Evolution, expression, and substrate specificities of aldehyde oxidase enzymes in eukaryotes

This work was supported by Deutsche Forschungsgemeinschaft Grant Le1171/8-3 (to S. L.). FCT-MCTES, research unit UCIBIO (UID/Multi/04378/2019). project PTDC/BBB-BEP/1185/2014 (to M. J. R.). Fondazione Italo Monzino and the Associazione per la Ricerca sul Cancro (AIRC) (to E. G.).Aldehyde oxidases (AOXs) are a small group of enzymes belonging to the larger family of molybdo-flavoenzymes, along with the well-characterized xanthine oxidoreductase. The two major types of reactions that are catalyzed by AOXs are the hydroxylation of heterocycles and the oxidation of aldehydes to their corresponding carboxylic acids. Different animal species have different complements of AOX genes. The two extremes are represented in humans and rodents; whereas the human genome contains a single active gene (AOX1), those of rodents, such as mice, are endowed with four genes (Aox1-4), clustering on the same chromosome, each encoding a functionally distinct AOX enzyme. It still remains enigmatic why some species have numerous AOX enzymes, whereas others harbor only one functional enzyme. At present, little is known about the physiological relevance of AOX enzymes in humans and their additional forms in other mammals. These enzymes are expressed in the liver and play an important role in the metabolisms of drugs and other xenobiotics. In this review, we discuss the expression, tissue-specific roles, and substrate specificities of the different mammalian AOX enzymes and highlight insights into their physiological roles.publishersversionpublishe

Loss to follow-up in registries of rheumatic patients treated with biologics : a potential information bias in assessing pharmacovigilance and efficacy outcomes

© 2001-2021 Sociedade Portuguesa de Reumatologia.Background: The information associated with loss to follow-up (LFU) patients may affect real-world data evaluation of the use of biologics that is not being adequately captured in registries. Methods: We identified all patients(Pts) treated with biologics in our center who had no visits registered for more than 6 months, in the Rheumatic Diseases Portuguese Register, Reuma.pt. We retrieved baseline information from Reuma.pt and from the hospital electronic clinical record. We then performed a telephonic interview to characterize the reasons for LFU at our day care unit. For Pts unable to be contacted by telephone a letter of invitation to an appointment at the hospital was sent. Results: From a total of 794 Ptsregistered in Reuma.pt at our center with active biologic therapy 227 did not have any information registered in the last 6 months. Of this, 36 Pts were on biologic therapy prescribed by other departments and maintained follow-up in these departments. 102 Pts had suspended biologic administration by medical indication and this information was registered in the hospital electronic clinical records but not updated in Reuma.pt. For 89 Pts no information could be retrieved from either the hospital electronic clinical record or Reuma.pt and we classified these Pts as true LFU. 26 of these LFU Pts were being followed up in another Rheumatology center. 26 of the LFU Pts died. 11 Pts had an adverse effect. 4 Pts of the LFU were considering to be in remission. We were not able to contact 15 of the LFU pts. Conclusion: Identifying LFU Pts and clarifying the reason for the loss of data in a register contributes to a better knowledge on strategies to discontinue biologics in stable pts, to a better pharmacovigilance of adverse effects and to more efficiency in data capture by registries. Due to data protection reasons it was impossible to have access to the Pts's death certificates.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

CONCEITOS FUNDAMENTAIS E TERMINOLOGIA ANATÓMICA APLICADA AO SISTEMA LOCOMOTOR

Este livro constitui o primeiro volume de uma coleção pedagógica vocacionada para o estudante de Medicina Veterinária e, em destaque, para a compreensão da Anatomia/Morfologia dos animais de interesse veterinário. Se é correto que a Morfologia do organismo animal se mantém, de certo modo, inalterada nos seus conceitos fundamentais e na descrição geral dos sistemas e aparelhos, também é lícito afirmar-se que os estudantes têm uma certa relutância e dificuldade na sua aprendizagem. Para eles, a morfologia descritiva é isso mesmo, um conjunto de conceitos e de termos complexo e demasiado vasto. Este problema agrava-se na medida em que qualquer unidade curricular de Anatomia é ministrada nos primeiros semestres do curso de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária. Tendo em mente esta situação, aliada aos anos de ensino de Anatomia, surge a ideia de uma pequena coleção pedagógica, acessível a todos, que integre a terminologia geral de cada sistema e aparelho, os conceitos fundamentais e que seja complementada quer com imagens reais de osteologia e de disseção quer com protocolos laboratoriais de orientação para o estudante. Cada volume abordará uma região anatómica, sendo o ensino “em espiral” de forma que o estudante compreenda cada uma das partes e a integre no todo animal. Cada volume, sempre que apropriado, abordará ainda algumas curiosidades anatómicas e é dado enfoque à importância clínica de determinadas estruturas, em detrimento de uma simples descrição exaustiva das mesmas, tentando que o estudante melhor compreenda as competências de que necessita para o desempenho profissional. Em nossa opinião, este tipo de manual de anatomia associado a imagens reais legendadas, obtidas no decorrer das aulas práticas, em oposição a atlas e modelos virtuais, e complementado com protocolos laboratoriais de orientação pode constituir uma ferramenta primordial para o aluno principiante, ao mesmo tempo que o começa a capacitar para a realidade de “hands on” futura

Arsenite oxidase in complex with antimonite and arsenite oxyanions - insights into the catalytic mechanism

Arsenic contamination of groundwater is among one of the biggest health threats affecting millions of people in the world. There is an urgent need for efficient arsenic biosensors where the use of arsenic metabolizing enzymes can be explored. In this work we have solved the crystal structures of four complexes of arsenite oxidase (Aio) obtained in complex with arsenic and antimony oxyanions and the structures determined correspond to intermediate states of the enzymatic mechanism. These structural data were complemented with DFT calculations providing a unique view of the molybdenum active site at different time points that, together with mutagenesis data, enabled to clarify the enzymatic mechanism and the molecular determinants for the oxidation of As(III) to the less toxic As(V) species

Psychometric study of a knowledge questionnaire on autonomous nursing interventions in patients with acute coronary syndrome

Enquadramento: O reconhecimento da autonomia dos enfermeiros só poderá ser conseguido se esta for corretamente mensurada e validada. Neste sentido, torna-se imperioso avaliar os seus conhecimentos, reconhecendo o seu papel decisivo. Objetivo: Validar e avaliar as propriedades psicométricas do Questionário de Conhecimentos acerca das Intervenções Autónomas de Enfermagem face ao Doente com Síndrome Coronário Agudo. Metodologia: Estudo metodológico, descritivo analítico-correlacional e transversal. Avaliou-se a consistência interna através do alfa de Cronbach e a análise fatorial confirmatória numa amostra de 738 enfermeiros portugueses inscritos na Ordem dos Enfermeiros. Resultados: A média de idades foi de 37,57 anos, sendo 76,0% mulheres. Após o refinamento do questionário, a análise fatorial confirmatória evidenciou uma qualidade de ajustamento aceitável da estrutura fatorial composta por 9 fatores com 44 itens (x2 /gl = 2,042; CFI = 0,846; GFI = 0,826; RMSEA = 0,053; RMR = 0,069). A consistência interna global foi de = 0,930, mostrando uma fiabilidade elevada, explicando 56,739% de variância total. Conclusão: O questionário é fiável e válido revelando potencial para investigação, monitorização e avaliação dos conhecimentos dos enfermeiros em contexto formativo e prática clínica.Background: the recognition of nurses autonomy can only be achieved if it is correctly measured and validated. In this sense, it is imperative to evaluate their knowledge, recognizing their decisive role. Objective: To validate and evaluate the psychometric properties of the Knowledge Questionnaire about Autonomous Nursing Interventions for patients with Acute Coronary Syndrome. Methodology: Methodological, descriptive, analytical-correlational and cross-sectional study. Internal consistency was assessed using Cronbach’s alpha and confirmatory factor analysis in a sample of 738 Portuguese nurses enrolled in the Ordem dos Enfermeiros. Results: The average age was 37.57 years, 76.0% of which were women. After the refinement of the questionnaire, the confirmatory factor analysis showed an acceptable quality of adjustment of the factor structure composed of 9 factors with 44 items (x2/gl = 2.042; CFI = 0.846; GFI = 0.826; RMSEA = 0.053; RMR = 0.069). The overall internal consistency was α = 0.930, showing high reliability, explaining 56.739% of total variance. Conclusion: The questionnaire is reliable and valid, revealing the potential for investigation, moni-toring and evaluation of nurses’ knowledge in a training context and clinical practice.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

From old indexes to new technologies

Funding Information: This work was supported by FEDER, Portugal2020, and co‐financed by Lisboa2020 and Alentejo2020 (ALT20‐03‐0247‐FEDER‐113469 and LISBOA‐01‐0247‐FEDER‐113469), ‘Fundação para a Ciência e a Tecnologia’—FCT iNOVA4Health (UIDB/Multi/04462/2020), European Commission Marie Skłodowska‐Curie Action H2020 (mtFOIE GRAS, grant agreement n. 734719) and the Sociedade Portuguesa de Diabetologia. Publisher Copyright: © 2022 The Authors. European Journal of Clinical Investigation published by John Wiley & Sons Ltd on behalf of Stichting European Society for Clinical Investigation Journal Foundation.Background: Diabetes is a heterogeneous and multifactorial disease. However, glycemia and glycated hemoglobin have been the focus of diabetes diagnosis and management for the last decades. As diabetes management goes far beyond glucose control, it has become clear that assessment of other biochemical parameters gives a much wider view of the metabolic state of each individual, enabling a precision medicine approach. Methods: In this review, we summarize and discuss indexes that have been used in epidemiological studies and in the clinical practice. Results: Indexes of insulin secretion, sensitivity/resistance and metabolism have been developed and validated over the years to account also with insulin, C-peptide, triglycerides or even anthropometric measures. Nevertheless, each one has their own objective and consequently, advantages and disadvantages for specific cases. Thus, we discuss how new technologies, namely new sensors but also new softwares/applications, can improve the diagnosis and management of diabetes, both for healthcare professionals but also for caretakers and, importantly, to promote the empowerment of people living with diabetes. Conclusions: In long-term, the solution for a better diabetes management would be a platform that allows to integrate all sorts of relevant information for the person with diabetes and for the healthcare practitioners, namely glucose, insulin and C-peptide or, in case of need, other parameters/indexes at home, sometimes more than once a day. This solution would allow a better and simpler disease management, more adequate therapeutics thereby improving patients' quality of life and reducing associated costs.publishersversionepub_ahead_of_prin

Envolvimento da ribonuclease humana Dis3L1 em processos de controlo de qualidade da expressão génica

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Humana e Ambiente). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011A expressão génica nos eucariotas envolve um número de etapas interligadas desde a transcrição do material genético até à tradução em proteína, sendo os RNAs mensageiros (mRNAs) os intermediários chave ao longo deste processo. Embora a complexidade da expressão génica dos eucariotas permita um controlo da produção proteica a vários níveis, também torna este processo vulnerável a erros. As células eucariotas desenvolveram mecanismos elaborados de controlo de qualidade do mRNA que asseguram a fidelidade da expressão génica através da detecção e degradação de transcritos anómalos. Como exemplo destes mecanismos de controlo de qualidade temos: o NMD (Nonsense-mediated mRNA Decay), que reconhece e elimina mRNAs que contenham codões prematuros de terminação da tradução, e o NSD (Nonstop mRNA Decay) que elimina mRNAs que não possuem codões de terminação em fase na grelha de leitura. O exossoma é um complexo proteico evolutivamente conservado que possui actividade ribonucleolítica e que se encontra presente tanto no núcleo como no citoplasma das células eucariotas. Uma das várias funções do exossoma é participar na degradação de mRNAs anómalos portadores de mutações nonsense ou de mutações nonstop. Como consequência da recente identificação de uma nova ribonuclease, a hDis3L1, como parte integrante do exossoma, este trabalho teve como objectivo avaliar o envolvimento desta subunidade do exossoma humano na degradação inerente ao NMD e ao NSD. Para tal, usaram-se variantes do gene da β-globina humana: um gene portador de mutação nonsense e sensível ao mecanismo de NMD (β39, com uma mutação nonsense no codão 39), um gene sem qualquer codão de terminação em fase (βnonstop) e o correspondente gene normal (βn), como genes modelo. Estes genes clonados em vectores de expressão foram usados para transfectar transitoriamente células HeLa em cultura. Simultaneamente, foram realizados testes de RNA interference (RNAi) através da transfecção de small interference RNAs (siRNAs) específicos para o transcrito que codifica hDis3L1 e, como controlo, siRNAs para um transcrito não específico (luciferase). Nestas condições de inibição da expressão da hDis3L1 ou em condições normais, as células em cultura foram colhidas para extracção do RNA total. O nível de mRNA das globinas foi quantificado por RT-qPCR (quantitative reverse transcription polymerase chain reaction), enquanto que o nível de inibição da expressão de cada transcrito sujeito a RNAi foi avaliado por RT-PCR (semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction). Em condições de baixa expressão de hDis3L1 na célula, pretendeu-se verificar se os transcritos β39 e βnonstop aumentam de expressão, o que indicaria que o mecanismo de NMD e/ou o mecanismo de NSD ficariam inibidos, sugerindo que a ribonuclease hDis3L1 estaria envolvida no processo de degradação de transcritos com mutações nonsense ou non-stop, respectivamente. De facto, os resultados obtidos neste trabalho sugerem que a hDis3L1 participa no mecanismo de NMD, uma vez que se verificou um aumento dos níveis de transcritos nonsense aquando da inibição da hDis3L1. Por outro lado, sugerem também que a hDis3L1 não participa no mecanismo de NSD, uma vez que não se verificaram alterações nos níveis dos transcritos nonstop em condições de inibição desta subunidade do exossoma. Estes resultados contribuem assim para melhor compreender estes processos de degradação envolvidos no controlo de qualidade da expressão génica e podem contribuir para um possível desenvolvimento de ferramentas específicas para a manipulação do processo de NMD, o qual pode levar ao estabelecimento de terapias específicas direccionadas a patologias, como cancro e muitas doenças genéticas, associadas a este tipo de mutações nonsense.Eukaryotic gene expression involves a series of interconnected steps from transcription to protein synthesis, in which mRNAs are the key mediators along this process. Even though eukaryotic gene expression complexity allows a tight control of protein production at several levels, it also makes this process vulnerable to errors that can occur along the mechanism. Eukaryotic cells have developed elaborated mechanisms of mRNA quality control that ensure genetic expression fidelity through detection and degradation of faulty transcripts. Two examples of these mRNA quality control mechanisms are the NMD (Nonsense-mediated mRNA Decay), which can recognise and degrade mRNA with premature stop codons, and the NSD (Nonstop mRNA Decay) which degrades mRNAs without any in frame termination codons. The exosome is an evolutionarily conserved protein complex that possesses a ribonucleolytic activity and that is present in the nucleus as well as in the cytoplasm of eukaryotic cells. One of the exosome’s several functions is participating in the degradation of abnormal mRNAs carrying nonsense mutations or nonstop mutations. As a result of the recent identification of a novel ribonuclease, hDis3L1, as an integrated part of the exosome, this work aimed to assess the involvement of this human exosome’s subunit involvement in the degradation intrinsic to NMD and to NSD. In order to achieve that, several variants of the human β-globin gene were used: a gene carrying a nonsense mutation (β39, with a nonsense mutation at codon 39), a gene without any in frame termination codons (βnonstop) and the respective wild-type gene (βn), as reporter genes. These genes which were cloned on expression vectors were used to transiently transfect HeLa cells in culture. Simultaneously, small interference RNAs (siRNAs) specific for the transcript coding the hDis3L1 and siRNAs for a non-specific transcript (luciferase), as a control, were also transiently transfected. For these conditions of expression inhibition of hDis3L1 or in normal conditions, cells in culture were harvested to extract total RNA. The globin mRNA levels were quantified by RT-qPCR (quantitative reverse transcription polymerase chain reaction), while the inhibition of expression of each of the proteins subjected to RNAi was evaluated through RT-PCR (semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction). At hDis3L1 low expression conditions, it was assessed if NMD or NSD would be inhibited, suggesting that ribonuclease hDis3L1 would be involved in the degradation mechanism of transcripts carrying nonsense or nonstop mutations, respectively. In fact, the results obtained in this work suggest that hDis3L1 takes part in NMD, since an increase in nonsense transcript levels was seen when the hDis3L1 subunit is inhibited. Our results also suggest that hDis3L1 does not take part in NSD, since changes in nonstop transcript levels were not observed when this subunit was inhibited compared to normal conditions. These results contribute therefore for a better understanding of these mechanisms of mRNA degradation involved in gene expression quality control. Also, they provide aid for a possible future development of specific tools for NMD manipulation, which present a promising role in the establishment of specific therapies directed to pathologies, like cancer and many genetic diseases, associated to nonsense mutations

Calidad de vida de pacientes con insuficiencia renal crónica en hemodiálisis de alta eficiencia.

Este estudo teve como objetivo avaliar a qualidade de vida (QV) de pacientes com insuficiência renal crônica em hemodiálise de alta eficiência, através do questionário Medical Outcomes Study 36 Item Short Form Health Survey (SF36) correlacionar seus escores aos dados sociodemográficos, clínicos, laboratoriais, Escala de Karnofsky e Índice Cognitivo de Depressão (ICD). Estudamos 50 pacientes com idade média 37 anos, tempo médio de tratamento 50,6 meses e observamos alteração da QV evidenciada por correlações entre escores do SF36 e aspectos sociodemográficos, clínicos, Escala de Karnofsky e ICD. O estudo permitiu concluir que o uso isolado do SF36 pode subsidiar a avaliação da conduta terapêutica.This study aimed at assessing the quality of life (QL) of patients with chronic kidney failure under high efficiency hemodialysis. The Medical Outcomes Study 36 Item Short Form Health Survey (SF36) was applied, and the results were correlated with social-demographic profile, clinical and laboratorial data, Karnofsky’s Scale and Depression Cognitive Index (DCI). The sample consisted of 50 patients with an average age of 3 and mean treatment duration of 50.6 months. LQ changes were evidenced by correlations of SF36 scores with socialdemographic aspects, clinical data, Karnofsky’s Scale, and DCI. It was concluded that the individual use of SF36 may aid the assessment of therapeutic conduct.Este estudio tuvo como objeto evaluar la calidad de vida (CV) de pacientes con insuficiencia renal crónica mantenidos en hemodiálisis a través de cuestionario sobre calidad de vida, SF36, y correlacionar sus puntajes a los datos sociodemográficos, clínicos, laboratoriales, Escala de Karnofsky e Índice Cognitivo de Depresión (ICD). Estudiamos 50 pacientes con edad promedio de 37 años y tiempo promedio de tratamiento de 50.6 meses y observamos alteraciones de la CV evidenciada por correlaciones entre puntajes del SF36 y aspectos socio-demográficos, clínicos, Escala de Karnofsky e ICD. El estudio permite concluir que el uso aislado del SF36 hace aportaciones para la evaluación de la conducta terapéutica