On the vulval morphology of some species of Bursaphelenchus (Nematoda: Parasitaphelenchinae)

The vulval pattern of six species of the genus Bursaphelenchus (B. abruptus, B. conicaudatus, B. fraudulentus, B. luxuriosae, B. mucronatus and B. xylophilus) was studied using scanning electron microscopy. A terminology for the vulval region structures observed is proposed herein and illustrated by micrographs and line drawings. It was shown that, of the studied species, only B. mucronatus and B. xylophilus share an identical morphology of the vulval region, all other species differing significantly from each other and from both B. mucronatus and B. xylophilus. This study indicates the diagnostic potential for variation in vulval morphology within Bursaphelenchus and it is recommended that such features are recorded in all future descriptions

O papel dos neurosteróides na depressão e ansiedade

Monografia realizada no âmbito da unidade de Estágio Curricular do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas, apresentada à Faculdade de Farmácia da Universidade de CoimbraEsteróides neuroativos que são sintetizados no cérebro e no sistema nervoso a partir do colesterol são conhecidos como “Neuroesteroides”. Estas moléculas e os seus derivados sintéticos influenciam a função de múltiplos mecanismos de sinalização incluindo os recetores do ácido gama-aminobutírico e do glutamato, o maior neurotransmissor inibitório e excitatório respetivamente no sistema nervoso central. Estes esteroides exercem funções muito importantes, pois contribuem na mielinização e na organização da conetividade cerebral. Sob situações de stress, as concentrações dos neuroesteroides, tal como da alopregnanolana e alotetrahidroxicorticosterona, estão alteradas. Perante esta situação tem sido sugerido que a desregulação da síntese dos neuroesteroides tem influência nas doenças psiquiátricas relacionadas com o stress, incluindo alterações de humor e ansiedade. Os transtornos depressivos são frequentes e representam uma carga importante para a sociedade contemporânea. Estas alterações psicológicas representam a maior causa de deficiência nas sociedades ocidentais, e compreendem cerca de 40 % das doenças que resultam na incapacidade de trabalhar de forma produtiva. Ao longo do trabalho, irei abordar o papel do ácido gama-aminobutírico e dos neuroesteroides no stress e na depressão e eventuais estratégias na manipulação da sua síntese no Sistema Nervoso Central e os potenciais fins terapêuticos.The neuroactive steroids which are synthesized in the brain and nervous system from cholesterol are known as ‘‘Neurosteroids”. These agents and their synthetic derivatives influence the function of multiple signaling pathways including receptors for γ-aminobutyric acid and glutamate, the major inhibitory and excitatory neurotransmitters in the central nervous system. These steroids have crucial functions such as contributing to the myelination and organization of the brain connectivity. Under the stressful circumstances, the concentrations of neurosteroid products such as allopregnanolone and allotetrahydrodeoxycorticosterone alter. It has been suggested that dysregulation of neurosteroid production plays a role in the pathophysiology of stress and stress-related psychiatric disorders, including mood and anxiety disorders. Depressive disorders are frequent, representing an important burden for contemporary society. These mental disorders are among the leading causes of disability in western societies, and comprise approximately 40% of illnesses that result in an inability to work productively. Then, I will review evidence indicating a role for for γ-aminobutyric acid and neurosteroids in stress and depression, and focus on potential strategies that can be used to manipulate central nervous system neurosteroid synthesis and function for therapeutic purposes

Customer relationship management field lab at PCDIG: Customer segmentation

The purpose of this study is to suggest a segmentation model that best suits PCDIGA’s resources and its customer database. To achieve this, an extensive analysis was carried out about the company, which was combined with literature research regarding the subjects of customer relationship management and segmentation. As a result, a segmentation was proposed, which was tested through an online survey that reached over 4 000 individuals. Recommendations were drawn for the company to develop the resulting 7 segments according to their potential and value produced

Activities of an aqueous plant extract against Herpes simplex virus type 2 (HSV 2): role in virus replication and progeny yield

Tese de mestrado, Biologia Molecular e Genética, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2015Herpes simplex virus type 2 (HSV-2) is widely distributed through the human population, infecting more than 500 million people globally. Although causing generally mild infections this virus may cause severe symptoms occasionally, mainly in immunocompromised patients. Presently, there are a number of systemic antiviral agents against herpesvirus, the most commonly used being acyclovir (ACV) and its prodrugs. However, long term treatments with these drugs may result in the development of resistance, especially in immunocompromised patients, which leads to a continuous search for new and better therapeutic alternatives. According to the World Health Organization (WHO) plants would be the best sources for obtaining a wide variety of drugs. In fact, in the last decades many pharmacological and chemical studies have focused on medicinal plants and the discovery of new natural therapeutic compounds. In this study the anti-herpetic action of an aqueous extract was evaluated. The product was obtained by decoction of stem and leaves from Solidago virgaurea, a perennial herb member of the Asteraceae family. The study of the aqueous extract activity included a preliminary evaluation of its cytotoxicity in Vero cells – by the MTT assay - in the same conditions that are applied for viral production. Extract direct effect on viral particles – virucidal effect – was also assessed, having proved null. Anti-herpetic activity was investigated through two kinds of experiments: treatment of infected cells during virus production that revealed a mean yield reduction of 94 % in treated relatively to non-treated cells and an IC50 of 35.1 μg/mL; and treatment of infected cells during virus titration, which revealed slighter inhibition but significant size differences between virus plaques formed in treated and control conditions (smaller in treatment conditions). To further evaluate the mechanisms that mediate the aqueous extract inhibitory effect, infected cells – treated and non-treated - and virus particles – produced in treated and non-treated cells - were visualized through Transmission Electron Microscopy (TEM), revealing less damage due to infection in treated cells and a reduced amount of viral particles in HSV-2 suspensions produced in treated cells, relatively to controls. A kinetic of the first hours of the infection was performed with and without treatment, to assess possible differences in DNA production. Extracted samples were subjected to qPCR and results showed that the amount of viral DNA raises significantly slower in treated versus non-treated infected cells, throughout the infection. This is consistent with the effective reduction of the extract when added at later infection times - 4-6 h p.i. - when DNA replication is already in an advanced stage. Our results suggest that the aqueous extract inhibits HSV-2 replication, when present at the beginning of the infection, possibly by interfering with the viral DNA synthesis.O vírus Herpes simples tipo 2 (HSV-2) é um vírus de simetria icosaédrica e grandes dimensões, pertencente à família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae da ordem Herpesvirales. Infecta mais de 500 milhões de pessoas em todo o mundo, surgindo, em cada ano, mais de 20 milhões de casos. A sua prevalência é geralmente mais elevada entre mulheres do que homens e varia substancialmente entre diferentes regiões do globo, alcançando os mínimos na Europa Ocidental - 18 % para mulheres e 13 % para homens – e percentagens máximas na África Subsaariana – 70 % para mulheres e 55 % para homens. O HSV infecta as células da mucosa oral ou genital e tem a capacidade de infetar as dendrites e os gânglios sensoriais que enervam estes tecidos onde estabelece latência. Estas infeções causam normalmente patologias ligeiras – gengivite, herpes labialis ou herpes genitalis – podendo até ser assintomáticas. Porém, infeções com HSV-2 podem causar complicações sérias a nível ocular - sendo a primeira causa de cegueira devida a infeção no mundo Ocidental -, neurológico - causando meningites e encefalites, especialmente comuns em neonatos – e dermatológico. Estas patologias mais severas, associadas à infeção com HSV, ocorrem com maior frequência em pacientes imuno-comprometidas, nomeadamente em indivíduos HIV (Vírus da Imunodeficiência Humana) positivos. Aliás, a infeção com HSV-2 aumenta 3 a 4 vezes a probabilidade de adquirir HIV e a sua disseminação, sendo esta relação recíproca, uma vez que pacientes HIV positivos têm maior probabilidade de adquirir HSV-2 e sofrem mais reativações da infeção. Atualmente, existem vários agentes com atividade antiviral contra HSV, como o Aciclovir (ACV) e as suas pró-drogas, no entanto, tratamentos prolongados com estes compostos podem resultar no desenvolvimento de resistência. De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS) as plantas são a melhor fonte para a obtenção de novas drogas e, nas últimas décadas, as plantas medicinais têm sido alvo de vários estudos químicos e farmacológicos. Neste estudo foi avaliado o efeito anti-herpético do extrato aquoso de Solidago virgaurea, uma planta perianal, membro da família Asteraceae. O extrato utilizado foi obtido por decocções de caules e folhas de S. virgaurea e a solução stock foi preparada a 100 mg/mL em DMSO. Antes de ser sujeito a testes de actividade anti-herpética foi ensaiado o efeito do extracto aquoso na viabiliade de células hospedeiras não infectadas, através do método do MTT – um ensaio colorimétrico que se baseia na capacidade de reduzir metabolicamente o sal de tetrazolio das células viáveis. Para isso culivaram-se células Vero em placas de 96 poços – em meio de cultura com FBS (Soro Fetal Bovino) a 10 % – até à sub-confluência. O meio de cultura foi depois substituido por meio com FBS a 2 % e diferentes concentrações de extracto (25 - 250 μg/mL), ou meio com FBS a 2 % sem adição de extrato no caso dos testemunhos, e as placas foram incubadas 24 ou 48 horas a 37 °C. No final do período de tratamento fez-se o teste do MTT para determinação da viabilidade das culturas tratadas, por comparação com as culturas não tratadas. Os conteúdos de cada poço da P96 foi analisado espectofotometricamente num leitor de placas Elisa. Para caracterizar a actividade citotóxica do extracto foram comparadas as absorvâncias obtidas em poços com células tratadas e relação a células não tratadas e determinaram-se os parametros CMNC (Concentração Máxima Não Citotóxica) - 150 μg/mL - e CC50 (Concentração que inviabiliza 50 % das células) – 177,3 μg/mL. O efeito directo do extracto nas partículas de HSV-2 foi testado através da comparação dos títulos de suspensões virais previamente tratadas com 100 μg/mL de extrato em meio com FBS a 2 % com os títulos de suspensões não tratadas. O extrato não demonstrou efeito virucida sobre partículas virais em suspensão, uma vez que os títulos das suspensões tratadas foram muito semelhantes aos títulos dos testemunhos. Para testar o efeito do extrato na formação de placas virais infetaram-se células, em placas de 24 poços, com diluições seriadas de HSV-2. Depois da entrada do vírus – 30 minutos pós infeção – os inóculos foram removidos e foi adicionado meio de cultura com FBS a 2 % com ou sem 100 μg/mL de extrato, às culturas tratadas e testemunho, respetivamente. No final do período de tratamento – 3 a 4 horas pós infeção (h p.i.) – foi adicionado meio com FBS e Sephadex a 2 %. A redução de título em culturas tratadas foi 71,6 ± 26,8 %, em relação às não tratadas. Foi ainda evidente uma redução no diâmetro das placas produzidas nas culturas tratadas. Foram também levadas a cabo várias experiências envolvendo a produção de vírus em condições de tratamento, em que culturas celulares sub-confluentes foram infetadas com cerca de 3 pfu/célula e tratadas com extrato em diferentes concentrações e durante diferentes períodos da infeção. Os títulos das suspensões produzidas em condições de tratamento foram comparados com os títulos dos testemunhos para o cálculo das percentagens de inibição. A redução média de título – com concentrações de extrato não citotóxicas – foi de 93,65 ± 8 %, relativamente a vírus produzido na ausência do extrato. Para determinar os parâmetros IC50 e IC90 (concentrações que reduzem o rendimento viral em 50 e 90 %, respetivamente) foram produzidas suspensões de HSV-2 em meio com FBS a 2 % e diferentes concentrações de extrato (10-175 μg/mL) que foram posteriormente tituladas. Os IC50 e IC90 foram calculados através de regressão linear da curva dose-resposta e foram 35,1 e 128,1 μg/mL, respetivamente. Para investigar a etapa da infeção afetada pelo extrato produziram-se suspensões de HSV-2 sob tratamento - com 100 μg/mL de extrato – iniciado em diferentes horas pós infeção. Foi observável uma redução da percentagem de inibição do extrato para cerca de 50 % em tratamentos começados entre as 3 e as 6 h p.i. e para 0 % a partir das 15 h p.i. Células infetadas tratadas e não tratadas, e partículas virais produzidas em ambas as condições, foram observadas por Microscopia Eletrónica de Transmissão (TEM), revelando a existência de menos danos, devidos à infeção, em células infetadas tratadas do que em não tratadas e uma quantidade significativamente menor de partículas de HSV-2 em suspensões virais produzidas em células tratadas, apesar dos viriões produzidos sob tratamento não apresentarem defeitos morfológicos. Por fim foi executada uma cinética da infeção em condições de tratamento (e uma cinética testemunho, em condições normais de produção viral), para tal, células infetadas – tratadas e não tratadas - foram raspadas para o meio de cultura a diferentes horas pós infeção – 2 a 7. O DNA de cada cultura infetada recolhida foi extraído, quantificado e submetido a PCR para a deteção de DNA viral. O resultado não permitiu visualizar diferenças significativas na quantidade de DNA de HSV-2 em células tratadas e não tratadas, mas mostrou um aumento considerável na quantidade de DNA a partir das 5 horas pós infeção. As mesmas amostras foram depois utilizadas para PCR em tempo real (qPCR) para avaliar possíveis diferenças na quantidade de DNA viral. O resultado mostrou que, embora nas horas iniciais – 3-4 h p.i. – as diferenças na quantidade de DNA sejam mínimas, entre amostras de DNA extraído de células tratadas e não tratadas, é visível um aumento muito mais lento no número de cópias de DNA viral ao longo da infeção em culturas tratadas do que em não tratadas, indicando que a replicação de DNA é afetada durante o tratamento com extrato aquoso de S. virgaurea

Bipolar disorder and the risk of developing dementia : a literature review

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2017In the last centuries, the concept of bipolar disorder has suffered multiple modifications at many levels, including the diagnosis and the recognition of the prognosis associated with it. Many authors, based on their clinical observations, have recently conducted studies in order to appraise the possible underlying neuroprogression of the bipolar disorder. Objectives: The aim of this review is to evaluate the existence of a correlation between bipolar disorder and the risk of developing dementia. If this proposition is verified, the target will also be determining which subtype of dementia is more often found in these patients. Methods: a literature review of key papers of all English language articles from a PubMed and b-on literature search (2007–2017) using the keywords “bipolar disorder”, “dementia”, “frontotemporal” and “staging”. In addition to all the articles identified as relevant, the search was augmented by manually reviewing bibliographies from identified reports and recent reviews. Articles were selected for review if their content was instructive to the current topic. Results: There is strong evidence that history of bipolar disorder significantly increased the risk of dementia, specifically behavioral variant frontotemporal dementia. Biomarkers, such as Brain-Derived Neurotrophic Factor and oxidative stress markers, and neuroimaging findings support the hypothesis of an underlying neuroprogression associated with bipolar disorder. Conclusion: A higher risk of dementia, specifically behavioral variant frontotemporal dementia, is patent in bipolar disorder patients. It is also evident that the likelihood of developing cognitive and functional impairment is elevated when there is inadequate treatment and, consequently, increased duration and number of the affective episodes per year. Future studies are necessary, in order to enhance these patients’ outcome, by clarifying the underlying mechanisms of this neuroprogression and, also, by defining the best possible interventions that might avoid developing dementia.Nos últimos séculos, o conceito de perturbação afetiva bipolar sofreu múltiplas modificações a diversos níveis, incluindo o diagnóstico e o reconhecimento do prognóstico associado. Vários autores, com base nas suas observações clínicas, realizaram, recentemente, estudos com o objetivo de avaliar a possível neuroprogressão subjacente a esta patologia. Objetivos: Esta revisão da literatura tem como propósito apreciar a existência de uma correlação entre perturbação afetiva bipolar e o risco de desenvolvimento de demência. Se esta proposição for verificada, o objetivo será também determinar que tipo de demência é mais frequentemente encontrado nestes pacientes. Métodos: Procedeu-se a uma revisão da literatura dos artigos em Língua Inglesa, resultantes de uma pesquisa nas plataformas PubMed e b-on (2007-2017), usando as palavras-chave “bipolar disorder”, “dementia”, “frontotemporal” e “staging”. Para além de todos os artigos identificados como relevantes, a pesquisa foi aumentada com uma revisão manual das bibliografias dos mesmos. Resultados: Há forte evidência que suporta a correlação entre o diagnóstico de perturbação afetiva bipolar e o posterior desenvolvimento de demência, especificamente a variante comportamental da demência frontotemporal. Biomarcadores e achados imagiológicos apoiam a hipótese de que há um possível mecanismo de neuroprogressão subjacente à perturbação afetiva bipolar. Conclusão: Um risco aumentado de demência, particularmente a variante comportamental da demência frontotemporal, parece estar patente nos doentes com perturbação afetiva bipolar. Também é evidente que a probabilidade de desenvolvimento de défices cognitivos e funcionais é superior, quando existe tratamento inadequado e, consequentemente, maior número e duração dos episódios afetivos. Estudos futuros são necessários, de modo a melhorar o outcome destes doentes, através do esclarecimento dos mecanismos de neuroprogressão subjacentes e, ainda, pela definição de quais as possíveis intervenções mais adequadas, de modo a evitar o desenvolvimento de demência

Development of Mixed Matrix Iongel Membranes for CO2 Separation

The climate crisis and the strategies to mitigate it are, undoubtedly, some of the most relevant and discussed issues in today’s society. The continuous increase in greenhouse gas emissions, particularly CO2, and consequent global warming can pose severe risks to the environment and the population. Due to the urgent need to mitigate CO2 emissions, numerous strategies have been considered, particularly the implementation of a Carbon Capture, Utilization and Storage (CCUS) technology. In terms of carbon capture, membrane separation processes offer a variety of advantages, compared to other processes, in terms of lower energy consumption, maintenance requirements, and capital investment. The designable nature of Ionic Liquids (ILs) opens up a wide range of possible chemical structures, targeting specific applications, especially CO2 capture processes. Considering the broad range of tunable chemical and physical properties of ILs and the undeniable advantages of membrane processes, from an economical and environmental point of view, this thesis explores the development of iongel membranes, which are a specific class of IL-based materials, for CO2 separation. Throughout this thesis, different polymer matrices and solid fillers were used to design Mixed Matrix Iongel Membranes (MMIMs) with the intent of, not only enhance their gas separation performance, but also to improve their mechanical, thermal, and chemical stabilities. A fast and solvent-free method was employed to fabricate MMIMs, by free-radical UV polymerization, as an alternative to longer and more complex preparation methods previously used. The main idea throughout the presented thesis is to fine-tune the design of iongel membranes and to address some of the major challenges regarding the use of these IL-based materials, for CO2 separation, in terms of thermal and mechanical properties and stability under different experimental conditions. In this thesis, CO2/N2 (flue gas) and CO2/CH4 (biogas) are the target separations, due to their relevance at an industrial level. Therefore, and considering the importance of evaluating the potential of the iongel membranes in a more realistic scenario, the developed materials were tested under different and relevant experimental conditions, in terms of temperature, pressure and humidity. The data presented throughout Chapters 2 to 6, clearly show that the chemistry and properties of the selected component materials has a significant impact on the MMIMs' properties and overall performance. Moreover, it is expected that the obtained results will be a step towards the design of new and alternative IL-based materials for CO2 separation.As mudanças climáticas e as estratégias para as mitigar são, indiscutivelmente, algumas das questões mais relevantes na sociedade atual. O aumento contínuo das emissões de gases com efeito de estufa, em particular CO2, e consequente aquecimento global podem representar graves riscos para o ambiente e para a população. Devido à urgente necessidade de mitigar as emissões de CO2, têm sido consideradas inúmeras estratégias, em particular, a implementação de tecnologias de captura, utilização e armazenamento de carbono (CCUS). Relativamente à captura de carbono, os processos de separação com membranas oferecem uma variedade de vantagens em termos de consumo energético, requisitos de manutenção e investimento de capital. A possibilidade de desenhar Líquidos Iónicos (LIs) permite obter uma ampla gama de estruturas químicas, direcionadas a aplicações específicas, especialmente para processos de captura de CO2. Considerando a ampla gama de propriedades químicas e físicas dos LIs e as inegáveis vantagens dos processos de membranas do ponto de vista económico e ambiental, esta tese explora o desenvolvimento de membranas ditas “iongel”, que são uma classe específica de materiais baseados em LIs, para a separação de CO2. Ao longo desta tese, foram utilizadas diferentes matrizes poliméricas e materiais sólidos para desenvolver membranas iongel de matriz mista (MMIMs) como uma forma de, não só melhorar o seu desempenho na separação de gases, mas também melhorar a sua estabilidade mecânica, térmica e química. Esta tese apresenta um método rápido e sem recurso a solventes para preparar MMIMs, através da polimerização UV de radicais livres, como alternativa a métodos de preparação mais longos, complexos e poluentes, utilizados anteriormente. A ideia subjacente a este trabalho é afinar/otimizar o desenho das membranas “iongel” e abordar alguns dos principais desafios em relação à utilização destes materiais, para separação de CO2, em termos de propriedades térmicas e mecânicas e estabilidade em diferentes condições experimentais. Nesta tese, foram consideradas as separações CO2/N2 e CO2/CH4, devido à sua relevância a nível industrial. Desta forma, e tendo em conta a importância de avaliar o potencial das membranas “iongel” num cenário mais realista, os materiais desenvolvidos foram testados sob diferentes condições experimentais, em termos de temperatura, pressão e teor de humidade. Os dados apresentados ao longo dos capítulos 2 a 6 mostram claramente que a natureza dos materiais selecionados tem um impacto significativo nas propriedades e desempenho das MMIMs. Além disso, é esperado que os resultados obtidos representem um avanço no desenvolvimento de materiais novos e alternativos à base de LIs para a separação do CO2