto educativo. Se realizó mediante encuestas online a 267 personas con técnica mixta (cualitativa-cuantitativa) por valoración de escala de Likert. Los resultados corroboran que el programa gubernamental “ser pilo paga” ha afectado significativamente a las universidades públicas del país, puesto que este paga al estudiante sus estudios con un crédito condonable en la universidad que éste decida cursar sus carreras profesionales. Las conclusiones se centran en la posibilidad de posicionar una marca, a pesar de ser una universidad pública, como una marca reconocida, recordada, posicionada y finalmente como marca amor en los colombianos.The positioning of a brand is one of the main elements that distinguishes one organization from another and that is why this document analyzes the valuation of a love mark® or love brand, defined as the emotional bond of the consumer with their brand. especially, in the case of a highly recognized institution in the field of Colombians such as the National University (Colombia), with more than 150 years of tradition. The method used was the application of the index developed by Eunjoo Cho in 2011, who developed a methodology for the evaluation of love marks adapted to the educational context. It was carried out through an online survey of 267 people with mixed technique (qualitative-quantitative) by Likert scale assessment. The results corroborate that the government program "be pilo pays" has significantly affected the country's public universities, since it pays the student for his studies with a forgivable credit in the university that he decides to pursue his professional careers. The conclusions focus on the possibility of positioning a brand, despite being a public university, as a recognized, remembered, positioned brand and finally as a love brand in Colombians

Direct transformation of crystalline MoO3_3 into few-layers MoS2_2

We fabricate large-area atomically thin MoS$_2$ layers through the direct transformation of crystalline molybdenum MoS$_2$ (MoO$_3$) by sulfurization at relatively low temperatures. The obtained MoS2 sheets are polycrystalline (~10-20 nm single-crystal domain size) with areas of up to 300x300 um$^2$ with 2-4 layers in thickness and show a marked p-type behaviour. The synthesized films are characterized by a combination of complementary techniques: Raman spectroscopy, X-ray diffraction, transmission electron microscopy and electronic transport measurements.Comment: 6 figures in main text, 2 figures in supp. inf

Extractos del probiótico Shewanella putrefaciens Pdp11 protegen frente a la infección por RGNNV en cultivo celular

El agente etiológico de la retinopatía y encefalitis viral (VER) es el virus de la necrosis nerviosa (VNN). Aunque esta enfermedad puede causar una elevada mortalidad en numerosas especies de peces, no existen métodos efectivos para su tratamiento o prevención. La utilización de piensos funcionales es una estrategia novedosa para prevenir enfermedades de etiología infecciosa en acuicultura. El objetivo del presente trabajo ha sido evaluar in vitro la capacidad inmunoestimulante y antivírica frente a un aislado VNN de un extracto de la bacteria probiótica Shewanella putrefaciens Pdp11 (SpPdp11), aislada de dorada. En concreto, se ha cuantificado la transcripción de diferentes genes implicados en la respuesta inmune antiviral en células tratadas con este postbiótico, y se ha analizado su interferencia sobre distintas fases del proceso de infección vírica, analizándose tanto la supervivencia celular, como la multiplicación vírica. Los resultados muestran que el extracto de SpPdp11 es capaz de generar un estado antiviral en las células que las protege frente a la infección por VNN, por lo que este postbiótico es un buen candidato para incluir en los piensos de las especies susceptibles como estrategia de lucha frente a VNNProyecto de la Junta de Andalucía P18-RT-1067 y del Ministerio de Ciencia e Innovación PID2020-113637RB-C22 Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía TECH