Implication of AMPK in glucose-evoked modulation of Na,K-ATPase

Background and aims: Na,K-ATPase is an integral membrane protein that maintains the gradients of Na+ and K+, using the energy of ATP hydrolysis, maintaining the ionic gradients that allow electrical activity to occur. It has been demonstrated that, in pancreatic β-cells, Na,K-ATPase is regulated by glucose and that this phenomenon is impaired in glucose intolerant subjects. However, the mechanism underlying glucose-induced modulation of Na,K-ATPase is still unclear. The AMP-activated protein kinase (AMPK) is a molecular key player in energy homeostasis, providing exquisite sensitivity to small changes in intracellular AMP levels and thus to intracellular [ATP]/[ADP] ratio, that is known to activate protein regulatory pathways. Since in pancreatic β-cell, glucose has marked effects on oxidative metabolism and total intracellular ATP and AMP levels, the involvement of AMPK in the cascade of events regulating Na,K-ATPase regulation in pancreatic β-cells was postulated. The aim of this work was to evaluate the putative role of AMPK in the glucose-evoked regulation of Na,K-ATPase activity in the pancreatic β-cell. Materials and methods: Pancreatic -cells from normal (control) or glucose-intolerant Wistar rats (GIR) were isolated and cultured (48h). Cell batches were pre-incubated (30min) with 2.1mM glucose to reach basal activity. Afterwards cells were challenged to 8.4mM glucose for 20min, in the presence or absence of AMPK agonists (AICAR) and antagonists (compound C; CC). ATPase activity was assessed in intact cells by colorimetric quantification of Pi formed in 30min. Na,K-ATPase activity was calculated by the difference between the activities obtained in the absence and in presence the of 1mM ouabain. Results: In basal conditions the activity of Na,K-ATPase from normal and GIR pancreatic β-cell was similar (0.184±0.030 and 0.186±0.020 molPi/min/mgProt, respectively). Challenging the control β-cells with glucose 8.4mM evoked a 62% reduction of Na,K-ATPase activity whereas in GIR β-cells a significantly lower inhibition (40%) was observed. The addition of AICAR 1mM abolished glucose-induced Na,K-ATPase inhibition (0,166±0.011 molPi/min/mg). In control β-cell, the addition of CC 10 μM had no effect on glucose-induced inhibition of Na,K-ATPase. In the contrary, in GIR β-cells it significantly potentiated glucose-evoked inhibition of Na,K-ATPase reaching values similar to that observed in the controls (66%). Conclusions: The AMPK agonist AICAR counteracts the inhibitory action of glucose on Na,K-ATPase of control β-cells whereas CC amplified the glucose-induced inhibition of Na,K-ATPase in GIR β-cells. These results suggest that AMPK plays a central role in the cascade of events underlying glucose-induced modulation of Na,K-ATPase and that the defect must be upstream of AMPK. Finally, abnormal glucose-induced regulation of Na,K-ATPase occurs prior to overt type 2 diabetes and might be a feature in the disease development

Abnormal regulation of Na,K-ATPase in Glucose Intolerant Rats.

Introduction: Glucose is the most important physiological insulin secretagogue. However, the mechanisms underlying glucose-induced insulin release are not fully understood. The role of electrogenic systems such as ionic pumps, to these events remains essentially uninvestigated. Na,K-ATPase, responsible for maintaining Na+ and K+ gradients across the plasma membrane and generates a net outward current, thus changes in its activity may contribute to the early ionic events regulating insulin secretion (Therien and Blostein, 2000). Objective: The aim of this work was to evaluate the regulation of Na,K-ATPase activity by glucose in intact -cells of normal and glucose intolerant (GI) rats and its putative contribution to the regulation of insulin secretion. Material and Methods: Pancreatic -cells, from normal or control or GI rats, were isolated and cultured (48h). Cell batches were pre-incubated (30min) with 2mM glucose to reach basal. Afterwards cells were challenged with glucose in the interval 0-11mM for 60min, for dose-dependence evaluation, or with 8mM glucose for 5-120min, for time-dependence evaluation. ATPase activity was assessed in intact cells by colorimetric quantification of Pi formed in 30min. Na,K-ATPase activity was calculated by the difference between the activities obtained in the absence and in presence the of 1mM ouabain (Costa et al., 2009). Results: In β-cells from normal rats, glucose induced a bimodal regulation of Na,K-ATPase. In the absence of glucose, Na,K-ATPase activity was 0.056±0.015 U/mg. Stimulation with 2mM glucose induced an increase of Na,K-ATPase activity of ~4 fold whereas for [glucose] above 2mM it was observed a significant inhibition of Na,K-ATPase activity (0.061±0.013, 0.080±0.009 and 0.064±0.005 U/mg for 5.6, 8.4 and 11mM glucose, respectively, compared to 0.188±0.035 U/mg observed in 2mM G; n=3-8). β-cells from GI rats does not present this profile; in the absence of glucose, Na,K-ATPase activity was 0.202±0.036 U/mg and no significant differences from this value were observed with the other glucose concentration tested. Addicionally, in β-cells from normal rats, glucose (8mM) induced a time-dependent inhibition, with a biphasic profile, of Na,K-ATPase - it was observed a decrease in the pump activity between 0 and 20min stimulation where it reached a minimum value (77%). For incubation periods over 20min, the pump activity slowly and partially recovered (54%, 55% and 52%, for 30, 60 and 120min, respectively; n=7). In β-cells from GI animals, an less accentuated decrease of Na,K-ATPase activity between 0 ans 20min was also observed (34%), and is not observed further recover in activity. Conclusions: This work demonstrates there Na,K-ATPase is strictly regulated by glucose in pancreatic β-cell. This regulation is unpaired in GI animals. Na,K-ATPase contribution to glucose-induced ionic events and insulin secretion might be relevant and must be explored as a possible therapeutic target in TD2 . 1. Therien AG, Blostein R (2000) Mechanisms of sodium pump regulation. Am J Physiol Cell Physiol 279:C541-C566 2. Costa AR, Real J, Antunes CM, Cruz-Morais J (2009) A new approach for determination of Na,K-ATPase activity: application to intact pancreatic beta-cells. In Vitro Cell Dev Biol Ani

A Avaliação e Seleção na produção de Informação da SIC Notícias

O presente relatório descreve o estágio no Arquivo Audiovisual da SIC, abordando as funções do arquivo e destacando tarefas de Avaliação e Seleção documental, mais precisamente o processo e a política de avaliação e seleção praticado no Arquivo Audiovisual da estação de televisão e aplicado essencialmente aos telejornais da SIC Noticias, desde a criação até à sua conservação ou eliminação. A avaliação e seleção são procedimentos essenciais na prática arquivística e no ciclo de vida dos documentos, na medida em que definem quais os documentos que serão preservados e os que serão eliminados uma vez que é insustentável conservar todos os conteúdos produzidos. A política de avaliação deve ser sistemática, planificada e claramente definida para que o património documental seja corretamente identificado. Para um serviço de informação é essencial divulgar o seu património audiovisual com qualidade e autenticidade; a avaliação e a seleção remetem para a preservação dos conteúdos para que estes se possam manter com capacidade de reutilização. No entanto, os resultados apontam para algumas possibilidades de revisão do processo de avaliação dos telejornais da SIC Noticias, de forma a rentabilizar e racionalizar o espaço de armazenamento, manter a qualidade e aumentar a capacidade de resposta aos utilizadores.This report describes an internship at the Audiovisual Archive of SIC, highlighting the Evaluation and Selection of audiovisual content, specifically the procedures applied primarly to the SIC Notícias tv news channel content, from their creation to their final storage or disposal. Evaluation and selection are key procedures in archival practice and in the life cycle of documents, to the extent that they will define which documents are preserved and which will be removed, since it is unsustainable to keep all content produced. The evaluation policy should be systematic, planned and clearly defined so that the documentary heritage is correctly identified. For an information service is essential to disclose their audiovisual heritage with high quality and guaranteed authenticity levels. Both evaluation and selection are deeply connected to content preservation, thus also catering to content reusability. The results of this internship suggest, however, that it might be possible to review some aspects of the evaluation process of the SIC Noticias TV news content in order to maximize and streamline storage space, maintain quality and increase responsiveness to users

Alterações na modulação da Na,K-ATPase pela glicose em célula β-pancreática de animais intolerantes à glicose.

Alterações na modulação da Na,K-ATPase pela glicose em célula β-pancreática de animais intolerantes à glicose AR Costa1,2, CM Antunes1,3, J Cruz-Morais1,2 1Departamento de Química, 2Instituto de Ciências Agrárias e Ambientais Mediterrânicas (ICAAM), Universidade de Évora, Largo dos Colegiais 2, 7000 Évora; 3Centro de Neurociências e Biologia Celular (CNC), Universidade de Coimbra, 3004-517 Coimbra;[email protected] A diabetes tipo 2 é uma síndrome metabólica, que se caracteriza por alterações da secreção ou acção da insulina, cujas bases bioquímicas não estão completamente esclarecidas. Na célula-, a resposta fisiológica à glicose envolve a despolarização, resultante principalmente do fecho de canais de K+ sensíveis ao ATP, seguido do influxo de Ca2+ por canais sensíveis à voltagem tipo-L e consequente aumento da concentração intracelular de Ca2+, necessário à exocitose da insulina, hormona responsável pela homeostasia da glicose. A Na,K-ATPase (ou bomba de sódio), é o sistema de transporte activo responsável por manter o gradiente transmembranar de Na+ e K+. Estudos recentes têm sugerindo que a inibição da Na,K-ATPase possa contribuir para a despolarização induzida por glicose. Como o acoplamento estímulo-secreção se encontra alterado em célula- de animais diabéticos, proposemo-nos estudar a participação da Na,K-ATPase neste mecanismo utilizando um modelo de pré-diabetes que se caracteriza essencialmente por apresentar alterações na curva de tolerância à glicose. Para isso, desenvolveu-se um método que permite avaliar a actividade da bomba em células β-pancreáticas primárias, mantidas em culturas aderentes, que preservam os processos de transdução de sinal. Com este método observámos que a glicose inibe a Na,K-ATPase em animais normais, estando este processo significativamente atenuado em animais pré-diabéticos. Observámos ainda que a secreção de insulina estimulada por glicose, nas células de pré-diabéticos, é cerca de 4 vezes menor relativamente aos controlos. Estes dados permitem-nos sugerir que a regulação da bomba por glicose se encontra modificada em animais pré-diabéticos, podendo contribuir para as alterações dos mecanismos iónicos responsáveis pelo acoplamento estímulo-secreção, nomeadamente na cinética da despolarização, comprometendo a secreção de insulina. O trabalho prossegue no sentido de esclarecer os mecanismos através dos quais a glicose induz inibição na Na,K-ATPase, bem como no levantamento dos factores que podem contribuir para as diferenças observadas entre os animais normais e pré-diabéticos, nomeadamente ao nível da expressão isoenzimática

Local Medical-Sentinel Network Almada-Seixal: report of one year of experience

A Rede Médicos-Sentinela Local Almada-Seixal foi a primeira rede criada para dar resposta a questões locais de investigação em saúde e, simultaneamente, reforçar a cober tura a nível nacional. Com este ar tigo pretende- se acompanhar a sua implementação e desenvolvimento após o primeiro ano de experiência. A adesão de um número progressivamente maior de médicos à rede permitiu aumentar a população sob obser vação efetiva na Rede Médicos-Sentinela. Foram ponderadas estratégias para garantir a regular par ticipação destes médicos na notificação de eventos. O primeiro desafio desta rede de investigação será a implementação de um estudo sobre os fatores de risco e prognóstico da doença isquémica cardíaca na área de abrangência do ACES Almada-Seixal, considerado prioritário no Plano Local de Saúde.The Local GP Sentinel Network in Almada-Seixal was the first network created to answer some local health investigation issues and, simultaneously, to strengthen the national surveillance. We here present its implementation and development after the first experimental year. The adhesion of more doctors to the network made possible having at national level a larger population under observation. We bring forward some strategies to ensure the regular notification from these doctors. The first project of this network will be the implementation of a study about the risk factors and prognostic of ischemic disease in Almada-Seixal, one of the one of the research priorities in the Local Health Plan.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Alterações na actividade enzimática da amílase salivar em indivíduos obesos

Nos últimos anos o estudo da composição proteica da saliva ganhou interesse pelo seu potencial no diagnóstico não invasivo e compreensão de diversas doenças, quer orais, quer sistémicas. Para além disso, a interacção deste fluido com os constituintes dos alimentos tornam a sua análise importante para a compreensão das variações a nível da percepção dos alimentos e escolhas alimentares. Há, contudo, poucos estudos que comparem a composição proteica da saliva de indivíduos obesos com indivíduos normoponderais. Uma das proteínas mais abundante na saliva é a α-amilase. Esta proteína é responsável pelo início da digestão de hidratos de carbono na boca influenciando a percepção dos alimentos. Para além disso, os seus níveis são indicadores do funcionamento das glândulas salivares, tendo ainda sido sugerida como potencial marcador de condições de stress e de actividade do sistema nervoso simpático. O presente trabalho teve como objectivo comparar os níveis de α-amilase salivar entre indivíduos obesos (IMC>30; N=10) e normoponderais (IMC<25; N=10) do sexo feminino. Foram feitas recolhas de saliva mista, na ausência de estimulação e sempre à mesma hora do dia. Para determinar a actividade enzimática da α-amilase utilizou-se um kit colorimétrico (Sentinel Diagnostics). Foi observada uma maior actividade enzimática de α-amilase nos indivíduos obesos comparativamente aos normoponderais (243,2 X 103 ± 37,7 X 103 e 106,1 X 103 ± 44,2 X 103 U/L, respectivamente) A maior actividade enzimática da α-amilase poderá contribuir para alterações na percepção dos alimentos, nomeadamente no que diz respeito ao gosto doce dos hidratos de carbono. Uma diferente sensibilidade gustativa poderá ter influências nas escolhas alimentares. Estes resultados reforçam a importância de estudos mais aprofundados acerca da função salivar e percepção gustativa na obesidade

A Like to Intergenerationality: Participatory Strategies for Social Inclusion

O Like Saúde - Programa de Prevenção em Comportamentos Aditivos e Dependências (CAD), inserido no Projeto Educativo Municipal (PEM), de base territorial, é um programa dirigido a todas as escolas do concelho de Leiria, com a participação de toda a comunidade educativa e envolvimento da comunidade local. O Kit Pedagógico “Despir os Preconceitos, Vestir a Inclusão” é um recurso pedagógico do Programa, desenvolvido em parceria com a Rede Europeia Anti- Pobreza (EAPN – Núcleo Distrital de Leiria), com o objetivo de promover a inclusão social. Sendo a escola um meio privilegiado de aprendizagem formal, não formal e informal, pretende-se envolver os vários atores-chave neste trabalho em rede abordando as temáticas: Intergeracionalidade; Comportamentos Aditivos e Dependências; Interculturalidade e Igualdade Género. Apresentaremos, neste artigo, a construção do referido Kit, na temática da Intergeracionalidade e transversalmente a sua importância na educação para a cidadania enquanto atitude e comportamento, um modo de estar em sociedade que tem como referência os direitos humanos, nomeadamente os valores da igualdade, da democracia e da justiça social (DGE, 2017).info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Cellular interactions in the tumor microenvironment: the role of secretome

Over the past years, it has become evident that cancer initiation and progression depends on several components of the tumor microenvironment, including inflammatory and immune cells, fibroblasts, endothelial cells, adipocytes, and extracellular matrix. These components of the tumor microenvironment and the neoplastic cells interact with each other providing pro and antitumor signals. The tumor-stroma communication occurs directly between cells or via a variety of molecules secreted, such as growth factors, cytokines, chemokines and microRNAs. This secretome, which derives not only from tumor cells but also from cancer-associated stromal cells, is an important source of key regulators of the tumorigenic process. Their screening and characterization could provide useful biomarkers to improve cancer diagnosis, prognosis, and monitoring of treatment responses.Agência financiadora Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Sao Paulo (FAPESP) FAPESP 10/51168-0 12/06048-2 13/03839-1 National Council for Scientific and Technological Development (CNPq) CNPq 306216/2010-8 Fundacao para a Ciencia e a Tecnologia (FCT) UID/BIM/04773/2013 CBMR 1334info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Changes in the salivary protein profile of morbidly obese women either previously subjected to bariatric surgery or not

Saliva is a non-invasive source of biomarkers useful in the study of physiological mechanisms. Moreover, this fluid has diverse functions, among which food perception and ingestion, making it particularly suitable for the study of obesity. The aims of this study were to assess changes in salivary proteome among morbidly obese women, with a view to provide information about mechanisms potentially related to the development of obesity, and to evaluate whether these changes persist after weight loss. Mixed saliva samples from morbidly obese women (N = 18) who had been either subjected (group O-BS) or not (group O) to bariatric surgery and women with normal weight (N = 14; group C) were compared for protein profiles, alpha-amylase abundance and enzymatic activity, and carbonic anhydrase (CA) VI abundance. Differences in salivary obese profiles were observed for 23 different spots. Zinc-alpha-2 glycoprotein-containing spots showed higher abundance in group O only, whereas cystatin S-containing spots presented higher abundance in the two groups of obese subjects. Most of the spots identified as salivary amylase were present at lower levels in group O-BS. With regard to the amylase enzymatic activity, increases were observed for group O and decreases for group O-BS. One interesting finding was the high correlation between levels of CA VI and body mass index in group O, which was not observed for groups O-BS or C. The differences between groups, mainly regarding salivary proteins involved in taste sensitivity and metabolism, point to the potential of using saliva in the study of obesity development

A MULTIMODALIDADE E SEUS SIGNIFICADOS EM TEXTOS PUBLICITÁRIOS

Este artigo tem como objetivo analisar se os recursos multimodais utilizados em um anúncio publicitário do Bradesco conseguem atingir os propósitos comunicativos desse gênero. Para tanto, foi analisado um anúncio, cuja finalidade é informar a seus clientes sobre a possibilidade de antecipar a restituição do imposto de renda e, consequentemente, persuadi-los a comprar o produto anunciado. A base teórica utilizada foi a Gramática do Design Visual de Kress e van Leeuwen (2006), mais especificamente a metafunção composicional, assim como a Linguística Sistêmico-Funcional (HALLIDAY; MATTHIESSEN, 2004; FUZER;CABRAL, 2014) e as considerações sobre os propósitos comunicativos nos gêneros textuais feitas por Martin; Rose (2007). A análise concluiu que os recursos multimodais utilizados no anúncio publicitário do Bradesco trabalham em harmonia e conseguiram atender satisfatoriamente aos propósitos comunicativos deste gênero. DOI: https://doi.org/10.47295/mren.v7i2.174