Expression and purification of the extracellular domain of wild-type humanRET and the dimeric oncogenic mutant C634R

The receptor tyrosine kinase RET is essential in a variety of cellular processes. RET gain-of-function is strongly associated with several cancers, notably multiple endocrine neoplasia type 2A (MEN 2A), while RET loss-of-function causes Hirschsprung's disease and Parkinson's disease. To investigate the activation mechanism of RET as well as to enable drug development, over-expressed recombinant protein is needed for in vitro functional and structural studies. By comparing insect and mammalian cells expression of the RET extracellular domain (RETECD), we showed that the expression yields of RETECD using both systems were comparable, but mammalian cells produced monomeric functional RETECD, whereas RETECD expressed in insect cells was non-functional and multimeric. This was most likely due to incorrect disulfide formation. By fusing an Fc tag to the C-terminus of RETECD, we were able to produce, in HEK293T cells, dimeric oncogenic RETECD (C634R) for the first time. The protein remained dimeric even after cleavage of the tag via the cysteine disulfide, as in full-length RET in the context of MEN 2A and related pathologies. Our work thus provides valuable tools for functional and structural studies of the RET signaling system and its oncogenic activation mechanisms. (C) 2020 Published by Elsevier B.V.Peer reviewe

REPRESENTAÇÕES DA MULHER NAS CRÓNICAS DE JÚLIO DANTAS NA REVISTA ILUSTRAÇÃO PORTUGUESA (1913-1916)

Between April 1913 and May 1916, Júlio Dantas published 129 chronicles in the second series of Ilustração Portuguesa. With publication starting in February 1906, the second series was a “Weekly review of the events of Portuguese life - social life, political life, artistic life, literary life, worldly life, sporting life, domestic life” and did not include any chronicle until number 374, contrary to what happened in the entire first series (1903-1906). Recovering the chronicle, the director Silva Graça gave the responsibility of its writing to Dantas, in a different format from the previous one, which had a single theme; now the chronicle appears, “under a new form, that of the impressive comment to ideas and facts, preceded by the quick enunciation of those facts or those ideas” because “The modern reader reads ‘à la minute’: twenty lines are enough to find a new aspect, mark a figure, comment on an initiative or fix an event”. Dantas respected these guidelines: in the chronicles he gives his opinion about the social, cultural and political reality of the republican Portugal with an always conclusive personal comment. Among the themes he dealt with women, whose socio-cultural reality was gaining a new momentum, occupy a prominent place. Therefore, by the thematic opportunity and originality of the approach, the aim of this text is an analysis of the representations of the female, such as women and fashion, women and war or women and the suffragist movement.Entre abril de 1913 e maio de 1916, Júlio Dantas publicou 129 crónicas na 2ª série da Ilustração Portuguesa. Iniciada em fevereiro 1906, a 2ª série assumia-se como “Revista semanal dos acontecimentos da vida portuguesa – vida social, vida política, vida artística, vida literária, vida mundana, vida sportiva, vida doméstica” e não incluiu até ao nº 374 qualquer crónica, ao invés do que sucedera em toda a 1ª série (1903-1906). Recuperando a crónica, o diretor Silva Graça entregou a responsabilidade da sua escrita a Júlio Dantas, num formato diverso do anterior que era de temática única; agora a crónica surge, “sob uma nova forma, a do comentário impressivo a idéas e factos, precedido do enunciado rápido desses factos ou d’essas idéas” porque “O leitor moderno lê ‘à la minute’: vinte linhas são suficientes para encontrar um aspecto novo, marcar uma figura, comentar uma iniciativa ou fixar um acontecimento” (Dantas 1913ª, p. 487). Dantas respeitou estes ditames: nas crónicas palpita a realidade social, cultural e política do Portugal republicano com um comentário pessoal sempre conclusivo. Entre os temas tratados, a mulher, cuja realidade sociocultural ganhava um novo impulso, ocupa lugar destacado. Por isso, pela oportunidade temática e originalidade da abordagem, o objetivo deste texto é uma análise de representações da mulher tais como a mulher e a moda, a mulher e a guerra ou a mulher e o movimento sufragista

REPRESENTAÇÕES DA MULHER NAS CRÓNICAS DE JÚLIO DANTAS NA REVISTA ILUSTRAÇÃO PORTUGUESA (1913-1916)

Entre abril de 1913 e maio de 1916, Júlio Dantas publicou 129 crónicas na 2ª série da Ilustração Portuguesa. Iniciada em fevereiro 1906, a 2ª série assumia-se como “Revista semanal dos acontecimentos da vida portuguesa – vida social, vida política, vida artística, vida literária, vida mundana, vida sportiva, vida doméstica” e não incluiu até ao nº 374 qualquer crónica, ao invés do que sucedera em toda a 1ª série (1903-1906). Recuperando a crónica, o diretor Silva Graça entregou a responsabilidade da sua escrita a Júlio Dantas, num formato diverso do anterior que era de temática única; agora a crónica surge, “sob uma nova forma, a do comentário impressivo a idéas e factos, precedido do enunciado rápido desses factos ou d’essas idéas” porque “O leitor moderno lê ‘à la minute’: vinte linhas são suficientes para encontrar um aspecto novo, marcar uma figura, comentar uma iniciativa ou fixar um acontecimento” (Dantas 1913ª, p. 487). Dantas respeitou estes ditames: nas crónicas palpita a realidade social, cultural e política do Portugal republicano com um comentário pessoal sempre conclusivo. Entre os temas tratados, a mulher, cuja realidade sociocultural ganhava um novo impulso, ocupa lugar destacado. Por isso, pela oportunidade temática e originalidade da abordagem, o objetivo deste texto é uma análise de representações da mulher tais como a mulher e a moda, a mulher e a guerra ou a mulher e o movimento sufragista

Unexpected structures formed by the kinase RET C634R mutant extracellular domain suggest potential oncogenic mechanisms in MEN2A

The RET receptor tyrosine kinase plays a pivotal role in cell survival, proliferation, and differentiation, and its abnormal activation leads to cancers through receptor fusions or point mutations. Mutations that disrupt the disulfide network in the extracellular domain (ECD) of RET drive multiple endocrine neoplasia type 2A (MEN2A), a hereditary syndrome associated with the development of thyroid cancers. However, structural details of how specific mutations affect RET are unclear. Here, we present the first structural insights into the ECD of the RET(C634R) mutant, the most common mutation in MEN2A. Using electron microscopy, we demonstrate that the C634R mutation causes ligand-independent dimerization of the RET ECD, revealing an unusual tail-to-tail conformation that is distinct from the ligand-induced signaling dimer of WT RET. Additionally, we show that the RETC634R ECD dimer can form complexes with at least two of the canonical RET ligands and that these complexes form very different structures than WT RET ECD upon ligand binding. In conclusion, this structural analysis of cysteine-mutant RET ECD suggests a potential key mechanism of cancer induction in MEN2A, both in the absence and presence of its native ligands, and may offer new targets for therapeutic intervention.Peer reviewe

PTCHD1 Binds Cholesterol but Not Sonic Hedgehog, Suggesting a Distinct Cellular Function

Deleterious mutations in the X-linked Patched domain-containing 1 (PTCHD1) gene may account for up to 1% of autism cases. Despite this, the PTCHD1 protein remains poorly understood. Structural similarities to Patched family proteins point to a role in sterol transport, but this hypothesis has not been verified experimentally. Additionally, PTCHD1 has been suggested to be involved in Hedgehog signalling, but thus far, the experimental results have been conflicting. To enable a variety of biochemical and structural experiments, we developed a method for expressing PTCHD1 in Spodoptera frugiperda cells, solubilising it in glycol-diosgenin, and purifying it to homogeneity. In vitro and in silico experiments show that PTCHD1 function is not interchangeable with Patched 1 (PTCH1) in canonical Hedgehog signalling, since it does not repress Smoothened in Ptch1−/− mouse embryonic fibroblasts and does not bind Sonic Hedgehog. However, we found that PTCHD1 binds cholesterol similarly to PTCH1. Furthermore, we identified 13 PTCHD1-specific protein interactors through co-immunoprecipitation and demonstrated a link to cell stress responses and RNA stress granule formation. Thus, our results support the notion that despite structural similarities to other Patched family proteins, PTCHD1 may have a distinct cellular function

Propriedades antioxidativas e morfológicas da Terminalia catappa linn em diferentes estágios de maturação/ Antioxidative and morphological properties of the Terminal catappa linn in different stages of maturation

A Terminalia catappa Linn é uma fruta da família Combretaceae e tem sido pesquisada como agente antioxidante atuando na prevenção de diversas patologias. Nesse sentido o objetivo desta pesquisa foi caracterizar e comparar o teor de compostos bioativos e a estrutura morfológica dos frutos em estágios de maturação roxo e amarelo. A metodologia aplicada seguiu os padrões estabelecidos pelo Instituto Adolfo Lutz e parâmetros de análises internacionais para analises de biocompostos. Os resultados mostram que o potencial hidrogeniônico e sólidos solúveis totais de ambas não apresentam diferenças significativas em nível de 5%. Mas diferem em seu teor de acidez total titulável. Seus teores em compostos bioativos demostram diferença significativa (p≤0,05) nos teores de Fenólicos totais (142,33 e 123,44 (mg GAE/g), Vitamina C (78,83 e 37,04 mg/100ml) e Antocianinas 16,29 e 2,64 mg/100ml). Porém, não mostram diferença significativa no teor de Flavonoides (43,52 e 41,95 mg/100ml) respectivamente para estado de maturação da castanhola roxa e amarela. As estruturas morfológicas mostram grânulos de aspecto esponjosos e estruturas em feixes fibrilares. Todos os achados desta pesquisa evidenciam um potencial alimentício para aplicação deste fruto em dietas humanas.

Efeitos do Consumo de Produtos e Subprodutos do Maracujá (Passiflora edulis) nas Doenças Crônicas não Degenerativas/ Effects of Consumption of Passion (Passiflora edulis) Products and By-Products on Non-Degenerative Chronic Diseases

O maracujá (Passiflora edulis) é um fruto tropical muito apreciado no Brasil e no mundo, em sua maioria na forma de sucos, entretanto os resíduos gerados pela indústria merecem ser explorados em prol da sustentabilidade e valorização deste que seria descartado. Objetivo: Realizar uma revisão em estudos referentes ao aproveitamento de produtos e subprodutos do maracujá (Passiflora edulis), no intuito de contribuir para difusão de conhecimentos em prol do beneficio à saúde humana. Metodologia: A revisão proposta abrange bases de dados que fomentam e difundem as pesquisas na área da saúde, e, assumi como princípio produzir dados a partir da literatura sobre o tema aproveitamento de produtos e subprodutos do maracujá. Para além da revisão tecemos reflexões sobre as implicações do consumo de produtos e subprodutos do maracujá para a saúde humana. Resultados: Com base nos estudos é possível reconhecer o potencial em termos nutricionais e funcionais, visto que, o seu perfil químico, cromatográfico demonstrou majoritariamente ácidos graxos insaturados, que auxiliam na prevenção de DCV’s. recentes pesquisas buscam relacionar o consumo de determinados alimentos sobre a saúde cardiovascular e seus demais fatores relacionados á saúde pública

Mia Couto: viajante e afinador de identidades

A identidade cultural moçambicana forja-se pela força do diálogo e da articulação funcional de diferentes identidades. Neste particular, a obra de Mia Couto destaca-se pelo modo único como congrega a riqueza desse mecanismo, afirmando-se como um interlocutor original no processo de construção da identidade nacional para o qual concorrem diversos elementos identitários que formam a especificidade moçambicana no conjunto da africanidade. Viajante do tempo, Mia Couto faz a história (e a identidade) moçambicana pela soma de um enorme conjunto de estórias, marca de um conhecimento ancestral que se revela necessário para a construção de um novo paradigma identitário – uma identidade que se constrói no compromisso entre o passado e o presente – que o autor vai afinando em cada nova obra porque se reconhece como “mulato de existências” que anseia pela esperança do futuro.********************************************************************Mia Couto: traveler and tuner of identitiesAbstract: Mozambique's cultural identity is forged by the force of dialogue and functional articulation of different identities. In this regard, Mia Couto’s work is distinguished by the unique way he brings together the wealth of this mechanism, asserting itself as an original party in the national identity building process to which many identity elements contribute to form the Mozambican specificity in set of Africanness. Time traveler, Mia Couto makes Mozambican history (and identity) summing up a huge set of stories, marks of an ancestral knowledge that proves necessary for the construction of a new identity paradigm – an identity that is built on a compromise between past and present – that the author tunes in each new work because he is recognized as "mulatto of existences" that yearns for future hope.Keywords: Mozambique; Mia Couto; Identity; Tradition; Hybridity